旋毛虫Ts87抗原基因克隆体外表达条件的研究 被引量：6

1

作者 杨静 诸欣平 杨雅平 《首都医科大学学报》 CAS 2002年第4期307-309,共3页

为提高融合蛋白PET 2 8a(+) /Ts87/BL2 1的表达水平 ,对诱导时间、诱导物浓度、诱导时细菌生长状态等条件与表达量的关系进行了研究。结果表明 ,在细菌生长的适宜状态 (OD6 0 0nm=0 .6)和诱导条件 (3 7℃ 4h)下 ,此融合蛋白的表达量最... 为提高融合蛋白PET 2 8a(+) /Ts87/BL2 1的表达水平 ,对诱导时间、诱导物浓度、诱导时细菌生长状态等条件与表达量的关系进行了研究。结果表明 ,在细菌生长的适宜状态 (OD6 0 0nm=0 .6)和诱导条件 (3 7℃ 4h)下 ,此融合蛋白的表达量最高 ,约占菌体总蛋白的 3 0 展开更多

关键词 旋毛虫 ts87抗原 基因克隆 体外表达条件 融合蛋白

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大肠癌组织中ERCC1、TS表达及临床意义 被引量：2

2

作者 白东晓 李保中 +3 位作者 杨海军 洪永贵 肖建安 李军扩 《中国医学创新》 CAS 2013年第24期3-5,共3页

目的:探讨ERCC1和TS蛋白在大肠癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化SP法和组织芯片对196例大肠癌组织和50例正常大肠切缘组织进行ERCC1和TS蛋白表达水平检测,分析两者与临床病理特征的关系。其中129例术后患者行FOLFOX4方案化疗... 目的:探讨ERCC1和TS蛋白在大肠癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化SP法和组织芯片对196例大肠癌组织和50例正常大肠切缘组织进行ERCC1和TS蛋白表达水平检测,分析两者与临床病理特征的关系。其中129例术后患者行FOLFOX4方案化疗,随访3年。结果:在结直肠癌中ERCC1及TS表达均高于正常肠黏膜组织,而与性别、年龄、分化程度、部位无关(P>0.05),TS阳性表达率及两者双阳性表达率均在有淋巴结转移者及TNMⅢ期、Ⅳ期患者中明显升高。ERCC1、TS阴性表达者3年DFS均分别高于阳性表达者(P<0.05)。结论:ERCC1和TS蛋白在大肠癌中的阳性表达较高,可能与肿瘤的发生、转移有关。ERCC1和TS蛋白阴性者可从FOLFOX4化疗中获益。 展开更多

关键词 ERCC1蛋白 ts蛋白 大肠癌 免疫组化 3年DFS

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TS制剂对桑树萎缩病的防治机理 被引量：1

3

作者 周玲玲 吴尔福 《山东大学学报（自然科学版）》 CSCD 1998年第3期340-344,共5页

用植物病毒防治剂（ＴｈｅＶｉｒｏｃｉｄｅｆｏｒＰｌａｎｔ）—ＴＳ制剂喷洒感病桑树植株后，用聚丙烯酰胺凝胶电泳对叶片多酚氧化酶、过氧化物酶进行同功酶比较，发现处理株多酚氧化酶的酶带数和对照株相同，均为４条，但酶带位置、... 用植物病毒防治剂（ＴｈｅＶｉｒｏｃｉｄｅｆｏｒＰｌａｎｔ）—ＴＳ制剂喷洒感病桑树植株后，用聚丙烯酰胺凝胶电泳对叶片多酚氧化酶、过氧化物酶进行同功酶比较，发现处理株多酚氧化酶的酶带数和对照株相同，均为４条，但酶带位置、强弱有差异；处理株过氧化物酶有４条基本酶带，而对照株有３条酶带，处理株出现一条新酶带．处理株多酚氧化酶活性感病后期比感病初期提高１．６倍，对照株酶活性提高１倍，而过氧化物酶活性感病后期比感病初期下降６０％，而对照株酶活性下降８０％．用紫外分光光度计测蛋白质含量，处理组为０．３ｇ／Ｌ，对照组为０．３８ｇ／Ｌ，表明经ＴＳ制剂处理比对照桑萎缩病的病株蛋白质含量降低． 展开更多

关键词 桑树萎缩病 酶谱分析 酶活性 ts制剂

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旋毛虫抗原基因Ts21体外表达条件的研究

4

作者 王来 崔晶 +1 位作者 王中全 王强 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期697-699,共3页

目的优化体外表达旋毛虫抗原基因Ts21的条件。方法比较不同诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间、抗生素(氨苄青霉素)浓度及诱导温度等条件下融合蛋白(rMBP-Ts21)的表达水平,选择适宜的表达条件。结果在诱导剂浓度0.3mmol/L、诱导时间3h及诱导... 目的优化体外表达旋毛虫抗原基因Ts21的条件。方法比较不同诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间、抗生素(氨苄青霉素)浓度及诱导温度等条件下融合蛋白(rMBP-Ts21)的表达水平,选择适宜的表达条件。结果在诱导剂浓度0.3mmol/L、诱导时间3h及诱导温度在20℃的情况下,融合蛋白的表达量最高,占菌体总蛋白的20%;抗生素浓度对融合蛋白表达量无明显影响。结论获得旋毛虫抗原基因Ts21体外表达的适宜条件,为大量制备、纯化该重组抗原奠定基础。 展开更多

关键词 旋毛虫 ts21 融合蛋白 表达

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猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B1蛋白原核表达条件的优化 被引量：13

5

作者 王秋霞 张美英 +5 位作者 张改平 王选年 宁长申 鲁琨 张龙现 菅复春 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期59-63,共5页

研究了培养基、温度、诱导时间I、PTG和氨苄青霉素终浓度以及诱导前后温度变化等不同条件对重组菌菌体生长和融合蛋白表达量的影响,以期获得猪囊尾蚴排泄分泌抗原(ES Ag)Ts8B1蛋白基因在大肠杆菌中的最大表达量。结果显示,使用TB培养基... 研究了培养基、温度、诱导时间I、PTG和氨苄青霉素终浓度以及诱导前后温度变化等不同条件对重组菌菌体生长和融合蛋白表达量的影响,以期获得猪囊尾蚴排泄分泌抗原(ES Ag)Ts8B1蛋白基因在大肠杆菌中的最大表达量。结果显示,使用TB培养基于37℃培养3 h后,采用终浓度为0.2mmol/L的IPTG和200mmol/L的氨苄青霉素在32℃过夜诱导培养,pGEX-6p-1/Ts8B1融合蛋白表达量最大,表达的融合蛋白约占菌体总蛋白的33%。SDS-PAGE表明pGEX-6p-1/Ts8B1融合蛋白大小约为33 kDa,与预计的分子量大小一致,Western blot分析表明其能与猪囊尾蚴多克隆抗体起特异性反应,并获得最大产量的融合蛋白。为研究其在猪囊尾蚴病检测中的应用价值奠定了基础。 展开更多

关键词 猪囊尾蚴 排泄分泌抗原 ts8B1蛋白 原核表达

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猪带绦虫TS045W-4B—TSOL18融合基因在大肠埃希菌ArcticExpress（DE3）中的表达、纯化和兔抗血清的制备 被引量：10

6

作者 周泠 周必英 +2 位作者 刘美辰 刘晖 贺莉芳 《中华地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期619-624,共6页

目的构建猪带绦虫pGEX—TS045W-4B-TSOL18重组质粒，纯化重组融合蛋白及制备兔抗重组蛋白血清。方法用疏水甘氨酸接头（Gly,Ser），连接TS045W-4B和TSOL18编码基因，通过全基因合成猪带绦虫TS045W-4B—TSOL18融合基因。将融合基因定向... 目的构建猪带绦虫pGEX—TS045W-4B-TSOL18重组质粒，纯化重组融合蛋白及制备兔抗重组蛋白血清。方法用疏水甘氨酸接头（Gly,Ser），连接TS045W-4B和TSOL18编码基因，通过全基因合成猪带绦虫TS045W-4B—TSOL18融合基因。将融合基因定向克隆到pGEX—1λT表达载体上，构建重组质粒pGEX—TS045W-4B—TSOL18，再用重组质粒转化大肠埃希菌（E．col）ArcticExpress（DE3）。用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导其表达，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析表达情况，亲和层析纯化获得重组融合蛋白。用纯化的重组蛋白按0．5mg／只与弗氏完全佐剂（CFA）混合，于兔后腿肌肉及背部皮下多点免疫注射；2周后再用相同剂量的重组蛋白与弗氏不完全佐剂（IFA）混合加强免疫，此后每隔10d按第2次免疫法重复加强免疫，第4次免疫后6d，采集兔心脏血并分离血清，立即纯化及制备抗血清。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定抗血清的效价，采用蛋白印迹（Western blot）法鉴定抗血清的特异性。结果全基因合成的TS045W-4B—TSOL18融合基因片段长度为789bp。酶切证实pGEX—TS045W-4B—TSOL18重组质粒成功构建，测序结果获得的基因片段大小为789bp，与预期大小相符。SDS—PAGE分析和亲和层析后显示，重组质粒在转化E．col ArcticExpress（DE3）后，获得了相对分子质量约为55×10。的重组融合蛋白，纯度为85％。EUSA测定兔抗血清的效价为1：512000，Westernblot证实抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应，在相对分子质量约为55×10^3处出现1条与预期大小-致的特异性条带。结论成功地构建猪带绦虫重组质粒pGEX—TS045W-4B—TSOL18及制备了高纯度的TS045W-4B—TSOL18重组融合蛋白和高滴度的兔抗重组蛋白血清。 展开更多

关键词 猪带绦虫 ts045W-4B—tsOL18编码基因 重组融合蛋白 抗血清

原文传递

旋毛虫Ts87基因在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化 被引量：5

7

作者 杨静 诸欣平 +3 位作者 杨雅平 詹斌 冯建军 Hotez Peter 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期25-27,40,共4页

目的　为进一步研究和应用旋毛虫Ts87基因 ,本文原核表达了PET - 2 8a(+) /Ts87重组质粒 ,并纯化鉴定了该蛋白。方法　将Ts87基因片段克隆入原核表达载体PET - 2 8a(+) ,形成重组质粒PET - 2 8a(+) /Ts87,转化后经IPTG诱导得到表达蛋白 ... 目的　为进一步研究和应用旋毛虫Ts87基因 ,本文原核表达了PET - 2 8a(+) /Ts87重组质粒 ,并纯化鉴定了该蛋白。方法　将Ts87基因片段克隆入原核表达载体PET - 2 8a(+) ,形成重组质粒PET - 2 8a(+) /Ts87,转化后经IPTG诱导得到表达蛋白 (约 4 0kDa) ,利用固定化金属离子 (Ni2 + )配体亲和层析纯化目的蛋白 ,进行复性 ,并用兔人工感染旋毛虫血清鉴定表达产物。结果与结论　成功构建了PET - 2 8a(+) /Ts87,SDS -PAGE显示融合蛋白主要以包涵体形式存在 ,经过亲和层析得到纯化的目的蛋白 。 展开更多

关键词 旋毛虫 ts87基因 大肠杆菌 表达 表达产物 纯化

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基于改进的禁忌搜索的蛋白质三维结构预测 被引量：5

8

作者 张晓龙 程文 《计算机工程》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期31-34,共4页

禁忌搜索算法是一种局部搜索能力很强的全局迭代优化算法,已经被成功地应用到各种组合优化问题中。基于AB非格模型,该文将一种改进的禁忌搜索算法应用于蛋白质三维折叠结构预测。实验结果表明改进的禁忌算法求得的蛋白质三维最低能量构... 禁忌搜索算法是一种局部搜索能力很强的全局迭代优化算法,已经被成功地应用到各种组合优化问题中。基于AB非格模型,该文将一种改进的禁忌搜索算法应用于蛋白质三维折叠结构预测。实验结果表明改进的禁忌算法求得的蛋白质三维最低能量构形的最低能量值比已有的算法求得的最低能量值要低,同时三维构形中形成了一个疏水核,被亲水残基包围,反映了真实蛋白质的结构特征。该算法效率高,可以有效地用于蛋白质三维折叠预测。 展开更多

关键词 禁忌搜索算法 蛋白质三维折叠 AB非格模型

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旋毛虫Ts21重组蛋白的免疫诊断价值及免疫保护作用的研究 被引量：5

9

作者 王睿 王中全 崔晶 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期17-21,共5页

目的探讨旋毛虫Ts21重组蛋白的免疫诊断价值及免疫保护作用。方法应用旋毛虫Ts21重组蛋白ELISA(Ts21-ELISA)与肌幼虫ES抗原ELISA(ES-ELISA)对旋毛虫病与其他寄生虫病患者血清及5种旋毛虫(T1、T2、T3、T4和T7)感染小鼠血清进行检测,并观... 目的探讨旋毛虫Ts21重组蛋白的免疫诊断价值及免疫保护作用。方法应用旋毛虫Ts21重组蛋白ELISA(Ts21-ELISA)与肌幼虫ES抗原ELISA(ES-ELISA)对旋毛虫病与其他寄生虫病患者血清及5种旋毛虫(T1、T2、T3、T4和T7)感染小鼠血清进行检测,并观察不同剂量旋毛虫感染小鼠后不同时间的血清抗体水平。将Ts21重组蛋白皮下注射免疫小鼠(20μg/只,免疫3次,每次间隔10d),末次免疫后10d,每只小鼠用300条旋毛虫肌幼虫经口攻击感染,3.5d和42d后剖杀,观察肠道成虫与肌幼虫数并计算减虫率。结果Ts21-ELISA检测旋毛虫病、并殖吸虫病、囊尾蚴病及棘球蚴病患者血清的抗体阳性率分别为94.7%(18/19)、15.8%(3/19)、9.1%(1/11)和7.7%(1/13),与血吸虫病、华支睾吸虫病患者血清及健康人血清无交叉反应;Ts21重组蛋白与ES抗原ELISA检测旋毛虫病患者血清抗体的敏感性与特异性差异均无统计学意义(χ2=0,P>0.05;χ2=0.358,P>0.05)。Ts21重组蛋白与ES抗原检测T1感染小鼠血清的敏感性差异无统计学意义(χ2=0.104,P>0.05),与T2、T3、T4、T7感染小鼠血清的交叉反应率明显低于ES抗原(χ2=17.069,P<0.05)。小鼠感染300条旋毛虫后4周,应用Ts21-ELISA检测的血清抗体阳性率为100%(10/10);小鼠感染5条旋毛虫后6周,血清抗体阳性率为100%(10/10)。Ts21重组蛋白免疫小鼠用旋毛虫攻击感染后3.5d和42d,肠道成虫与肌幼虫减虫率分别为42.71%和49.8%。结论Ts21重组蛋白可用于旋毛虫病的血清学检测,但不能忽视与并殖吸虫病、囊尾蚴病及棘球蚴病患者血清的交叉反应。 展开更多

关键词 旋毛虫 ts21重组蛋白 ELISA 血清学诊断 免疫保护 小鼠

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PEG/磷酸盐双水相体系萃取青霉TS67胞外活性蛋白的研究 被引量：3

10

作者 张志娟 王素英 林媛 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第17期7841-7843,共3页

[目的]研究用PEG/磷酸盐双水相体系萃取青霉TS67胞外活性蛋白,为活性蛋白的进一步提纯及工业化生产提供依据。[方法]以分配系数、下相分配率及抑菌圈直径为指标,分别研究了PEG的浓度、磷酸盐的浓度、氯化钠的浓度对青霉TS67胞外活性蛋白... [目的]研究用PEG/磷酸盐双水相体系萃取青霉TS67胞外活性蛋白,为活性蛋白的进一步提纯及工业化生产提供依据。[方法]以分配系数、下相分配率及抑菌圈直径为指标,分别研究了PEG的浓度、磷酸盐的浓度、氯化钠的浓度对青霉TS67胞外活性蛋白在PEG2000/磷酸盐和PEG 6000/磷酸盐双水相系统中分配特性的影响。[结果]在24%PEG 2000/12%磷酸盐的双水相体系中下相抑菌圈直径最大,达到2.50 cm,此时下相分配率为87.77%;在28%PEG 6000/12%磷酸盐双水相体系中,下相分配率最大,达到94.85%,此时下相抑菌圈直径为2.45 cm。[结论]PEG的浓度、磷酸盐的浓度对蛋白的分配特性有显著影响,氯化钠的浓度对其影响并不明显。从成本及结果来说,PEG 2000优于PEG 6000。 展开更多

关键词 PEG/磷酸盐双水相系统 青霉ts67 活性蛋白

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TS、p53基因产物表达水平与直肠癌预后的关系 被引量：3

11

作者 冯继锋 陆建伟 +5 位作者 张彤 莫伏根 曹国春 潘良熹 黄富麟 郑秀立 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2004年第6期591-594,共4页

目的 :探讨TS基因和 p5 3基因产物表达与直肠癌术后复发转移和预后的关系。 方法 :采用免疫组织化学方法对 4 2例直肠癌手术标本中的TS基因和 p5 3基因产物进行检测和分析。 结果 :TS基因产物的高表达率为 4 5 5 % (2 0 / 4 2 ) ,p5 3... 目的 :探讨TS基因和 p5 3基因产物表达与直肠癌术后复发转移和预后的关系。 方法 :采用免疫组织化学方法对 4 2例直肠癌手术标本中的TS基因和 p5 3基因产物进行检测和分析。 结果 :TS基因产物的高表达率为 4 5 5 % (2 0 / 4 2 ) ,p5 3基因产物的高表达率为 4 3 2 % (19/ 4 2 )。TS基因产物低表达患者的局部复发率和远处转移率明显低于高表达患者 (P =0 0 14 ,0 0 0 5 ) ,无病生存期明显长于高表达患者 (P =0 0 0 0 6 )。在 2 4例术后辅助化疗患者中 ,TS基因产物低表达患者的局部复发率和远处转移率均明显低于高表达患者 (P =0 0 0 7,0 0 0 5 )。p5 3基因产物高表达与局部复发、远处转移以及无病生存期之间未见明显的相关性。多因素分析结果显示TS基因产物表达是影响直肠癌患者术后无病生存期的独立因素。结论 展开更多

关键词 高表达 P53基因 ts 无病生存期 基因产物 患者 直肠癌 远处转移 局部复发 预后

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不同佐剂对旋毛虫Ts87重组蛋白免疫小鼠保护性的影响 被引量：4

12

作者 李强 杨静 +4 位作者 杨雅平 顾园 刘智英 黄松 诸欣平 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期101-105,共5页

目的比较福氏完全佐剂(CFA)等6种佐剂对于旋毛虫Ts87重组蛋白(rTs87)免疫保护性的影响。方法经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定的rTs87分别与上述各种佐剂免疫ICR小鼠,每间隔2周免... 目的比较福氏完全佐剂(CFA)等6种佐剂对于旋毛虫Ts87重组蛋白(rTs87)免疫保护性的影响。方法经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定的rTs87分别与上述各种佐剂免疫ICR小鼠,每间隔2周免疫1次,共免疫3次。ELISA检测免疫小鼠血中抗原特异性IgG抗体水平。攻击感染45 d后剖杀小鼠取肌幼虫(ML)并计数,计算肌幼虫减虫率。结果rTs87相对分子质量(Mr)约为40 000,可被旋毛虫感染鼠血清和rTs87免疫鼠血清识别,分别与佐剂CFA(或IFA)、IMS 1312、ISA720、Quil-A及氢氧化铝免疫后均引起较强的IgG抗体反应,各佐剂免疫组减虫率分别为49.4％、49．2％、63．5％、65．1％和70．8％,与空白对照组比较有统计学意义;单纯抗原rTs87免疫组获得了23．7％的减虫率,与对照组及各佐剂免疫组差异均有统计学意义(P<0．05)。结论佐剂CFA(或IFA)、IMS1312、ISA720、Quil-A及氢氧化铝均能不同程度增强rTs87对小鼠的保护性免疫力,其中佐剂ISA720、Quil-A和氢氧化铝的保护效果更好。 展开更多

关键词 旋毛虫 旋毛虫ts87重组蛋白(rts87) 佐剂 保护性

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球形芽孢杆菌Ts-1毒蛋白的分离纯化 被引量：3

13

作者 于自然 尚克进 +3 位作者 马明 王健 牛瑞芳 任改新 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第4期254-258,共5页

球形芽孢杆菌 Ts-1对蚊虫幼虫有高效杀灭能力,其有毒成份为一种蛋白质。纯芽孢-晶体复合物经超声波处理后,以0.05mol/L 的 NaOH 抽提毒素,经 Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱层析纯化,用 SDS-PAGE 检验柱层析得到的杀虫活性部分,Ts-1的芽孢... 球形芽孢杆菌 Ts-1对蚊虫幼虫有高效杀灭能力,其有毒成份为一种蛋白质。纯芽孢-晶体复合物经超声波处理后,以0.05mol/L 的 NaOH 抽提毒素,经 Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱层析纯化,用 SDS-PAGE 检验柱层析得到的杀虫活性部分,Ts-1的芽孢-晶体复合物中主要为42kD 和43kD 的两种蛋白质。经聚丙烯酰胺凝胶制备电泳分离纯化,生物活性测定表明这两种蛋白质都有杀蚊毒效,经 DEAE 纤维素柱层析进一步纯化,获得了分子量为42kD的毒蛋白。 展开更多

关键词 球形芽孢杆菌 ts-1毒蛋白

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卫星搭载对苜蓿突变株蛋白表达的影响 被引量：3

14

作者 李红 李波 +4 位作者 李雪婷 王烨 杨蔚然 杨伟光 杨曌 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1749-1754,共6页

以卫星搭载筛选出的2株突变株系为材料,研究空间环境对苜蓿(Medicago sativa)蛋白表达机制的影响,利用IEF/SDS-PAGE凝胶电泳技术,对其蛋白质特异性进行了比较分析。结果表明,突变株系与对照相比,蛋白质图谱有较大的差异,突变株系1L-4较... 以卫星搭载筛选出的2株突变株系为材料,研究空间环境对苜蓿(Medicago sativa)蛋白表达机制的影响,利用IEF/SDS-PAGE凝胶电泳技术,对其蛋白质特异性进行了比较分析。结果表明,突变株系与对照相比,蛋白质图谱有较大的差异,突变株系1L-4较对照共有6个蛋白质斑点下调,17个蛋白质斑点上调,突变株系6L-5较对照共有17个斑点下调,18个斑点上调,表明空间环境促使了苜蓿基因结构的改变,影响了蛋白质的表达。 展开更多

关键词 卫星搭载 苜蓿 差异蛋白质 双向电泳

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BMBQA:融合MCNN和BiGRU的蛋白质模型质量评估算法 被引量：2

15

作者 聂良鹏 权丽君 +3 位作者 吴庭芳 孙晓雨 何如吉 吕强 《小型微型计算机系统》 CSCD 北大核心 2022年第7期1419-1425,共7页

蛋白质模型质量评估是指对计算手段预测出的蛋白质结构进行评分,以选择尽可能接近天然结构的蛋白质模型,这对在蛋白质结构预测中挑选最优的蛋白质模型和在生物医学研究中恰当使用它们起到至关重要的作用.随着3D蛋白质数据的不断增长,基... 蛋白质模型质量评估是指对计算手段预测出的蛋白质结构进行评分,以选择尽可能接近天然结构的蛋白质模型,这对在蛋白质结构预测中挑选最优的蛋白质模型和在生物医学研究中恰当使用它们起到至关重要的作用.随着3D蛋白质数据的不断增长,基于深度学习的蛋白质模型质量评估方法得到了快速发展,但该领域只探索了深度学习方向较浅层的应用.本文为了探索更精确的质量评估方法,提出了一个基于多尺度卷积(MCNN)和双向门控循环神经网络(BiGRU)的深度模型,预测蛋白质模型的GDT_TS(Global Distance Test_Total Score)分数,并将这一方法命名为BMBQA(Quality Assessment Base on MCNN-BiGRU).其中,多尺度卷积神经网络用来提取蛋白质模型中浅层的细节信息以及深层的抽象信息,双向门控循环神经网络用来提取每个残基的长程相互作用信息,通过数据增强来提高深度模型在目标蛋白质中挑选最优蛋白质模型的性能.本文利用CASP13中的数据集与现有的先进方法进行比较,实验结果表明本文方法在4个经典的评价指标中均具有很强的竞争力. 展开更多

关键词 蛋白质模型质量评估 多尺度卷积神经网络 双向门控循环神经网络 GDT_ts 数据增强 CASP13

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猪带绦虫Ts14-3-3.3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：2

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作者 罗波 李想 周必英 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1100-1105,共6页

目的建立猪带绦虫Ts14-3-3.3蛋白原核表达系统并制备兔多克隆抗体。方法通过逆转录PCR(RT-PCR)技术将猪囊尾蚴总RNA反转录为cDNA,利用特异性引物扩增猪带绦虫Ts14-3-3.3基因,将其克隆至原核表达质粒pCznⅠ中,在大肠杆菌Arctic Express... 目的建立猪带绦虫Ts14-3-3.3蛋白原核表达系统并制备兔多克隆抗体。方法通过逆转录PCR(RT-PCR)技术将猪囊尾蚴总RNA反转录为cDNA,利用特异性引物扩增猪带绦虫Ts14-3-3.3基因,将其克隆至原核表达质粒pCznⅠ中,在大肠杆菌Arctic Express中用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析其表达产物,用HisLink亲和层析柱进行纯化,免疫印迹(Western blot)法鉴定纯化后的Ts14-3-3.3重组蛋白。将纯化的Ts14-3-3.3重组蛋白免疫新西兰兔,制备Ts14-3-3.3多克隆抗体,Western blot和免疫组化法检测Ts14-3-3.3天然蛋白在猪带绦虫成虫和囊尾蚴的分布。结果成功构建猪带绦虫重组表达质粒pCznⅠ-Ts14-3-3.3,经IPTG诱导表达,获得可溶性形式高效表达的Ts14-3-3.3重组蛋白,分子质量约29.31 kD,纯化后带有His标签的Ts14-3-3.3重组蛋白能被抗血清所识别。用纯化的Ts14-3-3.3重组蛋白免疫新西兰兔,获得了Ts14-3-3.3多克隆抗体,其效价为1∶512000。Western blot和免疫组化结果显示,Ts14-3-3.3天然蛋白在猪带绦虫成虫和囊尾蚴中均有表达。结论成功制备猪带绦虫重组Ts14-3-3.3蛋白,并获得了高纯度、高效价的兔多克隆抗体。 展开更多

关键词 猪带绦虫 ts14-3-3.3蛋白 原核表达 多克隆抗体

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EGFR基因突变晚期非小细胞肺癌患者TS、ERCC1、β-tubulin-Ⅲ和RRM1蛋白的表达及意义 被引量：3

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作者 马建刚 王惠琴 +2 位作者 任加良 张丽媛 陈方园 《海南医学》 CAS 2019年第23期3007-3010,共4页

目的研究表皮生长因子受体(EGFR)基因突变晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者中胸苷酸合成酶(TS)、切除修复交叉互补蛋白1(ERCC1)、β微管蛋白3(β-tubulin-Ⅲ,TUBB3)和核苷酸还原酶亚单位M1(RRM1)蛋白的表达,为临床上EGFR基因突变晚期NSCLC... 目的研究表皮生长因子受体(EGFR)基因突变晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者中胸苷酸合成酶(TS)、切除修复交叉互补蛋白1(ERCC1)、β微管蛋白3(β-tubulin-Ⅲ,TUBB3)和核苷酸还原酶亚单位M1(RRM1)蛋白的表达,为临床上EGFR基因突变晚期NSCLC患者的个体化化疗方案选择提供参考。方法选取2015年1月至2017年6月陕西中医药大学第二附属医院呼吸内科收治的晚期NSCLC患者进行研究,依据EGFR基因的29种突变情况检测结果筛选出发生EGFR基因突变的128例晚期NSCLC患者。应用免疫组织化学法检测所选患者肿瘤组织中TS、ERCC1、β-tubulin-Ⅲ和RRM1蛋白的表达水平,通过观察各蛋白表达水平的差异情况、相关性以及与生存期的关系,来评估其在晚期NSCLC患者选择个体化化疗方案中的应用价值。结果EGFR基因突变晚期NSCLC患者肿瘤组织中TS、ERCC1、β-tubulin-Ⅲ和RRM1蛋白的表达阳性率分别为65.63%、60.16%、54.69%和50.78%;TS、ERCC1、β-tubulin-Ⅲ和RRM1蛋白表达的阳性率与患者的性别、年龄、肿瘤组织分型均无关(P>0.05);患者肿瘤组织中的TS、ERCC1、β-tubulin-Ⅲ和RRM1蛋白表达之间均呈正相关(P<0.05);TS、ERCC1和RRM1表达阴性患者的平均生存期和2年存活率分别为(23.33±1.22)个月、(22.97±1.41)个月、(18.57±2.03)个月和72.73%、68.63%、65.08%,均明显高于表达阳性患者的平均生存期[(17.43±1.68)个月、(17.63±0.97)个月、(15.93±1.87)个月]和2年存活率(51.19%、49.35%、46.15%),差异均有统计学意义(P<0.05);β-tubulin-Ⅲ表达阴性患者的平均生存期和2年存活率分别为(17.03±1.55)个月和58.62%,与表达阳性患者的(16.87±1.36)个月和48.57%比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论临床上可以通过检测TS、ERCC1、β-tubulin-Ⅲ和RRM1蛋白的表达程度来筛选效能较好的化疗药物,指导EGFR基因突变晚期NSCLC患者选择个体化化疗方案。同时,TS、ERCC1、β-tubulin-Ⅲ和RRM1蛋白在� 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 表皮生长因子受体基因 胸苷酸合成酶 切除修复交叉互补蛋白1 β微管蛋白3 核苷酸还原酶亚单位M1

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日本血吸虫Sj-Ts1基因的亚克隆表达与免疫保护效果测定 被引量：1

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作者 王林纤 陈欲晓 +7 位作者 周东明 蔡春 陈利玉 唐连飞 罗永慧 张顺科 曾宪芳 易新元 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第7期592-595,共4页

在大肠杆菌中高效表达日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)Sj -Ts1融合蛋白并测定其免疫保护效果。将Sj-Ts1基因亚克隆至 pGEX - 5X - 3原核载体 ,转化入大肠杆菌ER2 5 6 6 ,并用IPTG对该重组菌进行诱导表达中。将此表达产物进行West... 在大肠杆菌中高效表达日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)Sj -Ts1融合蛋白并测定其免疫保护效果。将Sj-Ts1基因亚克隆至 pGEX - 5X - 3原核载体 ,转化入大肠杆菌ER2 5 6 6 ,并用IPTG对该重组菌进行诱导表达中。将此表达产物进行WesternBlot分析后免疫小鼠 ,免疫剂量为 10 0 μg/次 /鼠。并设蛋白佐剂对照和PBS对照。免疫三次后进行攻击感染 ,计数虫负荷及肝卵负荷。在IPTG诱导下 ,亚克隆至 pGEX - 5X - 3的Sj-Ts1基因在大肠杆菌内高效表达融合蛋白SjGST -Ts1,用此融合蛋白免疫小鼠 ,能诱导产生 2 4 16 %的减虫率和 4 8 74 %的减卵率。Sj-Ts1基因亚克隆至 pGEX -5X - 3载体后可在大肠杆菌中高效表达 ,表达产物可诱导小鼠产生一定程度的抗Sj保护性免疫力。 展开更多

关键词 日本血吸虫 Sj-ts1基因 亚克隆 表达 免疫保护效果 测定

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旋毛虫Ts-DNaseⅡ-7蛋白对Caco-2肠上皮细胞屏障的影响 被引量：1

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作者 李䶮风 王静 +5 位作者 刘晓雷 白雪 唐斌 丁静 白玉梅 刘明远 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期351-357,共7页

为了探索旋毛虫成虫期核酸酶家族Ts-DNaseⅡ-7蛋白对Caco-2肠上皮细胞屏障模型的作用及机制,本研究采用Transwell细胞培养板构建Caco-2肠上皮细胞屏障,当跨膜电阻值(TEER)达到400Ω·cm^(2)即判定肠上皮屏障模型构建成功。将试验组... 为了探索旋毛虫成虫期核酸酶家族Ts-DNaseⅡ-7蛋白对Caco-2肠上皮细胞屏障模型的作用及机制,本研究采用Transwell细胞培养板构建Caco-2肠上皮细胞屏障,当跨膜电阻值(TEER)达到400Ω·cm^(2)即判定肠上皮屏障模型构建成功。将试验组分为对照组(control)、PBS组、Ts-DNaseⅡ-7组(5μg/m L)、阳性对照LPS组(15μg/m L),作用48 h后,检测跨上皮电阻值(TEER)和对FITC的通透性;Western-blot和荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞Claudin 1、Occludin和ZO-1的蛋白表达水平和m RNA表达水平;通过细胞免疫荧光观察各组紧密连接蛋白的分布情况。结果,与对照组相比,Ts-DNaseⅡ-7组在第48小时TEER值降低,FITC的通透性增加;Claudin 1、Occludin和ZO-1的蛋白及m RNA的表达水平降低;免疫荧光试验可见细胞间的网状结构荧光不连续。结果表明,旋毛虫成虫期Ts-DNaseⅡ-7蛋白可破坏肠上皮细胞的物理屏障,有助于旋毛虫实现顺利寄生。 展开更多

关键词 旋毛虫 ts-DNaseⅡ-7 肠屏障 通透性 紧密连接蛋白

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旋毛虫Ts-Sp-7蛋白的表达纯化及其多克隆抗体的制备 被引量：1

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作者 张胜兰 刘琰 +6 位作者 李岩松 刘晓雷 白雪 唐斌 王学林 刘明远 周玉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1368-1373,共6页

为给旋毛虫病的诊断及疫苗研制提供备选抗原,对本实验室获得的旋毛虫Ts-Sp-7基因(GenBank登录号EU263332.1)进行PCR扩增,构建原核表达载体,进行表达纯化,Western-blot分析。制备多克隆抗体进行间接免疫荧光分析。通过PCR扩增出1372 bp的... 为给旋毛虫病的诊断及疫苗研制提供备选抗原,对本实验室获得的旋毛虫Ts-Sp-7基因(GenBank登录号EU263332.1)进行PCR扩增,构建原核表达载体,进行表达纯化,Western-blot分析。制备多克隆抗体进行间接免疫荧光分析。通过PCR扩增出1372 bp的Ts-Sp-7基因。SDS-PAGE结果显示,该蛋白大小为46 ku左右,与理论分子质量一致。Western-blot结果显示,该目的蛋白与10000条/头感染剂量不同感染时间的猪阳性血清均呈现特异性条带。制备的多克隆抗体效价为1∶350000。Ts-Sp-7多克隆抗体的间接免疫荧光鉴定结果显示,Ts-Sp-7蛋白在旋毛虫肌幼虫期存在于虫体表面。 展开更多

关键词 旋毛虫 ts-Sp-7蛋白 原核表达 间接免疫荧光

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