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α-亚麻酸对TM3细胞活性及相关基因表达的影响 被引量:5
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作者 李万宏 李发弟 +2 位作者 翁秀秀 乐祥鹏 李纯锦 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期102-107,共6页
α-亚麻酸(ALA)是哺乳动物必需脂肪酸的重要成员,在机体生长和发育过程中起着重要作用。在雄性动物生殖系统,ALA通过代谢生成二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA),进而对生殖系统发挥调控功能。采用WST-1、JC-1以及RT-PCR等方法研究... α-亚麻酸(ALA)是哺乳动物必需脂肪酸的重要成员,在机体生长和发育过程中起着重要作用。在雄性动物生殖系统,ALA通过代谢生成二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA),进而对生殖系统发挥调控功能。采用WST-1、JC-1以及RT-PCR等方法研究ALA对体外培养的小鼠睾丸间质细胞TM3细胞的活力及相关基因表达的影响。结果表明:培养体系中添加10,50,100,200,400μmol/L的ALA,处理24 h可以显著提高TM3细胞活力(P<0.05),并且呈剂量依赖性。与对照组相比,50μmol/L的ALA处理24 h可以促进TM3细胞增殖,提高线粒体膜电位,抑制凋亡相关基因Caspase-3表达(P<0.05),促进类固醇代谢相关基因StAR表达(P<0.05)。这说明在体外培养体系中添加ALA可以增加TM3细胞活性,促进细胞增殖和StAR基因表达,抑制Caspase-3基因表达。 展开更多
关键词 Α-亚麻酸 tm3细胞 增殖
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益精方介导PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬抑制Leydig细胞凋亡的体外实验研究 被引量:4
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作者 曹 闵潇 +2 位作者 朱健 贾金铭 焦拥政 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1112-1118,共7页
目的:从益精方通过调控小鼠睾丸Leydig细胞自噬与凋亡的方式,探索益精方改善少弱精子症患者精子质量的作用机制。方法:用100μmol/L的丙烯醛(ACR)诱导小鼠Leydig细胞(TM3)氧化应激模型,然后分别用5%、10%和20%的益精方含药血清处理TM3细... 目的:从益精方通过调控小鼠睾丸Leydig细胞自噬与凋亡的方式,探索益精方改善少弱精子症患者精子质量的作用机制。方法:用100μmol/L的丙烯醛(ACR)诱导小鼠Leydig细胞(TM3)氧化应激模型,然后分别用5%、10%和20%的益精方含药血清处理TM3细胞,将TM3细胞分成正常对照组,模型组,益精方低、中、高剂量组。利用CCK-8法检测TM3细胞活率,Real-time PCR和Western印迹检测自噬/凋亡相关基因Beclin-1、Bcl-2、LC3-II及相关信号通路基因PI3K/Akt/mTOR mRNA及蛋白变化情况。结果:ACR诱导后,TM3细胞生长受到抑制(生存率为54%);与正常对照组比较,MDA含量明显增加(P<0.01),T-AOC、SOD含量显著降低(P<0.01);mTOR mRNA明显增多(P<0.01),p-PI3K/p-Akt蛋白相对表达量明显下调(P<0.05);Beclin-1、LC3II mRNA及蛋白相对表达量均显著增多(P<0.01),Bcl-2 mRNA及蛋白相对表达量明显减少(P<0.01、P<0.05);给予益精方含药血清后,上述指标均发生不同程度的逆转变化,且具有一定的剂量依赖关系。结论:益精方能够抵抗氧化应激,可介导PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬抑制Leydig细胞凋亡,从而改善少弱精子症的精子质量。 展开更多
关键词 益精方 PI3K/AKT/MTOR LEYDIG细胞 自噬 凋亡 tm3细胞
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人参鹿茸药对配伍对小鼠睾丸间质细胞增殖活性研究 被引量:4
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作者 杨银平 王会 +5 位作者 张宇 金平 林贺 孙佳明 张辉 韩曦英 《吉林中医药》 2017年第11期1140-1142,共3页
目的人参鹿茸药对配伍对睾丸间质细胞(TM_3)细胞增殖活性的比较。方法运用均匀设计考察的方法,制备不同比例人参鹿茸药对配伍样品,应用配伍的样品干预TM_3细胞,MTT法检测细胞增殖率,并对TM_3细胞增殖作用进行评价。结果人参鹿茸配伍的... 目的人参鹿茸药对配伍对睾丸间质细胞(TM_3)细胞增殖活性的比较。方法运用均匀设计考察的方法,制备不同比例人参鹿茸药对配伍样品,应用配伍的样品干预TM_3细胞,MTT法检测细胞增殖率,并对TM_3细胞增殖作用进行评价。结果人参鹿茸配伍的各组样品均具促进TM_3细胞增殖的作用,人参与鹿茸按2.1:1剂量配伍时该药对促进TM_3细胞增殖活性的作用最佳。结论人参鹿茸药对不同剂量配伍时对促进TM_3细胞增殖活性具有协同作用,为人参鹿茸药对在补气壮阳方面的作用提供了有力的科学依据。 展开更多
关键词 人参 鹿茸 MTT法 tm3细胞 补气壮阳
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莱菔硫烷对染镉小鼠睾丸间质细胞抗氧化功能影响的研究 被引量:3
4
作者 姜丽莹 何剑斌 +3 位作者 郑伟萍 张彤 李慧 杨淑华 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第2期568-577,共10页
试验旨在研究莱菔硫烷(SFN)对染镉(Cd)小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞)抗氧化应激能力的影响。向TM3细胞培养液中添加Cd和SFN,分别测定Cd的半数抑制浓度(IC50)和SFN的安全剂量范围,建立试验模型,通过检测TM3细胞的相对存活率、乳酸脱氢酶(LDH... 试验旨在研究莱菔硫烷(SFN)对染镉(Cd)小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞)抗氧化应激能力的影响。向TM3细胞培养液中添加Cd和SFN,分别测定Cd的半数抑制浓度(IC50)和SFN的安全剂量范围,建立试验模型,通过检测TM3细胞的相对存活率、乳酸脱氢酶(LDH)活性及细胞抗氧化水平,判定SFN对Cd诱导TM3细胞毒性的影响。结果显示:1随着Cd浓度的增加,TM3细胞的相对存活率降低,Cd对体外培养TM3细胞的IC50为51.4μmol/L;SFN在一定范围内对细胞存活有促进作用,但超过范围后具有毒性,且浓度越大毒性越大,本试验条件下选择SFN浓度为2.5、5和10μmol/L。2与对照组相比,Cd组TM3细胞的T-SOD、GSH-Px活性及GSH含量显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01),LDH活性、MDA含量升高;SFN组LDH活性、MDA含量降低,GSH含量、T-SOD活性及GSH-Px活力升高;与Cd组相比,Cd+SFN组GSH含量、T-SOD活性及GSH-Px活力显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01);LDH活性、MDA含量则降低,表明SFN具有缓解染Cd诱导TM3细胞毒性的作用。 展开更多
关键词 莱菔硫烷 tm3细胞 氧化应激
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过氧化氢诱导TM3细胞氧化应激模型建立 被引量:3
5
作者 赵剑 任时 +3 位作者 翟玲玲 吴爽 许丽萍 刘铮 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期312-314,共3页
目的构建过氧化氢(H2O2)诱导小鼠睾丸间质细胞(TM3)氧化应激模型,为肥胖相关雄性生殖功能低下机制研究提供参考。方法分别以不同浓度H2O2处理TM3细胞4 h,采用噻唑蓝法测定细胞活力,酶联免疫吸附试验检测睾酮水平,比色法测定细胞内活性氧... 目的构建过氧化氢(H2O2)诱导小鼠睾丸间质细胞(TM3)氧化应激模型,为肥胖相关雄性生殖功能低下机制研究提供参考。方法分别以不同浓度H2O2处理TM3细胞4 h,采用噻唑蓝法测定细胞活力,酶联免疫吸附试验检测睾酮水平,比色法测定细胞内活性氧(ROS)含量、总抗氧化能力(TAOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢酶(CAT)活性。结果 300、600μmol/L H2O2组细胞存活率[(86.7±4.3)%、(46.3±2.0)%]均低于对照组[(100.0±1.7)%](P<0.05);与对照组[(250.09±26.70)pg/m L]比较,150、300、600μmol/L H2O2组TM3细胞睾酮水平[(188.93±7.06)、(179.23±6.66)、(131.59±11.26)pg/m L]均明显降低(P<0.05);与对照组比较,150、300、600μmol/L H2O2组TM3细胞SOD和CAT活性[分别为(2.42±0.17)、(2.69±0.30)、(0.44±0.41)和(56.76±12.17)、(23.45±2.17)、(24.55±18.05)U/mg protein]均明显下降(P<0.05)。结论成功构建以H2O2为诱导剂的TM3细胞体外氧化应激模型。 展开更多
关键词 过氧化氢(H2O2) 小鼠睾丸间质细胞(tm3) 氧化应激
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马兜铃酸诱导TM3小鼠睾丸间质细胞凋亡机制 被引量:2
6
作者 陈蓉 贠丹丹 +4 位作者 黄文峰 柴艳梅 刘丹 陈群 周成 《陕西中医》 CAS 2021年第7期819-822,共4页
目的:探讨马兜铃酸(AAs)对TM3细胞凋亡的作用及分子机制。方法:用2.5、10、25、100、400、1000μmol/L浓度的马兜铃酸分别对TM3细胞作用24、48、72 h后,CCK-8法测定细胞活力;25、100、400μmol/L的马兜铃酸对TM3细胞作用48 h后,TUNEL检... 目的:探讨马兜铃酸(AAs)对TM3细胞凋亡的作用及分子机制。方法:用2.5、10、25、100、400、1000μmol/L浓度的马兜铃酸分别对TM3细胞作用24、48、72 h后,CCK-8法测定细胞活力;25、100、400μmol/L的马兜铃酸对TM3细胞作用48 h后,TUNEL检测细胞凋亡率,实时荧光定量法检测Caspase通路相关基因Caspase-3、Caspase-9和Bax mRNA相对表达情况,并通过Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9和Bax蛋白表达水平变化。结果:不同浓度的马兜铃酸对小鼠睾丸间质细胞的活力有一定的抑制作用;用25、100、400μmol/L浓度的马兜铃酸处理TM3细胞48 h后,通过TUNEL染色发现,不同浓度的马兜铃酸能够促进细胞的凋亡,Caspase-3、Caspase-9、Bax mRNA和蛋白表达水平升高。结论:马兜铃酸通过Caspase途径促进TM3细胞的凋亡来影响生殖细胞的发育。 展开更多
关键词 马兜铃酸 tm3细胞 凋亡 睾丸间质细胞 Caspase通路 小鼠
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黄芪甲苷对镉致TM3细胞损伤的保护作用 被引量:2
7
作者 王毅 宁巍 +1 位作者 刘亚平 廖晓岗 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期879-884,共6页
目的探讨黄芪甲苷(Asd)对镉(Cd)致TM3细胞损伤的保护。方法 MTT细胞活性实验筛选Asd拮抗Cd的最佳保护浓度;流式细胞作TM3细胞凋亡分析;免疫组织化学检测连接蛋白43(connexin43,Cx43)的表达;电镜观察TM3细胞超微结构。结果 24 h、48 h MT... 目的探讨黄芪甲苷(Asd)对镉(Cd)致TM3细胞损伤的保护。方法 MTT细胞活性实验筛选Asd拮抗Cd的最佳保护浓度;流式细胞作TM3细胞凋亡分析;免疫组织化学检测连接蛋白43(connexin43,Cx43)的表达;电镜观察TM3细胞超微结构。结果 24 h、48 h MTT实验:对照组与Asd组细胞成活率差异无统计学意义,Cd组细胞成活率明显减弱且随Cd浓度增加减弱越明显,Cd+Asd组细胞成活率明显高于相应Cd组,Asd的最佳保护浓度为20 mg/L。流式细胞分析:对照组与Asd组24 h细胞凋亡率差异无统计学意义,Cd组随Cd浓度增加凋亡率逐渐增加,Cd+Asd组凋亡率均低于相应Cd组(P<0.01)。免疫组织化学:Cd处理后TM3细胞Cx43阳性产物表达的平均光密度值明显降低(P<0.01)、平均灰度值明显升高(P<0.01),Cd+Asd组阳性产物表达虽较对照组减弱但明显高于相应Cd组(P<0.01)。电镜观察:Cd处理后TM3细胞超微结构破坏明显,Cd+Asd组超微结构破坏较相应Cd组为轻。结论 Cd引起TM3细胞损伤并降低Cx43的表达,Asd有较好的保护效果。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 tm3细胞 凋亡 连接蛋白43 免疫组织化学 电镜
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EDS诱导小鼠睾丸间质细胞TM3凋亡中NDRG2的表达及意义 被引量:2
8
作者 吴利平 韩亚娟 +3 位作者 朱航 李腾 胡静 张远强 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期715-718,共4页
目的探讨N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)是否参与睾丸间质细胞的凋亡。方法选用小鼠睾丸间质细胞系TM3作为实验对象,建立体外的1,2-二甲磺酸乙烷(EDS)诱导睾丸间质细胞凋亡模型。用含有500、750μg/mL ED... 目的探讨N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)是否参与睾丸间质细胞的凋亡。方法选用小鼠睾丸间质细胞系TM3作为实验对象,建立体外的1,2-二甲磺酸乙烷(EDS)诱导睾丸间质细胞凋亡模型。用含有500、750μg/mL EDS的培养基刺激TM3细胞,以Western blot、Real-time PCR、流式细胞术等方法检测TM3细胞凋亡及NDRG2的表达变化。结果随EDS浓度增高,诱导小鼠睾丸间质细胞发生凋亡的比率升高,并且在EDS诱导的小鼠睾丸间质细胞中,NDRG2的表达较对照组呈现剂量依赖性增高。结论 NDRG2可能参与到睾丸间质细胞的凋亡。 展开更多
关键词 N-myc下游调节基因2 1 2-二甲磺酸乙烷 睾丸间质细胞 tm3 凋亡
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低氧对原代睾丸间质细胞和细胞系TM3、MLTC-1中核呼吸因子1与睾酮合成的影响 被引量:1
9
作者 邹治然 王雪婷 朱俐 《南通大学学报(医学版)》 2017年第5期395-399,共5页
目的:探究低氧条件下,小鼠原代睾丸间质细胞、小鼠睾丸间质细胞系TM3、小鼠睾丸间质瘤细胞系MLTC-1中核呼吸因子1(nuclear respiratory factor 1,NRF-1)表达和睾酮合成的变化。方法:低氧处理3种细胞12、24、48 h,采用Western Blot、实... 目的:探究低氧条件下,小鼠原代睾丸间质细胞、小鼠睾丸间质细胞系TM3、小鼠睾丸间质瘤细胞系MLTC-1中核呼吸因子1(nuclear respiratory factor 1,NRF-1)表达和睾酮合成的变化。方法:低氧处理3种细胞12、24、48 h,采用Western Blot、实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)、细胞免疫荧光检测NRF-1蛋白水平和m RNA水平的变化;采用酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测培养基中睾酮的含量。结果:(1)Western Blot、real-time PCR、免疫荧光实验证明,与常氧组比较,低氧处理后原代睾丸间质细胞组和MLTC-1细胞组中NRF-1蛋白水平和m RNA水平均显著下降,而TM3细胞中NRF-1 m RNA和蛋白水平显著上升;(2)ELISA实验证明,与常氧组比较,低氧处理后原代睾丸间质细胞组睾酮分泌水平明显下降,而TM3细胞组睾酮分泌水平显著上升。结论:低氧能诱发原代睾丸间质细胞、TM3细胞和MLTC-1细胞中NRF-1和睾酮水平发生明显变化,其中NRF-1变化与睾酮变化呈正相关。 展开更多
关键词 睾丸间质细胞 tm3细胞 MLTC-1细胞 核呼吸因子1 睾酮
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没食子酸对小鼠TM3细胞凋亡的影响 被引量:1
10
作者 李万宏 乐祥鹏 +2 位作者 李熙成 翁秀秀 李发弟 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期581-586,共6页
为了研究植物多酚类化合物没食子酸(Gallic acid,GA)对小鼠TM3睾丸间质细胞凋亡的影响,利用WST-1、JC-1、DAPI以及RT-PCR方法研究GA对体外培养的TM3细胞活力、线粒体膜电位、增殖凋亡相关基因表达的影响。WST-1结果显示,培养体系中添加0... 为了研究植物多酚类化合物没食子酸(Gallic acid,GA)对小鼠TM3睾丸间质细胞凋亡的影响,利用WST-1、JC-1、DAPI以及RT-PCR方法研究GA对体外培养的TM3细胞活力、线粒体膜电位、增殖凋亡相关基因表达的影响。WST-1结果显示,培养体系中添加0,20,100,200,400μmol/L的GA,处理24 h后可抑制TM3细胞活力,且呈剂量依赖性,与对照组相比较,20~400μmol/L处理组TM3细胞活力显著降低(P<0.05)。进一步研究发现,20μmol/L和400μmol/L GA显著抑制细胞增殖相关基因Cyclin B1及PCNA表达(P<0.05),促进细胞凋亡相关基因BAX表达(P<0.05),引起细胞线粒体膜电位降低,细胞核固缩,形成细胞凋亡小体。结果表明,体外培养体系中添加GA可以明显抑制TM3细胞活力,引起细胞细胞凋亡。 展开更多
关键词 tm3细胞 没食子酸 细胞凋亡
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T-2毒素对TM3细胞线粒体功能的影响 被引量:1
11
作者 黄优 文银容 +3 位作者 杨成林 徐泽河 郭江鹏 邬静 《中兽医医药杂志》 2019年第6期9-13,共5页
探讨T-2毒素对TM3细胞线粒体功能的影响。将不同浓度T-2毒素(0 nM、1 nM、10 nM、100 nM)作用于TM3细胞24 h,通过MTT法检测T-2毒素对TM3细胞增殖的影响;生化方法测定细胞内Ca^2+、活性氧、线粒体超氧化物、ATP的含量、Ca^2+-Mg^2+-ATPas... 探讨T-2毒素对TM3细胞线粒体功能的影响。将不同浓度T-2毒素(0 nM、1 nM、10 nM、100 nM)作用于TM3细胞24 h,通过MTT法检测T-2毒素对TM3细胞增殖的影响;生化方法测定细胞内Ca^2+、活性氧、线粒体超氧化物、ATP的含量、Ca^2+-Mg^2+-ATPase和Na^+-K^+-ATPase的活性以及线粒体膜电位的变化。结果显示,T-2毒素对TM3细胞具有毒性作用,可引起细胞内Ca^2+含量增加,使细胞内活性氧和线粒体超氧化物的含量增加,降低线粒体膜电位、ATP的含量以及ATP依赖的Ca^2+-Mg^2+-ATPase和Na^+-K^+-ATPase的活性,进而影响线粒体功能的发挥。 展开更多
关键词 T-2毒素 tm3细胞 线粒体功能
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Sox30基因敲除致小鼠睾丸间质细胞增殖异常的研究 被引量:1
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作者 唐莹 姜晓 +5 位作者 韩飞 周洋西 崔志鸿 刘晋祎 杨惠芳 曹佳 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1063-1073,共11页
目的探讨Sox30基因敲除对小鼠睾丸间质细胞增殖的影响。方法采用HE染色法观察10周龄Sox30基因野生型(Sox30^(+/+))、杂合型(Sox30^(-/+))及纯合缺失型(Sox30^(-/-))小鼠睾丸组织病理形态;采用免疫组化技术检测睾丸组织中间质细胞特异性... 目的探讨Sox30基因敲除对小鼠睾丸间质细胞增殖的影响。方法采用HE染色法观察10周龄Sox30基因野生型(Sox30^(+/+))、杂合型(Sox30^(-/+))及纯合缺失型(Sox30^(-/-))小鼠睾丸组织病理形态;采用免疫组化技术检测睾丸组织中间质细胞特异性表达蛋白3β-HSD的表达水平;采用慢病毒感染及siRNA干扰技术构建Sox30基因过表达及敲低TM3细胞模型,并在此细胞模型基础上分别采用CCK-8法、流式细胞术、RT-qPCR法以及Western blot法检测细胞存活率、细胞周期分布及周期相关基因的mRNA及蛋白表达水平。采用JASPAR数据库预测Sox30与周期相关基因的启动子区结合位点。结果与Sox30^(+/+)和Sox30^(-/+)小鼠比较,HE染色结果显示Sox30^(-/-)小鼠睾丸组织中间质细胞显著增生,同时免疫组化染色发现表达3β-HSD的间质细胞增多。与Vector组相比,Sox30组TM3细胞存活率降低(P<0.05),G1期细胞周期阻滞(P<0.05),同时细胞周期相关基因CyclinD1、Cdk2等mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与Sox30-NC组比较,siSox30-3组TM3细胞存活率增加(P<0.05),G1期细胞周期阻滞恢复(P<0.05),同时细胞周期相关基因CyclinD1、Cdk2等mRNA和蛋白表达水平显著恢复(P<0.05)。JASPAR预测发现CyclinD1、Cdk2的启动子区域均存在Sox30蛋白质可能的结合位点。结论Sox30基因敲除可导致小鼠间质细胞增殖异常,CyclinD1和Cdk2可能是Sox30调控细胞周期的重要靶基因。 展开更多
关键词 Sox30 小鼠睾丸间质细胞 tm3细胞 细胞周期
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黑木耳多糖对TM_3细胞增殖的影响 被引量:1
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作者 杨柠 张赫 +3 位作者 张凤娟 阮立文 郑楷 沈楠 《吉林医药学院学报》 2019年第1期1-4,共4页
目的 MTT法观察不同浓度黑木耳多糖及其含药血清对大鼠睾丸间质细胞(TM_3细胞)增殖的影响,为黑木耳多糖抑制大鼠生殖系统功能的机制研究提供理论依据。方法大鼠灌胃制备的黑木耳多糖溶液和黑木耳多糖含药血清分别作用于TM_3细胞,采用MT... 目的 MTT法观察不同浓度黑木耳多糖及其含药血清对大鼠睾丸间质细胞(TM_3细胞)增殖的影响,为黑木耳多糖抑制大鼠生殖系统功能的机制研究提供理论依据。方法大鼠灌胃制备的黑木耳多糖溶液和黑木耳多糖含药血清分别作用于TM_3细胞,采用MTT法观察两种处理方式对TM_3细胞增殖的影响。结果不同浓度黑木耳多糖处理组与对照组之间的吸光度值差异极显著(P <0. 01),不同浓度黑木耳多糖组之间的吸光度值差异极显著(P <0. 01)或显著(P <0. 05),随着黑木耳多糖浓度增加,吸光度值先增加,后降低。不同浓度黑木耳多糖含药血清组与对照血清组之间的吸光度值差异极显著(P <0. 01)或显著(P <0. 05),各浓度黑木耳多糖含药血清组吸光度值均明显低于对照血清组。结论黑木耳多糖溶液对TM_3增殖表现为低浓度促进,高浓度抑制,黑木耳多糖含药血清对TM_3细胞增殖表现为明显抑制作用。 展开更多
关键词 黑木耳多糖 血清药理学 睾丸间质细胞 细胞增殖
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骨髓间充质干细胞来源的外泌体对环磷酰胺导致的睾丸间质细胞损伤的保护作用
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作者 彭钒 梁浩宇 +5 位作者 廖森林 翟嘉文 薛康颐 夏慧 周其赵 刘存东 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期295-300,共6页
目的:探究骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的外泌体对环磷酰胺(CP)导致的小鼠睾丸间质细胞TM3损伤的改善作用。方法:利用超高速离心法提取BMSC来源的外泌体(exo),然后分析其粒径大小和观察其在电镜下的形态,蛋白免疫印迹法检测exo的典型标... 目的:探究骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的外泌体对环磷酰胺(CP)导致的小鼠睾丸间质细胞TM3损伤的改善作用。方法:利用超高速离心法提取BMSC来源的外泌体(exo),然后分析其粒径大小和观察其在电镜下的形态,蛋白免疫印迹法检测exo的典型标志蛋白。将外泌体与睾丸间质细胞TM3共培养做摄取实验,观察TM3细胞对exo的摄取情况。构建睾丸间质细胞CP损伤模型,主要分组为对照组、CP组及CP+exo组,利用CCK-8法检测各组细胞活力,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,ELISA法检测细胞上清液的睾酮水平,最后利用蛋白免疫印迹法检测与睾酮合成相关的关键酶类固醇激素合成急性调控蛋白(StAR)的表达。结果:CP组与对照组相比活力明显降低,而加入exo共培养后,可以恢复TM3细胞的部分活力(P<0.05)。流式凋亡结果图中,CP组的凋亡率明显比对照组的升高,而CP+exo组则在一定程度上降低了凋亡率(P<0.01)。CP组细胞上清液中的睾酮水平较对照组下降,而加入exo后可提高睾丸间质细胞TM3分泌的睾酮水平(P<0.01)。StAR蛋白免疫印迹上,提示在CP组中StAR的表达量相比于对照组是降低的,而CP+exo组则是有一定程度的升高(P<0.01)。结论:BMSC-exo对CP导致的睾丸间质细胞TM3损伤具有保护作用,并且在一定程度上能恢复TM3细胞分泌的睾酮水平。 展开更多
关键词 外泌体 环磷酰胺 睾丸间质细胞 tm3细胞 损伤 睾酮 小鼠
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不同剂量^(60)Co-γ射线对TM3细胞的损伤效应
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作者 张烨敏 欧俊 +4 位作者 焦婷婷 张艺凡 邹冬芳 惠宁 孙健 《临床与病理杂志》 2016年第3期258-263,共6页
目的:对不同剂量6 0Co-γ射线下TM 3细胞的损伤进行细胞生物学行为、转录层面的分析。方法:TM 3细胞分4组,包括3个6 0Co-γ射线照射组(3、6、9 Gy)及对照组(不照射)。于2 4、4 8、7 2 h观察各组细胞凋亡情况(流式细胞法)、氧化损伤(ELI... 目的:对不同剂量6 0Co-γ射线下TM 3细胞的损伤进行细胞生物学行为、转录层面的分析。方法:TM 3细胞分4组,包括3个6 0Co-γ射线照射组(3、6、9 Gy)及对照组(不照射)。于2 4、4 8、7 2 h观察各组细胞凋亡情况(流式细胞法)、氧化损伤(ELISA)、睾酮合成关键因子(St AR、P450scc、P450c17及3β-HSD)的m R NA表达(实时定量PCR法)。于24、48、72、96、120、144 h,观察细胞增殖情况(MTS法)。结果:第24、72 h,各照射组细胞凋亡率均高于对照组(P<0.008);MTS实验中,第144、120 h,各照射组OD490值均低于对照组(P<0.008);第24,48,72 h,3 Gy组8-OHd G浓度与对照组相比无差异(P>0.008),而9 Gy组高于对照组(P<0.008);在72 h,各照射组St AR、P450scc、3β-HSD m RNA表达均低于对照组(P<0.008),而P450c17的表达在3 Gy组中无显著改变,在6 Gy组中高于对照组,在9 Gy组中低于对照组。结论:6 0Co-γ射线使TM 3细胞凋亡增加、细胞增殖能力下降。6 Gy、9 Gy照射可以导致TM3细胞DNA的氧化损伤。辐照导致TM3细胞中St AR、P450scc、3β-HSD m RNA表达下降。6 Gy的照射使P450c17 m RNA表达上升,9 Gy使之下降。 展开更多
关键词 60Co-γ射线 tm3细胞 细胞凋亡 细胞增殖 睾酮合成关键因子
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黄芪甲苷减轻镉致TM3细胞Cx43表达下降及缝隙连接细胞间通讯功能减退
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作者 王毅 刘亚平 +2 位作者 宁巍 吴余 廖晓岗 《基础医学与临床》 CSCD 2016年第12期1708-1712,共5页
目的探讨黄芪甲苷(As)对镉(Cd)致TM3细胞连接蛋白43(Cx43)表达改变及由Cx43介导的缝隙连接细胞间通讯(GJIC)功能改变的保护作用。方法用TM3细胞系作为研究对象,设对照组、As(20 mg/L)组、Cd(10μmol/L)组、Cd加As组,免疫组织化学方法分... 目的探讨黄芪甲苷(As)对镉(Cd)致TM3细胞连接蛋白43(Cx43)表达改变及由Cx43介导的缝隙连接细胞间通讯(GJIC)功能改变的保护作用。方法用TM3细胞系作为研究对象,设对照组、As(20 mg/L)组、Cd(10μmol/L)组、Cd加As组,免疫组织化学方法分析Cx43阳性产物表达,荧光定量PCR检测Cx43 mRNA表达,Western blot检测Cx43蛋白表达,划痕标记染料示踪技术(SLDT)检测GJIC功能。结果与对照组相比,Cd组TM3细胞Cx43阳性产物表达的平均吸光度值(A_(OD))显著降低(P<0.01),Cx43 mRNA和蛋白表达下降(P<0.01),TM3细胞GJIC功能降低(P<0.01);Cd+As组TM3细胞Cx43阳性产物表达虽较对照组减弱但明显高于相应Cd组(P<0.01),Cx43 mRNA、蛋白表达及GJIC功能虽比对照组降低,但较Cd组高(P<0.01)。结论黄芪甲苷对镉致TM3细胞Cx43表达下降及GJIC功能减退有明显的拮抗作用。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 tm3细胞 缝隙连接蛋白43 缝隙连接细胞间通讯
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Blepharis persica increases testosterone biosynthesis by modulating StAR and 3β-HSD expression in rat testicular tissues
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作者 Nilesh Gaikar Nishit Patel +3 位作者 Samir Patel Priyal Patel Piyush Chudasama Manan Raval 《Asian pacific Journal of Reproduction》 2022年第1期27-34,I0001-I0003,共11页
Objective:To evaluate the effect of methanolic extract and ethyl acetate fraction of methanol extract prepared from the seeds of Blepharis(B.)persica on testosterone biosynthesis and also to elucidate the underlying m... Objective:To evaluate the effect of methanolic extract and ethyl acetate fraction of methanol extract prepared from the seeds of Blepharis(B.)persica on testosterone biosynthesis and also to elucidate the underlying mechanism.Methods:Forty-eight male Wistar rats were divided into eight groups(n=6 per group).GroupⅠreceived 0.3%w/w gum acacia suspension p.o.and served as the normal control group.GroupⅡwas administered testosterone propionate in arachis oil i.m.as the positive control group.GroupⅢtoⅣreceived B.persica methanolic extract p.o.at doses of 50,100 and 200 mg/kg body weight.GroupⅥtoⅦreceived B.persica ethyl acetate fraction p.o.at doses of 50,100 and 200 mg/kg body weight.The testis was used for biochemical estimation and histological studies.The effects of methanolic extract and ethyl acetate fraction of B.persica on testicular testosterone,mRNA expression corresponding to steroidogenic acute regulatory protein(StAR)and 3β-hydroxysteroid dehydrogenase(3β-HSD)along with 3β-HSD enzyme assay were evaluated in testicular tissues and sperm concentration.Ethyl acetate fraction of B.persica was subjected to column chromatography.Invitro studies were performed using TM3 cell line at three dose levels(50,100,200μg/mL),each for methanolic extract,ethyl acetate fraction and 2-benzoxazolinone for evaluation of their comparative effect on testosterone production.Results:Ethyl acetate fraction and methanolic extract of B.persica could elevate the testicular testosterone content compared to the normal control group.The treatment with methanolic extract and ethyl acetate fraction of B.persica increased the expression of mRNA corresponding to StAR by 6.7 fold and 10.6 fold,respectively,whereas the mRNA expression of 3β-HSD increased by 5.7 fold and 7.3 fold,respectively.Moreover,fraction and extract treatment exhibited increased 3β-HSD activity in the testicular tissues and were found to elevate sperm concentration in seminal fluid.The spermatogenic potential was further ensured by histological observat 展开更多
关键词 Blepharis persica TESTOSTERONE Spermatogenic Leydig cells 3β-hydroxysteroid dehydrogenase Steroidogenic acute regulatory protein mRNA expression tm3 cell line
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二甲双胍对H_(2)O_(2)诱导的TM3小鼠睾丸间质细胞氧化应激和细胞凋亡的影响 被引量:10
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作者 穆杨 杨菁 《生殖医学杂志》 CAS 2021年第5期644-648,共5页
目的探讨二甲双胍对H_(2)O_(2)诱导的TM3小鼠睾丸间质细胞损伤的作用。方法将TM3小鼠睾丸间质细胞随机分为4组,分别为正常对照组、二甲双胍组、H_(2)O_(2)模型组以及H_(2)O_(2)+二甲双胍组。各组细胞培养24 h后,利用CCK-8法检测细胞存活... 目的探讨二甲双胍对H_(2)O_(2)诱导的TM3小鼠睾丸间质细胞损伤的作用。方法将TM3小鼠睾丸间质细胞随机分为4组,分别为正常对照组、二甲双胍组、H_(2)O_(2)模型组以及H_(2)O_(2)+二甲双胍组。各组细胞培养24 h后,利用CCK-8法检测细胞存活率,ELISA检测TM3细胞睾酮的分泌情况,实时定量PCR检测睾酮合成酶StAR、P450scc、17β-HSD的mRNA表达情况,采用比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量,Western blot检测TM3细胞内凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3的表达情况。结果与正常对照组相比,H_(2)O_(2)模型组TM3细胞的睾酮水平显著降低,睾酮合成酶StAR、P450scc和17β-HSD的mRNA表达水平显著降低,细胞内SOD和CAT活性显著降低,细胞存活率亦显著降低(P均<0.05),MDA含量及Cleaved-caspase3表达水平显著升高(P<0.05)。与H_(2)O_(2)模型组相比,H_(2)O_(2)+二甲双胍组TM3细胞的睾酮水平显著升高,睾酮合成酶的mRNA表达水平显著升高,SOD和CAT活性显著升高,细胞存活率显著提高(P均<0.05),MDA含量及Cleaved-caspase3表达水平显著降低(P<0.05)。结论二甲双胍可减轻H_(2)O_(2)诱导的TM3小鼠睾丸间质细胞功能损伤。 展开更多
关键词 二甲双胍 H_(2)O_(2) tm3小鼠睾丸间质细胞 细胞损伤
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蛇床子素对TM3小鼠睾丸间质细胞增殖及雄激素合成与分泌的影响 被引量:7
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作者 梁龙龙 潘志强 +4 位作者 王晓敏 方肇勤 卢文丽 刘小美 张园园 《中药药理与临床》 CSCD 北大核心 2017年第3期45-49,共5页
目的:研究蛇床子素对体外培养的睾丸间质细胞雄激素合成与分泌的影响。方法:以TM3小鼠睾丸间质细胞为实验对象,采用1~320μmol/L蛇床子素干预TM3细胞24h、48h和72h,以MTT检测细胞增殖;采用5~80μmol/L蛇床子素干预TM3细胞24h和48h,RT-q ... 目的:研究蛇床子素对体外培养的睾丸间质细胞雄激素合成与分泌的影响。方法:以TM3小鼠睾丸间质细胞为实验对象,采用1~320μmol/L蛇床子素干预TM3细胞24h、48h和72h,以MTT检测细胞增殖;采用5~80μmol/L蛇床子素干预TM3细胞24h和48h,RT-q PCR技术检测雄激素合成酶相关基因mRNA表达;采用80μmol/L蛇床子素干预TM3细胞15min^12h,RTq PCR技术检测即刻早期基因mRNA表达,并运用Western blot方法检测CYP17A1蛋白表达,ELISA方法检测细胞分泌液睾酮含量。结果:与对照组(Con)比较,160~320μmol/L蛇床子素作用48h和72 h均显著抑制TM3细胞增殖。不同浓度蛇床子素干预TM3细胞24h和48h后,与对照组比较,40μmol/L和80μmol/L蛇床子素显著促进类固醇急性调节蛋白(Star)基因表达;80μmol/L蛇床子素显著促进胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1)基因表达;大于20μmol/L蛇床子素显著增强细胞色素P45017α1羟化酶(Cyp17a1)基因表达、尤其是干预48h上调幅度更大,但是对CYP17A1蛋白表达无明显作用;也显著促进3β类固醇脱氢酶(Hsd3b2)基因表达;大于10μmol/L蛇床子素干预24h可显著促进黄体生成素受体(Lhr)基因表达。此外,80μmol/L蛇床子素干预12h可显著促进Star和Nr4a2基因表达,作用15min^1h即可显著增强Nr4a1基因表达。且蛇床子素可升高TM3细胞睾酮水平。结论:蛇床子素具有促进小鼠睾丸间质细胞雄激素合成与分泌的药理作用。 展开更多
关键词 蛇床子素 tm3细胞 雄激素 睾酮 基因表达 类固醇急性调节蛋白 P45017α1羟化酶 3β类固醇脱氢酶
原文传递
白藜芦醇通过沉默调节蛋白1-解偶联蛋白2信号通路降低小鼠睾丸间质细胞TM3的氧化损伤 被引量:6
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作者 张晓春 陈指龙 +3 位作者 方娟 黎陈 伍小松 杨青 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期2632-2640,共9页
本试验旨在研究白藜芦醇(RES)对氧化损伤小鼠睾丸间质细胞TM3的保护作用,并探索其可能的作用机制。首先,用不同浓度(0、150、200、250、300μmol/L)的过氧化氢(H2O2)处理小鼠睾丸间质细胞TM3 8 h,确定建立氧化损伤细胞模型的适宜H2O2浓... 本试验旨在研究白藜芦醇(RES)对氧化损伤小鼠睾丸间质细胞TM3的保护作用,并探索其可能的作用机制。首先,用不同浓度(0、150、200、250、300μmol/L)的过氧化氢(H2O2)处理小鼠睾丸间质细胞TM3 8 h,确定建立氧化损伤细胞模型的适宜H2O2浓度;然后,用不同浓度(0、2.5、5.0和10.0μmol/L)的RES分别处理正常细胞24 h,确定RES安全浓度;最后,用安全浓度的RES处理氧化损伤细胞24 h。在整个培养过程中采用i CELLigence实时无标记细胞功能分析仪监测细胞的增殖情况;待安全浓度的RES处理氧化损伤细胞结束后采用2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针法检测细胞中活性氧(ROS)的含量,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和蛋白质印迹(Western blotting)法分别检测沉默调节蛋白1(SIRT1)/解偶联蛋白2(UCP2)信号通路中关键因子SIRT1和UCP2 mRNA和蛋白质的相对表达量。结果表明:1)用浓度为150μmol/L及以上的H2O2处理细胞8 h后,极显著降低细胞存活率(P<0.01),因此确定150μmol/L为建立氧化损伤细胞模型的适宜H2O2浓度。2)用10.0μmol/L及以下浓度的RES处理正常细胞24 h后,细胞存活率均无显著变化(P>0.05);用2.5、5.0和10.0μmol/L的RES处理氧化损伤细胞24 h后,细胞存活率均显著提高(P<0.05),且各浓度RES组间无显著差异(P>0.05)。因此,选用5.0μmol/L为RES的安全浓度。3)用5.0μmol/L的RES处理氧化损伤细胞24 h后,细胞中ROS的含量极显著降低(P<0.01);细胞中SIRT1 mRNA和蛋白质的相对表达量极显著增加(P<0.01),而UCP2 mRNA和蛋白质的相对表达量则显著或极显著降低(P<0.01或P<0.05)。由此可见,适宜浓度的RES可激活SIRT1同时抑制UCP2的表达,UCP2通过负反馈调节方式减少细胞内ROS的生成,从而在一定程度上抑制TM 3细胞的氧化损伤。 展开更多
关键词 白藜芦醇 氧化损伤 沉默调节蛋白1 解偶联蛋白2 小鼠睾丸间质细胞tm3
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