跨膜型肿瘤坏死因子信号肽氨基酸部分缺失对细胞毒作用影响 被引量：2

1

作者 姜小丹 李清芬 +4 位作者 龚非力 徐勇 冯玮 熊平 李卓娅 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期530-532,共3页

目的　探讨跨膜型肿瘤坏死因子 (TM TNF)信号肽在其杀瘤中的作用。方法　用PCR构建突变体及体外转录、翻译蛋白质 ,分别获得TM TNF信号肽胞浆段、胞外与分泌型肿瘤坏死因子(S TNF)连接段以及部分跨膜段缺失即信号肽第 73～ 4 7、 73... 目的　探讨跨膜型肿瘤坏死因子 (TM TNF)信号肽在其杀瘤中的作用。方法　用PCR构建突变体及体外转录、翻译蛋白质 ,分别获得TM TNF信号肽胞浆段、胞外与分泌型肿瘤坏死因子(S TNF)连接段以及部分跨膜段缺失即信号肽第 73～ 4 7、 73～ 34、 34～ 1、 2 1～ 1位氨基酸缺失的TM TNF体外翻译蛋白。用MTT法检测其对HL 6 0细胞的杀伤率。结果　 34～ 1、 2 1～ 1位氨基酸缺失可提高TM TNF对HL 6 0细胞的杀伤 , 73～ 4 7位氨基酸缺失对其杀瘤力无明显作用 ,而 73～ 34位氨基酸缺失可使其杀瘤率明显下降。结论　去除信号肽胞外段可提高TM TNF α对HL 6 0细胞的杀伤率 ,而TM TNF α信号肽 4 7～ 34位氨基酸在其杀瘤过程中有重要作用。 展开更多

关键词 跨膜型 肿瘤坏死因子 信号肽 氨基酸 细胞毒作用 tm-tnf PCR

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比较跨膜型与分泌型TNF-α在体内的杀瘤效应 被引量：6

2

作者 李清芬 冯玮 +4 位作者 李卓娅 龚非力 姜晓丹 徐勇 熊平 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1999年第4期250-252,共3页

目的:比较分泌型和跨膜型TNF-α在体内抗瘤作用的异同.方法:在肿瘤局部直接注射3种TNF-α(野生型TNF-α重组体、跨膜型及分泌型TNF-α突变体)基因,观察其抗瘤效应 结果:3种TNF-α均能有效表达。并具明显抑瘤效应,跨膜型TNF-α突变体对... 目的:比较分泌型和跨膜型TNF-α在体内抗瘤作用的异同.方法:在肿瘤局部直接注射3种TNF-α(野生型TNF-α重组体、跨膜型及分泌型TNF-α突变体)基因,观察其抗瘤效应 结果:3种TNF-α均能有效表达。并具明显抑瘤效应,跨膜型TNF-α突变体对早期肿瘤的仰制效应明显高于其它2种TNF-α(P<0.01),而野生型TNF-α对中肿瘤的抗瘤效应则最佳.此外,注射3种TNF-α裸DNA均未观察到明显副作用,结论:分泌型和跨膜型TNF-α抑瘤机制可能下同,裸DNA直接用于细胞因子基因治疗较安全。 展开更多

关键词 基因治疗 跨膜型 tnf-Α 分泌型 抗瘤效应

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双导丝球囊血管成形术加支架术后血清TNF-α和IL-6测定及其临床意义 被引量：7

3

作者 周亮 张邢炜 +6 位作者 王宁夫 潘浩 徐坚 叶显华 杨建敏 童国新 李佩璋 《浙江医学》 CAS 2007年第5期417-420,共4页

目的评价双导丝球囊血管成形术对血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)浓度的影响,并研究术后血清TNF-α和IL-6水平与远期心血管事件的关系。方法冠脉造影证实的冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者共80例,分为普通... 目的评价双导丝球囊血管成形术对血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)浓度的影响,并研究术后血清TNF-α和IL-6水平与远期心血管事件的关系。方法冠脉造影证实的冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者共80例,分为普通球囊组(41例)和双导丝球囊组(39例),所有患者采用酶联免疫吸附法测定术前、术中、术后即刻,术后6、24h血清TNF-α、IL-6水平,并随访术后6个月心血管事件,比较术后再狭窄患者与无再狭窄患者之间血清TNF-α、IL-6差异。结果再狭窄患者中普通球囊组术后6h TNF-α(107.39±27.97)ng/L、IL-6(65.71±8.38)ng/L均较术前(13.63±3.30)ng/L、(11.69±2.94)ng/L明显升高(tTNF-α=4.303,tIL-6=3.747,均P<0.05);双导丝球囊组术后6hTNF-α(36.89±10.16)ng/L、IL-6(48.13±9.16)ng/L均较术前(14.74±4.07)ng/L、(11.92±3.31)ng/L升高(均P<0.05);但普通球囊组升高更明显(P<0.05);而普通球囊组术后24h TNF-α(24.64±11.86)ng/L、IL-6(20.65±7.41)ng/L与术前比较差异无统计学意义(tTNF-α=1.386,tIL-6=1.134,均P>0.05);无再狭窄的普通球囊组患者和双导丝球囊组患者各时间段的TNF-α、IL-6水平均无显著变化(均P>0.05)。结论双导丝球囊组患者术后血管损伤较小、炎症反应较轻;冠脉血管成形术后6h TNF-α和IL-6升高可能是术后发生再狭窄的预报标志,对预测冠脉血管成形术后远期疗效具有一定的价值。 展开更多

关键词 双导丝球囊血管成形术 肿瘤坏死因子-Α 白细胞介素 再狭窄

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肿瘤坏死因子α转化酶在胰岛素抵抗中的作用及有关机制 被引量：6

4

作者 周聪 高峰 +3 位作者 张皎月 于丽秀 秦铀 卢芙蓉 《中西医结合研究》 2019年第5期270-272,275,共4页

胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是指一定量的胰岛素与其特异性受体结合后所产生的生物效应低于正常,表现为外周组织尤其是肌肉、脂肪组织对葡萄糖的摄取减少及抑制肝脏葡萄糖输出的作用减弱。IR的发生与多种因子有关,如肿瘤坏死因子... 胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是指一定量的胰岛素与其特异性受体结合后所产生的生物效应低于正常,表现为外周组织尤其是肌肉、脂肪组织对葡萄糖的摄取减少及抑制肝脏葡萄糖输出的作用减弱。IR的发生与多种因子有关,如肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、抵抗素、瘦素、IL-6等[1-2],其中TNF-α在IR中起核心调节作用。人体内TNF-α主要有2种形态:TNF-α胞外段(transmembrane tumor necrosis factor-alpha,TM-TNF-α)和可溶性TNF-α(secretory TNF-alpha,sTNF-α);TM-TNF-α需要在肿瘤坏死因子α转化酶(tumor necrosis factor-αconverting enzyme,TACE)的水解作用下形成sTNF-α,才能进入循环系统,参与各种炎症和免疫反应[3]。现本文就TACE与IR的关系作如下综述。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子α 胰岛素抵抗 转化酶 tm-tnf-Α INSULIN TACE 生物效应 受体结合

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噬菌体展示TM-TNF-α模拟肽体内杀瘤效应的研究 被引量：1

5

作者 熊霞辉 喻明霞 +5 位作者 石文芳 李清芬 林莉 冯玮 徐勇 李卓娅 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期282-285,共4页

目的　研究噬菌体展示TM -TNF- α模拟肽的体内杀瘤效应及机制。方法　大量制备所需的噬菌体展示肽,比较不同展示肽对小鼠的肝癌细胞H2 2的体外杀瘤效应,挑取杀瘤效应最好的展示肽并选择其合适的滴度进行体内实验。小鼠接种H2 2细胞3d后... 目的　研究噬菌体展示TM -TNF- α模拟肽的体内杀瘤效应及机制。方法　大量制备所需的噬菌体展示肽,比较不同展示肽对小鼠的肝癌细胞H2 2的体外杀瘤效应,挑取杀瘤效应最好的展示肽并选择其合适的滴度进行体内实验。小鼠接种H2 2细胞3d后,于肿瘤接种部位皮下注射噬菌体展示肽,观察肿瘤的生长情况。结果　噬菌体展示TM- TNF -α模拟肽在体内能明显抑制肿瘤的生长(P <0 .0 1)。且抑瘤率与展示肽之间呈剂量依赖关系。HE染色发现展示肽治疗组肿瘤组织中有大量淋巴细胞浸润,而sTNF- α治疗组除淋巴细胞浸润还可见中性粒细胞、浆细胞浸润。结论　直接注射噬菌体展示TM -TNF -α模拟肽可在体内有效杀瘤,其杀瘤机制可能不同于分泌型TNF -α。 展开更多

关键词 tm-tnf-Α 噬菌体展示 杀瘤效应 模拟肽 分泌型tnf-Α 淋巴细胞浸润 肝癌细胞H22 剂量依赖关系 H22细胞 中性粒细胞 浆细胞浸润 体内实验 皮下注射 接种部位 抑制肿瘤 肿瘤组织 HE染色 直接注射 杀瘤机制 治疗组 抑瘤率

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ICAM-1协同参与TNFRI介导的TM-TNF-α杀瘤作用 被引量：1

6

作者 郑芳 石文芳 +4 位作者 冯玮 姜晓丹 徐勇 范舫 李卓娅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期42-44,共3页

目的 :寻找协同参与TM TNF α杀瘤作用的膜表面分子 ,探讨TM TNF α杀瘤及两型TNF α生物学效应差异的分子机制。方法 :利用抗体封闭实验及RT PCR ,检测ICAM 1及VCAM 1对TNFR1或TNFRII介导的TM TNF α杀瘤效应是否具有协同作用。结果 :... 目的 :寻找协同参与TM TNF α杀瘤作用的膜表面分子 ,探讨TM TNF α杀瘤及两型TNF α生物学效应差异的分子机制。方法 :利用抗体封闭实验及RT PCR ,检测ICAM 1及VCAM 1对TNFR1或TNFRII介导的TM TNF α杀瘤效应是否具有协同作用。结果 :封闭表达TNFRI的MCF 7细胞表面的ICAM 1,可显著降低TM TNF α对其杀伤的作用 ;而封闭VCAM 1无明显效应。封闭表达TNFRII的HL 6 0细胞表面的ICAM 1或VCAM 1,均对TM TNF α的杀伤作用无影响。结论 :ICAM 1对于TM TNF 展开更多

关键词 ICAM-1 tm-tnf-Α 协同 杀瘤作用

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两型TNF-α的细胞毒效应与靶细胞内Ca^(2+)浓度变化的关系 被引量：1

7

作者 石文芳 尹丙姣 +2 位作者 熊平 龚非力 李卓娅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期537-539,共3页

目的 :比较分泌型TNF α(S TNF α)和跨膜型TNF α(TM TNF α)发挥细胞毒效应时 ,引起靶细胞内Ca2 + 浓度的变化。方法 :采用生物学活性检测法 ,观察两型TNF α对不同靶细胞的杀伤效应 ;用Fura 2检测细胞内Ca2 + 浓度的变化。结果 :TM T... 目的 :比较分泌型TNF α(S TNF α)和跨膜型TNF α(TM TNF α)发挥细胞毒效应时 ,引起靶细胞内Ca2 + 浓度的变化。方法 :采用生物学活性检测法 ,观察两型TNF α对不同靶细胞的杀伤效应 ;用Fura 2检测细胞内Ca2 + 浓度的变化。结果 :TM TNF α可杀伤实验所用 6株靶细胞 ;而S TNF α则仅对其中两株有细胞毒效应。两型TNF α杀伤靶细胞时 ,均伴有明显的Ca2 + 浓度升高。用钙螯合剂EGTA(10mmol/L)预先处理靶细胞30min ,只能降低S TNF α作用的靶细胞内的Ca2 + 浓度 ,并使其细胞毒效应明显减弱 (P <0 .0 1) ;对TM TNF α无影响。结论 :两型TNF α发挥细胞毒效应时 ,均可引起靶细胞内钙离子的重分布 ,导致靶细胞内Ca2 + 浓度的升高 ,但S TNF α的作用还可能与促进胞外Ca2 + 展开更多

关键词 跨膜型tnf-Α 分泌型tnf-Α 细胞毒效应 CA^2+

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TM-TNF-α介导的反向信号协同增强sTNF-α对U937细胞的激活作用 被引量：1

8

作者 辛利军 石文芳 +6 位作者 李清芬 姜晓丹 冯玮 熊平 徐勇 龚非力 李卓娅 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期44-47,共4页

目的　用sTNFRⅠ预先激活TM TNF α介导的反向信号 ,观测其对sTNF α激活单核细胞系U937细胞的影响。方法　预先用sTNFRⅠ与U937细胞作用 30min ,洗涤后加入sTNF α作用不同时间 ,观测预激活反向信号对sTNF α刺激U937产生活性氧、胞内... 目的　用sTNFRⅠ预先激活TM TNF α介导的反向信号 ,观测其对sTNF α激活单核细胞系U937细胞的影响。方法　预先用sTNFRⅠ与U937细胞作用 30min ,洗涤后加入sTNF α作用不同时间 ,观测预激活反向信号对sTNF α刺激U937产生活性氧、胞内促炎细胞因子TNF α、IL 1 β、IL 8mRNA的转录及IκB α水平 (Westernblot)的影响。结果　单独用sTNFRⅠ激活的反向信号并不影响U937细胞的功能 ,而预激活反向信号能协同增强sTNF α刺激U937细胞产生活性氧 ,且呈sTNFRⅠ浓度、sTNF α浓度依赖关系 ;预激活反向信号协同增强sTNF α刺激U937炎性细胞因子mRNA(TNF α、IL 1 β、IL 8等 )的转录水平 ;并促进U937细胞IκB α的降解。结论　预先激活TM TNF α介导的反向信号协同增强sTNF α对U937的激活作用 ,提示反向信号可能参与机体对早期炎症反应的调节。 展开更多

关键词 tnf-α U937细胞 tnfR 激活作用 预激 介导 IL-8 转录水平 RNA 刺激

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87位氨基酸在TM-TNF-α诱导靶细胞凋亡中的作用 被引量：1

9

作者 郑芳 姜小丹 +2 位作者 冯玮 龚非力 李卓娅 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期703-706,共4页

目的　研究TM TNF α分子结构与功能的关系 ,阐明其诱导靶细胞凋亡的分子机制。方法　构建定点突变的 87/PheTM TNF pcDNA3.0 ,并瞬时转染Cos 7细胞 ,利用MTT法 ,annexinⅤ ,Westernblot检测TM TNF α突变体的胞毒效应 ,对靶细胞死亡方... 目的　研究TM TNF α分子结构与功能的关系 ,阐明其诱导靶细胞凋亡的分子机制。方法　构建定点突变的 87/PheTM TNF pcDNA3.0 ,并瞬时转染Cos 7细胞 ,利用MTT法 ,annexinⅤ ,Westernblot检测TM TNF α突变体的胞毒效应 ,对靶细胞死亡方式及对核转录因子NF κB转位的影响。结果　 87位氨基酸置换后 ,TM TNF α对靶细胞的杀伤率无明显改变 ,但TM TNF α突变体通过促进NF κB核转位 ,诱导靶细胞死亡的方式由凋亡转为坏死。结论　 87位氨基酸是TM TNF α诱导靶细胞凋亡的关键氨基酸残基 。 展开更多

关键词 tnf-α 靶细胞 凋亡 tm 诱导 坏死 MTT法 突变体 结构域 定点突变

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肌动蛋白样分子参与TNFRⅡ介导的TM-TNF-α杀瘤活性的研究 被引量：2

10

作者 郑芳 李卓娅 +5 位作者 李新平 姜晓丹 冯玮 徐勇 熊平 龚非力 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期480-483,共4页

目的　寻找并研究参与TM TNF α杀瘤的协同分子 ,进一步揭示TM TNF α发挥生物学作用的特征 ,阐明其与S TNF α功能差异的分子机制。方法　利用免疫共沉淀法、质谱分析、Westernblot及细胞毒实验探索参与TM TNF α杀瘤功能的协同作用分... 目的　寻找并研究参与TM TNF α杀瘤的协同分子 ,进一步揭示TM TNF α发挥生物学作用的特征 ,阐明其与S TNF α功能差异的分子机制。方法　利用免疫共沉淀法、质谱分析、Westernblot及细胞毒实验探索参与TM TNF α杀瘤功能的协同作用分子并确定其性质。结果　TM TNF α免疫共沉淀产物中发现一相对分子质量 (Mr)为 4 3× 10 3蛋白分子 ,用质谱分析及Westernblot证实该分子属于肌动蛋白家族 ;用抗肌动蛋白抗体封闭效应细胞和 或靶细胞后 ,TM TNF α对主要表达TNFRⅡ的肿瘤细胞HL 6 0的杀伤作用显著下降 ,而对主要表达TNFRⅠ的肿瘤细胞MCF 7则无影响。结论　Mr为 4 3× 10 3的肌动蛋白样分子可能参与并增强TM TNF α通过TNFRⅡ介导的杀瘤功能。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子-Α 跨膜型 分泌型 杀瘤功能 肌动蛋白样分子 免疫共沉淀法

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TM-TNF-α介导的反向信号下调sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的表达

11

作者 辛利军 李清芬 +5 位作者 冯玮 姜晓丹 熊平 徐勇 龚非力 李卓娅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期797-800,804,共5页

目的:观测TM-TNF-α介导的反向信号对sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的影响,构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变体,并进一步验证。方法:sTNF-α激活U937细胞后撤除,加入可溶性TNFR(sTNFRⅠ)激活TM-TNF-α介导的反向信号,用RT-PCR方法检测反向... 目的:观测TM-TNF-α介导的反向信号对sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的影响,构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变体,并进一步验证。方法:sTNF-α激活U937细胞后撤除,加入可溶性TNFR(sTNFRⅠ)激活TM-TNF-α介导的反向信号,用RT-PCR方法检测反向信号对活化后U937细胞因子IL-1β、IL-8mRNA的影响;采用分子克隆技术构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变重组体,采用电穿孔法转染U937,并用Western blot检测蛋白表达。结果:sTNF-α激活U937细胞后撤除,高表达的细胞因子IL-1β、IL-8mRNA随着时间的延长而逐渐降低;sTNFRⅠ激活的TM-TNF-α介导的反向信号可加速细胞因子mRNA的降解,且使mRNA降解至50%的时间分别由约75、60分钟缩短至约45、35分钟。成功构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变重组体pcDNA3.0-ΔcsTM-TNF-α并瞬时转染U937细胞,Western blot结果显示U937细胞膜表面除表达26000的野生型TM-TNF-α蛋白外,还可表达约20000的突变体蛋白。这种缺失胞浆段的突变体蛋白可竞争性抑制反向信号对活化后U937细胞因子mRNA的下调作用。结论:TM-TNF-α介导的反向信号可下调sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的表达;且TM-TNF-α胞浆段为其介导的反向信号所必需。 展开更多

关键词 反向信号 tm—tnf—α U937 StnfR Ⅰ

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肌动蛋白参与TNFRⅡ介导的TM-TNF杀瘤活性的研究

12

作者 陈慧 张海龙 +2 位作者 秦娜琳 姜晓丹 李卓娅 《华中医学杂志》 2007年第3期195-197,共3页

目的研究肌动蛋白解聚对跨膜型肿瘤坏死因子(TM-TNF)杀瘤活性的影响。方法利用细胞松弛素D解聚肌动蛋白,采用免疫荧光技术,观察HL-60细胞内肌动蛋白的形态改变;采用细胞毒实验,检测TM-TNF杀瘤活性;采用免疫共沉淀技术和Western blot,探... 目的研究肌动蛋白解聚对跨膜型肿瘤坏死因子(TM-TNF)杀瘤活性的影响。方法利用细胞松弛素D解聚肌动蛋白,采用免疫荧光技术,观察HL-60细胞内肌动蛋白的形态改变;采用细胞毒实验,检测TM-TNF杀瘤活性;采用免疫共沉淀技术和Western blot,探索肌动蛋白参与TM-TNF杀瘤活性的分子机制。结果2μmol/L松弛素D对HL-60细胞内肌动蛋白有明显的解聚效果;肌动蛋白解聚对TM-TNF杀瘤活性有抑制作用;被刺激的HL-60细胞主要从TNFRⅡ上沉淀下大量的肌动蛋白。结论肌动蛋白主要参与TNFRⅡ介导的TM-TNF正向信号的传递,以增强TM-TNF的杀瘤活性。 展开更多

关键词 肌动蛋白 受体 肿瘤坏死因子 跨膜型肿瘤坏死因子 细胞松弛素D

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TM-TNF-α杀伤乳腺癌细胞的协同分子初探

13

作者 郑芳 冯玮 +2 位作者 姜晓丹 徐勇 李卓娅 《世界肿瘤杂志》 2004年第2期148-149,共2页

目的 寻找协同参与TM-TNF-α杀伤乳腺癌细胞的膜表面分子，探讨TM-TNF-α的杀瘤机制，为乳腺癌的治疗提供新线索。方法 利用抗体封闭实验观察ICAM-1，VCAM-1对TM-TNF-α杀瘤效应是否有协同作用。结果 封闭MCF-7细胞表面的ICAM-1显著降低... 目的 寻找协同参与TM-TNF-α杀伤乳腺癌细胞的膜表面分子，探讨TM-TNF-α的杀瘤机制，为乳腺癌的治疗提供新线索。方法 利用抗体封闭实验观察ICAM-1，VCAM-1对TM-TNF-α杀瘤效应是否有协同作用。结果 封闭MCF-7细胞表面的ICAM-1显著降低TM-TNF-α对其的杀伤作用，而封闭VCAM-1无明显效应。结论 ICAM-1可以协同参与TM-TNF-α对乳腺癌的杀伤作用。 展开更多

关键词 tm-tnf-Α 乳腺癌 肿瘤细胞 膜表面分子 ICAM-1

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肿瘤坏死因子转化酶(TACE)最新研究进展

14

作者 孙震 喻明霞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1135-1138,共4页

1 TNF-α裂解酶的发现TNF-α前体（TM-TNF-α）需要加工去除氨端76个氨基酸残基,才能成为游离型TNF-α（S-TNF-α）,进入循环系统。80年代末,人们认为这一加工过程依赖于丝氨酸蛋白水解酶;到了90年代,

关键词 肿瘤坏死因子 tm-tnf-Α 转化酶 加工过程 氨基酸残基 蛋白水解酶 循环系统 裂解酶

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一种快速简便的缺失突变方法 被引量：4

15

作者 曾劲杨 黄家强 +1 位作者 李卓娅 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第4期289-291,共3页

为了构建能表达稳定的、不易降解的ＴＭ－ＴＮＦ突变体（ＴＭ－ＴＮＦｍ）的基因，本文用改良的Ｓ－ＰＣＲ和ＯＥ－ＰＣＲ两种定位突变技术，成功地构建了缺失３６个碱基的ｐＢＳＫ－ＴＭ－ＴＮＦ突变重组体。与ＯＥ－ＰＣＲ技术（用两... 为了构建能表达稳定的、不易降解的ＴＭ－ＴＮＦ突变体（ＴＭ－ＴＮＦｍ）的基因，本文用改良的Ｓ－ＰＣＲ和ＯＥ－ＰＣＲ两种定位突变技术，成功地构建了缺失３６个碱基的ｐＢＳＫ－ＴＭ－ＴＮＦ突变重组体。与ＯＥ－ＰＣＲ技术（用两对引物进行两次ＰＣＲ反应）相比较，Ｓ－ＰＣＲ技术（用一对引物做一次ＰＣＲ反应）具有快速、经济、简便等优点，但其突变率较ＯＥ－ＰＣＲ低。 展开更多

关键词 tm-tnf-Α 一次重组 缺失突变法 聚合酶链反应

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