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石油烃污染土层生物修复模拟实验研究 被引量:34
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作者 张旭 李广贺 黄巍 《清华大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2000年第11期106-108,共3页
为研究加快石油烃污染土层生物修复的措施 ,取淄河滩含油土壤 ,通过加入富集细菌、翻耕调湿、加菌和翻耕调湿相结合 3种生物修复室内模拟实验 ,考察生物治理前后土壤石油降解速率的差异 ,并对土壤中石油的半衰期作出预测。结果表明 ,在... 为研究加快石油烃污染土层生物修复的措施 ,取淄河滩含油土壤 ,通过加入富集细菌、翻耕调湿、加菌和翻耕调湿相结合 3种生物修复室内模拟实验 ,考察生物治理前后土壤石油降解速率的差异 ,并对土壤中石油的半衰期作出预测。结果表明 ,在加入富集菌使土壤细菌含量提高一个数量级的条件下 ,油半衰期由自然土壤的 990 d减少到 346 d;在翻耕和调节土壤含水率的条件下 ,降解速率大大加快 ,油半衰期由对照样的 1733d减少到 90 d;在综合生物治理的条件下 ,油半衰期可以缩短到 42 展开更多
关键词 含油土壤 生物修复 加菌 翻耕
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TILLING技术的原理、特点及其在点突变筛选中的应用 被引量:27
2
作者 李春寿 阮关海 +1 位作者 张琳琳 吴殿星 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期317-321,共5页
TILLING(TargetingInducedLocalLesionsINGenomes),是一种全新的反向遗传学研究方法,它提供了一种高通量、低成本规模化高效筛选化学诱变剂EMS诱发产生点突变的技术。本文简要介绍了TILLING的原理和技术优势,并对其在植物功能基因组学... TILLING(TargetingInducedLocalLesionsINGenomes),是一种全新的反向遗传学研究方法,它提供了一种高通量、低成本规模化高效筛选化学诱变剂EMS诱发产生点突变的技术。本文简要介绍了TILLING的原理和技术优势,并对其在植物功能基因组学、突变分子育种和预测突变频率中的应用作了初步探讨。 展开更多
关键词 tilling 点突变 植物功能基因组学 突变分子育种 技术 原理 应用 筛选 特点 遗传学研究
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应用DNDC模型分析施肥和翻耕方式变化对旱田土壤N_2O释放的潜在影响 被引量:25
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作者 徐文彬 刘维屏 刘广深 《应用生态学报》 CAS CSCD 2001年第6期917-922,共6页
以贵州省玉米 油菜轮作田和大豆 冬小麦轮作田为N2 O释放通量测量对象 ,根据DNDC模型能较好地拟合田间N2 O释放通量季节变化及施肥和翻耕对释放的影响 ,采用DNDC模型定量探讨了上述作物生长季节有机肥施用量、N肥施用量及施肥日期、N... 以贵州省玉米 油菜轮作田和大豆 冬小麦轮作田为N2 O释放通量测量对象 ,根据DNDC模型能较好地拟合田间N2 O释放通量季节变化及施肥和翻耕对释放的影响 ,采用DNDC模型定量探讨了上述作物生长季节有机肥施用量、N肥施用量及施肥日期、N肥类型和施肥深度、翻耕深度和翻耕日期等变化对亚热带旱田生态系统N2 O释放的潜在影响 .为今后通过改变施肥和耕作方式来控制农业土壤N2 O释放量提供研究基础和参考 . 展开更多
关键词 N2O释放 施肥 翻耕 旱田土壤 DNDC模型 温室气体
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TILLING技术及其应用 被引量:17
4
作者 孙洁 崔海瑞 《细胞生物学杂志》 CSCD 2007年第1期41-46,共6页
定向诱导基因组局部突变(targetinginducedlocallesionsingenomes,TILLING)可快速、有效地鉴定和定向筛选突变,是一种全新的反向遗传学技术。现对TILLING的技术流程、核心与特点,及其在突变研究、反向遗传学及功能基因组学、SNP检测、... 定向诱导基因组局部突变(targetinginducedlocallesionsingenomes,TILLING)可快速、有效地鉴定和定向筛选突变,是一种全新的反向遗传学技术。现对TILLING的技术流程、核心与特点,及其在突变研究、反向遗传学及功能基因组学、SNP检测、资源创新与分析以及作物遗传改良等方面的应用进行了综述。 展开更多
关键词 tilling 反向遗传学 SNP 资源评价 遗传改良
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EMS诱发小麦京411突变群体构建及Wx-A1基因突变体鉴定 被引量:18
5
作者 李晓 郭会君 +5 位作者 闫智慧 赵世荣 赵林姝 古佳玉 谢永盾 刘录祥 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期2081-2087,共7页
为扩大小麦突变群体类型,提高目的基因点突变挖掘效率,选用北部冬麦区骨干亲本京411为材料,利用甲基磺酸乙酯(ethyl methylsulfonate,EMS)化学诱变剂构建小麦突变群体,以Wx-A1为候选基因,用TILLING技术检测所创建的突变群体。结果表明... 为扩大小麦突变群体类型,提高目的基因点突变挖掘效率,选用北部冬麦区骨干亲本京411为材料,利用甲基磺酸乙酯(ethyl methylsulfonate,EMS)化学诱变剂构建小麦突变群体,以Wx-A1为候选基因,用TILLING技术检测所创建的突变群体。结果表明,0.90%EMS溶液处理8 h和1.50%EMS溶液处理4 h均能获得较好的损伤效果,致死率分别达到38.47%和56.00%;在此基础上创建了包含867个株系的M2突变群体,在该群体中获得Wx-A1基因的7个点突变,突变密度为1/67.0 kb;其中预测有功能变异的4个错义突变系均可以稳定遗传至下一代,其直链淀粉含量降低2.8%~7.4%。本研究所构建的小麦突变群体可以作为其他目的基因的TILLING检测材料,用于小麦目的基因突变挖掘及功能基因组学研究。 展开更多
关键词 小麦 tilling EMS 突变群体 Wx-A1基因
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CELⅠ酶的粗提取及其活性检测 被引量:16
6
作者 韩锁义 杨玛丽 +1 位作者 盖钧镒 喻德跃 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1112-1116,共5页
CELⅠ酶是第一个从真核生物中提取的用于高效特异切割DNA双链碱基错配和DNA扭曲的内切酶,因而也是TILLING技术中用到的一种关键酶。文章对CELⅠ酶的粗提取及其活性检测进行了研究。错配切割实验表明,CELⅠ酶在包含有G→A点突变的杂合双... CELⅠ酶是第一个从真核生物中提取的用于高效特异切割DNA双链碱基错配和DNA扭曲的内切酶,因而也是TILLING技术中用到的一种关键酶。文章对CELⅠ酶的粗提取及其活性检测进行了研究。错配切割实验表明,CELⅠ酶在包含有G→A点突变的杂合双链中,能有效地在错配位点进行切割,并可以通过ABI377测序仪获得直观的检测结果,从而可以用于TILLING分析。 展开更多
关键词 CEL Ⅰ酶 tilling 点突变 活性
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CYP72A67 Catalyzes a Key Oxidative Step in Medicago truncatula Hemolytic Saponin Biosynthesis 被引量:14
7
作者 Elisa Biazzi Maria Carelli +5 位作者 Aldo Tava Pamela Abbruscato Ilaria Losini Pinarosa Avato Carla Scotti Ornella Calderini 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2015年第10期1493-1506,共14页
In the Medicago genus, triterpenic saponins are bioactive secondary metabolites constitutively synthesized in the aerial and subterranean parts of plants via the isoprenoid pathway. Exploitation of saponins as pharmac... In the Medicago genus, triterpenic saponins are bioactive secondary metabolites constitutively synthesized in the aerial and subterranean parts of plants via the isoprenoid pathway. Exploitation of saponins as pharmaceutics, agrochemicals and in the food and cosmetic industries has raised interest in identifying the enzymes involved in their synthesis. We have identified a cytochrome P450 (CYP72A67) involved in hemolytic sapogenin biosynthesis by a reverse genetic TILLING approach in a Medicago truncatula ethyl- methanesulfonate (EMS) mutagenized collection. Genetic and biochemical analyses, mutant complementation, and expression of the gene in a microsome yeast system showed that CYP72A67 is responsible for hydroxylation at the C-2 position downstream of oleanolic acid synthesis. The affinity of CYP72A67 for substrates with different substitutions at multiple carbon positions was investigated in the same in vitro yeast system, and in relation to two other CYP450s (CYP72A68) responsible for the production of medicagenic acid, the main sapogenin in M. truncatula leaves and roots. Full sib mutant and wild-type plants were compared for their sapogenin profile, expression patterns of the genes involved in sapogenin synthesis, and response to inoculation with Sinorhizobium meliloti. The results obtained allowed us to revise the hemolytic sapogenin pathway in M. truncatula and contribute to highlighting the tissue specificities (leaves/roots) of sapogenin synthesis. 展开更多
关键词 Medicago truncatula saponin pathway cytochrome P450 CYP72A67 CYP72A68 tilling analysis
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TILLING技术的发展及其在不同植物中的应用 被引量:13
8
作者 闫智慧 郭会君 +1 位作者 徐荣旗 刘录祥 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期224-233,共10页
TILLING技术(Targeting Induced Local Lesions IN Genomes)经过十多年的快速发展,已经应用到多种植物点突变高通量筛选与基因功能研究中,检测方法也逐渐趋于多样化,直接测序、毛细管电泳、高分辨熔解曲线等检测方法均得到了较多的应用... TILLING技术(Targeting Induced Local Lesions IN Genomes)经过十多年的快速发展,已经应用到多种植物点突变高通量筛选与基因功能研究中,检测方法也逐渐趋于多样化,直接测序、毛细管电泳、高分辨熔解曲线等检测方法均得到了较多的应用。与此同时EcoTILLING、DeTILLING及iTILLING等相关技术的发展扩大了TILLING技术的应用范围。本文着重介绍了目前TILLING分析中用到的不同检测方法及相关生物信息学工具,详细评述了TILLING技术在模式植物、主要粮食作物、油料作物、蔬菜等其它作物中的应用与研究进展。 展开更多
关键词 植物 tilling 化学诱变 点突变
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TILLING技术的形成和发展及其在麦类作物中的应用 被引量:10
9
作者 陈锋 徐艳花 +4 位作者 董中东 许海霞 程西永 詹克慧 崔党群 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期178-182,共5页
TILLING(Targeting induced local lesions in genomes,定向诱导基因组局部突变技术)是一种高通量的等位变异创制和突变体快速鉴定技术,其实质是将传统的化学诱变方法和突变的高效筛选有效结合的反向遗传学研究方法。其技术原理是将传... TILLING(Targeting induced local lesions in genomes,定向诱导基因组局部突变技术)是一种高通量的等位变异创制和突变体快速鉴定技术,其实质是将传统的化学诱变方法和突变的高效筛选有效结合的反向遗传学研究方法。其技术原理是将传统的酶切技术与PCR技术相结合后采用红外双色荧光系统进行结果鉴定,从而筛选出相应的突变体。传统的TILLING技术主要用于筛选由人工诱导产生的突变体。Ecotilling技术由TILL-ING技术延伸而来,主要用于鉴定自然界中已经存在的突变体,其与传统的TILLING技术的区别主要为构建DNA池时略有差异。随着该项技术在拟南芥等模式植物中的成功应用,越来越多的人开始将其用于基因组较大的植物之中。本文对近年来TILLING技术在麦类作物中的应用进行了分析,并通过比较不同植物突变体库中的突变频率发现,经EMS处理的小麦等麦类作物突变体库中的突变频率显著高于其他植物,因此相信,TILLING技术将会作为一种常规手段在麦类作物尤其是普通小麦改良中得到越来越广泛的应用。 展开更多
关键词 麦类作物 tilling Ecotilling
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TILLING技术在作物突变研究中的应用现状与前景 被引量:11
10
作者 潘娜 郭会君 +2 位作者 赵世荣 王广金 刘录祥 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期581-587,共7页
定向诱导基因组局部突变(targeting induced local lesions in genomes,TILLING)技术将化学诱变与高通量突变检测技术相结合,可高效、快速地从突变群体中鉴定出目标基因突变位点。本文在概述TILLING技术应用于水稻、小麦、玉米、大豆等... 定向诱导基因组局部突变(targeting induced local lesions in genomes,TILLING)技术将化学诱变与高通量突变检测技术相结合,可高效、快速地从突变群体中鉴定出目标基因突变位点。本文在概述TILLING技术应用于水稻、小麦、玉米、大豆等作物突变研究现状的基础上,重点综述了TILLING分析群体构建与突变位点检测方法的技术改进与发展,探讨了TILLING技术目前存在的问题与前景。 展开更多
关键词 作物 tilling 点突变 突变基因检测 进展
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大麦EMS突变群体的创建及功能评价 被引量:9
11
作者 齐新丽 徐智斌 +5 位作者 裴洪翠 胡鑫 吴佳洁 李宪彬 王涛 付道林 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期846-852,共7页
为开展麦类作物功能基因组学研究,选用综合性状突出的大麦品种Tamalpais,通过化学诱变剂甲基磺酸乙酯(Ethyl methane sulfonate,EMS)处理,创建了含有10 389个M2单株的突变群体。该群体数据分析表明,温室条件下,6.21%的M2幼苗呈现叶片颜... 为开展麦类作物功能基因组学研究,选用综合性状突出的大麦品种Tamalpais,通过化学诱变剂甲基磺酸乙酯(Ethyl methane sulfonate,EMS)处理,创建了含有10 389个M2单株的突变群体。该群体数据分析表明,温室条件下,6.21%的M2幼苗呈现叶片颜色变异;大田实验中,M2群体出现丰富的表型变异,主要包括幼苗匍匐、分蘖、株高、生育期、叶色、叶形、叶条纹、叶斑、穗部特征、育性等,其中幼苗匍匐、分蘖、株高、叶色、叶条纹、叶斑的突变频率分别为0.11%、6.03%、0.13%、2.5%、0.18%、0.17%。抽样调查显示,M2世代的胚坏死率较低,仅有9%左右的单株表现出过半的胚坏死率。运用TILLING技术成功获得大麦COI1同源基因的突变体,筛选结果同时表明,该突变群体的突变频率约为平均每673kb一个点突变。因此,Tamal-pais群体突变表型丰富、TILLING检测可行,可作为麦类作物基因图位克隆与功能验证的重要素材,适用于麦类作物的正向和反向遗传学研究。 展开更多
关键词 大麦 反向遗传学 功能基因组学 tilling COI1 基因
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水稻功能基因组学研究 被引量:5
12
作者 王凤梅 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第1期10-13,共4页
水稻是迄今为止第一个被测序的农作物。随着水稻基因组测序计划的完成,以功能基因组学研究为标志的后基因组时代已经到来。综述了水稻功能基因组学的工作进展与方法,主要包括:表达序列标签(EST)c、DNA微阵列和DNA芯片、蛋白质组学、生... 水稻是迄今为止第一个被测序的农作物。随着水稻基因组测序计划的完成,以功能基因组学研究为标志的后基因组时代已经到来。综述了水稻功能基因组学的工作进展与方法,主要包括:表达序列标签(EST)c、DNA微阵列和DNA芯片、蛋白质组学、生物信息学和反向遗传学等新方法。 展开更多
关键词 水稻 功能基因组学 蛋白质组学 生物信息学 tilling
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小麦TILLING突变体检测中基因组DNA提取方法的优化 被引量:8
13
作者 徐艳 徐继法 +4 位作者 陈磊 赵吉强 FU Zeyu JAMESON Paula E 宋建成 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期185-191,共7页
为了优化小麦高通量TILLING突变体扫描所需基因组DNA提取的方法,对利用SDS法、改良SDS法、CTAB法、改良CTAB法、AxyPrep DNA提取试剂盒、Qiagen DNeasy Plant Mini Kit试剂盒以及再生Qiagen硅胶柱方法提取的小麦基因组DNA进行了系统比... 为了优化小麦高通量TILLING突变体扫描所需基因组DNA提取的方法,对利用SDS法、改良SDS法、CTAB法、改良CTAB法、AxyPrep DNA提取试剂盒、Qiagen DNeasy Plant Mini Kit试剂盒以及再生Qiagen硅胶柱方法提取的小麦基因组DNA进行了系统比较。结果表明,尽管7种方法所提取DNA的纯度及琼脂糖凝胶电泳检测结果均良好,但再生Qiagen硅胶柱方法、CTAB法和改良SDS法的DNA浓度显著高于其他方法。根据小麦细胞分裂素氧化酶基因1(TaCKX1)的DNA序列设计引物,以新鲜DNA样品用于PCR扩增大于1 000bp的片段时,后4种方法扩增效果优于前3种方法;DNA在-20℃下保存100d后重新进行PCR扩增时,则只有Qiagen试剂盒和再生Qiagen硅胶柱2种方法提取的DNA能扩增出大于1 000bp的片段。采用本实验室与新西兰坎特伯雷大学合作建立的再生硅胶柱与自配提取液提取小麦基因组DNA,既保证了DNA的高质量,又降低了使用试剂盒的成本,为小麦TILLING库的构建及其他相关试验提供了一种经济有效的DNA提取方法。 展开更多
关键词 小麦 tilling 基因组DNA 提取方法
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An Integrated Approach to Crop Genetic Improvement 被引量:8
14
作者 Martin A.J.Parry Malcolm J.Hawkesford 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2012年第4期250-259,共10页
The balance between the supply and demand of the major food crops is fragile, fueling concerns for long-term global food security. The rising population, increasing wealth and a proliferation of non- food uses (e.g. ... The balance between the supply and demand of the major food crops is fragile, fueling concerns for long-term global food security. The rising population, increasing wealth and a proliferation of non- food uses (e.g. bioenergy) has led to growing demands on agricul- ture, while increased production is limited by greater urbanization, and the degradation of land. Furthermore, global climate change with increasing temperatures and lower, more erratic rainfall is projected to decrease agricultural yields. There is a predicted need to increase food production by at least 70% by 2050 and there- fore an urgent need to develop novel and integrated approaches, incorporating high-throughput phenotyping that will both increaseproduction per unit area and simultaneously improve the resource use efficiency of crops. Yield potential, yield stability, nutrient and water use are all complex multigenic traits and while there is genetic variability, their complexity makes such traits difficult to breed for directly. Nevertheless molecular plant breeding has the potential to deliver substantial improvements, once the component traits and the genes underlying these traits have been identified. In addition, interactions between the individual traits must also be taken into account, a demand that is difficult to fulfill with traditional screening approaches. Identified traits will be incorporated into new cultivars using conventional or biotechnological tools. In order to better understand the relationship between genotype, component traits, and environment over time, a multidisciplinary approach must be adopted to both understand the underlying processes and identify candidate genes, QTLs and traits that can be used to develop improved crops. 展开更多
关键词 Germpiasm variation NITROGEN tilling TRANSFORMATION TRAIT water WHEAT yield.
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油污土壤微生物处理技术 被引量:6
15
作者 金文标 宋莉晖 +1 位作者 吴东平 范金蔚 《环境科学研究》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第1期34-35,共2页
对油污土壤进行微生物处理时 ,油污土壤中微生物种群和数量、营养物种类和数量对处理效果均有影响。同时向油污土壤中投加高效原油降解菌和优良营养物是最为有效的处理方式。菌剂投加量≥ 6mL/kg ,营养物投加量为使土壤中C∶N
关键词 油污土壤 降解菌 营养物 地耕 微生物处理
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保护性耕作技术的实施 被引量:9
16
作者 董杰 《农业科技与装备》 2012年第1期70-71,共2页
保护性耕作改变了传统农业耕作方式,已成为旱区农业可持续发展的有效途径,是当前农机化推广的重点技术之一。介绍保护性耕作的技术内容和试验示范效果,分析保护性耕作推广中存在的问题,并提出相应的解决对策,为大规模推广保护性耕作提... 保护性耕作改变了传统农业耕作方式,已成为旱区农业可持续发展的有效途径,是当前农机化推广的重点技术之一。介绍保护性耕作的技术内容和试验示范效果,分析保护性耕作推广中存在的问题,并提出相应的解决对策,为大规模推广保护性耕作提供经验。 展开更多
关键词 农业机械化 保护性耕作 铧式犁 翻耕 免耕 效益 措施
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Reverse Genetic Approaches in Zebrafish 被引量:6
17
作者 Peng Huang Zuoyan Zhu +1 位作者 Shuo Lin Bo Zhang 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 2012年第9期421-433,共13页
Zebrafish(Danio rerio) is a well-established vertebrate animal model.A comprehensive collection of reverse genetics tools has been developed for studying gene function in this useful organism.Morpholino is the most ... Zebrafish(Danio rerio) is a well-established vertebrate animal model.A comprehensive collection of reverse genetics tools has been developed for studying gene function in this useful organism.Morpholino is the most widely used reagent to knock down target gene expression post-transcriptionally.For a long time,targeted genome modification has been heavily relied on large-scale traditional forward genetic screens,such as ENU(N-ethyl-N-nitrosourea) mutagenesis derived TILLING(Targeting Induced Local Lesions IN Genomes) strategy and pseudo-typed retrovirus mediated insertional mutagenesis.Recently,engineered endonucleases,including ZFNs(zinc finger nucleases) and TALENs(transcription activator-like effector nucleases),provide new and efficient strategies to directly generate site-specific indel mutations by inducing double strand breaks in target genes.Here we summarize the major reverse genetic approaches for loss-of-function studies used and emerging in zebrafish,including strategies based on genome-wide mutagenesis and methods for site-specific gene targeting.Future directions and expectations will also be discussed. 展开更多
关键词 Zebrafish Reverse genetics Morpholino tilling Retrovirus ZFN TALEN Gene targeting
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小麦类胡萝卜素合成途径关键基因Lcye功能分析 被引量:6
18
作者 翟胜男 郭军 +9 位作者 刘成 李豪圣 宋健民 刘爱峰 曹新有 程敦公 李法计 何中虎 夏先春 刘建军 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1485-1495,共11页
小麦籽粒黄色素是面粉及面制品黄度形成的主要原因,其主要成分是类胡萝卜素。ε-番茄红素环化酶(LCYE)是小麦类胡萝卜素生物合成途径的关键酶,前人对其研究多集中于QTL定位、基因克隆和分子标记开发,而基因功能和遗传调控机制尚不明确... 小麦籽粒黄色素是面粉及面制品黄度形成的主要原因,其主要成分是类胡萝卜素。ε-番茄红素环化酶(LCYE)是小麦类胡萝卜素生物合成途径的关键酶,前人对其研究多集中于QTL定位、基因克隆和分子标记开发,而基因功能和遗传调控机制尚不明确。本研究利用TILLING技术筛选EMS诱变群体,对Lcye功能及遗传调控机制进行研究,以期深入认识小麦籽粒黄色素含量形成的分子机制。在2491份M2代EMS诱变群体中共检测到21个Lcye基因的点突变,包含6个错义突变,2个同义突变和13个内含子突变,Lcye基因在该诱变群体中的突变频率为1/266.1 kb。PARSENP软件预测分析显示,M090815(C2202T)和M091648(G3284A)两个错义突变可能严重影响蛋白质功能。MEME分析结果表明,M090815和M092230(G2195A)突变位点位于Lcye基因保守结构域内。6个错义突变植株与野生型杂交构建的F2代群体中,M090815突变位点显著降低籽粒黄色素含量,证实该位点对LCYE功能具有重要影响。qRT-PCR(quantitative real-time PCR)分析也显示,M090815突变位点显著降低Lcye基因表达水平,且Lcye-B1和Lcye-D1基因表达降低趋势相似,而Lcye-A1在花后14~28 d表现出补偿效应。本研究不仅验证Lcye基因功能,也为面粉及其制品颜色性状改良提供了理论依据和种质资源。 展开更多
关键词 EMS tilling 面粉颜色 黄色素含量 遗传育种
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小麦TILLING分析中CELⅠ酶切及PCR反应体系的优化 被引量:5
19
作者 潘娜 郭会君 +6 位作者 赵世荣 赵林姝 古佳玉 李军辉 王广金 徐荣旗 刘录祥 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期830-837,共8页
在小麦中建立稳定的基于CELⅠ酶切的目的基因突变位点检测技术,有助于高通量鉴定目的基因片段的点突变及提高突变检测效率。本研究以冬小麦品种新麦18空间诱变SP2群体为材料,以小麦糯质基因Waxy为目标片段,通过优化基因组DNA提取方法、... 在小麦中建立稳定的基于CELⅠ酶切的目的基因突变位点检测技术,有助于高通量鉴定目的基因片段的点突变及提高突变检测效率。本研究以冬小麦品种新麦18空间诱变SP2群体为材料,以小麦糯质基因Waxy为目标片段,通过优化基因组DNA提取方法、调整PCR反应体系中dNTP、Mg2+及引物浓度、改变目标片段CELⅠ酶切缓冲液成分,以及调整纯化过程中的空气相对湿度等方式,优化了小麦TILLING技术体系。在利用PVP-40法提取DNA过程中,研磨器振动频率提高到30/s,KAc溶液的反应时间延伸为20min时,基因组DNA质量和纯度最佳;在设定的浓度范围内dNTP和Mg2+浓度对产物影响差异不明显,均能高效扩增出目的条带。引物浓度对产物影响差异显著,最佳引物浓度为0.4μmol/L。20μl酶切体系中,最佳CEL I酶浓度为0.1U且利用超纯水代替CELⅠ缓冲液。最终在小麦中建立起了基于CELⅠ酶切的高通量TILLING筛选技术体系。 展开更多
关键词 小麦 tilling CELⅠ 优化 糯质基因Waxy
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TILLING技术在植物功能基因组及育种中的应用(英文) 被引量:4
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作者 汪得凯 孙宗修 陶跃之 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第11期957-964,共8页
随着拟南芥、水稻等模式植物基因组测序计划的全面完成,数据库中大量的DNA序列需要进行功能注释,而用传统的正向遗传学进行基因克隆和近年来发展的反向遗传学(如插入突变、反义RNA、RNAi等技术)方法已不能适应基因组学的发展需求,因此,... 随着拟南芥、水稻等模式植物基因组测序计划的全面完成,数据库中大量的DNA序列需要进行功能注释,而用传统的正向遗传学进行基因克隆和近年来发展的反向遗传学(如插入突变、反义RNA、RNAi等技术)方法已不能适应基因组学的发展需求,因此,研发大规模、高通量的基因功能分析方法成为当务之急。TILLING技术(Targetinginducedlocallesionsingenomes)就是在基因组生物学大背景下出现的一种全新的反向遗传学技术。TILLING技术的基本步骤是通过化学诱变方法产生一系列点突变,经过PCR扩增放大和变性复性过程产生异源双链DNA分子,再通过特异性酶切和双色电泳分析识别异源双链中错配碱基,从而检测出突变发生的准确位置。由于具有高通量、大规模、高灵敏度和自动化等特点,能够适应植物功能基因组学研究的要求,TILLING技术已经和即将在功能基因组领域发挥越来越重要的作用。TILLING技术应用于已测序完成的拟南芥和水稻中的突变位点检测并取得了巨大成功;TILLING技术应用于农作物的品种改良,可以帮助实现快速、定向改良作物的品种,同时由于TILLING采用的化学诱变技术与传统诱变育种并无二致,因此在作物改良中采用TILLING技术不存在外源基因转入引发的转基因作物(GMO)争论;由TILLING技术发展来的EcoTILLING技术,具有通量高、成本低、定位准确等优点,可以很好地进行多态性检测和研究基因的功能,已成为开展物种DNA多态性检测和不同物种演替进化研究的有力工具。本文简要介绍了TILLING的原理及操作步骤,讨论了TILLING技术的特点和优点及TILLING技术的应用前景。 展开更多
关键词 tilling 反向遗传学 突变 育种
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