淫羊藿苷及其肠菌代谢产物对THP-1细胞分泌细胞因子的影响 被引量：29

1

作者 刘铁汉 王本祥 +4 位作者 王毅 吴立军 南陆彦 永田年 池岛乔 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期245-248,共4页

目的 :比较淫羊藿苷及其肠菌代谢产物对人组织细胞瘤THP 1细胞分泌 4种细胞因子的影响。方法 :放射免疫测定方法 (RIA)。结果 :在LPS和PMA存在下 ,淫羊藿苷及其肠菌代谢产物 (宝藿苷I和淫羊藿苷元 )对IL 6的产生有促进作用 ,代谢物的作... 目的 :比较淫羊藿苷及其肠菌代谢产物对人组织细胞瘤THP 1细胞分泌 4种细胞因子的影响。方法 :放射免疫测定方法 (RIA)。结果 :在LPS和PMA存在下 ,淫羊藿苷及其肠菌代谢产物 (宝藿苷I和淫羊藿苷元 )对IL 6的产生有促进作用 ,代谢物的作用更强 ,对IL 8的产生有一定的抑制作用。当LPS和PMA不存在时 ,对IL 6的产生无明显影响 ,而对IL 8的产生则有促进作用。不论LPS和PMA存在与否 ,原苷对TNFα的产生有抑制作用 ,原苷及其肠菌代谢产物对IL 1α的产生均有明显抑制作用。结论 :在不同的实验条件下 ,淫羊藿苷及其肠菌代谢产物对各种炎症性细胞因子的产生均有特异的调节作用。 展开更多

关键词 淫羊藿苷 肠菌代谢物 thp-1细胞 炎症

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THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及鉴定 被引量：17

2

作者 王术玲 潘华新 王培训 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期281-284,共4页

目的以人类单核细胞株THP-1建立泡沫细胞模型及建立鉴定模型的方法。方法以160nmol/L的佛波酯诱导THP-124h后分化成为巨噬细胞,继与80mg/L的氧化型低密度脂蛋白孵育48h,油红O染色后显微镜下观察细胞形态,采用HPLC-MS的方法测定细胞内胆... 目的以人类单核细胞株THP-1建立泡沫细胞模型及建立鉴定模型的方法。方法以160nmol/L的佛波酯诱导THP-124h后分化成为巨噬细胞,继与80mg/L的氧化型低密度脂蛋白孵育48h,油红O染色后显微镜下观察细胞形态,采用HPLC-MS的方法测定细胞内胆固醇和胆固醇酯的含量。结果经油红O染色后,诱导建模的细胞内有大量的红色脂质颗粒存在;HPLC-MS测定结果显示,与正常单核细胞相比,建模的细胞内胆固醇和胆固醇酯含量均明显增加。结论THP-1细胞经佛波酯和氧化型低密度脂蛋白诱导后,能成功建立人类巨噬细胞源性泡沫细胞模型。 展开更多

关键词 thp-1细胞 泡沫细胞模型 油红O染色 HPLC—MS法

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痛风宁含药血清对尿酸盐诱导THP-1中NALP3炎性体相关蛋白及炎症因子表达的影响 被引量：8

3

作者 苏友新 滕方舟 +7 位作者 蔡唐彦 郭洁梅 李保林 王建辉 朱亚菊 赖兴泉 黄露露 张艺强 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期323-329,共7页

目的通过检测痛风宁含药血清对尿酸盐(monosodium urate,MSU)诱导人单核细胞株THP-1(human monocytic cell line,THP-1)中NALP3炎性体相关蛋白与mRNA及上清液中IL-1β、PGE_2表达的影响,探讨痛风宁对痛风性关节炎的抗炎机制。方法制备... 目的通过检测痛风宁含药血清对尿酸盐(monosodium urate,MSU)诱导人单核细胞株THP-1(human monocytic cell line,THP-1)中NALP3炎性体相关蛋白与mRNA及上清液中IL-1β、PGE_2表达的影响,探讨痛风宁对痛风性关节炎的抗炎机制。方法制备低、中、高剂量痛风宁含药血清。将THP-1随机分为空白组和MSU干预组,MSU干预组予200 mg/L MSU混悬液诱导12 h建立炎症细胞模型,模型鉴定成功后采用随机数字表法分为模型组及低、中、高剂量痛风宁含药血清组(以下简称低、中、高剂量痛风宁组)、阳性对照组,分别予10%空白血清,10%低、中、高剂量痛风宁含药血清,10%空白血清+Caspase-1抑制剂干预,无MSU干预的空白组予10%空白血清干预。24 h后,离心收集各组THP-1及细胞上清液。采用ELISA检测各组细胞上清液中IL-1β、PGE_2含量,Western Blot、RT-qPCR分别检测各组THP-1中NALP3、Caspase-1、ASC蛋白及mRNA表达。结果与空白组比较,模型组NALP3、Caspase-1、ASC蛋白与mRNA表达及IL-1β、PGE_2含量均升高(P<0.01);各剂量痛风宁组所有指标均低于模型组及阳性对照组(P<0.01),同时低、高剂量痛风宁组所有指标水平均高于中剂量痛风宁组(P<0.05,P<0.01);阳性对照组Caspase-1蛋白表达及IL-1β、PGE_2含量低于模型组(P<0.01),Caspase-1 mRNA、NALP3、ASC蛋白及mRNA表达与模型组差异无统计学意义(P>0.05)。结论痛风宁对AGA的抗炎机制可能与抑制NALP3炎性体相关蛋白及mRNA表达,减少炎症因子IL-1β、PGE_2的产生有关。 展开更多

关键词 痛风宁含药血清 尿酸盐 thp-1细胞株 NALP3炎性体 炎症因子

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稳定表达PSMB9-eGFP-His蛋白的THP-1细胞系建立及免疫蛋白酶体活性检测

4

作者 王佳豪 冯利杰 +1 位作者 张瑶 徐平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期2282-2293,共12页

泛素/蛋白酶体系统(ubiquitin/proteasome system,UPS)在调控细胞内蛋白质稳态过程中发挥重要功能,UPS中蛋白酶体的催化活性受β1(PSMB6)、β2(PSMB7)和β5(PSMB5)亚基调控,在干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor n... 泛素/蛋白酶体系统(ubiquitin/proteasome system,UPS)在调控细胞内蛋白质稳态过程中发挥重要功能,UPS中蛋白酶体的催化活性受β1(PSMB6)、β2(PSMB7)和β5(PSMB5)亚基调控,在干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、炎症反应、氧化应激等条件诱导下,β1、β2和β5可被相应的β1i(PSMB9)、β2i(PSMB10)和β5i(PSMB8)替换,组装形成免疫蛋白酶体(immunoproteasome)。与标准蛋白酶体相比,免疫蛋白酶体具有更强的免疫调节作用,如加工递呈MHCⅠ抗原、调节促炎细胞因子的产生及T细胞分化、增殖等。免疫蛋白酶体的异常聚集会导致帕金森病、阿尔茨海默病、肌萎缩侧索硬化等神经退行性疾病的发生。为探究PSMB9在细菌感染后发挥的功能,本研究通过构建过表达PSMB9-eGFP-His的慢病毒质粒,利用三质粒系统转染HEK293T包装慢病毒,嘌呤霉素筛选,获得稳定表达PSMB9融合蛋白的人髓系白血病单核细胞THP-1细胞系,利用蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)及荧光显微镜验证了PSMB9融合蛋白的表达,通过实时荧光定量PCR(quantitative PCR,q PCR)计算了稳转细胞系中PSMB9-eGFP基因的拷贝数。免疫荧光结果发现eGFP-His不会影响PSMB9的亚细胞定位,镍柱亲和纯化实验证实PSMB9融合蛋白可组装至20S免疫蛋白酶体中,且具有底物切割活性。上述结果证明PSMB9-eGFP基因成功整合入THP-1细胞基因组并稳定表达,可用于探究PSMB9亚基在活细胞模型中不同感染条件及疾病进程中的细胞定位、动态表达和活性的变化,并为其他2个免疫蛋白酶体亚基PSMB8和PSMB10的稳转细胞系构建提供了参考。 展开更多

关键词 免疫蛋白酶体 慢病毒 稳转细胞系 PSMB9 thp-1

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不同方法诱导THP-1细胞分化效果比较 被引量：5

5

作者 彭卓颖 丛喆 +2 位作者 李想 薛婧 魏强 《中国比较医学杂志》 北大核心 2017年第9期1-6,共6页

目的优化不同方法刺激THP-1细胞定向分化为M1、M2巨噬细胞及DC细胞,为M1、M2和DC三种体外细胞模型研究奠定基础。方法首先用PMA和GM-CSF/M-CSF两种方法刺激诱导THP-1细胞分化,再分别添加不同细胞因子诱导其分化为M1、M2和DC细胞,观察细... 目的优化不同方法刺激THP-1细胞定向分化为M1、M2巨噬细胞及DC细胞,为M1、M2和DC三种体外细胞模型研究奠定基础。方法首先用PMA和GM-CSF/M-CSF两种方法刺激诱导THP-1细胞分化,再分别添加不同细胞因子诱导其分化为M1、M2和DC细胞,观察细胞形态的变化,并用流式细胞术检测细胞表面分子的表达情况。结果两种方法刺激细胞CD分子表达的整体趋势基本一致。THP-1-M1细胞表面CD80和CD86表达量显著增加;THP-1-M2细胞高表达CD163和CD209;THP-1-DC细胞CD14表达量显著降低,高表达CD80、CD86和CD11c。PMA刺激后,M1、M2和DC细胞均贴壁生长;GM-CSF/M-CSF刺激后,只有DC细胞部分贴壁生长,M1和M2细胞仍呈悬浮生长。结论两种方法均能成功地诱导THP-1细胞向不同细胞亚型分化,但是诱导出来的细胞在形态上存在一定差异,可根据实验需求选择刺激方法。 展开更多

关键词 thp-1 佛波酯 粒细胞巨噬细胞刺激因子/巨噬细胞集落刺激因子 M1巨噬细胞 M2巨噬细胞 树突状细胞 分化

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二氧化硅致人单核细胞THP-1核因子-κB活化定位改变的研究 被引量：5

6

作者 周建娅 毛国根 +1 位作者 唐法娣 周建英 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期179-181,共3页

目的　探讨矽肺发病过程中SiO2 诱导对人单核细胞株THP 1核因子 κB(NF κB)活化的影响。方法　采用间接免疫荧光细胞化学法结合激光共聚焦显微镜 (LSCM ,Zeiss 5 10 )检测THP 1细胞NF κBp6 5亚基 (NF κB/p6 5 )定位 ;Western blot... 目的　探讨矽肺发病过程中SiO2 诱导对人单核细胞株THP 1核因子 κB(NF κB)活化的影响。方法　采用间接免疫荧光细胞化学法结合激光共聚焦显微镜 (LSCM ,Zeiss 5 10 )检测THP 1细胞NF κBp6 5亚基 (NF κB/p6 5 )定位 ;Western blot法测定THP 1细胞核蛋白中NF κB/p6 5水平。结果　免疫荧光分析显示 ,异硫氰酸荧光素 (FITC)标记的NF κB/p6 5在胞浆区为绿色荧光 ,而进入了丙亚基碘(PI)红色荧光标记的胞核区时则红绿两色叠加成黄色荧光。正常细胞NF κB/p6 5主要分布于胞浆区 ,核区很少 ,而 10 0 μg/mlSiO2 刺激 30min后NF κB/p6 5荧光标记集聚于核区 ,胞浆区少见。Western blot结果显示 ,对照组 (0 μg/mlSiO2 )THP 1细胞核蛋白中有低水平NF κB/p6 5表达 ;10 0 μg/ml和 2 0 0μg/mlSiO2 作用 15min和 30min ,THP 1细胞核蛋白中NF κB/p6 5表达增加 ,并随着剂量的增加和时间的延长 ,NF κB/p6 5水平相对增加。NF κB/p6 5激活剂脂多糖 (LPS)处理的THP 1细胞NF κB/p6 5定位情况和核蛋白水平与上述结果相似。结论　SiO2 刺激可引起THP 1单核细胞NF κB核转位活化。 展开更多

关键词 矽肺 二氧化硅 核因子-κB 间接免疫荧光细胞化学法 激光共聚焦显微镜

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不同阶段泡沫细胞模型的建立与鉴定 被引量：5

7

作者 崔永春 刘晓鹏 +3 位作者 张宏 李凯 孟宪敏 唐跃 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2014年第3期953-957,共5页

目的建立不同阶段的泡沫细胞,并对其生物特性进行鉴定。方法体外培养人THP-1来源的巨噬细胞(THP-M),由ox-LDL诱导其转化为不同阶段泡沫细胞,ELISA方法检测不同阶段泡沫细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量;透射电镜和油红O染色光镜观察细胞内... 目的建立不同阶段的泡沫细胞,并对其生物特性进行鉴定。方法体外培养人THP-1来源的巨噬细胞(THP-M),由ox-LDL诱导其转化为不同阶段泡沫细胞,ELISA方法检测不同阶段泡沫细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量;透射电镜和油红O染色光镜观察细胞内脂质,噻唑蓝染色法测定不同阶段泡沫细胞的活性变化规律。Western blot方法测定II型微管相关蛋白1轻链3(LC3II)蛋白表达水平。结果 24h开始,THP-M细胞质内出现大量的红染颗粒或脂质空泡,总胆固醇和胆固醇酯均较对照组增加,细胞胆固醇酯含量大于总胆固醇的50%,泡沫细胞已经形成。噻唑蓝染色结果显示,自48h开始少量泡沫细胞出现死亡现象(存活率93.21±3.66%),60h和72h细胞存活率率分别为72.15±2.23%和63.06±1.83%。电镜扫描结果发现,24h细胞内脂滴聚集,24h内细胞浆自噬小体逐渐增多。36h、48h细胞内脂滴大小和形态各异,可见吞噬脂滴后尚未消化完全的自噬溶酶体,部分细胞膜破裂;60h和72h,细胞内自噬小体数量明显减少,细胞大量崩解。Western blot检测结果表明自噬标志性蛋白LC3II表达水平变化规律与电镜观察自噬小体结果一致。结论利用oxLDL诱导THP-M24h、36h-48h、60h-72h后,细胞形态和细胞内脂含量分别符合早期、中期和晚期泡沫细胞的生物特征,成功建立了早、中、晚期泡沫细胞模型,其中细胞活力变化可能与II型凋亡(自噬性死亡)相关。为不同病程AS研究提供支持。 展开更多

关键词 氧化型低密度脂蛋白 thp-1细胞 泡沫细胞 动脉粥样硬化

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熊果酸对单核细胞白血病细胞作用机制的初步研究 被引量：4

8

作者 陈金荣 刘丽 +4 位作者 袁文丹 王国祥 蔡虹静 王蔚琛 董晓青 《中国微循环》 北大核心 2006年第3期185-187,共3页

目的探讨熊果酸在体外对单核细胞白血病细胞株THP1(humanacutemonocyticleukemiacellline)的增殖抑制和杀伤机制。方法采用MTT法和流式细胞术检测熊果酸对THP1细胞的增殖抑制和杀伤效应,hoechst33258荧光染色观察DNA片段化。结果熊果酸... 目的探讨熊果酸在体外对单核细胞白血病细胞株THP1(humanacutemonocyticleukemiacellline)的增殖抑制和杀伤机制。方法采用MTT法和流式细胞术检测熊果酸对THP1细胞的增殖抑制和杀伤效应,hoechst33258荧光染色观察DNA片段化。结果熊果酸对THP-1细胞具有增殖抑制和杀伤效应,并呈浓度和时间依赖性。在熊果酸作用下THP-1细胞DNA受损,出现凋亡征象,G1期细胞数减少,细胞主要阻滞在S期。结论熊果酸在体外能诱导THP-1细胞凋亡。 展开更多

关键词 熊果酸 凋亡 thp-细胞株

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基于THP-1细胞的皮肤致敏体外检测方法 被引量：3

9

作者 陈彧 喻欢 +2 位作者 秦瑶 程树军 谈伟君 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第4期94-102,共9页

目的建立基于人细胞系的替代皮肤致敏动物实验的体外检测方法(h-CLAT),并对化学品、日用化学产品和化妆品植物原料进行皮肤致敏性检测。方法体外培养人急性单核细胞白血病细胞(THP-1),不同浓度受试物与细胞共孵育24 h,通过流式细胞仪检... 目的建立基于人细胞系的替代皮肤致敏动物实验的体外检测方法(h-CLAT),并对化学品、日用化学产品和化妆品植物原料进行皮肤致敏性检测。方法体外培养人急性单核细胞白血病细胞(THP-1),不同浓度受试物与细胞共孵育24 h,通过流式细胞仪检测细胞表面标志物CD86和CD54活化的差异,并对11种已知皮肤致敏化学物质和9种未知样品进行皮肤致敏性预测。同时对未知样品进行豚鼠局部封闭涂皮法验证。结果使用h-CLAT方法准确区分了11种参考物质的皮肤致敏性,9种受试样品中,7种样品被判断为阴性皮肤致敏物质,2种植物提取物被确认为皮肤致敏疑似物质。9种样品的预测结果与动物实验一致。结论 h-CLAT体外检测方法可以代替部分动物测试,用于可溶性皮肤致敏物质的预测。 展开更多

关键词 皮肤致敏 thp-1细胞 h-CLAT 替代方法 接触性过敏性皮类 致敏化学物 化妆品终产品

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三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞增殖及凋亡的影响 被引量：3

10

作者 赵丽凤 李晓强 +2 位作者 任汝静 刘丽 谭余庆 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第17期42-48,共7页

目的:研究三氧化二砷联合双氢青蒿素对人急性单核细胞白血病(AML)细胞株THP-1细胞增殖、周期及凋亡的影响并探究其作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测三氧化二砷、双氢青蒿素、三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞增殖的影响,... 目的:研究三氧化二砷联合双氢青蒿素对人急性单核细胞白血病(AML)细胞株THP-1细胞增殖、周期及凋亡的影响并探究其作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测三氧化二砷、双氢青蒿素、三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞增殖的影响,流式细胞术AnnexinV/碘化丙啶(PI)双染实验检测细胞周期和凋亡的变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),裂解半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达,在高内涵显微镜下观察药物作用后细胞形态的变化。结果:与空白组比较,不同浓度的三氧化二砷、双氢青蒿素对THP-1细胞的增殖均具有显著抑制作用(P<0.01),且成剂量和时间依懒性;作用48 h,与同等剂量的三氧化二砷或双氢青蒿素单独应用比较,1μmol·L^-1三氧化二砷与2μmol·L^-1双氢青蒿素联合应用对THP-1细胞增殖的抑制作用显著增强(P<0.01),且细胞阻滞在G1期(P<0.01),并显著下调Bcl-2和Caspase-3的表达(P<0.01),同时明显上调cleaved Caspase-3的表达水平(P<0.05)。结论:三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞具有明显抑制增殖和诱导凋亡的作用,其作用机制可能与阻滞细胞G1期,下调Bcl-2和Caspase-3蛋白表达,上调cleaved Caspase-3蛋白表达有关。 展开更多

关键词 急性单核细胞白血病 三氧化二砷 双氢青蒿素 thp-1细胞 增殖 凋亡

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β-连环素在白血病细胞株的异常定位研究 被引量：3

11

作者 时杰 王琳 胡丽华 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期1096-1100,共5页

β-连环素是Wnt信号通路关键的信号传递子,其在细胞的异常定位引起下游靶基因的转录是多种实体肿瘤发生的原因之一。由于造血细胞缺少典型的黏着连接(adherens junction,AJ),因此对β-连环素在血液肿瘤的表达及定位并无较多的研究。本... β-连环素是Wnt信号通路关键的信号传递子,其在细胞的异常定位引起下游靶基因的转录是多种实体肿瘤发生的原因之一。由于造血细胞缺少典型的黏着连接(adherens junction,AJ),因此对β-连环素在血液肿瘤的表达及定位并无较多的研究。本研究探讨4种常见的白血病细胞株(Daudi, Jurkat, K562和Thp-1)中β-连环素蛋白的定位及β-连环素基因mRNA的表达水平,了解血液肿瘤中是否有β-连环素蛋白的定位异常,以期发现白血病新的发生机制,为寻找新的特异治疗靶点提供线索。用免疫细胞化学法检测β-连环素在白血病细胞系中的定位,用实时定量RT-PCR法测定β-连环素mRNA表达水平。结果表明4种白血病细胞株有两种(Jurkat、Thp-1)存在β-连环素的异常定位,且β-连环素mRNA表达增高,但在Jurkat和Thp-1细胞中的β-连环素mRNA低于Daudi和K562细胞。这4种白血病细胞株中β-连环素基因的mRNA表达水平与其异常定位无相关性。结论β-连环素定位异常可能参与部分血液肿瘤的发生,引起β-连环素定位异常的机制并不是发生在转录水平。 展开更多

关键词 Β-连环素 白血病细胞株 DAUDI K562 JURKAT thp-1

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过表达突变的NPM1基因对THP-1白血病细胞增殖和凋亡的影响 被引量：2

12

作者 覃凤娴 邵会媛 +4 位作者 陈先春 谭诗 张慧娟 肖玲 张伶 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2012年第3期251-256,共6页

目的探讨核仁磷酸蛋白基因(NPM1)突变对白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法将携带NPM1 A型突变(NPM1 mA)的重组质粒载体pEGFPC1-NPM1 mA转染白血病THP-1细胞系,构建稳定表达NPM1 mA蛋白的细胞株(THP-1 mA),同时设立空载体转染组(THP-1 C1... 目的探讨核仁磷酸蛋白基因(NPM1)突变对白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法将携带NPM1 A型突变(NPM1 mA)的重组质粒载体pEGFPC1-NPM1 mA转染白血病THP-1细胞系,构建稳定表达NPM1 mA蛋白的细胞株(THP-1 mA),同时设立空载体转染组(THP-1 C1)和未处理组(THP-1)为对照。MTT实验观察细胞增殖;流式细胞术分析细胞周期和凋亡;RT-PCR和Western blot分别检测细胞凋亡相关蛋白(BAX和BCL-2)mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组相比较,实验组THP-1 mA细胞体外增殖能力明显增强(P<0.05),S期细胞比例明显增高(P<0.05),G1期细胞比例显著减低(P<0.05);而3组细胞凋亡率无显著差异,BAX,BCL-2的mRNA和蛋白表达以及BAX/BCL-2比值亦未见明显改变。结论 NPM1突变基因能够促进白血病细胞的体外增殖能力,而对白血病细胞凋亡无显著影响。 展开更多

关键词 NPM1突变 白血病 thp-1细胞系 增殖 凋亡

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稳定表达GFP-LC3蛋白的THP-1细胞系的构建 被引量：1

13

作者 雷蕾 黄珊 +6 位作者 于明航 刘志强 刘师伟 李婷 赵秀娟 李泽兴 王玺 《天津医药》 CAS 北大核心 2018年第4期341-344,共4页

目的构建稳定表达GFP-LC3的人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)。方法采用p CDH-CMV-GFP-LC3-EF1α-puro转染293T细胞构建慢病毒质粒系统,获取的慢病毒感染THP-1细胞,用嘌呤霉素(Puromycin)筛选稳定表达GFP-LC3蛋白的细胞系。通过Western ... 目的构建稳定表达GFP-LC3的人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)。方法采用p CDH-CMV-GFP-LC3-EF1α-puro转染293T细胞构建慢病毒质粒系统,获取的慢病毒感染THP-1细胞,用嘌呤霉素(Puromycin)筛选稳定表达GFP-LC3蛋白的细胞系。通过Western blot和流式细胞术检测THP-1细胞中GFP-LC3蛋白的表达,并利用该稳定表达细胞系观察饥饿和雷帕霉素诱导时细胞发生的自噬变化。结果筛选得到稳定表达GFP-LC3蛋白的THP-1细胞系,在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光。Western blot和流式细胞术检测证实了GFP-LC3融合蛋白的表达。激光共聚焦法和Western blot均证实饥饿和雷帕霉素可以诱导自噬的发生,且GFP-LC3融合蛋白可以反映内源LC3蛋白的变化,包括蛋白聚集和发生剪切修饰。结论应用慢病毒质粒系统成功构建了高效稳定表达GFP-LC3蛋白的THP-1细胞系,从而为后续利用GFP-LC3融合蛋白研究自噬变化提供了细胞模型。 展开更多

关键词 自噬 GFP-LC3 thp-1细胞 稳定细胞系 雷帕霉素

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三氧化二砷对白血病细胞EVI-1基因作用的研究 被引量：1

14

作者 周凌云 陈芳源 +3 位作者 沈莉菁 万海霞 钟济华 蔡佳翌 《诊断学理论与实践》 2014年第1期54-60,共7页

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对白血病细胞中EVI-1基因的作用。方法:采用1μmol/L的As2O3处理1例高表达EVI-1基因的急性单核细胞白血病患者的原代细胞,并用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain ... 目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对白血病细胞中EVI-1基因的作用。方法:采用1μmol/L的As2O3处理1例高表达EVI-1基因的急性单核细胞白血病患者的原代细胞,并用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞的EVI-1 mRNA表达率;同时采用RT-PCR检测人白血病细胞株K562、HL-60、U937和THP-1中EVI-1 mRNA基因的相对表达量。选取EVI-1 mRNA表达量最高的THP-1细胞株作为研究对象,经多位点PCR测序确认其包含EVI-1基因全长片段后,分别以1、3、5μmol/L的As2O3处理THP-1细胞株,观察细胞形态变化,CCK8检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR检测EVI-1 mRNA表达率,蛋白质印迹法检测细胞内EVI-1蛋白的表达情况。结果:As2O3能下调原代细胞中EVI-1 mRNA,抑制THP-1细胞株增殖、诱导其凋亡,且呈剂量、时间依赖性;As2O3能下调THP-1细胞株EVI-1 mRNA、EVI-1蛋白的表达。结论:As2O3通过抑制白血病细胞EVI-1 mRNA、EVI-1蛋白的表达,从而促进其凋亡。 展开更多

关键词 三氧化二砷 EVI-1基因 凋亡 thp-1细胞株

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微RNA-21在THP-1细胞中对STAT3/STAT5表达的影响 被引量：1

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作者 郑玉 张文哲 +2 位作者 董利阳 王婷 汪雪峰 《医学综述》 2020年第16期3287-3292,共6页

目的观察微RNA-21(miR-21)在人源单核白血病细胞株THP-1细胞中对信号转导及转录激活因子(STAT) 3、STAT5表达的影响。方法将人miR-21-5p过表达(LV-miR-21)及抑制(miR-21 Sponge)的慢病毒颗粒感染THP-1细胞,经嘌呤霉素筛选后,在倒置荧光... 目的观察微RNA-21(miR-21)在人源单核白血病细胞株THP-1细胞中对信号转导及转录激活因子(STAT) 3、STAT5表达的影响。方法将人miR-21-5p过表达(LV-miR-21)及抑制(miR-21 Sponge)的慢病毒颗粒感染THP-1细胞,经嘌呤霉素筛选后,在倒置荧光显微镜下观察细胞感染率,并通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测THP-1细胞中miR-21、STAT3、STAT5a、STAT5b信使RNA(mRNA)的表达,采用蛋白免疫印迹法检测THP-1细胞中STAT3、STAT5的表达。比较对照组、LV-miR-21组和miR-21 Sponge组慢病毒颗粒THP-1细胞中miR-21的表达水平以及STAT3、STAT5的表达。结果倒置荧光显微镜下,三组THP-1细胞的转染率达90%以上;STAT3基因的3’非翻译区与miR-21存在7个碱基互补区。实时荧光定量PCR显示,LV-miR-21组miR-21表达水平高于对照组和miR-21 Sponge组(3.17±0.17比1.00±0.04、1.01±0.06)(P <0.05),而对照组与miR-21 Sponge组THP-1细胞中miR-21的表达水平比较差异无统计学意义(P> 0.05);与对照组相比,LV-miR-21组STAT3 mRNA表达下降,而miR-21 Sponge组STAT3 mRNA表达水平显著升高(P <0.05),但三组STAT5a、STAT5b mRNA的表达水平比较差异无统计学意义(P> 0.05)。使用LAND-l软件对蛋白免疫印迹法检测结果进行灰度扫描显示,与对照组相比,LV-miR-21组THP-1细胞中STAT3蛋白表达下调,STAT5蛋白表达上调;而miR-21 Sponge组THP-1细胞中STAT3蛋白表达上调,STAT5蛋白表达下调。结论本实验成功获得了能够稳定过表达及抑制miR-21的THP-1细胞系,miR-21能抑制THP-1细胞中STAT3 mRNA和蛋白的表达,促进STAT5蛋白的表达。 展开更多

关键词 微RNA-21 thp-1细胞系 信号转导及转录激活因子

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FLT3靶向短发夹状干扰RNA体外转录合成及作用 被引量：1

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作者 卢洁 盛光耀 +6 位作者 邹湘 方营旗 赵晓明 徐学聚 白松婷 许培荣 王建人 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期839-844,共6页

FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)是一种酪氨酸激酶受体,在大多数急性髓系白血病(AML)患者中持续激活,与患者预后差密切相关。为探讨3种FLT3靶向短发夹状干扰RNA(shRNA)对急性髓系白血病细胞株THP-1的沉默效应,设计和体外转录合成3个FLT3靶向shRN... FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)是一种酪氨酸激酶受体,在大多数急性髓系白血病(AML)患者中持续激活,与患者预后差密切相关。为探讨3种FLT3靶向短发夹状干扰RNA(shRNA)对急性髓系白血病细胞株THP-1的沉默效应,设计和体外转录合成3个FLT3靶向shRNA(shRNA1、shRNA2、shRNA3),体外转染THP-1细胞;以RT-PCR法检测FLT3mRNA水平表达,用流式细胞术、免疫荧光测定法检测FLT3蛋白的表达。结果显示:shRNA1、shRNA3可显著下调FLT3mRNA的表达,其中shRNA1的抑制作用较强。25nmol/LshRNA1转染48小时对FLT3mRNA的抑制率是(72.95±2.07)%,作用可达72小时。5nmol/L及以上浓度的shRNA1对FLT3mRNA表达有下调作用,作用存在量-效关系。15nmol/LshRNA1的抑制率是(67.53±0.66)%。FLT3蛋白位于细胞膜上,shRNA1对其有较强的抑制作用,转染72小时蛋白抑制率达(79.67±0.66)%。结论:FLT3-shRNA1具有较好的FLT3基因靶向抑制作用,可作为进一步研究该基因作用机制及靶向治疗可能性的工具。 展开更多

关键词 急性髓系白血病 FLT3 FLT3-shRNA RNA干扰 thp-1细胞株

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稳定表达核仁磷酸蛋白1突变基因的白血病细胞株的构建及鉴定

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作者 邵会媛 覃凤娴 +4 位作者 苗宗玉 陈先春 谭诗 高玉洁 张伶 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第2期141-145,共5页

目的构建稳定表达人核仁磷酸蛋白1(Nucleophosmin 1,NPM1)A型突变蛋白(NPM1-mA)的白血病髓性细胞系,并进行鉴定。方法利用xfectTM转染试剂将含人NPM1-mA基因的重组质粒pEGFP-C1-NPM1-mA分别转染THP-1和K562细胞系,G418筛选阳性克隆,建... 目的构建稳定表达人核仁磷酸蛋白1(Nucleophosmin 1,NPM1)A型突变蛋白(NPM1-mA)的白血病髓性细胞系,并进行鉴定。方法利用xfectTM转染试剂将含人NPM1-mA基因的重组质粒pEGFP-C1-NPM1-mA分别转染THP-1和K562细胞系,G418筛选阳性克隆,建立稳定表达NPM1-mA的白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA。采用RT-PCR和Western blot检测细胞NPM1-mA mRNA和蛋白水平的表达,细胞免疫化学法检测NPM1-mA蛋白的亚细胞定位,细胞生长曲线观察细胞体外增殖能力的改变。结果构建的白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA的RT-PCR产物均可见446 bp的NPM1-mA基因条带;NPM1-mA蛋白的表达量明显升高;NPM1-mA蛋白存在于构建的2株白血病细胞胞浆中;与空载体转染组和未转染组细胞相比,转染NPM1-mA基因后,THP-1细胞体外增殖能力增强,K562细胞体外增殖能力减弱。结论已成功构建了稳定表达NPM1-mA的两株白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA,为进一步研究NPM1基因突变对白血病细胞生物学特性的影响提供了良好的细胞模型。 展开更多

关键词 白血病 核仁磷酸蛋白 突变 thp-1细胞系 K562细胞系

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氯化锂对白血病THP-1细胞生长的抑制作用及其对Wnt通路的影响

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作者 许思苗 方勇 +6 位作者 周密 赵雪娇 秦宇 张沛凌 原瑞凤 周剑峰 杨漾 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期568-572,共5页

目的研究氯化锂(LiCl)在体外对白血病细胞THP-1增殖、凋亡、周期以及Wnt通路的影响。方法氯化锂不同浓度不同时间作用THP-1细胞后,用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡和周期分布,Western blot检测细胞内Wnt通路的变化。结果氯... 目的研究氯化锂(LiCl)在体外对白血病细胞THP-1增殖、凋亡、周期以及Wnt通路的影响。方法氯化锂不同浓度不同时间作用THP-1细胞后,用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡和周期分布,Western blot检测细胞内Wnt通路的变化。结果氯化锂能抑制白血病THP-1细胞的增殖,诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G2/M期,且均呈浓度和时间依赖性。氯化锂不同浓度不同时间作用THP-1细胞后,t-GSK3β、cyclinD1表达不变,p-GSK3β、β-catenin表达升高,短时间低浓度作用后c-myc表达升高,但随作用时间延长和浓度增加,c-myc表达降低。结论氯化锂对THP-1细胞有显著的增殖抑制、凋亡诱导、细胞G2/M期阻滞作用,并激活Wnt通路,影响Wnt通路下游蛋白c-myc、cyclinD1的表达。 展开更多

关键词 氯化锂 白血病 thp-1细胞系 增殖 凋亡 细胞周期 糖原合成酶激酶 WNT信号通路

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植物细胞分裂素ortho-Topolin Riboside对人白血病细胞株THP-1的抗癌活性及机制初探

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作者 邓营营 李茗达 +4 位作者 郭祎 崔宝程 黄姣 王黎 崔昌浩 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第6期299-304,共6页

本研究以人急性髓性白血病细胞株THP-1为研究对象,初步探讨其抗癌活性及作用机制。通过光学显微镜观察N6-2-苄胺羟基腺苷(oTR)作用后THP-1细胞形态学和数目变化;CCK-8法检测oTR对THP-1细胞的增殖抑制作用,并用核苷转运体拮抗剂和腺苷受... 本研究以人急性髓性白血病细胞株THP-1为研究对象,初步探讨其抗癌活性及作用机制。通过光学显微镜观察N6-2-苄胺羟基腺苷(oTR)作用后THP-1细胞形态学和数目变化;CCK-8法检测oTR对THP-1细胞的增殖抑制作用,并用核苷转运体拮抗剂和腺苷受体拮抗剂预处理细胞检测oTR进入细胞的方式;用流式细胞仪分析oTR作用对THP-1细胞凋亡和分化的影响。结果表明,oTR可显著(P<0.05)抑制THP-1细胞的增殖能力,且呈浓度依赖性;核苷转运体拮抗剂Dipyridamole预处理THP-1细胞后,可明显逆转oTR的增殖抑制作用,而4种腺苷受体拮抗剂(DPCPX、SCH58261、MRS1754和MRA1191)则无显著影响;oTR可诱导处理组细胞亚倍体峰比例显著(P<0.05)高于对照组,且细胞髓系分化标志蛋白CD11b表达明显升高。以上结果表明细胞分裂素oTR通过核苷转运体途径进入THP-1细胞,显著(P<0.05)抑制细胞的增殖,并可诱导THP-1细胞发生凋亡和髓系分化。 展开更多

关键词 N6-2-苄胺羟基腺苷 抗肿瘤活性 白血病 thp-1细胞

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急性单核细胞白血病细胞系THP-1侧群细胞的分选、鉴定与富集

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作者 王颖超 马丽娜 +3 位作者 殷楚云 冯磊 魏永纬 盛光耀 《中华实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期699-703,共5页

目的探讨人急性单核细胞白血病细胞系THP-1中是否存在侧群（SP）细胞，鉴定其是否具有白血病干细胞（LSCs）的生物学特性，并研究从THP-1细胞系中富集sP细胞的方法。方法THP-1细胞用Hoechst33342荧光染料染色后，分别应用荧光显微镜和... 目的探讨人急性单核细胞白血病细胞系THP-1中是否存在侧群（SP）细胞，鉴定其是否具有白血病干细胞（LSCs）的生物学特性，并研究从THP-1细胞系中富集sP细胞的方法。方法THP-1细胞用Hoechst33342荧光染料染色后，分别应用荧光显微镜和流式细胞术（FCM）检测是否存在sP细胞及sP细胞的形态和比例。分选sP和非侧群（NSP）细胞，FCM检测其表面抗原表达及细胞周期；实时荧光定量PCR检测耐药基因ABCG2、ABCBl和凋亡基因Bcl-2、Bax在两亚群细胞中的表达差异。将THP-1细胞用不同水平阿糖胞苷（Ara—C）处理24h，染色后检测sP细胞比例的变化。结果1．荧光显微镜观察到在THP-1细胞中存在拒染的sP细胞，形态与NSP细胞无明显区别。FCM检测结果显示，试验管sP细胞比例为（1．81-4-0．99）％，对照管可被维拉帕米完全拮抗。2．FCM分选sP细胞的纯度达到（96．71±0．90）％；SP细胞大部分处于静止期，G0／G1期细胞比例达（84．04±4．98）％，而NSP细胞则处于增殖期，S／G2／M期细胞比例为（56．38±1．48）％；CD34＋、CD34＋CD％一细胞在sP亚群中的比例要高于NSP亚群（P〈0．05）；SP细胞ABCG2及ABCBl表达水平显著高于NSP细胞（P均〈0．05）。SP细胞Bcl-2表达水平（0．99±0．08）显著高于NSP细胞（0．29±0．13）（P〈0．05），而Bax表达值（0．68±0．05）与NSP细胞（0．85±0．09）表达水平差异无统计学意义（P〉0．05），但Bcl-2／Bax比值显著高于NSP细胞亚群（P〈0．05）。3．经与Ara-C共培养24h后，sP细胞的比例显著提高，且随着Ara．C水平增大，sP细胞比例也越高。结论人急性单核细胞白血病细胞系THP-1中存在少量sP细胞，较之NSP细胞更具有干细胞的生物学活性。与一定水平Ara—C共培养可有效富集THP-1细胞系中的sP细胞，可作为LSCs研究的切入点，对进一步研究白血病有重要意义。 展开更多

关键词 thp-1细胞 白血病干细胞 侧群细胞 阿糖胞苷

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