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人参皂苷Rg1对人白血病TF-1细胞EPOR信号通路的影响 被引量:15
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作者 夏菁 李静 +6 位作者 左国伟 赵亮 魏强 游智梅 李丹阳 刘泽洪 陈地龙 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期113-120,共8页
目的:探讨人参皂苷Rg1诱导急性髓系白血病M6型人红白血病TF-1细胞凋亡及其对红细胞生成素受体(erythropoietin receptor,EPOR)通路的影响,以及可能的机制。方法:不同浓度人参皂苷Rg1处理TF-1细胞后,应用CCK-8(cell counting kit-8)法检... 目的:探讨人参皂苷Rg1诱导急性髓系白血病M6型人红白血病TF-1细胞凋亡及其对红细胞生成素受体(erythropoietin receptor,EPOR)通路的影响,以及可能的机制。方法:不同浓度人参皂苷Rg1处理TF-1细胞后,应用CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞的增殖活性,FCM法检测并在透射电子显微镜下观察人参皂苷Rg1诱导TF-1细胞的凋亡,FCM法和免疫荧光法检测TF-1细胞中EPOR蛋白的表达水平和分布情况,实时荧光定量-PCR法检测TF-1细胞EPOR mRNA的表达,蛋白质印迹法检测人参皂苷Rg1作用后TF-1细胞的红细胞生成素(erythropoietin,EPO)反应性以及TF-1细胞中EPOR、磷酸化EPOR、酪氨酸激酶JAK2(Janus tyrosine kinase 2)、磷酸化JAK2、信号转导和转录激活因子5(signal transducers and activators of transcription 5,STAT5)、磷酸化STAT5、Bax、Bcl-2和caspase-3(激活型)蛋白的表达。结果:人参皂苷Rg1(12.5、25、50、100和200μmol/L)作用24、48和72 h后,TF-1细胞的增殖受到抑制(P<0.05)。人参皂苷Rg1(12.5、25和50μmol/L)作用48 h后,TF-1细胞的早期凋亡率高于人参皂苷Rg1未处理的对照组(P<0.05),透射电子显微镜下可见TF-1细胞出现凋亡变化。FCM法和免疫荧光检测结果均显示,人参皂苷Rg1作用后TF-1细胞膜表面EPOR的表达明显减少,并且TF-1细胞EPOR mRNA的表达水平下调(P<0.05)。与对照组比较,人参皂苷Rg1作用后TF-1细胞EPOR总蛋白的表达水平无明显变化,但降低了TF-1细胞对EPO的反应性,磷酸化EPOR的表达水平明显下调,Bax和caspase-3(激活型)蛋白的表达水平明显上调,Bcl-2以及EPOR下游JAK2、磷酸化JAK2、STAT5和磷酸化STAT5的表达水平均明显下调(P均<0.05)。结论:人参皂苷Rg1可明显抑制TF-1细胞的增殖并促进其凋亡,其促凋亡机制可能与降低TF-1细胞对EPO的反应性,下调EPOR下游相关蛋白的表达并激活caspase-3的表达有关。 展开更多
关键词 白血病 细胞凋亡 受体 红细胞生成素 人参皂苷RG1 细胞 tf-1
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依赖IL-5增殖的细胞株TF-1-9E3的驯化及验证
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作者 李诗洁 代维燕 +5 位作者 王雪莲 柯文锋 韩飞 陈永奇 刘畅 白仲虎 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期109-114,共6页
在IL-5靶点药物的发现阶段,为评价候选药物的阻断活性,需建立依赖IL-5增殖且信噪比高、重现性好的检测用细胞株。TF-1是人白血病细胞,其生长完全依赖IL-3或GM-CSF,而IL-5与IL-3和GM-CSF共用β(βc)受体,因此,研究以GM-CSF依赖的TF-1细... 在IL-5靶点药物的发现阶段,为评价候选药物的阻断活性,需建立依赖IL-5增殖且信噪比高、重现性好的检测用细胞株。TF-1是人白血病细胞,其生长完全依赖IL-3或GM-CSF,而IL-5与IL-3和GM-CSF共用β(βc)受体,因此,研究以GM-CSF依赖的TF-1细胞株为来源,用IL-5替换TF-1细胞生长必需的生长因子GM-CSF,降低血清含量进行细胞驯化培养传代。通过35 d的细胞驯化及3~5次降血清传代培养,采用有限稀释法分离单克隆,一共得到14个单克隆细胞株。对14株细胞进行FACS检测,其中,有9个细胞株IL-5Rα表达量升高。对IL-5Rα过表达的细胞株进行IL-5增殖检测,结果表明,相比8%FBS得到的单克隆,6%FBS得到的单克隆对IL-5刺激更敏感。通过单因素优化实验,细胞增殖检测最优的细胞接种量为2×10^(4)个/孔,FBS含量为3%,血清品牌为Gibco。驯化后的细胞TF-1-9E3对IL-5的剂量-效应曲线的信噪比为3.19,Emax区间为2.15,可用于IL-5的生物学活性检测及IL-5与IL-5Rα的抗体阻断活性检测。 展开更多
关键词 IL-5 tf-1细胞 增殖 阻断活性 细胞驯化
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苦参碱诱导白血病TF-1细胞凋亡及对SALL4基因表达的影响 被引量:4
3
作者 喻依川 王兰 +2 位作者 傅雷华 胡成琳 陈林 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第19期2719-2722,共4页
目的:探讨苦参碱(matrine,Mat)诱导急性髓性白血病M6型人红白血病TF-1细胞凋亡及对SALL4基因表达的影响。方法:将不同质量浓度(0.5,1.0,1.52,.0 g.L-1)的Mat分别作用于体外培养的TF-1细胞不同时间(24,48,72 h),MTT检测Mat对细胞增殖的影... 目的:探讨苦参碱(matrine,Mat)诱导急性髓性白血病M6型人红白血病TF-1细胞凋亡及对SALL4基因表达的影响。方法:将不同质量浓度(0.5,1.0,1.52,.0 g.L-1)的Mat分别作用于体外培养的TF-1细胞不同时间(24,48,72 h),MTT检测Mat对细胞增殖的影响;流式细胞术(flow cytometry,FCM)测定细胞周期;Annexin V和PI双染色法检测细胞凋亡;逆转录RT-PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测SALL4 mRNA表达。结果:Mat(0.5~2.0 g.L-1)作用TF-1细胞24,48,72 h后均有增殖抑制作用(P<0.01),在该浓度范围内抑制率呈剂量和时间依赖4,8 h半数抑制浓度(IC50)为1.0 g.L-1;Mat作用TF-1细胞48 h后,与对照组相比G0/G1期细胞比例增加,S期细胞下降(P<0.01);流式细胞术检测细胞凋亡率分别为8.6%1,1.21%,15.26%,17.63%,与对照组(5.05%)相比较,差异具有统计学意义(P<0.01);RT-PCR结果显示SALL4mRNA表达量与β-actin(内参照)表达量的比值,随Mat剂量增加而显著减小(P<0.01)。结论:Mat在一定浓度和时间范围内对TF-1细胞具有增殖抑制作用,其机制是使细胞发生G0/G1期阻滞;抑制SALL4基因的表达,诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 苦参碱 SALL4基因 白血病 tf-1细胞 细胞凋亡
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GM-CSF/IL-3融合蛋白质量标准的研究和建立 被引量:2
4
作者 袁力勇 饶春明 +4 位作者 李响 韩春梅 郭莹 丁有学 王军志 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1605-1608,共4页
目的:建立重组 GM-CSF/IL-3融合蛋白的质控标准和检测方法,以用于该产品的常规质量控制。方法:用 TF-1/MTT 细胞增殖试验定量测定 GM-CSF/IL-3融合蛋白体外生物学活性;用抗 GM-CSF 和 IL-3的抗体分别进行 WesternBlot 进行鉴别试验;用 C... 目的:建立重组 GM-CSF/IL-3融合蛋白的质控标准和检测方法,以用于该产品的常规质量控制。方法:用 TF-1/MTT 细胞增殖试验定量测定 GM-CSF/IL-3融合蛋白体外生物学活性;用抗 GM-CSF 和 IL-3的抗体分别进行 WesternBlot 进行鉴别试验;用 C_8-HPLC 和 SDS~PAGE 测定蛋白纯度;用胰蛋白酶消化/C_(18)-HPLC 进行肽图分析;用顶空进样气相色谱法检测甲醇残留量;还原型 SDS-PAGE 测定融合蛋白相对分子质量;其他原液和成品检测项目参照2005年版中国药典三部的方法进行。结果:GM-CSF/IL-3融合蛋白的原液及成品与 TF-1细胞的反应呈典型的 S 型曲线,符合四参数方程 y=(A-D)/[1+(x/C)(?)B)]+D,相关系数大于0.99,成品和原液的回收率均大于94%,RSD 均小于20%;与 GM-CSF 和 IL-3抗体进行的 Western Blot 均为阳性;原液纯度大于95.0%;甲醇残留量小于0.005%,其他项目均符合2005年版中国药典三部要求。结论:建立的重组 GM-CSF/IL-3融合蛋白质控标准和检测方法可以有效控制该制品的质量,并确保制品的安全与有效,已用于该制品的常规检定。 展开更多
关键词 GM—CSF/IL-3 tf-1细胞 WESTERN BLOT 甲醇
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干细胞因子对红白血病细胞系TF-1凋亡的抑制作用 被引量:2
5
作者 王利红 胡志远 +1 位作者 王嘉玺 贺福初 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2000年第1期33-35,共3页
目的 :探讨干细胞因子 (stemcellfactor ,SCF)阻止红白血病细胞系TF 1进入凋亡程序的作用。方法 :进行3H TdR掺入实验、细胞存活实验、细胞基因组DNA电泳分析和流式细胞术分析。结果 :发现TF 1细胞对SCF的反应存在量 半高效关系 ,在SC... 目的 :探讨干细胞因子 (stemcellfactor ,SCF)阻止红白血病细胞系TF 1进入凋亡程序的作用。方法 :进行3H TdR掺入实验、细胞存活实验、细胞基因组DNA电泳分析和流式细胞术分析。结果 :发现TF 1细胞对SCF的反应存在量 半高效关系 ,在SCF存在时细胞存活率明显提高 ,TF 1细胞系在SCF饥饿 2 4h时出现DNA梯型条带 ;流式细胞术检测显示 ,在SCF饥饿 36h后 ,在G1峰前出现凋亡特有的AP峰。结论 :SCF有阻滞或抑制红白血病细胞系TF 1凋亡的作用。 展开更多
关键词 干细胞因子 tf-1 细胞凋亡 红白血病
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重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子效价测定中最佳细胞密度的探讨
6
作者 遇畅 王海蓉 周艳玲 《黑龙江医药》 CAS 2001年第6期439-440,共2页
重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rh GM—CSF)效价的测定是采用 TF—1 rh GM—CSF 依赖株细胞,该细胞的增殖与 rh GM—CSF 浓度成正比,用 MTT 法测定细胞增殖程度,反映 rh GM—CSF 的活性。在测定 rh GM—CSF 的效价过程中 TF—1细胞... 重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rh GM—CSF)效价的测定是采用 TF—1 rh GM—CSF 依赖株细胞,该细胞的增殖与 rh GM—CSF 浓度成正比,用 MTT 法测定细胞增殖程度,反映 rh GM—CSF 的活性。在测定 rh GM—CSF 的效价过程中 TF—1细胞的密度对实验结果有直接影响。 展开更多
关键词 重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 tf-1细胞 密度 效价测定
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TF-1细胞凋亡相关基因19与甲状腺肿瘤之间关系的初步探讨 被引量:22
7
作者 杜颖 洪天配 《中华内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期492-494,共3页
目的 探讨TF 1细胞凋亡相关基因 19(TFAR19)在甲状腺腺瘤 (TA)和甲状腺乳头状癌 (PTC)中是否有表达及其细胞定位。方法  6例TA和 6例PTC患者 ,经手术得到甲状腺肿瘤组织标本并获病理诊断 ,以 6例TA患者的瘤周正常甲状腺组织作为对照。... 目的 探讨TF 1细胞凋亡相关基因 19(TFAR19)在甲状腺腺瘤 (TA)和甲状腺乳头状癌 (PTC)中是否有表达及其细胞定位。方法  6例TA和 6例PTC患者 ,经手术得到甲状腺肿瘤组织标本并获病理诊断 ,以 6例TA患者的瘤周正常甲状腺组织作为对照。TFAR19表达的检测采用免疫组化染色。结果 TFAR19在正常甲状腺组织中几乎未见表达 ;在TA组的甲状腺肿瘤组织中呈强阳性表达 ,而在PTC组中呈阴性表达。结论 TFAR19凋亡通路在TA中被激活 ,而在PTC中则受到抑制 ,提示细胞凋亡与增殖之间的平衡失调可能在PTC的发病机制中具有重要作用。 展开更多
关键词 tf-1细胞凋亡相关基因19 甲状腺肿瘤 脱噬作用 细胞凋亡 细胞增殖 免疫组化法
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肾透明细胞癌PDCD5表达及与预后的关系 被引量:24
8
作者 谭万龙 熊林 +4 位作者 郑少斌 郁兆存 齐桓 杜跃军 吴芃 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1316-1318,共3页
目的探讨PDCD5在肾透明细胞癌发生、发展中的作用及与预后关系。方法采用免疫组织化学方法,对46例肾透明细胞癌组织中PDCD5表达进行研究,对患者存活率进行回顾性随访。结果癌旁肾组织中PDCD5阳性表达率显著高于肾癌组织。PDCD5阳性表达... 目的探讨PDCD5在肾透明细胞癌发生、发展中的作用及与预后关系。方法采用免疫组织化学方法,对46例肾透明细胞癌组织中PDCD5表达进行研究,对患者存活率进行回顾性随访。结果癌旁肾组织中PDCD5阳性表达率显著高于肾癌组织。PDCD5阳性表达率随肾透明细胞癌病理分级和临床分期的上升而下降,染色强度也减弱。PDCD5阳性表达组3年及5年存活率高于阴性表达组。结论PDCD5为肾透明细胞癌的负性调节因子,对抑制肾透明细胞癌的恶性转化和进展可能有重要的意义。 展开更多
关键词 肾透明细胞癌 PDCD5 tfAR19
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人TRAIL cDNA的真核表达和体外肿瘤细胞的凋亡诱导作用 被引量:9
9
作者 史须 黄家强 +2 位作者 张颖妹 宋泉声 马大龙 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期145-149,共5页
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( TRAIL)全长 cDNA及其胞外区真核表达产物体外诱导肿瘤细胞的凋亡作用,为 TRAIL基因治疗提供实验依据。方法 从胎心 cDNA文库中经 PCR扩增获得两种形式 cDNAs,构建相应的真核表达载体后进行... 目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( TRAIL)全长 cDNA及其胞外区真核表达产物体外诱导肿瘤细胞的凋亡作用,为 TRAIL基因治疗提供实验依据。方法 从胎心 cDNA文库中经 PCR扩增获得两种形式 cDNAs,构建相应的真核表达载体后进行基因转染,并筛选得到稳定表达细胞株;收集表达上清进行肿瘤细胞的体外凋亡诱导,同时观察凋亡相关蛋白 TFAR19与表达上清共同存在时对肿瘤细胞的作用。结果 成功获得表达两种目的蛋白的真核细胞系,其表达上清均能诱导肿瘤细胞 HeLa和 Hec-1a的凋亡,而且 TFAR19能增强表达上清的凋亡诱导作用。结论 证明 TRAIL基因的真核表达产物同样能诱导肿瘤细胞凋亡,如有 TFAR19存在则效果更佳。 展开更多
关键词 肿瘤坏死在子相关凋亡诱导配体 CDNA 真核表达 体外肿瘤细胞 细胞凋亡 tfAR19
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cDNA cloning and expression of an apoptosis-related gene, human TFAR15 gene 被引量:7
10
作者 王玉刚 刘洪涛 +1 位作者 张颖妹 马大龙 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 1999年第3期323-329,共7页
By means of eDNA-RDA)A method, some cd)YA fragment- were found to have high levels oi expression during deprivation of GM-CSF ( granulocyte macrophage-rolony stimulating (actor) in a human myeloid cell line, TF-I cell... By means of eDNA-RDA)A method, some cd)YA fragment- were found to have high levels oi expression during deprivation of GM-CSF ( granulocyte macrophage-rolony stimulating (actor) in a human myeloid cell line, TF-I cells. One of these fragments was identified as a novel gene. To gel the full length of eDNA, rapid amplification of cDYA ends (RACE) and expressed sequence tags ( EST) overlapting fragments assembling strategies were used. The novel gene was named TRAF15 (TF-1 cell apoptosis related gene-15) , which consist of I 218 nucleotides and eneodes 212 ammo acids. The putative protein product oi TFAR15 is parlially homologous to C. elegans protein C14A4. 11 . TFAR15 mRNA is expressed in fetal liver, kidney, spleen and lung. and also in some human myeloid cell lines. Both of the TFAR15 mRNA and protein in wen: highly expressed in TF-1 cells after GM-CSF withdrawal. In vitro analysis showed that the tecombinant TFAR15 protem coold inhibit the natural cell death of 293 cells, an embryonie kidney cell line. 展开更多
关键词 APOPTOSIS cDNA-RDA RACE tf-1 cell LINE 293 cells.
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TF-1细胞凋亡相关基因19在系统性红斑狼疮发病中的作用 被引量:5
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作者 宋清华 王晶 +4 位作者 陈英玉 狄春晖 孙荣华 陈学荣 李世荫 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期189-193,T004,共6页
目的 :探讨TF - 1细胞凋亡相关基因 1 9(TFAR1 9)在系统性红斑狼疮 (SLE)发病诱因中的作用及其与SLE病情的关系。方法 :应用倒置相差显微镜、Ladder方法、Westernblotting方法、荧光免疫显微镜、ELISA方法检测中波紫外线 (UVB)诱导HaCa... 目的 :探讨TF - 1细胞凋亡相关基因 1 9(TFAR1 9)在系统性红斑狼疮 (SLE)发病诱因中的作用及其与SLE病情的关系。方法 :应用倒置相差显微镜、Ladder方法、Westernblotting方法、荧光免疫显微镜、ELISA方法检测中波紫外线 (UVB)诱导HaCaT细胞凋亡时TFAR1 9的表达及其与SLE患者病情的关系。结果 :在剂量为 30mJ/cm2的UVB照射 2 4h后 ,HaCaT细胞开始凋亡 ,TFAR1 9在此过程中有表达 ,发现活动期SLE患者血清中TFAR1 9的抗体值高于稳定期和正常对照组的值 (P≤ 0 .0 5)。结论 :在UVB诱导角质形成细胞HaCaT凋亡的过程中 ,有TFAR1 9的参与并发挥了作用 ,提示TFAR1 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 细胞凋亡 紫外线B tf-1细胞凋亡相关基因19
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重组TFAR19蛋白对鼻咽癌CNE-1细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响 被引量:2
12
作者 漆涌 伍勇 +2 位作者 陶莹 李登清 马大龙 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第6期452-456,共5页
目的研究重组TFAR19(TF-1cellapoptsis-relatedgene19)蛋白对鼻咽癌细胞株CNE-1端粒酶活性及端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达的影响,探讨重组TFAR19蛋白促CNE-1细胞凋亡的作用机制。方法将不同浓度的高纯度重组TFAR19蛋白分别和人类鼻咽... 目的研究重组TFAR19(TF-1cellapoptsis-relatedgene19)蛋白对鼻咽癌细胞株CNE-1端粒酶活性及端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达的影响,探讨重组TFAR19蛋白促CNE-1细胞凋亡的作用机制。方法将不同浓度的高纯度重组TFAR19蛋白分别和人类鼻咽癌细胞株CNE-1共同培养后,通过7-AAD及AnnexinV-PE标记进行流式细胞术分析,检测TFAR19蛋白对细胞的促凋亡效应;RT-PCR法比较试验组和对照组CNE-1细胞株端粒酶hTERTmRNA的表达水平;TRAP-银染法检测重组TFAR19蛋白作用下CNE-1细胞株端粒酶活性的改变。结果(1)一定浓度的TFAR19蛋白在未加载体的情况下,可促进细胞凋亡,加入5、10、15、20、30mg/L的TFAR19蛋白后,CNE-1细胞的凋亡率分别是15.26%,29.48%,37·11%,54·20%,72.36%。阳性对照组(凋亡诱导剂stuanrosporin处理)与阴性对照组(PBS处理)的细胞凋亡率分别是98·37%、13·40%。(2)试验组与对照组CNE-1细胞株端粒酶hTERTmRNA表达无显著差异。(3)与20mg/L以上浓度的重组TFAR19蛋白共同培养后,CNE-1细胞株端粒酶活性明显降低。结论重组TFAR19蛋白在较高浓度下可降低鼻咽癌细胞株CNE-1的端粒酶活性,明显促进肿瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 重组tfAR19蛋白 鼻咽癌细胞 端粒酶 细胞凋亡
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中波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡中TF-1细胞凋亡相关基因19的表达 被引量:2
13
作者 宋清华 狄春晖 +3 位作者 陈英玉 钟英诚 陈学荣 李世荫 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期506-508,共3页
目的:研究在中波紫外线(UVB)诱导正常永生化角质形成细胞(HaCaT)凋亡过程中,T细胞凋亡相关基因19(TFAR 19)的表达时相及位置。方法:使用流式细胞仪、膜联蛋白V(Annexin-V)、激光扫描共聚焦显微镜等方法进行研究。结果:在凋亡过程中,TFAR... 目的:研究在中波紫外线(UVB)诱导正常永生化角质形成细胞(HaCaT)凋亡过程中,T细胞凋亡相关基因19(TFAR 19)的表达时相及位置。方法:使用流式细胞仪、膜联蛋白V(Annexin-V)、激光扫描共聚焦显微镜等方法进行研究。结果:在凋亡过程中,TFAR 19逐渐向核周聚积,最后向核膜内移位,在核膜及其周围以及核内表达。 结论:在UVB诱导HaCaT细胞凋亡的早期和晚期过程中TFAR 19均有表达。 展开更多
关键词 T细胞凋亡相关基因 HACAT细胞 中波紫外线 凋亡
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蛋白酶体抑制剂可增加足叶乙甙对白血病细胞系M-07e和TF-1的凋亡诱导效应 被引量:2
14
作者 兰雨 张学敏 +1 位作者 杨平地 沈倍奋 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期485-489,共5页
近年来的研究显示泛素 蛋白酶体通路在细胞凋亡调控中发挥了重要的作用。本实验就蛋白酶体抑制剂Z LLL CHO与经典的凋亡诱导剂足叶乙甙 (VP16)对白血病细胞系M 0 7e及TF 1的联合效应进行了初步研究。应用MTT法及台盼蓝拒染法显示Z LLL ... 近年来的研究显示泛素 蛋白酶体通路在细胞凋亡调控中发挥了重要的作用。本实验就蛋白酶体抑制剂Z LLL CHO与经典的凋亡诱导剂足叶乙甙 (VP16)对白血病细胞系M 0 7e及TF 1的联合效应进行了初步研究。应用MTT法及台盼蓝拒染法显示Z LLL CHO及VP16联合作用于M 0 7e及TF 1细胞 ,可增强两种药物单独的细胞杀伤效应。流式细胞术检测提示单独应用Z LLL CHO及VP16均可使S +G2 /M期细胞比例增加 ,两者联合应用导致细胞凋亡峰比例的显著增高。通过对M 0 7e细胞裂解物做免疫印迹检测 ,发现在Z LLL CHO及VP16单独作用中均导致Bcl 2蛋白被酶解为 2 2kD的片段 ,而联合作用时Bcl 2的酶解现象具有叠加效应。结论 :Z LLL CHO与VP16联合作用较单独作用有更强的细胞杀伤及诱导细胞凋亡活性 ,细胞周期S +G2 /M期比例的增加及Bcl 2酶解片段的增加是导致蛋白酶体抑制剂Z LLL CHO及VP16对白血病细胞系联合效应的可能机制。 展开更多
关键词 蛋白酶体抑制剂 足叶乙甙 细胞凋亡 白血病细胞系 M—07e tf-1
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人红系分化相关基因高表达提高TF-1细胞系存活能力 被引量:1
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作者 郑巍薇 张美江 +4 位作者 尹荣华 董小明 詹轶群 杨晓明 李长燕 《生物技术通讯》 CAS 2013年第4期462-466,共5页
目的:检测人红系分化相关基因(EDAG)对TF-1细胞株存活能力的影响。方法:采用电转染法将过表达EDAG的质粒高效转染TF-1细胞株,通过G418筛选得到过表达EDAG的TF-1细胞稳定株,用MTS法检测过表达EDAG的细胞稳定株在撤除细胞因子后的增殖情况... 目的:检测人红系分化相关基因(EDAG)对TF-1细胞株存活能力的影响。方法:采用电转染法将过表达EDAG的质粒高效转染TF-1细胞株,通过G418筛选得到过表达EDAG的TF-1细胞稳定株,用MTS法检测过表达EDAG的细胞稳定株在撤除细胞因子后的增殖情况,用流式细胞术检测细胞凋亡。结果:用表达GFP的质粒电转染TF-1细胞株,通过综合评价转染效率和细胞状态,确定最佳转染条件为1350 V电压电击30 ms,电击次数为1次;对得到的细胞稳定株进行检测,其内源EDAG的mRNA和蛋白水平均上调;将细胞稳定株在撤除细胞因子状态下培养,过表达EDAG后细胞存活能力增强、凋亡减少。结论:用电转染方式高效转染TF-1细胞,通过筛选得到过表达EDAG的稳定细胞株,并证实撤除细胞因子后过表达EDAG能提高TF-1细胞系的存活及抗凋亡能力。 展开更多
关键词 人红系分化相关基因 tf-1细胞 存活 凋亡
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硼替佐米诱导TF-1细胞凋亡及其对SALL4基因表达的影响
16
作者 王兰 喻依川 +2 位作者 傅雷华 胡成琳 陈林 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期785-789,共5页
目的:探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bortezomib)诱导人红系白血病细胞株TF-1凋亡的作用,及其对Sall4基因表达水平的影响。方法:(1)MTT法检测细胞增殖抑制率。(2)光学显微镜观察细胞的形态学改变。(3)电镜观察超微结构变化。(4)流式细胞... 目的:探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bortezomib)诱导人红系白血病细胞株TF-1凋亡的作用,及其对Sall4基因表达水平的影响。方法:(1)MTT法检测细胞增殖抑制率。(2)光学显微镜观察细胞的形态学改变。(3)电镜观察超微结构变化。(4)流式细胞仪检测Annexin V-FITC细胞凋亡率。(5)流式细胞仪分析细胞周期。(6)RT-PCR检测Sall4 mRNA的表达水平。结果:(1)硼替佐米呈时间和剂量依赖性抑制TF-1细胞生长,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。24 h和48 h的药物半数抑制浓度(Halfmaximal inhibitory concentration of a substance,IC50)分别为52 nmol/L和27 nmol/L。(2)显微镜下观察细胞皱缩变小,细胞密度明显下降。(3)电镜下观察可见凋亡小体。(4)Annexin V-FITC检测显示随着硼替佐米作用浓度的增加,凋亡率增加,呈剂量依赖关系(P<0.05)。(5)流式细胞仪分析细胞周期,随着硼替佐米作用时间的增加,G2/M期细胞比例逐渐增高,而G0/G1和S期细胞比例则逐渐减少,呈时间依赖关系(P<0.05)。(6)RT-PCR结果示Sall4基因在TF-1细胞上高表达,并随着硼替佐米作用浓度和时间的增加,Sall4 mRNA与β-actin mRNA表达量的积分光密度比值(Integral optical density ratio,V/B)水平下降(P<0.05)。结论:硼替佐米能抑制TF-1细胞增殖,诱导其凋亡,呈时间-剂量依赖关系。Sall4基因在TF-1细胞株上高表达,并随着硼替佐米作用浓度和时间的增加表达水平下降,呈时间-剂量依赖关系。 展开更多
关键词 硼替佐米 tf-1细胞株 细胞凋亡 Sall4基因
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rhGM-CSF生物活性的测定方法及工作标准品的标定
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作者 贾茜 周兴军 +3 位作者 王彦芳 田雪虹 焦艳晴 贺秉坤 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2001年第3期165-168,共4页
目的:研究用TF-1细胞测定rhGM-CSF(重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子)生物学活性的方法并用WHO rhGM-CSF国际标准品进行工作标准品和对照品(生白能先灵产品)的联合标定。方法:采用 MTT染色法。结果:首... 目的:研究用TF-1细胞测定rhGM-CSF(重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子)生物学活性的方法并用WHO rhGM-CSF国际标准品进行工作标准品和对照品(生白能先灵产品)的联合标定。方法:采用 MTT染色法。结果:首次将(4,4)法引入rhGM-CSF生物活性的测定,使所标定的工作标准品生物效价为每瓶1.37×106 IU,所标定的对照品生物效价为每瓶1.79×106IU,效价的平均可信限率分别为 4. 904%和 4. 333%。结论:(4, 4)法可用于rhGM-CSF生物活性的测定,结果便于统计分析。所标定的工作标准品可作为rhGM-CSF生物活性测定的工作标准。 展开更多
关键词 RHGM-CSF 生物效价 tf-1 细胞 (4 4)法
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凋亡相关新基因 TFAR19 的 cDNA 克隆、表达和功能研究 被引量:26
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作者 刘红涛 王玉刚 +5 位作者 张颍妹 宋泉声 狄春晖 陈光慧 汤建 马大龙 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1998年第5期6-10,共5页
利用RDA技术从人白血病细胞TF-1中克隆成功一个与凋亡相关的新基因TFAR19。序列分析表明,TFAR19cDNA全长559bp,其中25—399bp编码125个氨基酸的蛋白质。mRNA斑点杂交分析表明TFAR19... 利用RDA技术从人白血病细胞TF-1中克隆成功一个与凋亡相关的新基因TFAR19。序列分析表明,TFAR19cDNA全长559bp,其中25—399bp编码125个氨基酸的蛋白质。mRNA斑点杂交分析表明TFAR19在50种组织中均有不同程度的表达。在大肠杆菌中表达并纯化了重组TFAR19蛋白质,制备了多克隆抗体,WesternBlot发现TFAR19蛋白在凋亡的TF-1细胞中高表达。瞬时转染TFAR19正义基因后,TF-1细胞去细胞因子后凋亡速度增加。研究表明它能抑制胃癌细胞株803细胞和Hela细胞的生长,促进它们的去血清所致的凋亡。 展开更多
关键词 tf-1细胞 凋亡 CDNA 免疫学
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TF-1细胞凋亡相关基因的研究 被引量:18
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作者 刘红涛 王玉刚 +4 位作者 张颖妹 宋泉声 敬保迁 袁勇 马大龙 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第1期38-43,共6页
利用近年来发展起来的代表差异分析(cDNArepresentationaldiferencesanalysis,cDNARDA)技术研究了在人红白血病细胞株TF1细胞撤除细胞因子后进入凋亡时诱导表达的基因.发现了... 利用近年来发展起来的代表差异分析(cDNArepresentationaldiferencesanalysis,cDNARDA)技术研究了在人红白血病细胞株TF1细胞撤除细胞因子后进入凋亡时诱导表达的基因.发现了6个新基因片段.其中有三个经与GenBanknr和dbEST查询均没有发现同源性,已经向GenBank进行登记,登记号分别为U83208,U83279,U83397.此外还发现一批已知基因的表达与凋亡相关,其中包括Hou和人硫氧还原蛋白等,提示它们在凋亡中可能起作用.这项工作为进一步研究凋亡相关基因打下了良好基础.通过RDA的研究结果,有可能发现人白血病细胞凋亡的特异标记蛋白或发挥作用的重要蛋白,以期为白血病治疗提供理论基础. 展开更多
关键词 tf-1细胞株 代表差异分析 细胞凋亡
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TF-1细胞增殖特性与信号蛋白JAK2/STAT3表达研究 被引量:1
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作者 谌登兵 张日 夏学鸣 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 2004年第1期18-21,共4页
目的 探索JAK/STAT途径活化与细胞增殖和凋亡之间的关系。方法 通过表达内源性GM CSF受体的TF 1细胞 ,观察细胞增殖与凋亡 ;建立免疫沉淀和Westernblot印迹方法 ,检测经GM CSF 10 0ng/ml瞬时诱导的TF 1细胞信号蛋白JAK2和STAT3酪氨酸... 目的 探索JAK/STAT途径活化与细胞增殖和凋亡之间的关系。方法 通过表达内源性GM CSF受体的TF 1细胞 ,观察细胞增殖与凋亡 ;建立免疫沉淀和Westernblot印迹方法 ,检测经GM CSF 10 0ng/ml瞬时诱导的TF 1细胞信号蛋白JAK2和STAT3酪氨酸磷酸化情况。结果 经过GM CSF刺激 ,细胞不但免于凋亡 ,TF 1细胞还呈现剂量与时间信赖性的增殖反应。当耗竭细胞因子 6~ 12h后 ,倒置显微镜下TF 1细胞呈现折光性改变 ,细胞开始凋亡 ,呈现凋亡特征性形态改变和出现DNA梯形条带 ,而加入 0 .1ng/ml的GM CSF ,TF 1细胞即开始进入增殖状态 ,提示GM CSF对细胞具有凋亡保护作用。经过 10 0ng/mlGM CSF的瞬时诱导 ,在分子量 130kd区域见到JAK2蛋白条带 ,显示GM CSF可诱导TF 1细胞磷酸化JAK2表达 ;而在分子量 90kd区域未见到STAT3蛋白条带 ,显示无磷酸化STAT3表达 ;而未经GM CSF诱导的TF 1细胞 ,既无磷酸化JAK2也无磷酸化STAT3表达。结论 GM CSF为TF 1细胞增殖诱导和凋亡保护所必需 ;GM CSF诱导的TF 展开更多
关键词 GM-CSF JAK2 STAT3 tf-1细胞系
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