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儿童感染流感嗜血杆菌的流行病学及耐药机制研究 被引量：22
1
作者 潘芬 刘昌颀 +2 位作者 王春 秦惠宏 张泓 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第24期5700-5703,共4页
目的探讨儿童流感嗜血杆菌耐药情况及对氨苄西林的耐药机制,为临床治疗提供参考依据。方法收集医院2012年-2013年呼吸道感染患儿分离到375株流感嗜血杆菌菌株,采用纸片扩散法和头孢硝噻吩纸片法分析其耐药性和β-内酰胺酶情况,聚合酶链... 目的探讨儿童流感嗜血杆菌耐药情况及对氨苄西林的耐药机制,为临床治疗提供参考依据。方法收集医院2012年-2013年呼吸道感染患儿分离到375株流感嗜血杆菌菌株,采用纸片扩散法和头孢硝噻吩纸片法分析其耐药性和β-内酰胺酶情况,聚合酶链反应(PCR)法检测耐氨苄西林菌株的β-内酰胺酶基因。结果流感嗜血杆菌对氨苄西林的耐药率为40.3%,对阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、头孢呋辛、头孢噻肟等抗菌药物敏感率较高,均>70.0%;375株流感嗜血杆菌菌株中,检出119株产β-内酰胺酶,产酶率为31.7%,且氨苄西林耐药株中均检出TEM-1型基因,未发现ROB-1型基因。结论流感嗜血杆菌耐药情况不容忽视,应加强对其耐药性监测及耐药机制研究,为控制其感染传播提供参考。 展开更多
关键词 流感嗜血杆菌 耐药性 β-内酰胺酶 tem-1基因
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肺炎克雷伯菌产ESBLs基因型分析 被引量：12
2
作者 陈淑贞 石蓉林 +2 位作者 姚芬 蔡应木 钱元恕 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2006年第4期236-239,共4页
目的分析我院临床分离的肺炎克雷伯菌产ESBLs基因型,为指导临床合理用药提供依据。方法用琼脂稀释法检测10种抗菌药物对已确定为产ESBLs肺炎克雷伯菌的MIC,分别用TEM、SHV、CTX-M、OXA通用引物进行PCR扩增、产物克隆测序分析。结果83株... 目的分析我院临床分离的肺炎克雷伯菌产ESBLs基因型,为指导临床合理用药提供依据。方法用琼脂稀释法检测10种抗菌药物对已确定为产ESBLs肺炎克雷伯菌的MIC,分别用TEM、SHV、CTX-M、OXA通用引物进行PCR扩增、产物克隆测序分析。结果83株产ESBLs肺炎克雷伯菌中,产TEM型75株,SHV型41株,CTX-M型25株,OXA型9株。其中,同时产3种酶有13株,占15．7%；同时产2种酶有59株,占71．1%；仅11株产单1种酶,占13．2%。而9株同时产TEM、SHV和CTX-M型,测序结果为CTX-M-3,TEM-1及多种SHV型(SHV-12、SHV-28)。药敏结果表明,同时产2或3种酶的菌株比产单1种酶的菌株耐药性更严重。结论所分离产ESBLs肺炎克雷伯菌主要为TEM、SHV、CTX-M、OXA型,且同时存在产2～3种酶,应引起临床高度重视。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 超广谱β内酰胺酶 tem-1 CTX-M-3 SHV
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流感嗜血杆菌氨苄西林耐药基因TEM-1、ROB-1的检测 被引量：7
3
作者 姜敏 胡翼云 +3 位作者 沈叙庄 高薇 俞桑洁 杨永弘 《中国抗感染化疗杂志》 2005年第2期83-85,共3页
目的　探讨我国北京,上海,广州3地2000—2003年流感嗜血杆菌氨苄西林的耐药机制。方法　选取2000—2003上述3地上呼吸道感染患儿鼻咽部分离培养的899株流感嗜血杆菌,采用E test法检测氨苄西林耐药情况。用头孢硝噻酚片进行β内酰胺酶检... 目的　探讨我国北京,上海,广州3地2000—2003年流感嗜血杆菌氨苄西林的耐药机制。方法　选取2000—2003上述3地上呼吸道感染患儿鼻咽部分离培养的899株流感嗜血杆菌,采用E test法检测氨苄西林耐药情况。用头孢硝噻酚片进行β内酰胺酶检测,PCR方法检测产酶菌株TEM -1、ROB -1耐药基因携带情况。结果　74株氨苄西林耐药菌株均产生内酰胺酶,PCR检测均为TEM- 1基因阳性,未发现ROB -1基因阳性菌株。结论　我们研究的儿童上呼吸道携带流感嗜血菌对氨苄西林耐药的机制主要是TEM- 1型β内酰胺酶的产生。 展开更多
关键词 流感嗜血杆菌 氨苄西林 耐药 β内酰胺酶 tem-1基因
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TEM-1β内酰胺酶介导的大肠埃希菌对哌拉西林-他唑巴坦和头孢哌酮耐药机制的研究 被引量：4
4
作者 孙景勇 王勇 倪语星 《中国感染与化疗杂志》 CAS 北大核心 2013年第3期167-172,共6页
目的探讨临床分离大肠埃希菌RJ904对阿莫西林-克拉维酸、哌拉西林-他唑巴坦等含β内酰胺酶抑制剂抗菌药物和头孢哌酮耐药,而对头孢西丁、头孢噻肟敏感的机制。方法通过三相水解试验了解大肠埃希菌RJ904所产酶的水解特性;以大肠埃希菌J53... 目的探讨临床分离大肠埃希菌RJ904对阿莫西林-克拉维酸、哌拉西林-他唑巴坦等含β内酰胺酶抑制剂抗菌药物和头孢哌酮耐药,而对头孢西丁、头孢噻肟敏感的机制。方法通过三相水解试验了解大肠埃希菌RJ904所产酶的水解特性;以大肠埃希菌J53Azr为受体菌,临床菌株RJ904为供体菌,通过接合试验了解该耐药特性是否由质粒介导;通过"鸟枪法"随机克隆试验将耐药质粒经BamHI和HindⅢ双酶切后的片段插入到克隆载体pACYC184中表达并测序,明确介导该耐药特性的基因;通过重叠延伸法定点突变及亚克隆了解启动子对耐药基因表达的影响。结果菌株RJ904中的酶可水解哌拉西林-他唑巴坦、头孢哌酮,但不水解头孢西丁、头孢噻肟,而且其耐药性可通过质粒接合转移。耐药质粒经BamHI和HindⅢ酶切后重组到载体pACYC184中的3.9 kb双酶切片段,含有大小861 bp的blaTEM-1B基因,其上游的启动子为Pa/Pb。该重组载体表达后对头孢哌酮、哌拉西林-他唑巴坦等含酶抑制剂抗菌药物耐药,而对头孢西丁、头孢噻肟敏感,重组载体中blaTEM-1B基因启动子经32位的T→C定点突变后,由强启动子Pa/Pb变为弱启动子P3,突变后的重组质粒转化入大肠埃希菌DH5α后所表达的耐药性与突变前相比MIC值均有较大下降。结论本试验首次证实在大肠埃希菌中Pa/Pb启动子调控TEM-1β内酰胺酶的高表达可使细菌对阿莫西林-克拉维酸、哌拉西林-他唑巴坦等含酶抑制剂抗菌药物和头孢哌酮耐药,而且这种耐药基因位于转座子和质粒上,可通过接合转移扩散。 展开更多
关键词 tem-1β内酰胺酶 酶抑制剂 启动子 耐药机制
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TEM-1型β-内酰胺酶及CarO蛋白介导的耐舒巴坦鲍曼不动杆菌临床株耐药机制研究 被引量：3
5
作者 李楠 张豪杰 +5 位作者 王悦 祁萌 郭文学 王哲 祁伟 李国琪 《天津医药》 CAS 北大核心 2018年第3期246-250,共5页
目的研究TEM-1型β-内酰胺酶及Car O蛋白介导的鲍曼不动杆菌临床株对舒巴坦的耐药机制。方法将24株非重复鲍曼不动杆菌临床株通过琼脂稀释法分为舒巴坦非敏感组(18株)和敏感组(6株),用纸片扩散法(K-B)行药敏试验,PCR扩增bla_(TEM-1)和ca... 目的研究TEM-1型β-内酰胺酶及Car O蛋白介导的鲍曼不动杆菌临床株对舒巴坦的耐药机制。方法将24株非重复鲍曼不动杆菌临床株通过琼脂稀释法分为舒巴坦非敏感组(18株)和敏感组(6株),用纸片扩散法(K-B)行药敏试验,PCR扩增bla_(TEM-1)和car O基因,选取4株bla_(TEM-1)阳性菌株(A3、A5、1327、C1),对其扩增产物测序,BLAST软件分析;应用实时荧光定量RT-PCR技术检测2组菌株bla_(TEM-1)和car O基因m RNA转录情况。结果敏感组临床株对美罗培南、亚胺培南、头孢哌酮、环丙沙星、庆大霉素、氨苄西林耐药率分别为1/6、2/6、3/6、1/6、5/6、5/6;非敏感组分别为6/18、10/18、18/18、18/18、18/18。敏感组未检出bla_(TEM-1),非敏感组中16株临床株扩增出bla_(TEM-1);24株临床菌株全部扩增出car O基因。测序显示4株临床株bla_(TEM-1)基因均未出现有义突变;A3、A5、1327启动序列为P4,C1为P3。BlaTEM-1基因阳性菌株m RNA相对表达量与其对舒巴坦MIC值呈正相关(rs=0.551,P=0.027);car O基因m RNA相对表达在敏感组和非敏感组中无差异。结论临床分离鲍曼不动杆菌受试菌株耐药严重,其对舒巴坦的耐药机制与TEM-1型β-内酰胺酶高表达有关,而bla_(TEM-1)基因启动子调控可能是TEM-1型β-内酰胺酶高表达的原因之一。 展开更多
关键词 鲍氏不动杆菌 β内酰胺酶类 微生物敏感性试验 carO基因 blatem-1基因 tem-1型β-内酰胺酶
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TEM-1型β内酰胺酶的原核表达纯化及活性验证 被引量：1
6
作者 李静 徐建余 +5 位作者 宁年智 刘传杰 黄洁 刘雪超 李涛 王慧 《生物技术通讯》 CAS 2017年第3期319-323,共5页
目的:产β-内酰胺酶是大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等对β内酰胺类抗生素耐药的主要机制之一,该酶能水解青霉素、头孢菌素、碳青酶烯类等多种抗生素,其中TEM型是发现最早且种类最多的β内酰胺酶。探讨TEM-1型β内酰胺酶原核表达载体的构建、... 目的:产β-内酰胺酶是大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等对β内酰胺类抗生素耐药的主要机制之一,该酶能水解青霉素、头孢菌素、碳青酶烯类等多种抗生素,其中TEM型是发现最早且种类最多的β内酰胺酶。探讨TEM-1型β内酰胺酶原核表达载体的构建、酶的纯化及活性验证。方法:利用PCR技术,以大肠杆菌全基因组为模板钓取TEM-1基因,构建p ET22b(+)-TEM-1表达质粒,经测序鉴定后,转入大肠杆菌Transetta(DE3),IPTG诱导表达、亲和纯化,并通过抗生素水解实验验证其酶活性。结果:构建了可溶性表达TEM-1的工程菌,通过亲和纯化最终获得纯度达90%以上的TEM-1型β内酰胺酶,该酶可水解氨苄西林。结论:获得了对氨苄西林具有水解活性的TEM-1型β内酰胺酶,并对其进行了酶动力学参数检测,验证其抗生素水解特性,有利于对临床抗生素的合理应用做出指导。 展开更多
关键词 tem-1 β内酰胺酶 表达 纯化 酶动力学
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实时荧光聚合酶链反应检测呼吸道感染鲍曼不动杆菌TEM-1基因
7
作者 张红河 董晓勤 +2 位作者 范建中 周田美 王贤军 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期466-467,共2页
目的建立一种快速、准确、特异、定时检测鲍曼不动杆菌TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因的方法。方法选择TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因作为靶序列,设计合成引物和探针;收集呼吸道感染患者痰标本培养的鲍曼不动杆菌279株,并对其进行检测分析。... 目的建立一种快速、准确、特异、定时检测鲍曼不动杆菌TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因的方法。方法选择TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因作为靶序列,设计合成引物和探针;收集呼吸道感染患者痰标本培养的鲍曼不动杆菌279株,并对其进行检测分析。结果采用荧光聚合酶链反应检测鳗曼不动杆菌TEM-1耐药基因灵敏度为102拷贝,279株鲍曼不动杆菌中检出47株携带TEM-1基因,检出率为16.8%。结论应用Taqman探针荧光聚合酶链反应能够快速、准确检测鲍曼不动杆菌TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 鲍曼不动杆菌 tem-1基因
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用DNA杂交技术检测产β-内酰胺酶的临床分离菌株的TEM-1基因
8
作者 康梅 潘培根 陈民钧 《华西医学》 CAS 1998年第1期102-104,共3页
为了探求院内感染革兰氏阴性杆菌产生超广谱β内酰胺酶的基因决定机制，我们采用ＤＮＡ斑点杂交技术对所选临床分离的产β内酰胺的大肠埃希氏菌、克雷伯氏菌等进行了其质粒介导的β内酰胺酶基因类型分析。对２０株菌质粒用ＴＥＭ... 为了探求院内感染革兰氏阴性杆菌产生超广谱β内酰胺酶的基因决定机制，我们采用ＤＮＡ斑点杂交技术对所选临床分离的产β内酰胺的大肠埃希氏菌、克雷伯氏菌等进行了其质粒介导的β内酰胺酶基因类型分析。对２０株菌质粒用ＴＥＭ１探针检测的结果如下：１１株大肠埃希氏菌全与ＴＥＭ１探针杂交；６株肺炎克雷伯氏菌有３株与ＴＥＭ１探针杂交；１株已证明含有ＳＨＶ２超广谱β内酰胺酶的日勾维肠杆菌未与ＴＥＭ１探针杂交；２株不动杆菌有１株（溶血不动杆菌）与ＴＥＭ１探针杂交。 展开更多
关键词 DNA杂交 β-内酰胺酶 革兰氏阴性杆菌 tem-1
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基于β-内酰胺酶构建大肠杆菌体内Aβ42聚集抑制剂筛选体系
9
作者 赵文平 贾龙刚 +1 位作者 路福平 刘夫锋 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第19期17-24,共8页
淀粉样β蛋白(Aβ)的错误折叠和聚集是导致阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)的主要原因,开发Aβ聚集抑制剂对于缓解和治疗AD至关重要。根据TEM1-β-内酰胺酶(TEM1-β-lactamase,βlac)的结构特征及Aβ42的聚集特性,利用分子生物... 淀粉样β蛋白(Aβ)的错误折叠和聚集是导致阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)的主要原因,开发Aβ聚集抑制剂对于缓解和治疗AD至关重要。根据TEM1-β-内酰胺酶(TEM1-β-lactamase,βlac)的结构特征及Aβ42的聚集特性,利用分子生物学方法将Aβ42插入到βlac 196-197氨基酸残基之间,构建了BL21-βlac-Aβ42重组菌株。利用已知Aβ42聚集抑制剂,分别通过斑点滴定实验、平板涂布实验和菌体浓度变化检测实验进行了验证。结果显示,添加已知Aβ42抑制剂后,BL21-βlac-Aβ42菌株在特定氨苄青霉素(ampicillin, Amp)浓度条件下生长状况得到改善,允许微生物细胞生长的最大细胞稀释倍数增大,证明该融合体系能应用于大肠杆菌体内筛选Aβ42聚集抑制剂。该研究实现了淀粉样蛋白聚集抑制剂在微生物体内的高通量筛选,为开发新型抗Aβ聚集药物奠定了基础。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 淀粉样β蛋白42 (Aβ42) tem1-β-内酰胺酶(βlac) 融合蛋白表达 聚集抑制剂 大肠杆菌体内筛选系统
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