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吕氏泰勒虫TlSP基因的克隆和原核表达 被引量：5
1
作者 何海宁 李有全 +4 位作者 刘志杰 杨吉飞 陈泽 罗建勋 殷宏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1139-1143,共5页
为克隆表达吕氏泰勒虫TlSP基因的功能区片段并对其表达蛋白进行免疫印迹分析,以吕氏泰勒虫cDNA表达文库为模板,PCR扩增出TlSP基因片段,克隆至pET-30a载体。将成功构建的重组质粒转化感受态大肠杆菌BL21trxB(DE3)pLysS,诱导表达产物用镍... 为克隆表达吕氏泰勒虫TlSP基因的功能区片段并对其表达蛋白进行免疫印迹分析,以吕氏泰勒虫cDNA表达文库为模板,PCR扩增出TlSP基因片段,克隆至pET-30a载体。将成功构建的重组质粒转化感受态大肠杆菌BL21trxB(DE3)pLysS,诱导表达产物用镍柱进行亲和层析纯化,并用Western-blot分析TlSP表达蛋白与尤氏泰勒虫、绵羊泰勒虫以及环形泰勒虫阳性血清是否产生交叉反应。结果表明,TlSP基因获得了可溶性表达蛋白,并且重组表达蛋白TlSP分别与上述3种泰勒虫阳性血清存在交叉反应。证实TlSP同源基因也存在于环形泰勒虫、尤氏泰勒虫和绵羊泰勒虫,这为今后深入研究TlSP蛋白在羊泰勒虫病的免疫学诊断和亚单位疫苗研究中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 吕氏泰勒虫 Tlsp基因 原核表达 纯化 免疫印迹
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吕氏泰勒虫TlSP无跨膜区重组蛋白的表达及反应原性分析 被引量：4
2
作者 韩元 许强 +10 位作者 杨学财 李有全 郭鹏飞 关贵全 刘军龙 刘爱红 刘光远 李禤 殷宏 罗建勋 蔡葵蒸 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1503-1509,共7页
提取吕氏泰勒虫裂殖子的总RNA,采用RT-PCR方法扩增其表面蛋白TlSP(Theileria luwenshuni surface protein)基因的cDNA片段,结合生物信息学方法,对TlSP蛋白抗原表位和跨膜区进行预测,设计表达引物,分别扩增得到TlSP全长及逐一去除跨膜区... 提取吕氏泰勒虫裂殖子的总RNA,采用RT-PCR方法扩增其表面蛋白TlSP(Theileria luwenshuni surface protein)基因的cDNA片段,结合生物信息学方法,对TlSP蛋白抗原表位和跨膜区进行预测,设计表达引物,分别扩增得到TlSP全长及逐一去除跨膜区的4个片段,并将其分别克隆至pET-30a原核表达载体,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)p Lys S感受态细胞进行诱导表达,并对融合蛋白的反应原性进行分析。结果表明,TlSP融合蛋白的N端具有较好的抗原性,而在C端存在3个跨膜区:185~207 aa、228~250 aa和255~277 aa;SDS-PAGE结果表明,只有去除全部跨膜区的重组载体可成功表达。Western-blot分析表明,TlSP融合蛋白能与吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫、绵羊泰勒虫及环形泰勒虫阳性血清发生反应,而与巴贝斯虫、羊无浆体阳性血清无交叉反应。本研究为今后TlSP候选亚单位疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 吕氏泰勒虫 Tlsp基因 跨膜区 原核表达 反应原性分析
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吕氏泰勒虫TlSP基因在真核细胞中的表达与定位 被引量：3
3
作者 何海宁 刘志杰 +9 位作者 杨吉飞 陈泽 关贵全 王雅 刘爱红 任巧云 罗建勋 殷宏 赵萍 李有全 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期919-923,共5页
为研究吕氏泰勒虫TlSP基因在真核细胞中的表达与亚细胞定位,构建了pEGFP-N1-TlSP重组表达质粒,经脂质体转染Vero细胞后,用Western-blot验证了该蛋白在Vero细胞的表达;用荧光显微镜和激光共聚焦显微成像技术确定了TlSP重组蛋白在真核细... 为研究吕氏泰勒虫TlSP基因在真核细胞中的表达与亚细胞定位,构建了pEGFP-N1-TlSP重组表达质粒,经脂质体转染Vero细胞后,用Western-blot验证了该蛋白在Vero细胞的表达;用荧光显微镜和激光共聚焦显微成像技术确定了TlSP重组蛋白在真核细胞中的分布及亚细胞定位。结果表明重组质粒pEGFP-N1-TlSP在Vero细胞中获得了表达,绿色荧光主要聚集于细胞浆,而在空载体pEGFP-N1转染组,绿色荧光弥散性分布于细胞核。吕氏泰勒虫TlSP融合基因在外源真核细胞Vero中成功进行了表达,表达蛋白主要定位于Vero细胞的细胞浆。 展开更多
关键词 吕氏泰勒虫 Tlsp基因 绿色荧光蛋白 激光共聚焦显微成像技术
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