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利用MGE-PCR技术研究锥虫亚属种间与亚种间的分子特性 被引量：3
1
作者 李凤军 郑嘉瑜 +1 位作者 贾万忠 伦照荣 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期277-282,共6页
目的分析锥虫亚属布氏锥虫、伊氏锥虫和马媾疫锥虫3个种以及布氏锥虫:指名亚种、冈比亚亚种、罗得西亚3个亚种间的遗传变异与进化关系。方法利用移动遗传因子(MGE)-PCR技术对26个锥虫虫株基因组进行扩增,同时利用邻位相连(NJ)法对扩增... 目的分析锥虫亚属布氏锥虫、伊氏锥虫和马媾疫锥虫3个种以及布氏锥虫:指名亚种、冈比亚亚种、罗得西亚3个亚种间的遗传变异与进化关系。方法利用移动遗传因子(MGE)-PCR技术对26个锥虫虫株基因组进行扩增,同时利用邻位相连(NJ)法对扩增产物进行聚类分析。结果锥虫亚属的种间及亚种间的遗传差异明显,遗传距离在0到100%间均有分布(平均遗传距离为41.2%);布氏锥虫种内遗传变异度最大,遗传相似系数只有41.15%,伊氏锥虫和布氏锥虫的同源性最高,相似系数为62.94%;布氏锥虫指名亚种和罗得西亚亚种明显高于冈比亚亚种的遗传变异程度。结论锥虫亚属的种及亚种间的遗传变异程度较高;中国与南美洲的伊氏锥虫及中国与南美的马媾疫锥虫均应为同一起源。 展开更多
关键词 锥虫亚属 伊氏锥虫 马媾疫锥虫 布氏锥虫指名亚种 布氏锥虫罗得西亚亚种 布氏锥虫冈比亚亚种 移动遗传因子-PCR 聚类分析
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伊氏锥虫和媾疫锥虫蛋白组分的电泳分析 被引量：2
2
作者 张浩吉 甄英凯 +4 位作者 欧永春 王芳生 孙恩贵 刘俊华 张凤琴 《兽医大学学报》 CSCD 1993年第1期21-23,共3页
应用SDS—PAGE和IEF电泳对伊氏锥虫和媾疫锥虫的蛋白组分进行了分析.在SDS—PAGE中,伊氏锥虫有21条带.媾疫锥虫有19条带,两种虫体的蛋白质区带在分子量40000～90000之间存在差异,尤其表现在表面糖蛋白上,伊氏锥虫为43000,媾疫锥虫为600... 应用SDS—PAGE和IEF电泳对伊氏锥虫和媾疫锥虫的蛋白组分进行了分析.在SDS—PAGE中,伊氏锥虫有21条带.媾疫锥虫有19条带,两种虫体的蛋白质区带在分子量40000～90000之间存在差异,尤其表现在表面糖蛋白上,伊氏锥虫为43000,媾疫锥虫为60000.在IEF电泳中,伊氏锥虫出现26条带,媾疫锥虫出现33条带,两种虫体的蛋白质区带在等电点4.8～5.6之间相同,而在5.6～7.0之间存在差异.本实验还对马媾疫锥虫的蛋白质进行了双相电泳分析,显示出86个多肽斑点. 展开更多
关键词 伊氏锥虫 媾疫锥虫 蛋白 电泳
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马媾疫锥虫PCR检测方法的研究 被引量：2
3
作者 郑小龙 王群 +5 位作者 朱来华 邓明俊 肖西志 梁成珠 姜帆 于业锋 《中国动物检疫》 CAS 2013年第8期75-77,共3页
根据GenBank中公布的马媾疫锥虫大环kDNA基因序列,设计合成一对特异性引物,通过对PCR扩增条件的优化,建立了检测马媾疫锥虫的PCR方法。用建立的PCR方法检测马媾疫锥虫、马伊氏锥虫和马焦虫,仅马媾疫锥虫扩增出与实验设计相符的395bp的条... 根据GenBank中公布的马媾疫锥虫大环kDNA基因序列,设计合成一对特异性引物,通过对PCR扩增条件的优化,建立了检测马媾疫锥虫的PCR方法。用建立的PCR方法检测马媾疫锥虫、马伊氏锥虫和马焦虫,仅马媾疫锥虫扩增出与实验设计相符的395bp的条带,其余病原体检测均为阴性。灵敏性试验表明:建立的PCR方法最低能检出0.2 pg/μL的马媾疫锥虫DNA。研究建立的马媾疫锥虫PCR方法,具有快速、敏感、特异等优点,可用于临床上马媾疫锥虫感染的检测。 展开更多
关键词 马媾疫锥虫 kDNA PCR
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锥虫长期超低温保藏方法的研究 被引量：1
4
作者 白启 刘光远 周俊英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第5期457-462,共6页
作者观测了不同保护剂、稀释液、pH值、降温方法、复苏温度、冻融次数、液相气相交替以及解冻后在普通冰瓶中存放时间对伊氏锥虫浙江虫株的感染性及致病力的影响。在此试验基础上,又对伊氏锥虫的6个不同虫株、媾疫锥虫、刚果锥虫、布氏... 作者观测了不同保护剂、稀释液、pH值、降温方法、复苏温度、冻融次数、液相气相交替以及解冻后在普通冰瓶中存放时间对伊氏锥虫浙江虫株的感染性及致病力的影响。在此试验基础上,又对伊氏锥虫的6个不同虫株、媾疫锥虫、刚果锥虫、布氏锥虫等4个种的9个虫株,进行了超低温保藏试验和长期保藏效果观察。已测定的有效保藏期伊氏锥虫达574～3200天、媾疫锥虫达2866天、刚果锥虫达763天、布氏锥虫达783天。通过反复试验,提出了锥虫的常规保藏方法。 展开更多
关键词 伊氏锥虫 保藏 低温
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泰氏锥虫抗原制备及实验室诊断研究
5
作者 王祥生 《兽医大学学报》 CSCD 1991年第4期356-359,共4页
应用体外培养的泰氏锥虫制备可溶性抗原Ⅰ、抗原Ⅱ和代谢抗原.经测定,其蛋白含量每毫升分别为6.5mg、7.4mg和7.1mg.薄层等电聚焦电泳测定结果表明,抗原Ⅰ出现22条区带,抗原Ⅱ21条区带,代谢抗原28条区带,对照的伊氏锥虫琼脂免疫扩散抗原1... 应用体外培养的泰氏锥虫制备可溶性抗原Ⅰ、抗原Ⅱ和代谢抗原.经测定,其蛋白含量每毫升分别为6.5mg、7.4mg和7.1mg.薄层等电聚焦电泳测定结果表明,抗原Ⅰ出现22条区带,抗原Ⅱ21条区带,代谢抗原28条区带,对照的伊氏锥虫琼脂免疫扩散抗原14条区带.经分析,泰氏锥虫抗原和伊氏锥虫抗原有4条区带在同一迁移率上.琼脂免疫扩散反应中,3种泰氏锥虫抗原均与相应免疫兔血清发生沉淀反应,抗原Ⅰ出现1条致密沉淀线,抗原Ⅱ和代谢抗原出现2～3条沉淀线,抗原效价为1:4～16.免疫电泳显示了类似的结果,抗原Ⅰ与免疫兔血清出现1条弧形沉淀线,抗原Ⅱ和代谢抗原与免疫兔血清出现了3条弧形沉淀线.间接血凝试验结果表明,泰氏锥虫自然感染牛血清效价为1:20～40,免疫兔血清为1:1280～5120.所制泰氏锥虫抗原对伊氏锥虫和媾疫锥虫血清也能很好地发生交叉反应,3份伊氏锥虫病马血清和3份伊氏锥虫人工感染兔血清血凝效价分别为1:10～40和1:8～1024;5份媾疫马血清有4份血凝效价为1:20～320.4份环形泰勒虫病牛血清均为阴性. 展开更多
关键词 泰氏锥虫 抗原 提取 诊断
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马媾疫锥虫SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：8
6
作者 王群 郑小龙 +5 位作者 朱来华 肖西志 邓明俊 岳志芹 孙涛 赵玉然 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期724-727,共4页
为建立一种特异、快速的媾疫锥虫检测方法,本研究通过PCR方法从马媾疫锥虫动基体基因组中扩增得到395 bp的特异的保守序列,将其克隆到pMD-18T载体中构建重组质粒标准品,以10倍倍比稀释的质粒标准品为模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR... 为建立一种特异、快速的媾疫锥虫检测方法,本研究通过PCR方法从马媾疫锥虫动基体基因组中扩增得到395 bp的特异的保守序列,将其克隆到pMD-18T载体中构建重组质粒标准品,以10倍倍比稀释的质粒标准品为模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立马媾疫锥虫荧光定量PCR的检测方法。结果表明:该方法的检测灵敏度可达到1拷贝/μL,并且与马属动物其他传染病无交叉反应。其组间及组内变异系数分别小于3.183%和3.842%。该方法的建立为快速及特异性检测马媾疫锥虫提供了有效的方法。 展开更多
关键词 马媾疫锥虫 SYBR Green Ⅰ 荧光定量
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伊氏锥虫、马媾疫锥虫、布氏锥虫、刚果锥虫的18S rDNA部分序列测定与系统发育关系 被引量：6
7
作者 周勇志 周金林 +3 位作者 沈杰 龚海燕 向飞宇 黄兵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期178-180,共3页
对伊氏锥虫(Trypanosomaevansi):新疆株(XJCA)、湖北株(HBM)、云南株(YNB)、广东株(GDB2);马媾疫锥虫(Trypanosomaequiperdum)、布氏锥虫(Trypanosomabrucei)、刚果锥虫(Trypanosomacongolense)提取基因组DNA,根据已报道的伊氏锥虫株18S... 对伊氏锥虫(Trypanosomaevansi):新疆株(XJCA)、湖北株(HBM)、云南株(YNB)、广东株(GDB2);马媾疫锥虫(Trypanosomaequiperdum)、布氏锥虫(Trypanosomabrucei)、刚果锥虫(Trypanosomacongolense)提取基因组DNA,根据已报道的伊氏锥虫株18SrDNA基因序列设计合成引物,用PCR扩增了锥虫虫株基因组DNA,伊氏锥虫新疆株、湖北株、云南株、广东株、布氏锥虫、刚果锥虫均为373bp的片段;马媾疫锥虫为372bp的片段,PCR产物经电泳鉴定后用试剂盒回收纯化,纯化后PCR产物经连接、转化后测序,将测得的序列用DNAMAN软件分析并与国外已发表的相应序列进行了同源性比较,并绘制了系统发育进化树。结果与国外AJ009153、AJ223564、D89527株同源性达到99%～100%,与另外11株同源性75%。本研究为锥虫分子流行病学研究及分类研究打下基础。 展开更多
关键词 伊氏锥虫 马媾疫锥虫 布氏锥虫 刚果锥虫 18S RDNA PCR
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伊犁地区马媾疫的诊断与治疗效果的观察
8
作者 王彦峰 马玉辉 +1 位作者 赵红琼 刘璐 《草食家畜》 2024年第2期42-50,共9页
【目的】为研究新疆伊犁地区马媾疫的发病情况和药物治疗效果,【方法】对疑似有马媾疫的马匹,通过ELISA方法检测马匹血清中马媾疫抗体,采用PCR方法检测马匹生殖道黏膜拭子中马媾疫锥虫,伊氏锥虫PCR检测排除假阳性,对确诊马媾疫的马匹使... 【目的】为研究新疆伊犁地区马媾疫的发病情况和药物治疗效果,【方法】对疑似有马媾疫的马匹,通过ELISA方法检测马匹血清中马媾疫抗体,采用PCR方法检测马匹生殖道黏膜拭子中马媾疫锥虫,伊氏锥虫PCR检测排除假阳性,对确诊马媾疫的马匹使用抗锥虫药物治疗并监测治疗效果。【结果】21匹临床表现疑似马媾疫的马匹,ELISA抗体检测结果显示阳性率为19.05%(4/21);用PCR检测出3匹马呈阳性,同时该3匹马均为抗体检测呈阳性马匹,PCR与ELISA检测阳性符合率75%;抗体阳性而PCR阴性马匹使用伊氏锥虫PCR检测呈阴性,结合流行病学分析该马匹也为马媾疫。4匹阳性马经抗锥虫药物治疗后,2匹马痊愈,1匹联合抗菌药物巩固治疗后痊愈,1匹死亡。【结论】马媾疫ELISA抗体检测联合PCR分子检测可提高马媾疫的检出率,诊断时需排除伊氏锥虫感染。早期发现马媾疫通过药物治疗后易痊愈,疾病进展至后期难以治愈成功。本研究为新疆伊犁地区马媾疫的诊断和治疗提供科学依据。 展开更多
关键词 马媾疫 马媾疫锥虫 血清学检测 分子生物学诊断
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应用质粒PTK探针鉴定锥虫的初步研究 被引量：3
9
作者 郑韧坚 王云飞 +2 位作者 沈杰 王爱华 周勇志 《中国兽医寄生虫病》 1993年第1期1-4,共4页
用^(32)P标记质粒探针PTK_1、PTK_(1.1)和PTK_(1·2),对12株中国伊氏锥虫的斑点杂交试验显示,3个探针均能与8株具有正常动基体的伊氏锥虫杂交,而不与其余4株异常动基体伊氏锥虫杂交,对正常动基体株的敏感度为10~2虫体。探针PTK_1亦... 用^(32)P标记质粒探针PTK_1、PTK_(1.1)和PTK_(1·2),对12株中国伊氏锥虫的斑点杂交试验显示,3个探针均能与8株具有正常动基体的伊氏锥虫杂交,而不与其余4株异常动基体伊氏锥虫杂交,对正常动基体株的敏感度为10~2虫体。探针PTK_1亦能与马媾疫锥虫杂交,敏感度为10~2个虫体。但PTK_1与布氏锥虫仅发生微弱的杂交反应,敏感度为10~5个虫体。试验表明伊氏锥虫株之间的kDNA微环是同源的,伊氏锥虫与马媾疫锥虫和布氏锥虫的kDNA微环存在着共同序列。 展开更多
关键词 质粒探针 鉴定 伊氏锥虫 马媾疫锥虫 布氏锥虫 斑点杂交法
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外源性双链DNA诱导小鼠狼疮样肾损害的病理学特征
10
作者 夏育民 江珊 +1 位作者 杨红霞 熊腊元 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期741-744,I0001,共5页
目的观察马疫锥虫双链DNA（dsDNA）诱导的小鼠狼疮样肾脏损害的病理学特征。方法将分离纯化的马疫锥虫动基体DNA（kDNA）与不完全弗氏佐剂乳化混合，以皮下途径对健康BALB／c小鼠进行免疫。8周后，检测相关生化与免疫学指标并观察其肾... 目的观察马疫锥虫双链DNA（dsDNA）诱导的小鼠狼疮样肾脏损害的病理学特征。方法将分离纯化的马疫锥虫动基体DNA（kDNA）与不完全弗氏佐剂乳化混合，以皮下途径对健康BALB／c小鼠进行免疫。8周后，检测相关生化与免疫学指标并观察其肾脏病理学表现；同时与BXSB小鼠和抗dsDNA抗体阳性狼疮肾炎（LN）患者进行比较。结果经马疫锥虫kDNA免疫后小鼠的免疫学指标符合LN的特征。肾脏损害以肾病综合征为主要表现；与BXSB小鼠和LN患者相比较，其肾脏病理改变有一定相似性，但以Ⅱ型（系膜细胞增殖）与Ⅳ型（弥漫性增殖）等类型为主。结论马疫锥虫dsDNA诱导的小鼠肾脏损害与抗dsDNA抗体阳性的LN损害相似，可以作为研究该类型LN的有效工具。 展开更多
关键词 狼疮肾炎 病理学 马疫锥虫 抗体 抗核
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