目的筛选慢性乙型肝炎(chron ic hepatitis B,CHB)患者与无症状乙型肝炎病毒携带者(asymptom atic HBVcarriers,ASCs)表达差异的基因。方法分离CHB及ASCs的外周血单个核细胞(peripheral b lood mononuc lear cells,PBMC)并提取RNA,SMAR...目的筛选慢性乙型肝炎(chron ic hepatitis B,CHB)患者与无症状乙型肝炎病毒携带者(asymptom atic HBVcarriers,ASCs)表达差异的基因。方法分离CHB及ASCs的外周血单个核细胞(peripheral b lood mononuc lear cells,PBMC)并提取RNA,SMART技术合成cDNA,采用抑制消减杂交(suppression subtractive hybrid ization,SSH)技术构建差异表达基因cDNA文库,进一步采用dot b lot筛选,得到差异表达的基因。结果经过筛选共获得了22个阳性克隆,通过序列分析,发现它们代表22个基因,在CHB表达增高的基因多是和炎症相关,在ASCs表达增高的基因中,多为新基因。结论成功构建了CHB与ASCs的消减文库并初步分析这些差异表达基因的意义,对于阐明CHB的发病机制及其治疗都有重要意义。展开更多
文摘目的筛选慢性乙型肝炎(chron ic hepatitis B,CHB)患者与无症状乙型肝炎病毒携带者(asymptom atic HBVcarriers,ASCs)表达差异的基因。方法分离CHB及ASCs的外周血单个核细胞(peripheral b lood mononuc lear cells,PBMC)并提取RNA,SMART技术合成cDNA,采用抑制消减杂交(suppression subtractive hybrid ization,SSH)技术构建差异表达基因cDNA文库,进一步采用dot b lot筛选,得到差异表达的基因。结果经过筛选共获得了22个阳性克隆,通过序列分析,发现它们代表22个基因,在CHB表达增高的基因多是和炎症相关,在ASCs表达增高的基因中,多为新基因。结论成功构建了CHB与ASCs的消减文库并初步分析这些差异表达基因的意义,对于阐明CHB的发病机制及其治疗都有重要意义。
文摘以经产荷斯坦奶牛外周血白细胞为材料,分离Poly(A)+ RNA,反转录合成单链及双链cDNA,经酶切成平均大小为400～600 bp的片段,将患乳房炎奶牛cDNA分成2组,分别与2种不同的接头连接,再与健康奶牛cDNA进行2次消减杂交和2次抑制性PCR扩增,将第2次PCR产物与pGEM-T载体连接,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞进行文库扩增,构建了具有高消减效率的奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库.文库扩增后得到610个白色阳性克隆,随机挑选克隆进行PCR鉴定,插入片段主要分布在250～750 bp 之间.文库的成功构建为进一步筛选、克隆与奶牛乳房炎抗性相关的基因奠定了基础,对研究奶牛乳房炎抗性的分子机制以及乳房炎的综合防制具有重要意义.
