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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因的克隆化研究 被引量：43
1
作者 刘妍 陆荫英 +3 位作者 成军 王建军 李莉 张玲霞 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期40-43,共4页
应用抑制性消减杂交技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白 5A(HCVNS5A)反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,克隆HCVNS5A蛋白反式激活相关基因。以HCVNS5A表达质粒pcDNA3 1(- ) NS5A转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1(- )为对照 ,制备转染... 应用抑制性消减杂交技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白 5A(HCVNS5A)反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,克隆HCVNS5A蛋白反式激活相关基因。以HCVNS5A表达质粒pcDNA3 1(- ) NS5A转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1(- )为对照 ,制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,经RsaI酶切后 ,将实验组cDNA分成两组 ,分别与两种不同的接头衔接 ,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR ,将产物与T/A载体连接 ,构建cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。文库扩增后得到 12 1个阳性克隆 ,经菌落PCR分析 ,得到 115个 2 0 0～10 0 0bp的插入片段 ,对其中的 90个片段测序 ,并进行同源性分析 ,显示 31种已知基因编码蛋白和 15种未知功能基因序列 ,包括一些与细胞周期、细胞凋亡、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因 ,可能是NS5A反式激活靶基因。结果提示 ,成功构建了HCVNS5A反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,该文库的建立为进一步阐明HCVNS5A反式调节的靶基因及致肝细胞癌发生的分子生物学机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白NS5A 反式激活 基因 克隆化
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抑制性扣除杂交技术(SSH)及其在基因克隆上的研究进展 被引量：21
2
作者 顾克余 翟虎渠 《生物技术通报》 CAS CSCD 1999年第2期13-16,共4页
抑制性扣除杂交技术是一种基因克隆的新方法，它对研究细胞生殖、发育、分化、癌变、衰老及程序化死亡等生命过程有关基因的差异表达以及相关基因的分子克隆提供了有力的工具，本文简要介绍抑制性扣除杂交技术的主要原理，基本过程、优... 抑制性扣除杂交技术是一种基因克隆的新方法，它对研究细胞生殖、发育、分化、癌变、衰老及程序化死亡等生命过程有关基因的差异表达以及相关基因的分子克隆提供了有力的工具，本文简要介绍抑制性扣除杂交技术的主要原理，基本过程、优越性。 展开更多
关键词 抑制性扣除杂交 基因克隆 应用
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小麦抗白粉病侵染初期的表达序列标签分析 被引量：21
3
作者 骆蒙 孔秀英 +2 位作者 霍纳新 周荣华 贾继增 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第6期525-530,共6页
以抗白粉病品系“百农 32 17×Mardler”　BC5F4为材料 ,构建了一个白粉病菌接种初期的抑制消减杂交cDNA文库 ,测序获得 76 0条ESTs。与GenBank序列进行BLASTx分析 ,获功能已知ESTs 2 71条。通过分析抗病相关基因 ,推测G蛋白介导的... 以抗白粉病品系“百农 32 17×Mardler”　BC5F4为材料 ,构建了一个白粉病菌接种初期的抑制消减杂交cDNA文库 ,测序获得 76 0条ESTs。与GenBank序列进行BLASTx分析 ,获功能已知ESTs 2 71条。通过分析抗病相关基因 ,推测G蛋白介导的信号传导途径、SA信号传递系统、MAP相关信号传递系统等参与了小麦抗白粉病过程。SAR基因在抗病相关ESTs中的种类与数量最多。数据显示苯丙烷代谢途径、细胞壁结构修饰作用、细胞保卫机制参与了抗病过程。未知功能ESTs与GenBank序列进行BLASTn分析 ,其中许多与病原菌、非病原菌诱导cDNA文库来源的ESTs同源 ;新ESTs占全部ESTs的 16 6 %。 展开更多
关键词 小麦 抗白粉病 侵染初期 表达序列标签 消减抑制杂交 抗病相关EST
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中华绒螯蟹卵巢差减cDNA文库的构建 被引量：17
4
作者 马长艳 周开亚 +3 位作者 郭豫杰 王义权 赵乃刚 汪朝晖 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期53-56,共4页
应用抑制性差减杂交技术构建中华绒螯蟹卵巢两个发育时期的差减cDNA文库。正向差减杂交以Ⅲ期卵巢为试验方、Ⅱ期卵巢为驱动方 ,反向差减杂交以Ⅱ期卵巢为试验方、Ⅲ期卵巢为驱动方 ;将所获差减cDNA片段克隆入质粒表达载体 ,转化大肠杆... 应用抑制性差减杂交技术构建中华绒螯蟹卵巢两个发育时期的差减cDNA文库。正向差减杂交以Ⅲ期卵巢为试验方、Ⅱ期卵巢为驱动方 ,反向差减杂交以Ⅱ期卵巢为试验方、Ⅲ期卵巢为驱动方 ;将所获差减cDNA片段克隆入质粒表达载体 ,转化大肠杆菌JM 10 9。最后获得的正、反向差减文库分别含 86 3、 36 0个重组子。PCR扩增鉴定正、反向差减cDNA文库的插入片段平均大小分别为 36 0和 16 0bp 。 展开更多
关键词 中华绒螯蟹 卵巢 差减CDNA文库 构建
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应用SSH技术研究NaHCO_3胁迫下柽柳基因的表达 被引量：22
5
作者 杨传平 王玉成 +1 位作者 刘桂丰 姜静 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第9期926-933,共8页
以NaHCO3 胁迫紫杆柽柳 (Tamarixandrossowii)cDNA为试验方 (tester) ,正常生长紫杆柽柳cDNA为驱动方(driver) ,应用SSH技术研究胁迫下柽柳基因的表达。经Northern杂交检测 ,共获得 36个盐胁迫应答基因。Blastx分析表明 ,它们编码的蛋... 以NaHCO3 胁迫紫杆柽柳 (Tamarixandrossowii)cDNA为试验方 (tester) ,正常生长紫杆柽柳cDNA为驱动方(driver) ,应用SSH技术研究胁迫下柽柳基因的表达。经Northern杂交检测 ,共获得 36个盐胁迫应答基因。Blastx分析表明 ,它们编码的蛋白与下列蛋白同源 :抗氧化酶CAT和PRDX ;海藻糖磷酸酶 (trehalosephosphatase) ,该酶与海藻糖合成相关 ;多种调控蛋白 ,例如bZIP转录因子、MADS box蛋白、富含甘氨酸RNA结合蛋白 (glycine richRNA bindingproteins)、CCCH型锌指蛋白、F box蛋白等等 ;早期光诱导蛋白 (earlylight inducedprotein) ,该蛋白可以保护和 /或修复由胁迫引起的植物光合元件 (photosyntheticapparatus)损伤 ;半胱氨酸蛋白酶 (cysteineproteinase)和VPE(vacuolarprocessingenzyme) ,它们在植物细胞的死亡过程中起作用 ;以及脂质转移蛋白前体 (lipidtransferproteinprecursor)、聚合泛素 (polyubiquitin)、查尔酮合成酶、谷胱甘肽转移酶、NADP IDH、盐诱导SI2蛋白、OEE1等蛋白。在获得的 36个基因中 ,3个基因编码的蛋白分别与 3个推定 (putative)的蛋白即HAK2 (K+ transporter)、钙结合蛋白和RNA结合蛋白具有同源性 ;同时 ,发现 6个盐胁迫应答的新序列。 展开更多
关键词 紫杆柽柳 抑制性消减杂交 NAHCO3胁迫
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截短型HBsAg中蛋白反式激活基因的克隆 被引量：26
6
作者 刘妍 成军 +7 位作者 张跃新 段惠娟 牟劲松 韩萍 李克 李莉 张玲霞 陈菊梅 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期218-221,共4页
目的　应用抑制性消减杂交技术构建乙型肝炎病毒 (HBV)截短型中蛋白 (MHBst)反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,克隆HBV截短型中蛋白反式激活相关基因。方法　以HBV截短型中蛋白表达质粒 pcDNA3.1( ) Mt16 7转染HepG2细胞 ,以空载体... 目的　应用抑制性消减杂交技术构建乙型肝炎病毒 (HBV)截短型中蛋白 (MHBst)反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,克隆HBV截短型中蛋白反式激活相关基因。方法　以HBV截短型中蛋白表达质粒 pcDNA3.1( ) Mt16 7转染HepG2细胞 ,以空载体 pcDNA3.1( )为对照 ;制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,经RsaI酶切后 ,将实验组cDNA分成两组 ,分别与两种不同的接头衔接 ,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应 (PCR) ,将产物与T/A载体连接 ,构建cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果　成功构建人HBV截短型中蛋白反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后得到 94个白色克隆 ,进行菌落PCR分析 ,均得到 2 0 0～ 80 0bp插入片段。挑取 5 0个插入片段测序 ,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列 ,结果共获得 2 3种编码基因 ,包括 19种已知基因和 4种未知基因。结论　筛选到的cDNA全长序列 ,包括一些与细胞生长调节、免疫应答及肿瘤发生密切相关的蛋白编码基因 。 展开更多
关键词 蛋白反式激活 乙型肝炎 表面抗原 基因克隆
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干旱胁迫下刚毛柽柳消减文库的构建及分析 被引量：15
7
作者 刘桂丰 侯英杰 +1 位作者 王玉成 褚延广 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期69-73,共5页
以干旱胁迫下的刚毛柽柳根部组织cDNA为tester,正常生长的刚毛柽柳根部组织cDNA为driver,利用抑制性消减杂交技术 (SSH)构建了干旱胁迫下刚毛柽柳根部组织的消减文库。文库克隆的重组率为 95 % ,插入片段大部分集中在 2 5 0～ 60 0bp之... 以干旱胁迫下的刚毛柽柳根部组织cDNA为tester,正常生长的刚毛柽柳根部组织cDNA为driver,利用抑制性消减杂交技术 (SSH)构建了干旱胁迫下刚毛柽柳根部组织的消减文库。文库克隆的重组率为 95 % ,插入片段大部分集中在 2 5 0～ 60 0bp之间。通过对文库阳性克隆的随机测序 ,获得了如Mn SOD、myb相关蛋白、锌指蛋白等 1 7种与干旱胁迫相关的基因 ,它们涉及了植物的渗透调节、信号传递、转录调控、活性氧清除等方面。所得EST序列已被GenBank收录。 展开更多
关键词 干旱胁迫 刚毛柽柳 消减文库 抑制性消减杂交技术 表达序列标签 抗旱性 抗旱基因
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抑制性消减杂交构建奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库 被引量：20
8
作者 曹随忠 李宏滨 +2 位作者 王爱华 赵兴绪 杜立新 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期526-530,共5页
以经产荷斯坦奶牛外周血白细胞为材料,分离Poly(A)+ RNA,反转录合成单链及双链cDNA,经酶切成平均大小为400～600 bp的片段,将患乳房炎奶牛cDNA分成2组,分别与2种不同的接头连接,再与健康奶牛cDNA进行2次消减杂交和2次抑制性PCR扩增,将第... 以经产荷斯坦奶牛外周血白细胞为材料,分离Poly(A)+ RNA,反转录合成单链及双链cDNA,经酶切成平均大小为400～600 bp的片段,将患乳房炎奶牛cDNA分成2组,分别与2种不同的接头连接,再与健康奶牛cDNA进行2次消减杂交和2次抑制性PCR扩增,将第2次PCR产物与pGEM-T载体连接,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞进行文库扩增,构建了具有高消减效率的奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库.文库扩增后得到610个白色阳性克隆,随机挑选克隆进行PCR鉴定,插入片段主要分布在250～750 bp 之间.文库的成功构建为进一步筛选、克隆与奶牛乳房炎抗性相关的基因奠定了基础,对研究奶牛乳房炎抗性的分子机制以及乳房炎的综合防制具有重要意义. 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 CDNA文库 抑制性消减杂交 抗性 相关 构建 pGEM-T载体 荷斯坦奶牛 PCR扩增 PCR产物 感受态细胞 TOP10 PCR鉴定 接头连接 大肠杆菌 阳性克隆 综合防制 分子机制 白细胞 外周血 RNA 反转录 600 610 片段 酶切
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YS型小麦温敏雄性不育系A3017育性相关基因的SSH分析 被引量：15
9
作者 宋国琦 胡银岗 +2 位作者 林凡云 董普辉 何蓓如 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期1301-1308,共8页
以人工气候箱控温条件下YS型小麦温敏不育系A3017的不育幼穗和可育幼穗为材料,分别构建了不育和可育条件下基因特异表达的抑制消减杂交cDNA文库.在两个库中分别随机挑选100个阳性克隆进行测序,经BLAST序列比对分析,共获功能已知的EST 78... 以人工气候箱控温条件下YS型小麦温敏不育系A3017的不育幼穗和可育幼穗为材料,分别构建了不育和可育条件下基因特异表达的抑制消减杂交cDNA文库.在两个库中分别随机挑选100个阳性克隆进行测序,经BLAST序列比对分析,共获功能已知的EST 78条.比较发现,不育条件下与细胞质相关的基因表达数量(63.4%)远高于可育条件下的基因数量(35.1%),参与蛋白质合成、蛋白质修饰/加工/储藏、转运和信号传递过程基因的比例也均高于可育条件下的,而参与能量代谢过程基因的比例则明显偏低.分析认为,在不育和可育条件下的基因表达差异可能是导致温敏雄性不育系育性变化的关键,这为进一步从分子基础上揭示YS型小麦温敏雄性不育系育性转换机制奠定了基础. 展开更多
关键词 小麦 温敏雄性不育系 抑制消减杂交 育性相关基因
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人参植物与皂苷生物合成相关的差减cDNA文库构建及基因差异表达分析 被引量：12
10
作者 罗志勇 刘水平 +4 位作者 陆秋恒 陈湘晖 文斌 罗建清 胡维新 《生命科学研究》 CAS CSCD 2003年第4期324-328,共5页
应用抑制差减杂交技术,分别以源于4年和1年生人参根组织cDNA群体作为检测子(tester)与驱赶子(driver),成功构建了与人参植物皂苷生物合成相关的差减cDNA文库,并对从中筛选的阳性cDNA克隆进行DNA测序及其序列分析、PCR及Northern印迹杂... 应用抑制差减杂交技术,分别以源于4年和1年生人参根组织cDNA群体作为检测子(tester)与驱赶子(driver),成功构建了与人参植物皂苷生物合成相关的差减cDNA文库,并对从中筛选的阳性cDNA克隆进行DNA测序及其序列分析、PCR及Northern印迹杂交鉴定.结果显示,获得的13个克隆为新基因序列.其中6个差减克隆系人参植物根生长发育阶段差异表达基因.目前,6个差异表达新基因的结构与功能仍在进一步研究中. 展开更多
关键词 人参植物 皂苷 生物合成 差减CDNA文库 基因差异表达 五加科 人参属
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毛乳头细胞凝集性生长差异表达基因的筛选及分析 被引量：19
11
作者 宋志强 郝飞 +4 位作者 杨希川 钟白玉 杨卫兵 麦跃 叶庆佾 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期513-515,共3页
目的筛选和分析毛乳头细胞凝集性生长状态下差异表达基因。方法分别提取凝集性生长和非凝集性生长状态下毛乳头细胞中的总RNA,应用SMARTcDNA合成技术和抑制性消减杂交技术分离毛乳头细胞凝集性生长差异表达基因的cDNA片段,并构建消减cDN... 目的筛选和分析毛乳头细胞凝集性生长状态下差异表达基因。方法分别提取凝集性生长和非凝集性生长状态下毛乳头细胞中的总RNA,应用SMARTcDNA合成技术和抑制性消减杂交技术分离毛乳头细胞凝集性生长差异表达基因的cDNA片段,并构建消减cDNA文库,通过PCR筛选、cDNA斑点杂交验证、测序和同源性检索对差异表达基因进行分析。结果成功地构建了毛乳头细胞凝集性生长差异表达cDNA文库。通过对毛乳头细胞凝集性生长状态差异表达基因文库的筛选、克隆,证实毛乳头在体外凝集性生长状态下可以特异表达与细胞同源凝集、生长调控、分化发育及信号转导相关的基因,包括已知基因(如加帽蛋白、palladin,VEGF)、造血干细胞分化相关基因(HSPC011、HSPC016)及1条新基因。结论毛乳头细胞凝集性生长差异表达基因消减cDNA文库的构建,为进一步筛选和克隆毛乳头细胞凝集性生长相关基因奠定了基础。在凝集性生长状态下,多种基因可能协同作用,参与毛乳头细胞生长调控和功能发挥。 展开更多
关键词 毛乳头细胞 凝集性生长 差异表达基因 基因序列分析 筛选 基因克隆
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柔嫩艾美耳球虫抗马杜拉霉素、地克珠利虫株特异消减文库的构建 被引量：15
12
作者 韩红玉 赵其平 +3 位作者 姜连连 董辉 陈兆国 黄兵 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1712-1716,共5页
以遗传背景一致的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)敏感株孢子化卵囊为驱动组,马杜拉霉素抗药株和地克珠利抗药株孢子化卵囊为试验组,利用抑制消减杂交(SSH)方法,通过两轮杂交和两次PCR分别构建了富含两个抗药株孢子化卵囊与敏感株孢子... 以遗传背景一致的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)敏感株孢子化卵囊为驱动组,马杜拉霉素抗药株和地克珠利抗药株孢子化卵囊为试验组,利用抑制消减杂交(SSH)方法,通过两轮杂交和两次PCR分别构建了富含两个抗药株孢子化卵囊与敏感株孢子化卵囊之间差异表达基因的消减cDNA文库。随机从两个消减文库中分别挑取50个克隆,经PCR鉴定马杜拉霉素抗药株和地克珠利抗药株孢子化卵囊的消减文库重组率分别为96%和98%,差异基因片段大小分布在250bp～1.0kb之间。从每个文库中随机挑取65个阳性克隆经斑点杂交试验,分别选择表达量上调的6个克隆进行序列分析和同源性比较。结果发现,有4个cDNA片段可能是新基因片段,与地克珠利抗药株的产生有关;有3个新的cDNA片段可能与马杜拉霉素抗药株的产生有关。这些结果将为克隆全长cDNA和探索球虫抗药性产生及发展的分子机理奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 马杜拉霉素 地克珠利 抗药性相关基因 抑制消减杂交 基因克隆 消减文库 构建 孢子化卵囊 cDNA片段
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利用抑制消减杂交技术研究钩端螺旋体致病相关基因 被引量：12
13
作者 鲍朗 胡昌华 +3 位作者 李学敏 晏菊芳 张万江 张会东 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期574-577,共4页
目的　利用抑制消减杂交技术 (SSH) ,比较致病与非致病钩端螺旋体 (简称钩体 )之间基因组差异 ,筛选致病钩体特有的基因片段。方法　以赖型 0 1 7株为tester,非致病性patocⅠ株为driv er,选择合适的四碱基内切酶将基因组酶切 ,连接特殊... 目的　利用抑制消减杂交技术 (SSH) ,比较致病与非致病钩端螺旋体 (简称钩体 )之间基因组差异 ,筛选致病钩体特有的基因片段。方法　以赖型 0 1 7株为tester,非致病性patocⅠ株为driv er,选择合适的四碱基内切酶将基因组酶切 ,连接特殊设计的adaptor进行消减杂交和PCR ,得到消减混合物 ,与T/A克隆载体连接 ,转化JM1 0 9建立差异消减文库 ,经PCR和Southernblot筛选鉴定阳性克隆 ,进而对部分片段进行测序和同源分析。结果　AluⅠ适于将钩体酶切成用于SSH技术的小片段 ;经SSH筛选鉴定得到 3 0个片段大小为 2 0 0～ 1 3 0 0bp的阳性克隆 ,部分已测序的片段中 1个与硫胺素合成蛋白高度同源 ,4个与GenBank无明显同源性 ,可能为赖型致病钩体所特有而非致病钩体缺失的基因片段 ,已被GenBank收录 ,收录号分别为AF3 0 0 873～ 3 0 0 877。结论　SSH是一种有效、灵敏、高特异的比较分析基因组差异的方法 ,对钩端螺旋体致病基因的筛选、基因组分化、分子遗传研究等具有重要意义。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 基因组差异 抑制消减杂交
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淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性和敏感性相关基因克隆和序列分析 被引量：11
14
作者 田海生 朱昌亮 +4 位作者 高晓红 马磊 沈波 李秀兰 吴观陵 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期193-197,共5页
目的　获取淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性和敏感性相关基因。　方法　通过正、反向抑制性差减杂交获取对溴氰菊酯抗药性和敏感性淡色库蚊的差异表达基因 ,并以基因芯片和逆 Northern对所获基因进行杂交鉴定。　结果　正、反向抑制性差减杂... 目的　获取淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性和敏感性相关基因。　方法　通过正、反向抑制性差减杂交获取对溴氰菊酯抗药性和敏感性淡色库蚊的差异表达基因 ,并以基因芯片和逆 Northern对所获基因进行杂交鉴定。　结果　正、反向抑制性差减杂交各获得 5 2 3和 2 86个克隆 ,经芯片鉴定后在抗性品系高表达的基因分别有15 5个 (2～ 3倍 )和 42个 (3倍以上 ) ,在敏感品系中高表达的基因分别有 15个 (2～ 3倍 )和 9个 (3倍以上 )。对 3倍以上差异表达和特异表达基因进行单向测序 ,根据最高同源性比对结果 ,线粒体 r RNA基因、6 0 S核糖体蛋白基因、40 S核糖体蛋白 S4基因、胰蛋白酶前体基因、糜蛋白酶 A前体基因、视蛋白基因等在抗性品系中高表达 ;而 40 S核糖体蛋白 S2 9基因和肌球蛋白调控轻链 2在敏感品系中高表达 ;另外 ,1,4- α-葡聚糖分支酶和核糖体蛋白 46基因在抗性品系中特异表达。　结论　所获得的 13个差异表达基因和 展开更多
关键词 淡色库蚊 杀虫剂抗性 基因克隆 抑制性差减杂交 基因芯片 逆Northern
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差异表达基因的分离策略 被引量：4
15
作者 刘军 杨金水 《生物工程进展》 CSCD 1999年第6期43-46,37,共5页
生命活动的各个进程伴随着不同基因的选择性开启和关闭。如何有效地分离克隆各种差异表达的基因，成为分子生物学研究的一个努力方向，大量差异基因分离策略因之问世。本文扼要介绍了近年来发展的几种主要分离策略。
关键词 差异表达基因 抑制差减杂交 基因分离
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利用抑制性减数杂交技术(SSH)研究IL-10抑制表达的新基因 被引量：12
16
作者 韩文玲 李莹 +4 位作者 张颖妹 徐秀珍 宋泉声 狄春辉 马大龙 《中华微生物学和免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第2期128-131,共4页
目的　利用抑制性减数杂交 (SSH)技术筛选IL 10抑制表达的新基因。方法　以PHA刺激的U937细胞为tester,以PHA刺激同时IL 10抑制的U937细胞为driver,提取mRNA ,反转录构建cDNA文库 ,利用SSH技术筛选IL 10抑制表达的新基因。结果　通过SS... 目的　利用抑制性减数杂交 (SSH)技术筛选IL 10抑制表达的新基因。方法　以PHA刺激的U937细胞为tester,以PHA刺激同时IL 10抑制的U937细胞为driver,提取mRNA ,反转录构建cDNA文库 ,利用SSH技术筛选IL 10抑制表达的新基因。结果　通过SSH技术 ,发现了 15个可能的IL 10抑制表达的基因 ,其中 6个与GenBank中已公布的表达序列检签 (expressedsequencetag ,EST)片段没有明显同源性 ,为新基因 ,其中之一经EST拼接 ,得到全长cDNA ,为一种新的C C家族趋化因子 ,已被GenBank收录 ,收录号码为AF0 96 985。挑选 4个新基因进行Northernblot分析 ,发现IL 10可抑制其中 3个新基因表达。结论　SSH技术是一种高效的差异基因筛选方法 ,IL 展开更多
关键词 白细胞介素10 U937细胞 抑制性减数杂交
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红曲菌cDNA消减文库的构建 被引量：10
17
作者 赖卫华 许杨 熊勇华 《菌物系统》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期466-473,共8页
应用抑制性消减杂交技术,构建红曲菌产桔霉素和不产桔霉素差异表达的cDNA消减文库.分别从产桔霉素和不产桔霉素的红曲菌丝体中提取mRNA,依次合成单链和双链cDNA,经酶切成大小为250～750bp的片断,将产桔霉素的cDNA分为两组,分别与两种不... 应用抑制性消减杂交技术,构建红曲菌产桔霉素和不产桔霉素差异表达的cDNA消减文库.分别从产桔霉素和不产桔霉素的红曲菌丝体中提取mRNA,依次合成单链和双链cDNA,经酶切成大小为250～750bp的片断,将产桔霉素的cDNA分为两组,分别与两种不同的接头连接,再与不产桔霉素的红曲菌的cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR后,将产物与T/A载体连接构建成功cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,文库扩增后得到283个克隆,经PCR法快速测定,均得到250～750bp的插入片断.所构建的红曲菌cDNA消减文库为进一步筛选红曲菌中与产桔霉素性状相关的基因奠定了基础. 展开更多
关键词 桔霉素 抑制性消减杂交 聚合酶链式反应
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肝炎病毒蛋白反式激活作用的研究策略 被引量：13
18
作者 成军 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期373-376,共4页
具有反式激活作用的肝炎病毒蛋白有多种 ,目前研究主要集中在HBV的羧基末端截短型表面抗原中蛋白 (MHBst)、HBx Ag,以及HCV的核心蛋白、非结构蛋白 3(NS3)、非结构蛋白 5A(NS5A)等。研究肝炎病毒蛋白反式激活作用的分子生物学技术包括... 具有反式激活作用的肝炎病毒蛋白有多种 ,目前研究主要集中在HBV的羧基末端截短型表面抗原中蛋白 (MHBst)、HBx Ag,以及HCV的核心蛋白、非结构蛋白 3(NS3)、非结构蛋白 5A(NS5A)等。研究肝炎病毒蛋白反式激活作用的分子生物学技术包括抑制性消减杂交 (SSH)、基因表达谱芯片技术等。肝炎病毒蛋白在极少数情况下通过与启动子DNA结合影响肝细胞的基因表达谱 ,但更主要的是通过影响细胞信号转导的途径 ,包括NF κB、STAT 3、MAPK、Nur77、PI3K等。关于肝炎病毒蛋白对肝细胞基因表达谱的影响及其机制的研究 。 展开更多
关键词 肝炎病毒 反式激活 抑制性消减杂交 基因表达谱芯片 信号转导
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肺巨细胞癌高低转移株差异表达基因的鉴定 被引量：10
19
作者 张金强 王妍 +3 位作者 王涛 杜芝燕 徐元基 陆应麟 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期590-593,共4页
目的从两株同源但转移能力不同的人肺巨细胞癌细胞株中分离并鉴定差异表达基因。方法应用抑制消减杂交(SSH)技术,对来源相同、转移能力不同的人肺巨细胞癌细胞株PLA801C和PLA801D进行了两次实验。第1次SSH实验以PLA801C株为实验方,第2... 目的从两株同源但转移能力不同的人肺巨细胞癌细胞株中分离并鉴定差异表达基因。方法应用抑制消减杂交(SSH)技术,对来源相同、转移能力不同的人肺巨细胞癌细胞株PLA801C和PLA801D进行了两次实验。第1次SSH实验以PLA801C株为实验方,第2次实验以PLA801D株为实验方。将获得差异表达的片段点在氨基化的玻片上做成基因芯片,利用荧光标记的探针与芯片杂交,选取差异表达克隆,并利用RNA狭缝杂交或Northern杂交对若干片段进行验证。结果在低转移肺巨细胞癌细胞株中,高表达的序列有16条;在高转移肺巨细胞癌细胞株中,高表达的序列有79条。测序后经过同源性分析,大部分序列均与已知序列高度同源,主要编码以下几类蛋白(1)细胞因子及其受体相关蛋白;(2)激酶及其相关蛋白;(3)其他蛋白,包括酶类、热休克蛋白、受体蛋白、细胞骨架蛋白、线粒体蛋白和癌基因编码产物等;(4)一些未知功能的蛋白或是从核酸序列推出来的假想蛋白。结论HSP70、AXL受体酪氨酸激酶和1433ζ等多种已知基因表达情况的改变,可能影响肺癌的转移过程,此外还发现了一些可能的肿瘤转移相关新基因。 展开更多
关键词 肺巨细胞癌 癌细胞株 差异表达基因 转移 高表达 蛋白 实验 激酶 玻片 序列
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盐碱胁迫下青海湖裸鲤鳃基因表达差异 被引量：14
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作者 郭雯翡 么宗利 +5 位作者 来琦芳 史建全 周凯 祁洪芳 李子牛 王慧 《海洋渔业》 CSCD 北大核心 2012年第2期137-144,共8页
采用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,研究了青海湖裸鲤(Gymnocyprisprzewalskii)在高盐碱胁迫下转录水平上的基因表达差异,实验获得差异表达序列91条,其中成功注释60条。以同是鲤科鱼类的斑马鱼(Danio re... 采用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,研究了青海湖裸鲤(Gymnocyprisprzewalskii)在高盐碱胁迫下转录水平上的基因表达差异,实验获得差异表达序列91条,其中成功注释60条。以同是鲤科鱼类的斑马鱼(Danio rerio)的基因ID作为参照,用DAVID软件对这些序列进行功能分类,结果从正向文库获得28条功能基因片段,反向文库获得14条。按功能将其分为10类,其中,催化活性、细胞、部分结合相关基因表达上调,结合、免疫相关基因表达下调。分析发现,高盐碱胁迫会改变鱼类的渗透压和酸碱平衡,对免疫系统产生一定的抑制作用,对此,鱼类通过增强离子调控、提高血清尿素氮浓度、合成应激蛋白等,来维持渗透压和酸碱平衡,缓解应激反应。 展开更多
关键词 青海湖裸鲤 高盐碱胁迫 抑制消减杂交 基因表达
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