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检测食品中大肠杆菌O157的多重荧光PCR方法的建立 被引量:5
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作者 李睿 刘晓红 +2 位作者 宫本敬久 王芳 熊燕 《中国酿造》 CAS 北大核心 2010年第4期160-163,共4页
针对大肠杆菌O157的志贺毒素编码基因stx1、stx2和O157血清型的标志基因wzy的保守序列,设计特异性的引物和探针,反复优化反应体系和条件,建立了一种新的多重荧光PCR检验方法。结果显示,该方法灵敏度高,stx1、stx2的扩增效率分别为96.4%... 针对大肠杆菌O157的志贺毒素编码基因stx1、stx2和O157血清型的标志基因wzy的保守序列,设计特异性的引物和探针,反复优化反应体系和条件,建立了一种新的多重荧光PCR检验方法。结果显示,该方法灵敏度高,stx1、stx2的扩增效率分别为96.4%和94.6%,实际样品检测时stx1、stx2的最低检出限分别为4.2×102cfu/mL和4.2×103cfu/mL。该方法特异性强,扩增结果与各参考菌株基因型一致,能良好的区分出O157菌株和非O157型大肠杆菌。该方法能用于食品样品的检测和流行病学分离株的快速鉴定。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157 食品检测 多重荧光PCR stx1 stx2 wzy
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双重荧光定量PCR检测志贺毒素stx1和stx2基因 被引量:2
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作者 陆芸 王若南 +3 位作者 谢国良 余斐 郑书发 陈晓 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2017年第5期591-593,597,共4页
目的建立一种双重荧光定量PCR检测志贺毒素stx1和stx2基因的方法。方法根据不同细菌来源的stx1和stx2序列,设计PCR引物和TaqMan探针,建立双重实时荧光定量PCR检测体系,进行灵敏度、特异性和重复性评价,并对腹泻患者粪便样本进行检测分... 目的建立一种双重荧光定量PCR检测志贺毒素stx1和stx2基因的方法。方法根据不同细菌来源的stx1和stx2序列,设计PCR引物和TaqMan探针,建立双重实时荧光定量PCR检测体系,进行灵敏度、特异性和重复性评价,并对腹泻患者粪便样本进行检测分析。结果双重实时荧光定量PCR检测含志贺毒素基因重组质粒的最低检测下限为102 copies/mL;该法对12种常见肠道病原菌均无特异性扩增,对不同浓度的标准质粒检测重复性高,Ct值变异系数均小于10%;对急性腹泻粪便标本的检测阳性率高于细菌分离培养。结论建立的双重实时荧光定量PCR可作为不同细菌来源的志贺毒素基因的快速鉴定方法,亦可用于人感染性腹泻标本的快速筛查。 展开更多
关键词 志贺毒素 stx1 stx2 实时荧光定量PCR
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产志贺毒素大肠杆菌的RPA-LF快速检测方法的建立 被引量:2
3
作者 田鑫鑫 郭容 +5 位作者 韩先干 王少辉 王权 钟国防 崔立 蒋蔚 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1482-1489,共8页
为建立一种快速检测产志贺毒素大肠杆菌的基于侧流层析的重组酶聚合酶扩增技术(RPA-LF)方法,以志贺毒素stx1和stx2基因序列为靶序列,设计了用于RPA-LF方法的特异性引物及探针,并对RPA-LF反应条件进行优化。结果显示,针对stx1和stx2基因... 为建立一种快速检测产志贺毒素大肠杆菌的基于侧流层析的重组酶聚合酶扩增技术(RPA-LF)方法,以志贺毒素stx1和stx2基因序列为靶序列,设计了用于RPA-LF方法的特异性引物及探针,并对RPA-LF反应条件进行优化。结果显示,针对stx1和stx2基因的最佳反应温度分别为39℃和37℃,最佳反应时间分别为10 min和15 min。最佳反应条件下,stx1和stx2基因的最低检测限分别为1 pg和10 pg,灵敏度较高。该检测方法能够准确识别含stx1和/或stx2基因的大肠杆菌,且不与其他6种非目的病原菌发生交叉反应,表明本方法特异性良好。本研究建立的针对志贺毒素stx1和stx2基因的RPA-LF快速检测方法灵敏度和特异性较好,且检测时间短,结果直观可视。本试验为产志贺毒素大肠杆菌的筛选诊断和现场的快速检测开辟了一个新的途径。 展开更多
关键词 产志贺毒素大肠杆菌 stx1 stx2 重组酶聚合酶扩增技术 侧流层析法
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产志贺毒素EHEC国内分离株Stx2基因的克隆及生物信息学分析 被引量:4
4
作者 唐中伟 周志江 《山西农业科学》 2011年第2期167-169,共3页
通过对来源于人和牛粪的EHEC的Stx2基因的克隆,并利用生物信息学方法对3株菌Stx2基因的序列进行分析,结果表明:EHEC94H的Stx2序列与标准株Stx2,Stx2c,Stx2d核苷酸序列同源分别为99.8%,99.5%,90.9%,EHEC 042的Stx2序列与标准株Stx2,Stx2c... 通过对来源于人和牛粪的EHEC的Stx2基因的克隆,并利用生物信息学方法对3株菌Stx2基因的序列进行分析,结果表明:EHEC94H的Stx2序列与标准株Stx2,Stx2c,Stx2d核苷酸序列同源分别为99.8%,99.5%,90.9%,EHEC 042的Stx2序列与标准株Stx2,Stx2c,Stx2d核苷酸序列同源性分别为98.9%,98.9%,90.5%,EHEC 094的Stx2序列与标准株Stx2,Stx2c,Stx2d核苷酸序列同源性分别为97.9%,98.0%,87.1%。 展开更多
关键词 EHEC stx2 克隆 序列分析 生物信息学分析
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双重实时荧光PCR检测肠出血型大肠埃希菌stx1和stx2基因方法的建立 被引量:1
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作者 陈应坚 刘渠 +2 位作者 甘莉萍 金玉娟 杨慧 《热带医学杂志》 CAS 2012年第3期298-301,310,共5页
目的建立一种检测肠出血型大肠埃希菌(EHEC)产毒基因stx1和stx2的TaqMan双重实时荧光PCR法。方法根据GenBank公布的EHECstx1和stx2基因序列进行比对后设计相应的PCR引物和TaqMan探针,探针报告基团分别使用FAM和HEX标记,淬灭基团使用BHQ... 目的建立一种检测肠出血型大肠埃希菌(EHEC)产毒基因stx1和stx2的TaqMan双重实时荧光PCR法。方法根据GenBank公布的EHECstx1和stx2基因序列进行比对后设计相应的PCR引物和TaqMan探针,探针报告基团分别使用FAM和HEX标记,淬灭基团使用BHQ1标记。建立双重实时荧光PCR反应体系并对反应条件进行优化,对方法的灵敏度、特异性及其重复性进行分析。结果建立了EHEC双重实时荧光PCR检测方法。菌液浓度为102~108cuf/ml时,均可观察到扩增曲线,且扩增曲线平滑;检测30份模拟临床样品,均检测到stx1和stx2基因,且均培养出EHEC,该方法灵敏度为100%;3次重复测定108、105、102cfu/ml3个高、中、低浓度的菌液DNA模板,得到其扩增曲线,计算各浓度的Ct值标准差及变异系数,均小于5%,在误差允许范围内。结论建立的双重实时荧光PCR法可快速、灵敏、特异、有效地检出EHEC。 展开更多
关键词 肠出血型大肠埃希菌 实时荧光PCR TaqMan法 stx1 stx2
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多重PCR法检测食品中大肠杆菌O157 被引量:1
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作者 李睿 戴诗皎 +1 位作者 杨敬镜 瞿敏 《武汉工业学院学报》 CAS 2010年第3期1-3,共3页
以大肠杆菌O157的stx1、stx2、wzy基因为靶基因,建立了一种新的多重PCR检测方法。PCR扩增结果与各参考菌株基因型一致。PCR结果表明,wzy基因特异性强,可作为检测O157菌株的标志基因,且为开发大肠杆菌O157的分子检测技术提供新的研究思路。
关键词 大肠杆菌O157 多重PCR stx1 stx2 wzy
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PCR Detection of Virulence Genes Colv,Stxs and HlyE of Escherichia coli 被引量:3
7
作者 史秋梅 张艳英 +5 位作者 高桂生 高光平 刘玉芹 房海 陈翠珍 沈庆鹏 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第10期2044-2047,共4页
[Objective] This study aimed to explore the presence of three causative genes Colv,Stxs and HlyE of the pathogenic E.coli from chickens,pigs and food.[Method] By using 44 E.coli strains from chickens,24 from pigs and ... [Objective] This study aimed to explore the presence of three causative genes Colv,Stxs and HlyE of the pathogenic E.coli from chickens,pigs and food.[Method] By using 44 E.coli strains from chickens,24 from pigs and 26 from food as the experimental materials,virulence genes Colv,Stxs(stx2,stx2e) and HlyE were detected with polymerase chain reaction(PCR) method.[Result] Among all the E.coli strains,the detection rate of Colv was 25% from chickens,4.2% from pigs,and 0 from food;the detection rate of Stx2(Stx2e) from all E.coli strains was 0;the detection rate of HlyE was 2.27% from chickens,0 from pigs,and 11.5% from food.[Conclusion] Virulence gene Colv shows relatively high carrying rate in E.coli from chickens and pigs;HlyE also shows a certain degree of presence in E.coli from chickens and food. 展开更多
关键词 Escherichia coli Virulence gene Colv stx2 stx2e HlyE PCR
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野黄芩苷抗肠出血大肠杆菌感染作用 被引量:3
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作者 娄飞 张勇 +1 位作者 邓旭明 王建锋 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期482-485,492,共5页
为了更好的分析野黄芩苷对肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhage E.coli,EHEC)感染的保护作用,本研究通过原核表达,亲和层析的方法纯化志贺毒素(Stx),利用细胞表型,通过LDH方法检测野黄芩苷对Stx活性的抑制作用。32 mg/L的野黄芩苷对Stx... 为了更好的分析野黄芩苷对肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhage E.coli,EHEC)感染的保护作用,本研究通过原核表达,亲和层析的方法纯化志贺毒素(Stx),利用细胞表型,通过LDH方法检测野黄芩苷对Stx活性的抑制作用。32 mg/L的野黄芩苷对Stx的抑制率为67%。通过动物试验,发现野黄芩苷对Stx中毒小鼠具有显著的保护作用,其保护率为70%。本研究中,我们筛选到了一种常用的中药黄酮类化合物,野黄芩苷可显著降低stx2引起的细胞死亡,同时有效抑制肠出血。基于以上结果,野黄芩苷可以作为抗Stx的潜在化合物。 展开更多
关键词 志贺样毒素 野黄芩苷 中毒 stx2
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产志贺毒素大肠杆菌stx2a和stx2b的血清和牛奶抗体检测 被引量:3
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作者 丁红雷 王豪举 +4 位作者 毛旭虎 朱凤才 邹全明 石云 周维英 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期63-67,共5页
于新桥医院采集健康人群血清535份,两个屠宰场采集商品猪血清415份,5家奶牛场和1家奶站采集新鲜牛奶326份,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清(牛奶)中的stx2a和stx2b抗体.用P/N>2.1作为阳性判定标准,535份健康人群血清检测到stx2a... 于新桥医院采集健康人群血清535份,两个屠宰场采集商品猪血清415份,5家奶牛场和1家奶站采集新鲜牛奶326份,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清(牛奶)中的stx2a和stx2b抗体.用P/N>2.1作为阳性判定标准,535份健康人群血清检测到stx2a抗体阳性和stx2b抗体阳性血清各21份(3.93%);415份商品猪血清检测到stx2a抗体阳性血清4份(0.96%),stx2b抗体阳性血清2份(0.48%);326份新鲜牛奶检测到stx2a抗体阳性血清25份(7.46%),stx2b抗体阳性血清21份(6.44%).牛奶中stx2抗体阳性率最高,健康人群血清次之,商品猪血清的阳性率最低.由此表明重庆市STEC菌株中携带stx2基因. 展开更多
关键词 产志贺毒素大肠杆菌 stx2 ELISA
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动物源E.coli O157:H7 stx基因的检测与系统进化分析 被引量:1
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作者 程海卫 杨霞 +7 位作者 赵军 陈陆 王新卫 常洪涛 张龙现 刘红英 姚慧霞 王川庆 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期173-180,共8页
为了解2009-2010年间在河南、甘肃地区分离鉴定的5株大肠埃希菌O157(E.coli O157)携带stx的情况及不同分离株间stx分子进化与变迁的情况,本研究利用PCR方法对分离株进行了stx基因检测,并完成了序列测定与系统演化分析。结果表明,5株不... 为了解2009-2010年间在河南、甘肃地区分离鉴定的5株大肠埃希菌O157(E.coli O157)携带stx的情况及不同分离株间stx分子进化与变迁的情况,本研究利用PCR方法对分离株进行了stx基因检测,并完成了序列测定与系统演化分析。结果表明,5株不同动物源的分离株均含有stx1及stx2基因。序列分析结果显示5株分离株间stx1、stx2的核苷酸及氨基酸同源性均较高;stx1基因均与参考株中的山羊源和食品源E.coli O157菌株的同源性较高,进化树中遗传距离最近;分离株的stx2基因与多株牛源及少数人源参考株也具有较高的同源性,进化树中虽然5株分离菌均在一个大主干分支中,但分离株27与其他各分离株及参照株遗传距离最远,独自处于一次级分支中;分离株L37与W、12与50分别分布于牛源、人源E.coli O157小次级分支中;由此可推测,分离株所携带的stx1很有可能是经食品源或羊源E.coli O157传递而来;分离株L37与W、分离株12与50的stx2可能是由牛源、人源E.coli O157菌株传递而来,分离株27的stx2来源不清楚。研究结果表明,5株E.coli O157分离株均含有stx1、stx2基因,但两个基因的起源存在差异。 展开更多
关键词 E COLI O157 stx1 stx2 检测 进化分析
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肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺样毒素Ⅱ毒素亚单位Stx2A的表达与纯化 被引量:2
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作者 马颖 毛旭虎 +1 位作者 邹全明 张卫军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第15期1582-1584,共3页
目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(Enterohem orrhagic Escherichia col,i EHEC)O157∶H7志贺样毒素A亚单位(Sh iga-like toxin,Stx2A),并对其初步纯化。方法设计引物采用PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增Stx2A的编码基因stx2 a,T-A克隆后... 目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(Enterohem orrhagic Escherichia col,i EHEC)O157∶H7志贺样毒素A亚单位(Sh iga-like toxin,Stx2A),并对其初步纯化。方法设计引物采用PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增Stx2A的编码基因stx2 a,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11 c(+)-stx2 a,经测序鉴定后转化E.coli.BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDS-PAGE和W esten b lot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白。结果扩增的stx2 a基因约950bp;原核表达质粒pET-11 c(+)-stx2 a经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coli.BL21(DE3)中得到高效表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量约31×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达92.3%。结论EHEC O157∶H7 Stx2A的高效表达与初步纯化,为探讨O157∶H7菌的感染机制奠定基础。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌0157:H7 毒素A亚单位 表达 纯化
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食品中产志贺毒素大肠杆菌的多重PCR检测
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作者 李睿 戴诗皎 +2 位作者 杨敬镜 瞿敏 刘志国 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2010年第11期161-163,共3页
针对产志贺毒素大肠杆菌的stx2、wzy、hlyA的保守序列,设计特异性的引物,建立一种新的多重PCR检验方法。结果显示,该方法特异性强,扩增结果与各参考菌株基因型一致,并能良好的区分出O157菌株和非O157型产志贺毒素大肠杆菌。该方法能用... 针对产志贺毒素大肠杆菌的stx2、wzy、hlyA的保守序列,设计特异性的引物,建立一种新的多重PCR检验方法。结果显示,该方法特异性强,扩增结果与各参考菌株基因型一致,并能良好的区分出O157菌株和非O157型产志贺毒素大肠杆菌。该方法能用于食品样品的检测和流行病学分离株的快速鉴定。 展开更多
关键词 产志贺毒素大肠杆菌 多重PCR hlyA stx2 wzy
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MGB(Minor Groove Binder)复合探针二重实时定量PCR检测大肠杆菌O157
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作者 朱向玲 严亚贤 +3 位作者 陆承平 刘佩红 王建 沈莉萍 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期897-900,共4页
以大肠杆菌O157rfbE和stx2为待检靶基因,设计两对引物和两条MGB探针,rfbE和stx2探针5′端分别用FAM和VIC基团标记,3′端均用Taqman-MGB标记。建立并优化了检测大肠杆菌O157的二重荧光定量PCR方法,可检测的最低DNA浓度是10拷贝/μL;实验... 以大肠杆菌O157rfbE和stx2为待检靶基因,设计两对引物和两条MGB探针,rfbE和stx2探针5′端分别用FAM和VIC基团标记,3′端均用Taqman-MGB标记。建立并优化了检测大肠杆菌O157的二重荧光定量PCR方法,可检测的最低DNA浓度是10拷贝/μL;实验中O157菌株检测结果均为rfbE阳性,而非O157菌株检测结果均为阴性;重复性实验中,批间差异小于80%,批内差异小于70%。实验结果显示此二重荧光定量PCR方法可对分离的可疑大肠杆菌O157菌株进行快速鉴定,同时得知菌株是否携带stx2毒力基因,有利于菌株毒力强弱的判定。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157 荧光定量PCR MGB探针 rfbE stx2
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非O157型产志贺毒素大肠杆菌分子进化和流行特征分析 被引量:1
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作者 马崇礼 杨俊 +1 位作者 段合波 毕旺来 《生物化工》 2018年第4期100-103,共4页
为分析非O157型产志贺毒素大肠杆菌的流行特点和分子进化,从NCBIGen Bank数据库下载197条非O157型产志贺毒素大肠杆菌志贺毒素2基因序列。搜集分离菌株的采集地点、采集年代、宿主类型等流行病学信息,通过构建进化树分析菌株间的遗传进... 为分析非O157型产志贺毒素大肠杆菌的流行特点和分子进化,从NCBIGen Bank数据库下载197条非O157型产志贺毒素大肠杆菌志贺毒素2基因序列。搜集分离菌株的采集地点、采集年代、宿主类型等流行病学信息,通过构建进化树分析菌株间的遗传进化关系。结果表明,我国非O157型产志贺毒素大肠杆菌基因型主要属于stx2c、stx2d和stx2e,血清型分布较广泛,主要流行型不是欧美国家常见的"Top Six"。 展开更多
关键词 非O157型 产志贺毒素大肠杆菌 志贺毒素2 进化分析
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Zinc phosphate-based nanoparticles as alternatives to zinc oxide in diet of weaned piglets 被引量:1
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作者 Silvia Kociova Kristyna Dolezelikova +14 位作者 Pavel Horky Sylvie Skalickova Daria Baholet Lucie Bozdechova Eva Vaclavkova Jaroslava Belkova Pavel Nevrkla Jiri Skladanka Tomas Do Ondrej Zitka Yazan Haddad Pavel Kopel Ludek Zurek Vojtech Adam Kristyna Smerkova 《Journal of Animal Science and Biotechnology》 SCIE CAS CSCD 2020年第4期1147-1162,共16页
Background: The high doses of zinc oxide(Zn O) administered orally to piglets for the prevention of diarrhea and increase of growth rate can contaminate pig farms and the surrounding environment. Therefore, there is a... Background: The high doses of zinc oxide(Zn O) administered orally to piglets for the prevention of diarrhea and increase of growth rate can contaminate pig farms and the surrounding environment. Therefore, there is a need to find a replacement of high doses of dietary Zn O with an equally effective alternative. In the present study, the effect of two formulations of zinc phosphate-based nanoparticles(Zn A and Zn C NPs) on growth performance,intestinal microbiota, antioxidant status, and intestinal and liver morphology was evaluated. A total of 100 weaned piglets were randomly divided into 10 equal groups with the base diet(control) or the base diet supplemented with Zn A, Zn C, or Zn O at concentrations 500, 1000, and 2000 mg Zn per kilogram of diet. Supplements were given to animals for 10 days. Fecal samples were collected on day 0, 5, 10 and 20. At the end of the treatment(day 10),three piglets from each group were sacrificed and analyzed.Results: Comparing to that of control, the significantly higher piglet weight gain was observed in all piglet groups fed with Zn A(P < 0.05). Differences in the total aerobic bacteria and coliform counts in piglet feces after NPs supplementation compared to that of control and Zn O groups were also found(P < 0.05). The majority of aerobic culturable bacteria from the feces represented Escherichia(28.57–47.62%), Enterococcus(3.85–35.71%), and Streptococcus(3.70–42.31%) spp. A total of 542 Escherichia coli isolates were screened for the virulence genes STa,STb, Stx2, F4, and F18. The substantial occurrence of E. coli virulence factors was found on day 5, mainly in fimbrillary antigen and thermostable toxins, except for piglets fed by Zn C. Zn treatment decreased Zn blood levels in piglets fed with Zn O and Zn A(500 mg/kg) and increased in Zn C(2000 mg/kg) compared to that of control(P < 0.05). The antioxidant status of piglets was affected only by Zn A. While some changes in the liver and the intestinal morphology of piglets with NPs were observed, none were serious as r 展开更多
关键词 Antioxidant status DIET E.coli STa STB stx2 F4 F18 Fecal coliforms MICROBIOTA
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STX2通过调控JNK 信号途径抑制肺癌细胞的增殖和迁移
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作者 吴兴伟 吕坤 耿彪 《皖南医学院学报》 CAS 2021年第5期417-421,共5页
目的:本研究主要探讨STX2对非小细胞肺癌(NSCLC)的增殖和迁移的抑制作用及其潜在分子机制。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肺正常细胞系(16-HBE)和肺癌细胞系(A549和H1299)中STX2的差异性表达;将STX2在肺癌细胞系中敲低后,通过CCK-... 目的:本研究主要探讨STX2对非小细胞肺癌(NSCLC)的增殖和迁移的抑制作用及其潜在分子机制。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肺正常细胞系(16-HBE)和肺癌细胞系(A549和H1299)中STX2的差异性表达;将STX2在肺癌细胞系中敲低后,通过CCK-8检测细胞活力,平板克隆实验检测细胞增殖能力,通过细胞Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测CDK2、E-cadherin、MMP-2、MMP-9的表达及JNK的磷酸化水平。结果:肺正常细胞系与肺癌细胞系相比STX2是低表达的,体外实验表明STX2表达下调可促进细胞增殖、细胞迁移和侵袭;进一步的实验表明,STX2表达降低可以显著增加CDK2、MMP-2、MMP-9的表达以及抑制E-cadherin的表达水平。通过研究STX2可能参与的信号分子通路,发现与对照组相比,STX2敲低组促进了JNK的磷酸化水平。结论:STX2可能可以通过JNK途径影响NSCLC的进展,STX2可能是NSCLC中的一个潜在的预后生物标志物和潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 stx2 增殖 迁移 JNK信号途径 非小细胞性肺癌
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断奶仔猪日粮中锌磷酸盐纳米颗粒可替代氧化锌
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作者 王丽雪 魏茂莲 +1 位作者 解玉怀 杨维仁(译) 《中国饲料添加剂》 2021年第1期30-42,共13页
(背景)为预防腹泻和增加生长速度给仔猪口服高剂量的氧化锌(ZnO)会污染养猪场和周围环境。因此,有必要找到一种同样有效的替代品替代高剂量的膳食ZnO。本研究评估了两种基于磷酸锌的纳米颗粒制剂(ZnA和ZnCNPs)对生长性能、肠道菌群、抗... (背景)为预防腹泻和增加生长速度给仔猪口服高剂量的氧化锌(ZnO)会污染养猪场和周围环境。因此,有必要找到一种同样有效的替代品替代高剂量的膳食ZnO。本研究评估了两种基于磷酸锌的纳米颗粒制剂(ZnA和ZnCNPs)对生长性能、肠道菌群、抗氧化剂状态以及肠和肝形态的影响。将总共100头断奶仔猪随机平均分为10组,包括对照组以及添加500、1000和2000mg/kgZn的ZnA、ZnC或ZnO的基础日粮。补充期为10天。在第0、5、10和20d收集粪便样本。在试验处理的第10d,每组选取3头猪进行屠宰并采样分析。(结果)与对照组相比,在所有饲喂ZnA的处理组中,仔猪体重增加显著提高(P<0.05)。还发现补充NPs后的仔猪粪中总需氧细菌和大肠杆菌群计数与对照组和ZnO组相比有差异(P<0.05)。粪便中大多数有氧可培养细菌代表大肠埃希菌(28.57%-47.62%)、肠球菌(3.85%-35.71%)和链球菌(3.70%-42.31%)。总共筛选了542种大肠杆菌分离株的毒力基因Sta、STb、Stx2、F4和F18。在第5天发现了大量的大肠杆菌毒力因子,主要存在于纤维状抗原和热稳定毒素中,除了用ZnC喂养的仔猪。锌处理与对照组相比,饲喂ZnO和ZnA(500mg/kg)的仔猪的血Zn水平降低,而ZnC(2000mg/kg)的仔猪的血Zn水平升高(P<0.05)。仔猪的抗氧化状态仅受ZnA影响。尽管观察到带有NP的仔猪的肝脏和肠道形态发生了一些变化,但正常健康状况和体重增加表现的提高均未反映出严重的变化。(结论)我们的结果表明,即使在最低浓度下,ZnANP对仔猪的生长性能也有积极的影响。补充ZnC的猪中大肠杆菌致病因子的发生率最低。磷酸锌基纳米颗粒可能是ZnO的有效替代物。 展开更多
关键词 抗氧化状态 日粮 大肠杆菌STa STB stx2 F4 F18 大肠杆菌群 微生物群
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Stx2B与IntiminC300融合蛋白的构建、表达及免疫保护研究 被引量:13
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作者 易勇 邹全明 +6 位作者 程建平 毛旭虎 童文德 曾明 朱永红 马颖 王庆旭 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期227-233,共7页
目的 构建表达肠出血性大肠杆菌 (EHEC)O1 57∶H7志贺毒素Ⅱ结合亚单位 (Stx2B)与紧密黏附素C 端免疫保护性片段 (IntiminC30 0 )的融合蛋白 (Stx2B IntiminC30 0 ) ,并观察其免疫保护作用。方法 设计引物采用PCR法自EHECO1 57∶H7基... 目的 构建表达肠出血性大肠杆菌 (EHEC)O1 57∶H7志贺毒素Ⅱ结合亚单位 (Stx2B)与紧密黏附素C 端免疫保护性片段 (IntiminC30 0 )的融合蛋白 (Stx2B IntiminC30 0 ) ,并观察其免疫保护作用。方法 设计引物采用PCR法自EHECO1 57∶H7基因组扩增Stx2B的编码基因stx2b ,T A克隆后在前期已构建原核表达质粒 pET 2 8a( + ) eaeC30 0的基础上构建融合基因表达质粒 pET 2 8a( + ) stx2b eaeC30 0 ,经测序鉴定后转化E .coliBL2 1 (DE3) ,IPTG诱导表达 ,PAGE检测 ;通过包涵体洗涤与阴离子柱层析纯化 ,获得目的蛋白Stx2B IntiminC30 0 ,以Al(OH ) 3为佐剂皮下注射免疫BALB/c小鼠 ,再以EHECO1 57∶H7超声破菌液腹腔注射免疫后的小鼠 ,观察攻毒保护效果。结果 PCR法自EHECO1 57∶H7基因组扩增出了约 2 90bp的目的片段 ;原核表达质粒 pET 2 8a( + ) stx2b eaeC30 0经酶切及测序鉴定与设计序列一致。转化E .coliBL2 1 (DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约 2 5% ;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量 (Mr)约 4 3× 1 0 3,破菌后电泳证实目的蛋白以包涵体形式表达。纯化后目的蛋白Stx2B IntiminC30 0的纯度达 75% ,免疫BALB/c小鼠后血清特异性抗体阳转率及抗体效价均显著增高 ,能够抵御致死剂量EHECO1 57∶H7超声破菌? 展开更多
关键词 融合蛋白 O157:H7志贺毒素 保护研究 BALB/c小鼠 表达及 BL21(DE3) 肠出血性大肠杆菌 原核表达质粒 EHEC 免疫保护性 基因组扩增 免疫保护作用 基因表达质粒 E.COLI E.COLI 相对分子质量 免疫保护效果 PCR法 PAGE T-A克隆
原文传递
大肠杆菌O157 Stx噬菌体裂解酶的克隆表达及活性分析 被引量:8
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作者 杨曦 吉文汇 +2 位作者 曹冬梅 孙建和 严亚贤 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2012年第4期25-30,共6页
为研究大肠杆菌O157Stx噬菌体编码的裂解酶(内溶素)对肠出血性大肠杆菌的抗菌作用,克隆表达了大肠杆菌O157Stx噬菌体裂解酶,并检测其裂解作用和裂菌谱。利用PCR方法扩增大肠杆菌O157Min27株中Stx2噬菌体裂解酶基因(R基因),构建表达质粒p... 为研究大肠杆菌O157Stx噬菌体编码的裂解酶(内溶素)对肠出血性大肠杆菌的抗菌作用,克隆表达了大肠杆菌O157Stx噬菌体裂解酶,并检测其裂解作用和裂菌谱。利用PCR方法扩增大肠杆菌O157Min27株中Stx2噬菌体裂解酶基因(R基因),构建表达质粒pET28a(+)-lysEC1,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)。重组质粒在BL21中获得了高表达,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的34%,经His-trapTM亲和层析柱纯化后,获得的重组LysEC1的纯度大于97%。体外裂解活性试验证实纯化的噬菌体裂解酶LysEC1对肠出血性大肠杆菌菌株具有很好的裂解作用,这为新型噬菌体抗菌生物制剂的研发提供了新的研发方向。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157 stx2噬菌体 裂解酶 酶活性
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EHEC O157∶H7志贺毒素ⅡA1亚单位蛋白的构建表达与免疫原性鉴定 被引量:7
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作者 罗萍 曾浩 +5 位作者 易勇 张卫军 郭鹰 刘璐 陈洪章 邹全明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期287-290,共4页
目的构建表达GST-STX2A1融合蛋白并鉴定其免疫原性。方法通过PCR反应从EHEC O157∶H7EDL933标准株菌中扩增STX2A1基因,将此基因克隆到GST融合蛋白原核表达载体PGEX-6p-1,得到阳性克隆PGEX-6p-1/STX2A1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导GST-STX... 目的构建表达GST-STX2A1融合蛋白并鉴定其免疫原性。方法通过PCR反应从EHEC O157∶H7EDL933标准株菌中扩增STX2A1基因,将此基因克隆到GST融合蛋白原核表达载体PGEX-6p-1,得到阳性克隆PGEX-6p-1/STX2A1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导GST-STX2A1融合蛋白的表达,采用亲和层析纯化该蛋白,SDS-PAGE分析其表达量、表达形式和纯度;用纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,免疫双向扩散鉴定抗血清效价,Western blotting鉴定抗血清的特异性。结果成功构建重组质粒PGEX-6p-1/STX2A1,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致,并在大肠杆菌中表达出Mr约为5.3×104大小的可溶性目的蛋白,经亲和层析纯化后纯度可达90%,免疫Balb/c小鼠产生的抗血清效价为1∶16,Western blotting表明可与天然STX2A蛋白反应。结论在大肠杆菌中成功表达了可溶性的GST-STX2A1融合蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性,为O157∶H7亚单位疫苗及制备抗STX2A1的单克隆抗体提供了必要的物质基础。 展开更多
关键词 O157H7 stx2A1 免疫原性
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