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持续高表达CXC趋化因子受体-4重组慢病毒颗粒的包装鉴定及细胞迁移 被引量:1
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作者 王奇 冯世庆 +4 位作者 孔晓红 刘畅 张彬 张亮 张衍军 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期605-608,共4页
目的观察持续高表达CXC趋化因子受体_4(CXCR4)慢病毒颗粒在细胞迁移的作用。方法从大鼠大脑组织提取总RNA,逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)得到大鼠cDNA文库,以cDNA为模板,经过PCR获得CXCR4基因,测序正确后连接到pCDHl一MCS—EFl... 目的观察持续高表达CXC趋化因子受体_4(CXCR4)慢病毒颗粒在细胞迁移的作用。方法从大鼠大脑组织提取总RNA,逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)得到大鼠cDNA文库,以cDNA为模板,经过PCR获得CXCR4基因,测序正确后连接到pCDHl一MCS—EFl一copGFP(慢病毒载体质粒),与第3代慢病毒其余辅助质粒pMDLG/pRRE、pRsv.Rev及pVSV.G按照1:4:1:1共转染293T细胞包装慢病毒,超离慢病毒,测定病毒滴度,感染Hela细胞72h与14d后,分别观察Hela细胞荧光,实时定量聚合酶链反应(Real—timepcn)测定Hela细胞表达大鼠CXCR4mRNA含量,Transwell小室观察细胞迁移。结果测序CXCR4基因序列正确,并成功连接到pCDHl.MCS—EFl.copGFP,利用第3代慢病毒包装系统成功包装慢病毒,经超离慢病毒颗粒,流式细胞仪测定慢病毒滴度为7.89×10^5,持续观察Hela细胞荧光强度,Real.timePCR检测结果示Hela细胞表达大鼠CXCR4mRNA水平显著升高(72h为78.29倍,至14d为58.93倍),Transwell小室观察到高表达CXCR4的慢病毒颗粒感染组细胞迁移多(P〈0.05)。结论高效感染力并持续高表达CXCR4的慢病毒颗粒可持续促进细胞迁移,并有基质细胞衍生因子.1d(SDF一10L)浓度依赖性。 展开更多
关键词 CXC趋化因子受体-4 基质细胞衍生因子-1a 慢病毒 细胞迁移
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SDF-1/CXCR4轴通过调控间充质干细胞定向分化修复缺氧缺血性脑损伤 被引量:11
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作者 余勤 林洁 +6 位作者 刘丽珍 王艳 宣晓波 王标 单威 周丽萍 刘伟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1424-1430,共7页
目的:探讨基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)轴调控间充质干细胞定向分化、修复缺氧缺血性脑损伤的作用。方法:大鼠间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells... 目的:探讨基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)轴调控间充质干细胞定向分化、修复缺氧缺血性脑损伤的作用。方法:大鼠间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells,rMSCs)经缺氧培养不同时点(0h、6h、12h、24h、48h、72h)或SDF-1α(10μg/L)孵育后,采用RT-PCR、Western blotting和流式细胞术检测其表面CXCR4表达的变化;建立大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,运用RT-PCR和Western blotting检测造模后不同时点(1d、3d、5d、7d、14d、21d)大鼠脑部海马组织中SDF-1αmRNA转录和蛋白表达的改变情况;用AMD3100(CXCR4拮抗剂)拮抗rMSCs表面CXCR4后,免疫细胞化学和Western blotting检测rMSCs诱导向神经细胞分化中神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific eno-lase,NSE)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)等神经细胞特异性标志物的阳性率及表达变化情况。结果:低氧培养6 h及12 h的rMSCs CXCR4 mRNA及蛋白表达水平均较常氧培养组明显增加(P<0.01),10μg/L SDF-1α孵育后rMSCs的CXCR4表达水平明显增加(P<0.01);缺氧缺血性脑损伤模型的大鼠脑内SDF-1α蛋白表达显著增加(P<0.01);5 mg/L AMD3100处理后的rMSCs在向神经细胞诱导分化中NSE和GFAP蛋白的表达明显减少。结论:微小剂量的SDF-1α可诱导低氧培养的rMSCs表面CXCR4的表达,而在缺氧缺血性脑损伤模型的大鼠脑内SDF-1α表达增加,从而使SDF-1/CXCR4轴的生物学效应得以增强;CXCR4拮抗的rMSCs在分化中神经细胞特异性标志物NSE和GFAP的表达降低,表明SDF-1/CXCR4轴在rMSCs定向神经分化修复缺血缺氧脑损伤中具有重要的调控作用。 展开更多
关键词 间充质干细胞 细胞分化 基质细胞衍生因子-1Α CXC趋化因子受体4
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