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持续高表达CXC趋化因子受体-4重组慢病毒颗粒的包装鉴定及细胞迁移
被引量:
1
1
作者
王奇
冯世庆
+4 位作者
孔晓红
刘畅
张彬
张亮
张衍军
《中华实验外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期605-608,共4页
目的观察持续高表达CXC趋化因子受体_4(CXCR4)慢病毒颗粒在细胞迁移的作用。方法从大鼠大脑组织提取总RNA,逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)得到大鼠cDNA文库,以cDNA为模板,经过PCR获得CXCR4基因,测序正确后连接到pCDHl一MCS—EFl...
目的观察持续高表达CXC趋化因子受体_4(CXCR4)慢病毒颗粒在细胞迁移的作用。方法从大鼠大脑组织提取总RNA,逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)得到大鼠cDNA文库,以cDNA为模板,经过PCR获得CXCR4基因,测序正确后连接到pCDHl一MCS—EFl一copGFP(慢病毒载体质粒),与第3代慢病毒其余辅助质粒pMDLG/pRRE、pRsv.Rev及pVSV.G按照1:4:1:1共转染293T细胞包装慢病毒,超离慢病毒,测定病毒滴度,感染Hela细胞72h与14d后,分别观察Hela细胞荧光,实时定量聚合酶链反应(Real—timepcn)测定Hela细胞表达大鼠CXCR4mRNA含量,Transwell小室观察细胞迁移。结果测序CXCR4基因序列正确,并成功连接到pCDHl.MCS—EFl.copGFP,利用第3代慢病毒包装系统成功包装慢病毒,经超离慢病毒颗粒,流式细胞仪测定慢病毒滴度为7.89×10^5,持续观察Hela细胞荧光强度,Real.timePCR检测结果示Hela细胞表达大鼠CXCR4mRNA水平显著升高(72h为78.29倍,至14d为58.93倍),Transwell小室观察到高表达CXCR4的慢病毒颗粒感染组细胞迁移多(P〈0.05)。结论高效感染力并持续高表达CXCR4的慢病毒颗粒可持续促进细胞迁移,并有基质细胞衍生因子.1d(SDF一10L)浓度依赖性。
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关键词
CXC趋化因子受体-4
基质细胞衍生因子-
1
a
慢病毒
细胞迁移
原文传递
SDF-1/CXCR4轴通过调控间充质干细胞定向分化修复缺氧缺血性脑损伤
被引量:
11
2
作者
余勤
林洁
+6 位作者
刘丽珍
王艳
宣晓波
王标
单威
周丽萍
刘伟
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第8期1424-1430,共7页
目的:探讨基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)轴调控间充质干细胞定向分化、修复缺氧缺血性脑损伤的作用。方法:大鼠间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells...
目的:探讨基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)轴调控间充质干细胞定向分化、修复缺氧缺血性脑损伤的作用。方法:大鼠间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells,rMSCs)经缺氧培养不同时点(0h、6h、12h、24h、48h、72h)或SDF-1α(10μg/L)孵育后,采用RT-PCR、Western blotting和流式细胞术检测其表面CXCR4表达的变化;建立大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,运用RT-PCR和Western blotting检测造模后不同时点(1d、3d、5d、7d、14d、21d)大鼠脑部海马组织中SDF-1αmRNA转录和蛋白表达的改变情况;用AMD3100(CXCR4拮抗剂)拮抗rMSCs表面CXCR4后,免疫细胞化学和Western blotting检测rMSCs诱导向神经细胞分化中神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific eno-lase,NSE)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)等神经细胞特异性标志物的阳性率及表达变化情况。结果:低氧培养6 h及12 h的rMSCs CXCR4 mRNA及蛋白表达水平均较常氧培养组明显增加(P<0.01),10μg/L SDF-1α孵育后rMSCs的CXCR4表达水平明显增加(P<0.01);缺氧缺血性脑损伤模型的大鼠脑内SDF-1α蛋白表达显著增加(P<0.01);5 mg/L AMD3100处理后的rMSCs在向神经细胞诱导分化中NSE和GFAP蛋白的表达明显减少。结论:微小剂量的SDF-1α可诱导低氧培养的rMSCs表面CXCR4的表达,而在缺氧缺血性脑损伤模型的大鼠脑内SDF-1α表达增加,从而使SDF-1/CXCR4轴的生物学效应得以增强;CXCR4拮抗的rMSCs在分化中神经细胞特异性标志物NSE和GFAP的表达降低,表明SDF-1/CXCR4轴在rMSCs定向神经分化修复缺血缺氧脑损伤中具有重要的调控作用。
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关键词
间充质干细胞
细胞分化
基质细胞衍生因子-
1
Α
CXC趋化因子受体4
下载PDF
职称材料
题名
持续高表达CXC趋化因子受体-4重组慢病毒颗粒的包装鉴定及细胞迁移
被引量:
1
1
作者
王奇
冯世庆
孔晓红
刘畅
张彬
张亮
张衍军
机构
天津医科大学总医院骨科
出处
《中华实验外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期605-608,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(81070982)
天津市应用基础及前沿技术研究计划重点项目(IOJCZDJCl8800)
文摘
目的观察持续高表达CXC趋化因子受体_4(CXCR4)慢病毒颗粒在细胞迁移的作用。方法从大鼠大脑组织提取总RNA,逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)得到大鼠cDNA文库,以cDNA为模板,经过PCR获得CXCR4基因,测序正确后连接到pCDHl一MCS—EFl一copGFP(慢病毒载体质粒),与第3代慢病毒其余辅助质粒pMDLG/pRRE、pRsv.Rev及pVSV.G按照1:4:1:1共转染293T细胞包装慢病毒,超离慢病毒,测定病毒滴度,感染Hela细胞72h与14d后,分别观察Hela细胞荧光,实时定量聚合酶链反应(Real—timepcn)测定Hela细胞表达大鼠CXCR4mRNA含量,Transwell小室观察细胞迁移。结果测序CXCR4基因序列正确,并成功连接到pCDHl.MCS—EFl.copGFP,利用第3代慢病毒包装系统成功包装慢病毒,经超离慢病毒颗粒,流式细胞仪测定慢病毒滴度为7.89×10^5,持续观察Hela细胞荧光强度,Real.timePCR检测结果示Hela细胞表达大鼠CXCR4mRNA水平显著升高(72h为78.29倍,至14d为58.93倍),Transwell小室观察到高表达CXCR4的慢病毒颗粒感染组细胞迁移多(P〈0.05)。结论高效感染力并持续高表达CXCR4的慢病毒颗粒可持续促进细胞迁移,并有基质细胞衍生因子.1d(SDF一10L)浓度依赖性。
关键词
CXC趋化因子受体-4
基质细胞衍生因子-
1
a
慢病毒
细胞迁移
Keywords
CXC
chemokine
receptor-4
stromal
cell
derived
factor
-1
ct
Lentivirus
cell
mi-gration
分类号
R [医药卫生]
原文传递
题名
SDF-1/CXCR4轴通过调控间充质干细胞定向分化修复缺氧缺血性脑损伤
被引量:
11
2
作者
余勤
林洁
刘丽珍
王艳
宣晓波
王标
单威
周丽萍
刘伟
机构
浙江中医药大学
浙江大学医学院附属第一医院骨髓移植中心
浙江中医药大学
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第8期1424-1430,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30940028)
浙江省科技计划项目(No.2010C33024)
浙江省医药卫生科技计划(No.2010KYA147)
文摘
目的:探讨基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)轴调控间充质干细胞定向分化、修复缺氧缺血性脑损伤的作用。方法:大鼠间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells,rMSCs)经缺氧培养不同时点(0h、6h、12h、24h、48h、72h)或SDF-1α(10μg/L)孵育后,采用RT-PCR、Western blotting和流式细胞术检测其表面CXCR4表达的变化;建立大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,运用RT-PCR和Western blotting检测造模后不同时点(1d、3d、5d、7d、14d、21d)大鼠脑部海马组织中SDF-1αmRNA转录和蛋白表达的改变情况;用AMD3100(CXCR4拮抗剂)拮抗rMSCs表面CXCR4后,免疫细胞化学和Western blotting检测rMSCs诱导向神经细胞分化中神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific eno-lase,NSE)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)等神经细胞特异性标志物的阳性率及表达变化情况。结果:低氧培养6 h及12 h的rMSCs CXCR4 mRNA及蛋白表达水平均较常氧培养组明显增加(P<0.01),10μg/L SDF-1α孵育后rMSCs的CXCR4表达水平明显增加(P<0.01);缺氧缺血性脑损伤模型的大鼠脑内SDF-1α蛋白表达显著增加(P<0.01);5 mg/L AMD3100处理后的rMSCs在向神经细胞诱导分化中NSE和GFAP蛋白的表达明显减少。结论:微小剂量的SDF-1α可诱导低氧培养的rMSCs表面CXCR4的表达,而在缺氧缺血性脑损伤模型的大鼠脑内SDF-1α表达增加,从而使SDF-1/CXCR4轴的生物学效应得以增强;CXCR4拮抗的rMSCs在分化中神经细胞特异性标志物NSE和GFAP的表达降低,表明SDF-1/CXCR4轴在rMSCs定向神经分化修复缺血缺氧脑损伤中具有重要的调控作用。
关键词
间充质干细胞
细胞分化
基质细胞衍生因子-
1
Α
CXC趋化因子受体4
Keywords
Mesenchymal
stem
cell
s
cell
differentiation
stromal
cell
-
derived
factor
-
1
ct
CXC
chemokinereceptor
4
分类号
R741.05 [医药卫生—神经病学与精神病学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
持续高表达CXC趋化因子受体-4重组慢病毒颗粒的包装鉴定及细胞迁移
王奇
冯世庆
孔晓红
刘畅
张彬
张亮
张衍军
《中华实验外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
1
原文传递
2
SDF-1/CXCR4轴通过调控间充质干细胞定向分化修复缺氧缺血性脑损伤
余勤
林洁
刘丽珍
王艳
宣晓波
王标
单威
周丽萍
刘伟
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
11
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
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