不同品种猪肌肉组织miR-1和miR-133基因的表达分析 被引量：14

1

作者 习欠云 周莲莲 +8 位作者 李虹仪 韩东 束刚 王松波 高萍 朱晓彤 王修启 江青艳 张永亮 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期843-848,共6页

本研究旨在探讨猪miR-1和miR-133基因在不同品种猪肌肉组织中的表达情况。试验以180日龄的蓝塘猪、长白猪以及大花白猪的背最长肌为材料,采用Stem-loop实时定量RT-PCR法检测miR-1和miR-133在长白猪、大花白猪及蓝塘猪背最长肌组织中的... 本研究旨在探讨猪miR-1和miR-133基因在不同品种猪肌肉组织中的表达情况。试验以180日龄的蓝塘猪、长白猪以及大花白猪的背最长肌为材料,采用Stem-loop实时定量RT-PCR法检测miR-1和miR-133在长白猪、大花白猪及蓝塘猪背最长肌组织中的表达情况。结果表明,在蓝塘猪中,miR-1的表达量分别为长白猪和大花白猪的4.7和6.4倍,前者与后两者之间表达水平有显著的差异(P<0.05),而后两者之间表达量差异不显著(P>0.05);同样,miR-133在蓝塘猪中的表达量最高,其次为长白猪,两者分别是大花白猪的7.2和5.7倍,且差异显著(P<0.05),但蓝塘猪与长白猪之间差异不显著(P>0.05)。miR-1和miR-133在不同品种猪中存在特异性表达,提示可能与肌肉发育性状相关。 展开更多

关键词 stem-loop rt-pcr 肉质性状 MIR-1 miR-133 表达分析

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miRNA qPCR检测方法研究进展及其应用 被引量：4

2

作者 冯世鹏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期59-69,共11页

miRNA是目前国际研究的热点领域之一,而miRNA表达检测是miRNA研究的基础内容。针对miRNA序列短小的特点,开发出了多种检测方法,其中miRNA qPCR定量检测是应用最广泛的方法。就miRNA抽提,miRNA qPCR定量检测原理及miRNA qPCR定量检测流... miRNA是目前国际研究的热点领域之一,而miRNA表达检测是miRNA研究的基础内容。针对miRNA序列短小的特点,开发出了多种检测方法,其中miRNA qPCR定量检测是应用最广泛的方法。就miRNA抽提,miRNA qPCR定量检测原理及miRNA qPCR定量检测流程包括引物设计、反应体系设置、内参基因筛选等方面进行了深入探讨,并对miRNA定量检测研究方法的发展趋势进行了展望,以期为研究者进行miRNA qPCR定量检测提供参考。 展开更多

关键词 MIRNA stem-loop rt-pcr poly(A)加尾法rt-pcr 延伸法rt-pcr 数字pcr

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茎-环RT-PCR法定量miRNA-421的引物设计 被引量：6

3

作者 赵丽 杨洋 温传俊 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期83-88,共6页

本研究旨在通过茎-环RT-PCR法,建立有效定量miRNA-421的PCR方法,探讨该方法在定量检测miRNA方面的应用价值.利用miRBase数据库获得miRNA-421的成熟序列.设计3条miRNA-421特异性反转录引物,Q-PCR上游引物及通用下游引物.通过10倍梯度稀释... 本研究旨在通过茎-环RT-PCR法,建立有效定量miRNA-421的PCR方法,探讨该方法在定量检测miRNA方面的应用价值.利用miRBase数据库获得miRNA-421的成熟序列.设计3条miRNA-421特异性反转录引物,Q-PCR上游引物及通用下游引物.通过10倍梯度稀释RNA后特异性反转录,RT-PCR分析不同引物互相配对PCR的扩增曲线及熔融曲线,鉴定出特异性好、扩增效率高的引物.为进一步鉴定引物的有效性,过表达miRNA-421,用鉴定的成熟引物定量扩增.利用茎-环RT-PCR法设计、鉴定出miRNA-421引物:421RT7、F19,且这对引物特异性好、扩增效率高.通过设计引物组合,茎-环RT-PCR法能够很好地用于miRNA定量分析,并具有准确、快速、节约成本的优点. 展开更多

关键词 茎-环rt-pcr miRNA-421 引物设计

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猪miR-101表达特性分析 被引量：2

4

作者 杨秀芹 万洪宇 +3 位作者 王金奎 韩丽鑫 杜欣 禚建树 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期74-80,共7页

miRNA是一类长20～25 nt内源性、单链、非编码小分子RNA，通过调控靶基因转录后表达参与机体各项生命活动。人类miR-101是重要疾病相关miRNA，参与维持机体健康、抵御疾病。目前有关猪miR-101研究尚不多见，为确定其在猪抗病毒免疫反应... miRNA是一类长20～25 nt内源性、单链、非编码小分子RNA，通过调控靶基因转录后表达参与机体各项生命活动。人类miR-101是重要疾病相关miRNA，参与维持机体健康、抵御疾病。目前有关猪miR-101研究尚不多见，为确定其在猪抗病毒免疫反应中作用，研究利用stem-loop RT-PCR方法构建猪miR-101组织表达谱和poly（I：C）诱导表达谱。结果表明，猪miR-101在肝脏组织中表达量最高，高浓度poly（I：C）能有效抑制猪miR-101转录表达。为深入阐明miR-101在猪抗病毒免疫反应中作用奠定基础，为培育高抗病性猪品种（系）提供参考。 展开更多

关键词 猪 miR-101 poly(I:C) stem loop rt-pcr 表达

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茎-环RT-qPCR法定量检测羊背最长肌3种miRNA的表达 被引量：2

5

作者 王霄鹏 宋雪梅 +5 位作者 姜俊芳 吴建良 石放雄 周水良 李慧 蒋永清 《畜牧与兽医》 北大核心 2015年第12期31-35,共5页

本研究建立了一种可避免基因组污染的茎—环RT-q PCR miRNA定量检测方法。利用该方法可准确、快速、低成本地检测湖羊和杜泊羊×湖羊杂交羊肌肉中miR-1、miR-133和oar-miR-299-5p的表达。以6月龄雄性湖羊和杜泊羊×湖羊杂交羊F... 本研究建立了一种可避免基因组污染的茎—环RT-q PCR miRNA定量检测方法。利用该方法可准确、快速、低成本地检测湖羊和杜泊羊×湖羊杂交羊肌肉中miR-1、miR-133和oar-miR-299-5p的表达。以6月龄雄性湖羊和杜泊羊×湖羊杂交羊F1代各4只的背最长肌样品为研究对象,利用特异性茎环反转录引物以及miRNA上下游引物对3种miRNA进行基于SYBR GreenⅠ的荧光定量PCR检测,并以5S rRNA为内参基因,2-ΔΔCt法检测miRNA的相对表达量。结果显示:6月龄雄性湖羊背最长肌中oar-miR-299-5p表达量极显著高于6月龄雄性杜泊羊×湖羊杂交羊(P<0.01),提示oar-miR-299-5p可能与湖羊早期背最长肌的生长发育相关。 展开更多

关键词 湖羊 肌肉 MIRNA 茎-环rt-qpcr

原文传递

小发夹RNA在稀有鮈鲫胚胎中的表达 被引量：1

6

作者 杨琳 汪亚平 +1 位作者 廖兰杰 朱作言 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期1031-1036,共6页

由小的干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来快速发展的一种转录后基因沉默方法,已被广泛的应用于基因功能的研究,基因网络调控的探讨以及疾病的治疗等方面。多数的siRNA表达载体依赖RNA... 由小的干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来快速发展的一种转录后基因沉默方法,已被广泛的应用于基因功能的研究,基因网络调控的探讨以及疾病的治疗等方面。多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶Ⅲ启动子中的一种,操纵一段短发夹结构RNA(Small hairpin RNA,shRNA)在细胞或体内表达。这一类启动子主要包括人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子等。为了探明鱼类自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子是否能有效驱动shRNA在鱼体内表达,从而更好地利用RNAi进行鱼类基因功能和抗病毒研究,研究利用斑马鱼的H1和U6启动子以及草鱼的H1启动子,以草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)外衣壳蛋白VP7基因为靶基因,以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为报告基因,分别构建了三个shRNA表达载体:pZH1siGCRV-CMVeGFP、pZU6siGCRV-CMVeGFP和pCH1siGCRV-CMVeGFP。通过显微注射将三种表达载体分别导入稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)受精卵中。由于siRNA片段很短,其表达检测非常困难,研究采用stem-loop RT-PCR方法,对稀有鮈鲫胚胎发育不同时期的shRNA表达进行了检测。研究结果表明,采用的三种鱼类自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子均能有效驱动GCRVsiRNA的表达;在取样的各个胚胎发育时期均能检测到GCRV siRNA的表达;stem-loop RT-PCR方法可以便捷检测siRNA的表达。研究构建的鱼类胚胎siRNA有效持续表达载体,建立的简易快捷siRNA检测方法,为进一步的抗GCRV转基因鱼研制以及siRNA的病毒复制干扰机制研究奠定了重要基础并提供有力的技术支撑。 展开更多

关键词 RNA干扰 小干扰RNA 小发夹RNA stem-looprt-pcr 草鱼出血病病毒

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茎环RT-PCR检测马立克氏病毒感染鸡相关miRNA方法的建立 被引量：1

7

作者 陈燕梅 连玲 +2 位作者 曲鲁江 刘长军 杨宁 《中国家禽》 北大核心 2011年第9期9-13,共5页

本研究旨在建立一种检测马立克氏病毒人工感染鸡相关miRNA表达变化的RT-PCR方法,探讨该方法在miRNA定量检测方面的应用价值。试验选择6个具有典型肿瘤结节的马立克氏病毒感染脾脏样品作为研究材料,同时采用6个正常鸡的脾脏样品作为对照... 本研究旨在建立一种检测马立克氏病毒人工感染鸡相关miRNA表达变化的RT-PCR方法,探讨该方法在miRNA定量检测方面的应用价值。试验选择6个具有典型肿瘤结节的马立克氏病毒感染脾脏样品作为研究材料,同时采用6个正常鸡的脾脏样品作为对照材料。利用特异的茎环反转录引物以及miRNA上下游引物对gga-miR-181a进行基于SYBR GreenⅠ的荧光定量PCR检测,并以U6为内参基因、2-ΔΔCt法检测gga-miR-181a的相对表达量。结果,在马立克氏病毒人工感染鸡的脾脏和正常鸡的脾脏中成功检测出gga-miR-181a-1的表达。证明茎环RT-PCR法能用于检测马立克氏病毒人工感染鸡的相关miRNA,并具有准确、快速、节约成本的优点。 展开更多

关键词 鸡 马立克氏病毒 MIRNA 茎环rt-pcr

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bta-miR-377琼脂糖凝胶电泳条件优化 被引量：1

8

作者 郝琴琴 任静 +1 位作者 成俊丽 李鹏飞 《山西农业科学》 2022年第5期709-713,共5页

bta-miR-377与下丘脑分泌的可卡因苯丙胺调节转录肽(Cocaine and amphetamine regulated transcript peptide,CART)存在靶向结合关系。为分析bta-miR-377在牛下丘脑组织中的表达情况,为后续探讨bta-miR-377与CART相互作用进而影响牛卵... bta-miR-377与下丘脑分泌的可卡因苯丙胺调节转录肽(Cocaine and amphetamine regulated transcript peptide,CART)存在靶向结合关系。为分析bta-miR-377在牛下丘脑组织中的表达情况,为后续探讨bta-miR-377与CART相互作用进而影响牛卵泡发育的作用机制奠定基础,经Trizol法提取牛下丘脑总RNA,采用茎环结构法设计特异性引物,并利用半定量RT-PCR技术克隆bta-miR-377,观察不同条件琼脂糖凝胶电泳后Marker和目的条带的分离情况,其中凝胶浓度为2.0%、2.5%;电压为100、80 V;时间为40、60、80 min;同时通过Image J软件对不同条件下获得的bta-miR-377条带进行灰度值分析,结合电泳结果确定最佳分离条件。结果显示,利用茎环结构法能够达到延长bta-miR-377片段的目的,且特异性强;凝胶浓度为2.5%、电压为80 V、时间为80 min时,bta-miR-377条带分离效果好且表达量高,该条件下条带的灰度值与其他组相比差异显著,与电泳分析结果一致,说明低浓度凝胶的分辨率低,长时间高压会导致DNA降解进而使条带弥散,而适当电压下电泳时间过短会使DNA分子无法聚集而使条带过宽,说明适宜的电泳条件是鉴定目的 miRNA表达的关键。综上可见,bta-miR-377在牛下丘脑中有表达,丰富了动物生殖生理学中下丘脑-垂体-性腺轴的内分泌调控理论。 展开更多

关键词 bta-miR-377 茎环结构法 半定量rt-pcr 琼脂糖凝胶 条件优化

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特异性逆转录microRNA-505的高效茎环引物的设计

9

作者 熊黎 仝莉 +3 位作者 王茂春 周宇荀 李凯 肖君华 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第27期5225-5229,共5页

目的:构建一个高效且特异性的逆转录茎环引物,以准确定量检测小鼠的mi RNA-505基因,同时探讨茎环引物的结构对逆转录效率的影响。方法:规律性地改变通用茎环引物的茎部和环部的碱基结构,再进行不同的组合,利用逆转录-聚合酶链式反应(Rev... 目的:构建一个高效且特异性的逆转录茎环引物,以准确定量检测小鼠的mi RNA-505基因,同时探讨茎环引物的结构对逆转录效率的影响。方法:规律性地改变通用茎环引物的茎部和环部的碱基结构,再进行不同的组合,利用逆转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)技术,探寻效率最高的茎环引物。结果:当固定茎部结构为14对碱基,规律性改变环部碱基个数(15,18,21),经RT-PCR检测的CT值无差异,均为28.5;当固定环部结构为21个碱基,CT值随茎部碱基对(8,11,14)规律性地延长而逐渐增大;当环部结构为21个碱基,茎部结构为8对碱基时CT值最小,为26.7。结论:环部结构对茎环引物的效率无贡献;当环部结构为21个碱基,茎部结构为8对碱基时,茎环引物的效率和特异性是最佳的,适用于准确检测小家鼠的mi RNA-505基因。 展开更多

关键词 茎环引物 MI R-505 逆转录 逆转录-聚合酶链式反应(rt-pcr)

原文传递

盐芥miRNAs耐盐表达研究

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作者 刘冉 周立敬 +4 位作者 周宜君 高飞 马亭亭 隋欣 刘楠 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期665-669,共5页

以盐生植物盐芥为实验材料,选择经过Solexa测序筛选的盐芥tsa-miR172a和tsa-miR398b为目标基因,采用茎环的反转录PCR(stem-loop RT-PCR)方法分析其在盐芥根中的耐盐表达模式,以探讨盐芥miRNAs的stem-loop RT-PCR验证体系。结果显示,经过... 以盐生植物盐芥为实验材料,选择经过Solexa测序筛选的盐芥tsa-miR172a和tsa-miR398b为目标基因,采用茎环的反转录PCR(stem-loop RT-PCR)方法分析其在盐芥根中的耐盐表达模式,以探讨盐芥miRNAs的stem-loop RT-PCR验证体系。结果显示,经过300mmol.L-1 NaCl处理72h后,与对照相比,盐芥根中的tsa-miR172a上调表达,tsa-miR398b下调表达。用stem-loop RT-PCR方法进行tsa-miR172a和tsa-miR398b扩增,对其电泳图进行光密度分析结果显示,盐胁迫处理与对照的比值分别为1.8和0.55,Solexa测序结果分别为2.00和0.44,说明两种方法所得结果基本一致。表明该研究建立了盐芥miRNAs的stem-loop RT-PCR验证体系:每个miRNA设计3个引物(miRNA stem-loop引物、miRNA正向引物和miRNA通用反向引物);扩增条件为94℃2min,94℃15s,55℃45s,23个循环。 展开更多

关键词 盐芥 MIRNAS 茎环的反转录pcr 盐胁迫

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miR-608在成釉细胞瘤中的表达及意义 被引量：2

11

作者 陈井阳 钟鸣 +1 位作者 沈文静 刘洁 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期724-728,共5页

目的研究mi R-608在成釉细胞瘤(AB)中的表达及意义。方法利用实时茎环定量PCR方法检测mi R-608在26例人成釉细胞瘤(AB组)及17例瘤旁组织(对照组)中的表达水平,比较mi R-608在AB组与对照组,原发AB组与复发AB组,以及AB不同临床病理特征的... 目的研究mi R-608在成釉细胞瘤(AB)中的表达及意义。方法利用实时茎环定量PCR方法检测mi R-608在26例人成釉细胞瘤(AB组)及17例瘤旁组织(对照组)中的表达水平,比较mi R-608在AB组与对照组,原发AB组与复发AB组,以及AB不同临床病理特征的组间差异。结果 AB中mi R-608表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);复发组mi R-608的相对表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。mi R-608表达水平在不同年龄、性别和病理分型患者中均无统计学差异(P>0.05)。结论人AB组织中mi R-608表达水平显著下降,可能与该肿瘤的发生和复发相关。 展开更多

关键词 成釉细胞瘤 微小核糖核酸 608 实时茎环定量 pcr 肿瘤复发

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陆地棉种子发育过程中microRNA的挖掘与功能研究 被引量：6

12

作者 Wang Gaskin 余道乾 杜雄明 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期81-86,共6页

microRNAs(miRNAs)广泛参与调控植物的生长和发育,但这类分子是否对棉花胚珠和纤维的生长发育起到重要的作用,还有待验证。对这些小分子的认识,一般先要从序列信息的获得上开始。应用基因芯片对TM-1+5 DPA(开花后5 d)胚珠总RNA进行了mi... microRNAs(miRNAs)广泛参与调控植物的生长和发育,但这类分子是否对棉花胚珠和纤维的生长发育起到重要的作用,还有待验证。对这些小分子的认识,一般先要从序列信息的获得上开始。应用基因芯片对TM-1+5 DPA(开花后5 d)胚珠总RNA进行了miRNA的筛选研究。结果显示,含有352个探针的芯片成功钓取到199个陆地棉miRNA,其中绝大多数为首次报道。此外,对miR399研究发现,它与纤维中磷的含量变化相关;miR169可能与干旱应激反应有关。 展开更多

关键词 陆地棉 基因芯片 MIRNA 茎环rt-pcr

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棉花miRNA表达量检测方法Stem-loop RT-PCR的建立 被引量：2

13

作者 胡广 王乐 +4 位作者 张振楠 唐叶 周璐璐 彭清忠 吴家和 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期2121-2127,共7页

为建立一套鉴定棉花miRNA表达丰度的分子技术,优化了Stem-loop RT-PCR方法,并通过分析棉花3个miRNA的表达谱来评价分析该技术体系的特性。首先设计3条引物(茎环特异性反转录引物、正向引物和通用反向引物),通过cDNA和RNA梯度稀释,分析... 为建立一套鉴定棉花miRNA表达丰度的分子技术,优化了Stem-loop RT-PCR方法,并通过分析棉花3个miRNA的表达谱来评价分析该技术体系的特性。首先设计3条引物(茎环特异性反转录引物、正向引物和通用反向引物),通过cDNA和RNA梯度稀释,分析引物的扩增效率和检测灵敏度。结果表明,Stem-loop RT-PCR方法中设计的引物具有较高的扩增效率和检测灵敏度,miR156和miR159扩增效率分别为102.0%和103.6%;并对不同miRNA分析其总RNA检测灵敏度,miR156和miR159的总RNA检测灵敏度差异较大,分别为20 ng和2 pg。同时,应用建立的棉花Stem-loop RT-PCR方法,成功地分析了Gh-miR156、Gh-miR159和Gh-miR5658在根茎叶中的表达量。由此可见,棉花Stem-loop RT-PCR方法具有灵敏度高、特异性强、成本较低和适用于一般实验室等优点,为棉花等植物miRNA相关研究提供了技术保证,加快了miRNA及其调控基因功能的研究步伐。 展开更多

关键词 stem-loop rt-pcr 棉花 MIRNA 茎环引物

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