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人尿激酶原cDNA在昆虫杆状病毒真核表达系统中的高效表达 被引量：6
1
作者 徐扬 张洪涛 +2 位作者 宓怡德 吴祥甫 胡美浩 《生物化学杂志》 CSCD 1993年第6期709-713,共5页
人尿激酶原(pro-urokinase,pro-UK)是一种新型溶栓剂,优于尿激酶,具有血纤维蛋白特异性。为了在昆虫杆状病毒表达系统中高效表达pro-UK,我们在pAc373基础上,插入野生型AcMNPV polyhedrin启动子区-7～1碱基序列,构建了一个高表达转移载体... 人尿激酶原(pro-urokinase,pro-UK)是一种新型溶栓剂,优于尿激酶,具有血纤维蛋白特异性。为了在昆虫杆状病毒表达系统中高效表达pro-UK,我们在pAc373基础上,插入野生型AcMNPV polyhedrin启动子区-7～1碱基序列,构建了一个高表达转移载体pAcYT。分别经三次克隆将pro-UK cDNA正向插入到转移载体pAc373或PAcYT的BarnHI-KpnI位点上。用LiPofectin将pAcyT-UKDNA或pAc373-UK DNA与AcMNPV DNA共转染到昆虫Sf9细胞中,空斑法筛出重组病毒阳性克隆株。高效表达结果是:1.ELISA法确定重组病毒Sf9细胞分泌表达产物pro-UK为96mg/L培养基上清,平板法测定溶圈活性为1600IU/mL培养基上清;2.亲和层析一步法纯化表达产物,回收率选70％,以上,比活约为60000IU/mg;3.纯化的pro-UK,无论是否经还原处理,其SDS-PAGE图谱均为相同的单一条带,MR 50000;4.Western blot与SDS-PAGE图谱吻合。 展开更多
关键词 昆虫 杆状病毒 表达 尿激酶原 CDNA
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乙型肝炎病毒表面抗原基因在昆虫体系中的表达 被引量：7
2
作者 龙綮新 王珣章 +5 位作者 谢伟东 何代芬 蓝德安 庞义 苏德明 蒲蛰龙 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第1期37-46,共10页
利用组建的苜蓿尺蠖核型多角体病毒(AcNPV)非融合蛋白基因转移载体将乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因成功地插入粉纹夜蛾(Tn)NPV中,HBsAg基因在感染了重组病毒的草地夜蛾(Spodontera frugiperda)离体细胞以及粉纹夜蛾和蓖麻蚕等虫体中... 利用组建的苜蓿尺蠖核型多角体病毒(AcNPV)非融合蛋白基因转移载体将乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因成功地插入粉纹夜蛾(Tn)NPV中,HBsAg基因在感染了重组病毒的草地夜蛾(Spodontera frugiperda)离体细胞以及粉纹夜蛾和蓖麻蚕等虫体中获得了表达,免疫电镜下观察到典型的乙型肝炎病毒表面抗原22um颗粒。感染重组病毒的蓖麻蚕预蛹每克蛹重可产HBsAg蛋白1.6μg。表达产物经DEAE-纤维素层析得到的HBsAg粗提物可作临床检测用,再经抗体亲和柱层析可得到纯的HBsAg。 展开更多
关键词 重组病毒 昆虫体系 HBsAg基因
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水胺硫磷对草地贪夜蛾细胞亚显微结构的影响 被引量：3
3
作者 周青春 余泽华 +2 位作者 王家坤 虢华珊 陈曲侯 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1995年第1期90-95,共6页
经电镜观察表明：４００ｐｐｍ水胺硫磷药剂处理草地贪夜蛾细胞３０ｍｉｎ时，线体内膜上的嵴开始部分离解，细胞内空泡、囊泡明显增多，该药剂处理１ｈ后，细胞核周腔开始部分膨大，核膜部分离解；随着药剂处理时间的延长，线粒体内膜... 经电镜观察表明：４００ｐｐｍ水胺硫磷药剂处理草地贪夜蛾细胞３０ｍｉｎ时，线体内膜上的嵴开始部分离解，细胞内空泡、囊泡明显增多，该药剂处理１ｈ后，细胞核周腔开始部分膨大，核膜部分离解；随着药剂处理时间的延长，线粒体内膜上的嵴渐渐消失，整个线粒体形成双囊体状结构，最后，有的线粒体解体．该药剂处理９ｈ后，部分细胞的核膜完全溶解，核质散追到细胞质中，上述结果表明，水胺硫磷不仅具有抑制昆虫体内乙酰胆碱酯酶（ＡｃｈＥ）的作用，而且还具有破坏昆虫细胞线粒体和核膜的作用． 展开更多
关键词 水胺硫磷 草地 夜蛾细胞 亚显微结构
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绿色荧光蛋白在秋黏虫细胞中的表达
4
作者 刘丽华 沈卫德 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期416-418,共3页
将绿色荧光蛋白基因编码区克隆到转移载体pBacPAK8,与杆状病毒BacPAK6共转染昆虫细胞,通过同源重组和筛选,构建了整合有绿色荧光蛋白基因的重组病毒。在昆虫细胞中表达的绿色荧光蛋白,在荧光显微镜下呈现绿光。这样,就可在细胞内通过监... 将绿色荧光蛋白基因编码区克隆到转移载体pBacPAK8,与杆状病毒BacPAK6共转染昆虫细胞,通过同源重组和筛选,构建了整合有绿色荧光蛋白基因的重组病毒。在昆虫细胞中表达的绿色荧光蛋白,在荧光显微镜下呈现绿光。这样,就可在细胞内通过监测其表达情况,以了解病毒在不同细胞中的感染情况。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 秋黏虫细胞 基因表达
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表达乙型肝炎病毒表面抗原基因又形成多角体的杆状病毒 被引量：2
5
作者 何代芬 王珣章 +5 位作者 谢伟东 陈茹 龙綮新 邓日强 蒲蜇龙 苏德明 《中国病毒学》 CSCD 1992年第4期389-396,共8页
用形成包含体(OCC^+)并能利用人工合成启动序列和多角体XIV启动子表达外源基因的转移载体质粒pSXIVVI^+X3,将乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因和多角体基因同时插入无包含体的粉纹夜蛾核型多角体病毒TnNPV-SVI-G基因组中,得到表达HBsAg... 用形成包含体(OCC^+)并能利用人工合成启动序列和多角体XIV启动子表达外源基因的转移载体质粒pSXIVVI^+X3,将乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因和多角体基因同时插入无包含体的粉纹夜蛾核型多角体病毒TnNPV-SVI-G基因组中,得到表达HBsAg基因又形成包含体(多角体)的重组毒侏TnNPV-HBs85-OCC^+。与利用野生型多角体启动子表达HBsAg基因的无包含体毒株TnNPV-HBsD4不同,TnNPV-HBs85-OCC^+由于具包含体,能以口服方式大规模感染粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)幼虫,且HBsAg基因在草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)离体细胞中的表达量要比前者高约37％,在虫体中的表达则更高。 展开更多
关键词 乙型肝炎 表面抗原 昆虫病毒
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日本血吸虫胞蚴的体外培养和操作初探
6
作者 江艳 龚仁敏 +5 位作者 杨艺 李小红 刘毅 朱传刚 陆珂 郑浩 《国际医学寄生虫病杂志》 CAS 2011年第3期158-162,共5页
目的探究一种体外培养日本血吸虫胞蚴的新方法，并通过体外注射，感染阴性钉螺，培养阳性钉螺。方法将日本血吸虫虫卵孵化的毛蚴与作为滋养层的草地夜蛾（Spodoptera frugiperda）卵巢细胞（庐细胞）共培养，观察毛蚴的生长情况，并拍... 目的探究一种体外培养日本血吸虫胞蚴的新方法，并通过体外注射，感染阴性钉螺，培养阳性钉螺。方法将日本血吸虫虫卵孵化的毛蚴与作为滋养层的草地夜蛾（Spodoptera frugiperda）卵巢细胞（庐细胞）共培养，观察毛蚴的生长情况，并拍摄生长照片。用显微注射针将3～5只母胞蚴注射到钉螺体内，计算钉螺的存活率及尾蚴的阳性率，用钉螺逸出的尾蚴人工感染昆明鼠，检测尾蚴的活力，用组织化学染色法和PCR方法鉴定尾蚴的相关基因特性。结果毛蚴培养至第12小时观察到纤毛板已脱落，培养2～3d的虫体呈不断的伸缩运动，此后母胞蚴维持该状态并不转化成子胞蚴。3次实验的钉螺存活率依次为24．72％、28．23％和57．89％，活螺阳性率依次为4．55％、8．57％和14．29％。阳性钉螺释放的尾蚴具有感染性，且具有与日本血吸虫相同的基因特性。结论体外培养毛蚴通过显微注射可以人工感染钉螺并逸出有感染活力的尾蚴，为日本血吸虫幼虫的体外操作提供一种新的方法。 展开更多
关键词 日本血吸虫 spodopterafrugiperda卵巢细胞 钉螺 显微注射
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人α型肿瘤坏死因子基因在昆虫细胞中的表达 被引量：2
7
作者 李晓平 李元 +1 位作者 刘菊萍 吴旻 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期73-76,共4页
将人肿瘤坏死因子α（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ ＦａｃｔｏｒαＴＮＦ－α）ｃＤＮＡ片段克隆到转移载体ｐＡｃ６１０上，然后与苜蓿尺蠖核型多角体病毒（Ａｕｔｏｇｒｏｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｐｏｌ... 将人肿瘤坏死因子α（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ ＦａｃｔｏｒαＴＮＦ－α）ｃＤＮＡ片段克隆到转移载体ｐＡｃ６１０上，然后与苜蓿尺蠖核型多角体病毒（Ａｕｔｏｇｒｏｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｐｏｌｙｈｅｄｒｉｎ Ｖｉｒｕｓ，ＡｃＮＰＶ）ＣＮＡ共转染草地贪夜蛾细胞（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒｓ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｓｆ２１，获得含ｈＴＮＦ－α为１．０×１．＾４ｕ／１０＾６细胞：同时。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 Α基因 基因表达 昆虫细胞
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