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前列腺特异性膜抗原新型剪接变异体PSM-E在外周血的定量表达 被引量：4
1
作者 瞿虎 陈羽 +2 位作者 丘少鹏 毛晓鹏 郭胜杰 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期294-298,共5页
【目的】检测分析前列腺特异性膜抗原(PSMA)及其新型剪接变异体(PSM-E)在前列腺癌(PCA)及良性前列腺增生(BPH)患者外周血中的表达,探讨其意义。【方法】通过实时荧光定量PCR方法对PSM-E、PSMA在前列腺癌(53例)和前列腺增生(79例)两组患... 【目的】检测分析前列腺特异性膜抗原(PSMA)及其新型剪接变异体(PSM-E)在前列腺癌(PCA)及良性前列腺增生(BPH)患者外周血中的表达,探讨其意义。【方法】通过实时荧光定量PCR方法对PSM-E、PSMA在前列腺癌(53例)和前列腺增生(79例)两组患者外周血中定量表达,分析其差异。【结果】PSM-E相对表达量在PCA组(-8.22±0.32)高于BPH组(-9.99±0.41),P<0.001;PSMA相对表达量在PCA组(-12.51±0.31)高于BPH组(-13.72±0.48),差异有统计学意义,P<0.05;PCA组和BPH组内PSMA与PSM-E相对表达量有相关性(r=0.36,P<0.05;r=0.65,P<0.01),与血清PSA均不相关。【结论】外周血定量检测PSM-E表达差异可用于区分良性前列腺增生和前列腺癌;与PSMA相比PSM-E表达量更高,其检测的灵敏度更高,PSM-E诊断前列腺癌的敏感性和特异性更好。 展开更多
关键词 前列腺特异性膜抗原 PSM—E 剪接变异体 前列腺癌 荧光定量PCR
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分析PSM-E和PSMA在预测前列腺癌生化复发中的价值 被引量：1
2
作者 张俊隆 陈羽 +1 位作者 丘少鹏 严亮 《国际医药卫生导报》 2015年第15期2104-2107,共4页
目的分析前列腺特异性膜抗原（PSMA）及其新型剪接变异体（PSM-E）在预测前列腺癌患者生化复发上的作用。方法选取行前列腺癌根治术，影像学资料未提示转移而Gleason评分〉7分的局限性前列腺癌患者15例，荧光定量PCR检测PSM-E和PSMA在... 目的分析前列腺特异性膜抗原（PSMA）及其新型剪接变异体（PSM-E）在预测前列腺癌患者生化复发上的作用。方法选取行前列腺癌根治术，影像学资料未提示转移而Gleason评分〉7分的局限性前列腺癌患者15例，荧光定量PCR检测PSM-E和PSMA在术前外周血及切出肿瘤组织中的RNA表达，分析外周血及组织中PSM-E和PSMA相对表达的差异。术后随访患者前列腺特异性抗原（PSA）的变化。结果PSM-E和PSMA在前列腺癌组织中表达高于外周血，差异具有统计学意义（P〈0．01）。在前列腺癌组织中，PSM-E的表达明显低于PSMA；在前列腺癌患者的外周血中，PSM-E的表达明显高于PSMA，差异具有统计学意义（P〈0．01）。外周血PSM-E和PSMA表达阳性的患者术后生化复发率为66．7％（8／12），远处转移率为25．0％（3／12），均高于表达阴性的患者（0．O％，0／3），3例远处转移者表现为骨转移。结论在前列腺癌患者中，外周血检测PSM-E与PSMA均能地作为预测前列腺癌生化复发的指标。 展开更多
关键词 前列腺特异性膜抗原 微转移 剪接变异体 生化复发
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乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白4基因剪切体HBeBP4A的克隆与原核表达
3
作者 张健康 郭江 +6 位作者 成军 伦永志 王丹琼 赵龙凤 蓝贤勇 洪源 毛羽 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2007年第6期348-351,371,共5页
目的:克隆乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白未知功能新基因HBeBP4的剪切体基因HBeBP4A,构建其原核表达载体,诱导在大肠埃希菌中表达。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术及生物信息学(bioinformat-ics)技术从HepG2细胞提取的cDNA模板中... 目的:克隆乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白未知功能新基因HBeBP4的剪切体基因HBeBP4A,构建其原核表达载体,诱导在大肠埃希菌中表达。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术及生物信息学(bioinformat-ics)技术从HepG2细胞提取的cDNA模板中扩增获得HBeBP4基因的剪切体基因HBeBP4A,选用pGEM-T-easy载体进行TA克隆,通过PCR、限制性酶切分析及测序进行鉴定,再将其亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,转化进BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导HBeBP4A融合蛋白的表达,表达产物进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,考马斯亮蓝染色,以抗-His的单克隆抗体进行Western blotting免疫印迹分析鉴定证实表达蛋白的特异性。结果:成功扩增出HBeBP4剪切体基因HBeBP4A,并将其插入pET-32a(+)原核表达载体,经BL21(DE3)受体菌转化、IPTG诱导、SDS-PAGE分析获得了HBeBP4A重组蛋白的表达,Western blotting证实了重组蛋白表达的特异性。结论:发现了乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白4(HBeBP4)基因的剪切体HBeBP4A,构建了pET-32a(+)-HBeBP4A原核表达载体,并利用大肠埃希菌原核表达系统成功获得了pET-32a(+)-HBeBP4A重组蛋白的表达。 展开更多
关键词 E抗原 结合蛋白 剪切体 生物信息学 基因克隆 原核表达
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HBxAg反式调节基因11剪切体的克隆化及生物信息学分析
4
作者 尹丽 林原 +1 位作者 唐泽耀 成军 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期183-186,共4页
目的克隆乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白反式调节的靶基因11(XTP11),获得未知功能的新基因-XTP11剪切体,对其进行生物信息学分析,探讨其结构和功能。方法从肝母细胞瘤细胞系HepG2中提取总RNA,逆转录为cDNA后,设计特异性引物克隆XTP11剪切体,生... 目的克隆乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白反式调节的靶基因11(XTP11),获得未知功能的新基因-XTP11剪切体,对其进行生物信息学分析,探讨其结构和功能。方法从肝母细胞瘤细胞系HepG2中提取总RNA,逆转录为cDNA后,设计特异性引物克隆XTP11剪切体,生物信息学技术获得编码序列、物理化学性质、蛋白质结构和功能等基本信息。结果成功扩增出XTP11剪切体基因,生物信息学分析推定ORF为1 314个核苷酸,编码产物为437个氨基酸残基。结论此文发现并鉴定了HBV XTP11剪切体,为阐明其在HBV X蛋白致病机制中的作用提供新的研究线索。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 剪切体 克隆化 生物信息学
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HBeAg结合蛋白4剪切体HBeBP4A基因酵母表达载体的构建及表达研究
5
作者 张健康 成军 +3 位作者 郭江 刘春艳 赵龙凤 洪源 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期213-215,共3页
目的在真核生物酵母细胞中表达乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白4基因剪切体HBeBP4A基因。方法以pcDNATM3.1/myc-HisA-HBeBP4A重组质粒作为模板,经RT-PCR扩增HBeBP4A基因,克隆到pGEM-T载体中并测序鉴定,酶切回收后连接到酵母表达质粒pGBKT7中... 目的在真核生物酵母细胞中表达乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白4基因剪切体HBeBP4A基因。方法以pcDNATM3.1/myc-HisA-HBeBP4A重组质粒作为模板,经RT-PCR扩增HBeBP4A基因,克隆到pGEM-T载体中并测序鉴定,酶切回收后连接到酵母表达质粒pGBKT7中并转化酵母AH109,色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落,提取酵母蛋白质,行SDS-PAGE电泳和Western blotting分析。结果成功扩增出HBeBP4A基因,测序结果符合GenBank报告序列。酶切回收的HBeBP4A基因片段成功克隆入酵母表达载体pGBKT7并转化入酵母细胞AH109中,Western blotting分析显示该基因在酵母细胞中表达,表达产物相对分子量为61.37kD。结论成功构建了HBeBP4A酵母表达载体,并在酵母细胞中表达。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 肝炎e抗原 乙型 剪切体 基因表达
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HBeAg结合蛋白4基因剪切体HBeBP4A的克隆化
6
作者 张健康 郭江 +6 位作者 成军 王丹琼 伦永志 赵龙凤 蓝贤勇 洪源 毛羽 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2006年第15期1462-1465,共4页
目的:克隆HBeAg结合蛋白未知功能新基因 HBeBP4的剪切体基因HBeBP4A,构建其真核表达载体,并应用生物信息学初步探讨其结构及功能．方法:应用PCR技术从HepG2细胞提取的cDNA扩增HBeBP4基因的剪切体基因 HBeBP4A,选用pGEM-Teasy载体进行TA... 目的:克隆HBeAg结合蛋白未知功能新基因 HBeBP4的剪切体基因HBeBP4A,构建其真核表达载体,并应用生物信息学初步探讨其结构及功能．方法:应用PCR技术从HepG2细胞提取的cDNA扩增HBeBP4基因的剪切体基因 HBeBP4A,选用pGEM-Teasy载体进行TA 克隆,通过PCR,限制性酶切分析及测序进行鉴定,再将其亚克隆到真核表达载体 pcDNATM3．1/myc-HisA,通过PCR,限制酶切分析进行鉴定,并应用生物信息学初步分析其物理化学性质,蛋白质结构和功能．结果:成功扩增出HBeBP4剪切体基因,命名为HBeBP4A．利用生物信息学分析推定其 ORF为1104个核苷酸(nt),编码产物为367个氨基酸残基(aa)．结论:发现了HBeAg结合蛋白4(HBeBP4)基因的剪切体HBeBP4A,构建了pcDNATM3．1／ myc-HisA真核表达载体． 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒E抗原 结合蛋白 克隆化 剪切体:真核表达载体
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牦牛KLF8基因剪切体克隆及组织表达分析
7
作者 林森 林亚秋 +3 位作者 朱江江 柏雪 江明锋 王永 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第9期230-233,共4页
为了阐明KLF8基因在牦牛不同组织中的表达水平,试验采用RT-PCR方法克隆KLF8基因剪切体序列,利用荧光定量PCR技术检测该基因在不同组织中的表达丰度。结果表明:获得牦牛KLF8基因剪切体序列长度为1 246 bp(Gen Bank登录号为KX964629),其中... 为了阐明KLF8基因在牦牛不同组织中的表达水平,试验采用RT-PCR方法克隆KLF8基因剪切体序列,利用荧光定量PCR技术检测该基因在不同组织中的表达丰度。结果表明:获得牦牛KLF8基因剪切体序列长度为1 246 bp(Gen Bank登录号为KX964629),其中CDS为963 bp,编码320个氨基酸,与牛(登录号为XP_010820342.1)的氨基酸同源性达99.69%,无信号肽剪切位点和跨膜结构域,具有KLFs家族保守的锌指功能结构域;KLF8基因在牦牛的脂肪组织中存在高水平表达,极显著高于其他组织(P<0.01)。 展开更多
关键词 牦牛 KLF8基因 剪切体 克隆 组织表达
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乙型肝炎病毒X蛋白反式调节基因11剪切体的原核表达及蛋白纯化
8
作者 尹丽 成军 +2 位作者 王琦 李越 林原 《实用肝脏病杂志》 CAS 2009年第4期248-251,273,共5页
目的克隆乙型肝炎病毒X蛋白反式调节基因11(XTP11)剪切体,构建其原核表达载体,表达并纯化该蛋白。方法应用逆转录聚合酶链反应及生物信息学技术从HepG2细胞中提取cDNA为模板并扩增,意外获得XTP11基因的剪切体基因,选用pGEM-T载体进行T-... 目的克隆乙型肝炎病毒X蛋白反式调节基因11(XTP11)剪切体,构建其原核表达载体,表达并纯化该蛋白。方法应用逆转录聚合酶链反应及生物信息学技术从HepG2细胞中提取cDNA为模板并扩增,意外获得XTP11基因的剪切体基因,选用pGEM-T载体进行T-A克隆,通过限制性酶切分析及测序鉴定,再将其亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(DE3)宿主菌,经异丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导XTP11剪切体融合蛋白的表达,表达产物进行SDS-PAGE分析,考马斯亮蓝染色,以鼠His probe单克隆抗体进行Western blot分析鉴定证实表达蛋白的特异性,并纯化蛋白。结果成功扩增出XTP11剪切体基因,构建了pET-32a(+)XTP11剪切体原核表达载体,经IPTG诱导获得了大小约为69kD的重组蛋白。结论发现的HBV XTP11剪切体及其融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 X蛋白反式调节基因 剪切体 基因克隆 原核表达
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HCV p7蛋白反式调节新基因3及其剪切体克隆化和生物信息学分析
9
作者 陶明亮 成军 +4 位作者 王春花 郭江 袁菊 靳亚平 毛羽 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2006年第6期576-580,共5页
目的:筛选HCV p7病毒蛋白反式调节的新靶基因p7TP3,克隆p7TP3基因及其不同剪切体基因序列,并进行功能分析,探讨丙型肝炎病毒(HCV)p7病毒蛋白在HCV致病过程中的作用．方法:依据我们构建的真核表达载体pcDNA 3．1(-)-p7转染肝母细胞瘤细胞... 目的:筛选HCV p7病毒蛋白反式调节的新靶基因p7TP3,克隆p7TP3基因及其不同剪切体基因序列,并进行功能分析,探讨丙型肝炎病毒(HCV)p7病毒蛋白在HCV致病过程中的作用．方法:依据我们构建的真核表达载体pcDNA 3．1(-)-p7转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取总RNA,逆转录为cDNA后进行基因表达谱芯片分析,利用生物信息学技术获得新基因 p7TP3及其可变剪切体的编码序列,设计特异性引物,并对其进行克隆化研究. 结果:经测序鉴定获得新基因p7TP3的编码序列,并发现了p7TP3的不同剪切体,对 D7TP3基因组进行分析,获得剪切体的编码序列,并进行了克隆化研究及生物信息学分析．p7TP3(416 bp)编码蛋白质序列比 p7TP3(477 bp)少TQNTDVYPGLAVFFQNAL IFFSTLIY 26个氨基酸残基,其余序列相同．结论:HCV p7蛋白是一种典型的病毒基因组编码的具有反式调节作用的蛋白．利用分子生物学技术与生物信息学分析,发现并鉴定了HCV p7TP3反式调节作用的新的靶基因 p7TP3及其剪切体,为阐明HCV p7蛋白的反式调节作用及其机制开辟了新的研究方向． 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 剪切体 p7蛋白 剪切体克隆化 生物信息学
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新型前列腺特异膜抗原剪接变异体的发现及临床意义初步探讨 被引量：7
10
作者 曹开源 戴淑琴 +4 位作者 肖娜 徐霖 袁广卿 丘少鹏 黄小荣 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期2185-2188,共4页
目的:探讨前列腺特异膜抗原(PSMA)及其与前列腺癌发生、发展的关系,寻求更为特异的前列腺癌诊断和治疗的靶点。方法:采用RT-PCR和DNA测序技术,克隆PSMA基因新的剪接变异体,并根据其序列信息,设计特异性引物,检测其在不同病变前列腺组织... 目的:探讨前列腺特异膜抗原(PSMA)及其与前列腺癌发生、发展的关系,寻求更为特异的前列腺癌诊断和治疗的靶点。方法:采用RT-PCR和DNA测序技术,克隆PSMA基因新的剪接变异体,并根据其序列信息,设计特异性引物,检测其在不同病变前列腺组织及不同组织来源肿瘤细胞中的表达。结果:发现了一种新的PS-MA剪接变异体,其在前列腺癌、前列腺增生及正常前列腺组织中的表达率分别为92.6%、78.8%及10.0%,且特异表达于前列腺癌LNCaP细胞株,而在前列腺癌PC3细胞株、膀胱癌、肾癌、肝癌细胞株中均不表达。结论:发现了一种新型PSMA剪接变异体(定名为PSMA5),并证实该变异体与前列腺癌及前列腺增生有明显相关性,为研究前列腺癌的发生机制和寻求前列腺癌特异性诊治靶点提供了新的线索。 展开更多
关键词 前列腺特异膜抗原 剪接变异体 前列腺肿瘤
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脑胶质瘤组织中OCT4A和OCT4B水平及临床意义分析 被引量：2
11
作者 及时雨 蒋国梁 +2 位作者 齐平建 陈洋 沈风彪 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2018年第10期893-899,共7页
目的探讨脑胶质瘤组织中八聚体结合转录因子4(OCT4)剪切变体OCT4A和OCT4B水平及临床意义。方法收集本院2011年1月至2016年12月手术切除并经病理证实的脑胶质瘤组织84例和正常脑组织36例,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测以上组织中的OCT4A... 目的探讨脑胶质瘤组织中八聚体结合转录因子4(OCT4)剪切变体OCT4A和OCT4B水平及临床意义。方法收集本院2011年1月至2016年12月手术切除并经病理证实的脑胶质瘤组织84例和正常脑组织36例,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测以上组织中的OCT4A和OCT4B mRNA水平,分析脑胶质瘤组织中OCT4A和OCT4B mRNA水平与临床病理参数(年龄、性别、病理分级、病理类型、分化程度、瘤周水肿及浸润深度)和预后的关系,采用Cox比例风险回归模型分析影响预后的因素。结果 84例脑胶质瘤组织中的OCT4A mRNA水平为2. 144±1. 293,高于36例正常组织的1. 181±0. 688(t=4. 212,P<0. 001); OCT4B mRNA水平为2. 912±1. 540,亦高于正常组织的1. 258±0. 882(t=6. 025,P<0. 001);脑胶质瘤组织中OCT4A和OCT4B mRNA水平呈正相关(r=0. 462,P=0. 012)。脑胶质瘤组织中OCT4A和OCT4B水平与患者的性别、年龄和瘤周水肿均无关,而与病理类型、分化程度和病理分级有关,且在胶质母细胞瘤、低分化和病理分级Ⅲ～Ⅳ级患者中较高(P<0. 05)。单因素分析发现脑胶质瘤患者的总生存期与性别、年龄、瘤周水肿和浸润深度均无关,而与病理类型、分化程度、病理分级及OCT4A和OCT4B表达水平有关(P<0. 05); Cox风险比例回归模型分析发现病理类型、分化程度、病理分级及OCT4A和OCT4B表达水平为影响预后的独立因素,其中胶质母细胞瘤、低分化程度、病理分级较晚及OCT4A、OCT4B高表达为风险因素。结论脑胶质瘤组织中OCT4A和OCT4B水平升高,且与病理类型、分化程度和病理分级有关,OCT4A和OCT4B高表达者的预后较差,可能参与了该恶性肿瘤的发生发展,对脑胶质瘤的诊治及预后预测有一定意义。 展开更多
关键词 胶质瘤 OCT4剪切变体 临床意义 预后
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肝素酶基因可变剪接体的克隆及鉴定 被引量：1
12
作者 金泗虎 虞立霞 +4 位作者 高红伟 李素波 王玲燕 鲍国强 宫锋 《生物技术通讯》 CAS 2010年第5期670-672,共3页
目的:克隆肝素酶基因的可变剪接体并测序。方法:根据人肝素酶的cDNA序列设计引物,用RT-PCR方法从正常人外周血白细胞中扩增肝素酶基因的可变剪接体,构建至pGEM-T Easy载体中,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆并进行序列测定。... 目的:克隆肝素酶基因的可变剪接体并测序。方法:根据人肝素酶的cDNA序列设计引物,用RT-PCR方法从正常人外周血白细胞中扩增肝素酶基因的可变剪接体,构建至pGEM-T Easy载体中,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆并进行序列测定。结果:获得了肝素酶基因的3种可变剪接体形式,即5号外显子缺失可变剪接体、6号外显子缺失可变剪接体、5和6号外显子缺失可变剪接体,其中后2种可变剪接体尚未报道。结论:克隆了肝素酶基因的3种可变剪接体,有助于研究各种肝素酶可变剪接体编码蛋白的结构和功能及其在肿瘤发生转移过程中的作用。 展开更多
关键词 肝素酶 可变剪接体 克隆
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猪FcRn基因及其剪接变体序列的克隆与序列分析 被引量：1
13
作者 李海霞 陈丽颖 +5 位作者 刘涛 范沛 乔新安 张志强 王月影 王艳玲 《中国农学通报》 CSCD 2008年第11期27-31,共5页
克隆并分析猪FcRn基因;十二指肠组织提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD-19T载体连接后转化JM109感受态细胞,筛选阳性克隆并测序;FcRn阳性克隆两条序列在NCBI上比较,显示序列同猪FcRn(AY740682.1)同源性都为99%。克隆了猪... 克隆并分析猪FcRn基因;十二指肠组织提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD-19T载体连接后转化JM109感受态细胞,筛选阳性克隆并测序;FcRn阳性克隆两条序列在NCBI上比较,显示序列同猪FcRn(AY740682.1)同源性都为99%。克隆了猪FcRn基因的序列和其剪接变体序列,其剪接变体序列已在GenBank上注册(Accession.EU852582) 展开更多
关键词 猪 FCRN 剪接变体 克隆 序列分析
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人肝癌细胞辅酶Ⅱ-依赖性视黄醇脱氢/还原酶选择性剪接新亚型的鉴定和分析
14
作者 钱程 刘婷 +2 位作者 闫银侠 宋旭红 黄东阳 《汕头大学医学院学报》 2010年第3期138-141,共4页
目的:鉴定人肝癌细胞HepG2中辅酶Ⅱ-依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)的选择性剪接新亚型DHRS4L1A1,并检测其在不同细胞中的表达情况。方法:采用快速cDNA末端扩增方法,从HepG2中克隆选择性剪接亚型的cDNA序列;通过查找开放阅读框架,预测... 目的:鉴定人肝癌细胞HepG2中辅酶Ⅱ-依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)的选择性剪接新亚型DHRS4L1A1,并检测其在不同细胞中的表达情况。方法:采用快速cDNA末端扩增方法,从HepG2中克隆选择性剪接亚型的cDNA序列;通过查找开放阅读框架,预测并分析剪接新亚型的蛋白质序列和功能;用半定量RT-PCR法检测8种不同细胞株中新剪接亚型的相对表达量。结果:DHRS4L1A1全长1 117 bp,为NRDR选择性剪接新亚型;该亚型在卵巢癌细胞SKOV3中的表达量显著高于其他细胞。结论:DHRS4L1A1表达的蛋白属于SDR家族,该亚型可能参与生殖系统相关酶类的代谢。 展开更多
关键词 NADP(H)-依赖性视黄醇脱氢/还原酶 选择性剪接 HEPG2细胞
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乙酰肝素酶可变剪接体Splice 5在CHO细胞中的稳定转染及其亚细胞定位研究
15
作者 顾懿 高红伟 +7 位作者 李素波 金泗虎 鲍国强 檀英霞 王颖丽 季守平 裴雪涛 宫锋 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期514-516,共3页
目的建立乙酰肝素酶可变剪接体Splice 5稳定转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株,并进行亚细胞定位分析。方法将表达乙酰肝素酶全长的质粒和乙酰肝素酶可变剪接体Splice 5质粒转染入CHO细胞,经G418进行筛选后,挑取单克隆进行培养,RT-PCR检测筛... 目的建立乙酰肝素酶可变剪接体Splice 5稳定转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株,并进行亚细胞定位分析。方法将表达乙酰肝素酶全长的质粒和乙酰肝素酶可变剪接体Splice 5质粒转染入CHO细胞,经G418进行筛选后,挑取单克隆进行培养,RT-PCR检测筛选克隆。用激光共聚焦显微镜测定其亚细胞定位。结果成功获得乙酰肝素酶可变剪接体Splice 5稳定转染株,并研究了其亚细胞定位情况。野生型乙酰肝素酶以颗粒状分布于细胞质中,Splice 5以弥散状分布于细胞质中,且在内质网、高尔基体、溶酶体、细胞膜均有分布。结论 Splice 5和野生型乙酰肝素酶在CHO细胞中分布形式和定位的不同,提示Splice 5可能具有其他的生物学功能。 展开更多
关键词 乙酰肝素酶 可变剪接体 转染 亚细胞定位
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猪IgG Fc受体与恒定链的细胞定位及相互关系研究
16
作者 吴胜国 倪子豪 +2 位作者 李吕木 丁小玲 许发芝 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期401-406,453,共7页
克隆猪IgG Fc受体基因(FcRn)及其剪接体基因,研究其与猪恒定链(Ii)的细胞定位及相互关系。利用Triozl法从猪十二指肠组织提取总RNA,进行RT-PCR扩增,PCR产物与pMD-18T载体连接,筛选阳性克隆并序列测定和分析。进一步构建了融合表达绿色... 克隆猪IgG Fc受体基因(FcRn)及其剪接体基因,研究其与猪恒定链(Ii)的细胞定位及相互关系。利用Triozl法从猪十二指肠组织提取总RNA,进行RT-PCR扩增,PCR产物与pMD-18T载体连接,筛选阳性克隆并序列测定和分析。进一步构建了融合表达绿色荧光蛋白的FcRn基因及其剪接体真核表达载体,利用脂质体Lipofectamine2000介导法与能表达红色荧光的Ii真核表达载体共转染COS-7细胞,共聚焦荧光显微镜检测FcRn基因与猪Ii链在细胞中的共定位,并通过免疫共沉淀进一步研究它们之间的相互关系。序列分析结果表明,FcRn基因序列大小为1 071bp,剪接体片段大小为795bp,两者氨基酸序列均含有胞外结构域、跨膜区和胞浆尾区。细胞定位研究显示,LFC-GFP或SFC-GFP与RFP-Ii共转染COS-7细胞后共定位在细胞的内膜系统。免疫共沉淀结果显示,GFP-Ii与LFC-GFP或SFC-GFP共转染后,检测到LFC-GFP或SFC-GFP的表达。猪Ii链与FcRn基因或剪接体能够形成复合体,共定位于细胞的内膜系统。 展开更多
关键词 猪 FCRN 剪接体 序列分析 细胞共定位
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新基因XTP11剪切体的克隆与亚细胞定位
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作者 尹丽 王琦 +1 位作者 林原 成军 《大连医科大学学报》 CAS 2009年第4期251-254,共4页
[目的]克隆乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X蛋白反式调节基因11(XTP11)的剪切体,观察剪切体蛋白在人肝癌细胞HepG2中的定位。[方法]利用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transciptase-polymerase chain re-action,RT-PCR)技术扩增X... [目的]克隆乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X蛋白反式调节基因11(XTP11)的剪切体,观察剪切体蛋白在人肝癌细胞HepG2中的定位。[方法]利用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transciptase-polymerase chain re-action,RT-PCR)技术扩增XTP11剪切体,将目的基因片段插入克隆载体pGEM-T中,经双酶切和测序鉴定后,定向克隆至荧光表达载体pEGFP-C1中,转染HepG2细胞,荧光显微镜下观察确定其亚细胞定位。[结果]XTP1剪切体的开放阅读框长度为1314 bp,编码产物为437个氨基酸残基;重组质粒在HepG2细胞中转染效率为50%,蛋白定位于细胞浆。[结论]转染重组表达载体的细胞内出现局限性强绿色荧光信号,推断目的蛋白位于细胞质内。XTP11剪切体的克隆和亚细胞定位为进一步从分子水平分析其生物学功能奠定基础,为阐明其在乙型肝炎病毒X蛋白致病机制中的作用提供信息。 展开更多
关键词 XTP11剪切体 克隆 转染 亚细胞定位
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血清大分子量肌糖蛋白C剪接变构体水平对卵巢癌的临床意义研究
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作者 林玉贤 王红芳 +2 位作者 曹立萍 郑雪 王冬霞 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第10期1955-1958,共4页
目的:探讨血清大分子量肌糖蛋白C剪接变构体(L-Tn-CSV)水平对卵巢癌的临床意义,为卵巢癌的临床诊断、治疗和预后判断提供参考依据。方法:选择143例首次发病卵巢癌患者、18例复发卵巢癌患者、40例良性卵巢肿瘤患者及30例健康人为研究对象... 目的:探讨血清大分子量肌糖蛋白C剪接变构体(L-Tn-CSV)水平对卵巢癌的临床意义,为卵巢癌的临床诊断、治疗和预后判断提供参考依据。方法:选择143例首次发病卵巢癌患者、18例复发卵巢癌患者、40例良性卵巢肿瘤患者及30例健康人为研究对象,采用定量酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组血清中的L-Tn-CSV、HE4和CA125的表达水平并进行比较分析。结果:对一般卵巢癌标志物CA125和HE4与血清L-Tn-CSV诊断卵巢癌的敏感性和特异性比较发现其无统计学差异;首次发病的卵巢癌患者与复发的卵巢癌患者血清中的L-Tn-CSV水平分别为4924.1±3145.6pg/ml和4217.5±2349.3pg/ml,显著高于健康女性(2259.3±723.2pg/ml)及良性卵巢肿瘤组(2435.6±863.6 pg/ml)(P<0.01);卵巢良性肿瘤组血清L-Tn-CSV含量与正常对照组比较无统计学差异(P=0.42),卵巢癌Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者血清L-Tn-CSV水平较Ⅰ期显著增高(P<0.01);复发组的血清L-Tn-CSV水平明显高于卵巢良性肿瘤组和正常对照组(P<0.01),而Ⅲ期、Ⅳ期血清L-Tn-CSV水平无统计学差异(P>0.01);Spearman等级相关分析显示血清L-Tn-CSV水平与卵巢癌临床分期(r=0.573,P<0.01)及复发(r=0.627,P<0.01)呈正相关;术后血清L-Tn-CSV水平呈阴性与切除手术后治愈可能性显著相关(P<0.01)。结论:血清L-Tn-CSV水平对卵巢癌肿瘤诊断、分期及预后评估有一定的参考价值。 展开更多
关键词 卵巢癌 高分子量肌糖蛋白C剪接变构体 预后 诊断
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前列腺特异性膜抗原新型剪接变异体PSME基因及蛋白的生物信息学分析
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作者 王铸 冯发深 +6 位作者 何霞 关林琳 徐霖 张定梅 罗燕芬 汪杨 曹开源 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期523-526,共4页
目的通过对PSME的生物信息学分析,更多的了解该基因及蛋白结构与功能的相关信息。方法运用生物信息学方法分析PSME基因结构,序列及其编码蛋白的理化性质和结构与功能特征,蛋白相互作用网络以及抗原表位。结果用ExPASy的Computer PI/Mw、... 目的通过对PSME的生物信息学分析,更多的了解该基因及蛋白结构与功能的相关信息。方法运用生物信息学方法分析PSME基因结构,序列及其编码蛋白的理化性质和结构与功能特征,蛋白相互作用网络以及抗原表位。结果用ExPASy的Computer PI/Mw、SMART等软件对其氨基酸序列进行分析,该蛋白的PI值为6.38,相对分子质量约为78 000。二级结构中α螺旋(H)占34.66%,β折叠(E)占12.93%,无规卷曲占52.41%。PSME信号肽位于1～22位氨基酸,150～248位为肽酶结构域,639～703位为转铁蛋白受体二聚体,且含有多个糖基化位点。通过DNA Star软件分析得到了PSME蛋白的抗原表位。结论利用生物信息学预测出的结构和功能信息,能为PSME蛋白的相关研究提供信息基础。 展开更多
关键词 生物信息学 抗原新型剪接变异体 前列腺特异性膜抗原
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新基因p7TP3剪切体1的克隆与亚细胞定位
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作者 陶明亮 袁菊 +1 位作者 成军 靳亚平 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期19-22,共4页
利用RT-PCR技术扩增丙型肝炎病毒p7蛋白反式调节基因3剪切体1(p7TP3剪切体1)开放阅读框序列。将目的基因片段插入pGEM-T载体中,经双酶切和测序鉴定后,定向克隆至荧光表达载体pEGFP-C1,EcoRI及BamHI双酶切鉴定。脂质体法转染HepG2细胞,... 利用RT-PCR技术扩增丙型肝炎病毒p7蛋白反式调节基因3剪切体1(p7TP3剪切体1)开放阅读框序列。将目的基因片段插入pGEM-T载体中,经双酶切和测序鉴定后,定向克隆至荧光表达载体pEGFP-C1,EcoRI及BamHI双酶切鉴定。脂质体法转染HepG2细胞,荧光显微镜下观察确定其亚细胞定位。结果表明,p7TP3剪切体1片断长度为381 bp,与预期结果一致;亚细胞定位结果表明,该蛋白定位于细胞浆中。 展开更多
关键词 p7TP3剪切体1 克隆 转染 亚细胞定位
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