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含当归中成药的DNA提取及其分子鉴定 被引量:13
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作者 苟惠 王译伟 +2 位作者 郑茜 王钦 张春 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期44-50,共7页
目的:优化含当归中成药的DNA提取方法,并利用叶绿体trn L-F基因及当归特异分子标记对当归中成药进行鉴定。方法:采用传统十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法,十二烷基磺酸钠(SDS)法,磁珠法以及改良CTAB法对10种含有当归成分的中成药进... 目的:优化含当归中成药的DNA提取方法,并利用叶绿体trn L-F基因及当归特异分子标记对当归中成药进行鉴定。方法:采用传统十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法,十二烷基磺酸钠(SDS)法,磁珠法以及改良CTAB法对10种含有当归成分的中成药进行DNA提取,利用微量紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳检测所得总DNA的完整性、纯度和浓度。对10份当归中成药的trn L-F序列进行扩增、测序,对序列进行比对分析并构建系统发育树。利用当归特异鉴别分子标记对10种当归中成药中的当归成分进行分子鉴别。结果:利用改良CTAB法获得了纯度较高,质量较好的DNA。10种中成药中当归的trn L-F序列与正品当归序列相似度为99.88%-100%,系统发育树显示10份中成药中的当归与正品当归聚为一类。利用当归特异性鉴别分子标记进行验证,10种中成药DNA样品均能得到明亮的扩增条带。结论:改良CTAB法可以有效提取当归中成药中的基因组DNA。利用trn L-F序列和当归特异性鉴别分子标记,成功对10份市售当归中成药进行了分子鉴别,为当归类中成药的分子鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 当归中成药 DNA提取方法 叶绿体trn L-F序列 特异性鉴别分子标记 分子鉴定
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利用1RS特异标记和染色体原位杂交技术鉴定小麦1BL·1RS易位系 被引量:9
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作者 余利 何方 +4 位作者 陈桂玲 崔法 亓晓蕾 王洪刚 李兴锋 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期563-569,共7页
以小麦-黑麦1BL·1RS易位系(Kavkaz、山农030-1)、1AL·1RS易位系(Amigo)、荆州黑麦、八倍体小黑麦劲松49、1R-7R二体异附加系以及普通小麦中国春、辉县红、铭贤169、Chancellor等为材料,对65个黑麦1RS特异标记进行鉴定,从中筛... 以小麦-黑麦1BL·1RS易位系(Kavkaz、山农030-1)、1AL·1RS易位系(Amigo)、荆州黑麦、八倍体小黑麦劲松49、1R-7R二体异附加系以及普通小麦中国春、辉县红、铭贤169、Chancellor等为材料,对65个黑麦1RS特异标记进行鉴定,从中筛选出8个稳定的标记,即NOR-1、SECA2/SECA3、SCSS30.2、Sec1Gene、Sec1Pro、ω-Sec-P1/P2、ω-Sec-P3/P4和IB-267,可用于检测1AL·1RS易位系或1BL·1RS易位系;另外3个特异标记O-SEC5′-A/O-SEC3′-R、IAG95-1和SCM-9可用于区别1RS来源不同的1AL·1RS和1BL·1RS易位系。利用这11个标记和染色体原位杂交技术对40份山东省近年育成小麦品种(系)进行检测,发现潍麦8号、鲁麦14、济宁13、山农664、山农优麦3号和烟农25为1BL·1RS易位系,而且是1RS的整臂易位系,未检测到1AL·1RS易位系和其他易位类型。 展开更多
关键词 1BL·1RS易位系 特异性分子标记 基因组原位杂交
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一种潜在结核病特异性诊断分子标志物Circ-IRAKM的筛选鉴定
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作者 马小燕 张旭 +4 位作者 马沁梅 宫照乾 于嘉霖 吴晓玲 邓光存 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期972-980,共9页
目的分析Circ-IRAKM在活动型结核病患者外周血中的表达及其与结核病患者临床特征的相关性,评价其作为活动型结核病分子诊断标志物的预测价值。方法通过公共数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)筛选在结核病患者外周血差异表达的Circ-RN... 目的分析Circ-IRAKM在活动型结核病患者外周血中的表达及其与结核病患者临床特征的相关性,评价其作为活动型结核病分子诊断标志物的预测价值。方法通过公共数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)筛选在结核病患者外周血差异表达的Circ-RNA,qRT-PCR技术验证Circ-IRAKM在活动型结核病患者外周血的相对表达,采用SPSS 23.0及ROC曲线等分析Circ-IRAKM作为诊断活动型结核病的价值,GO/KEGG数据库预测候选靶点生物学功能。结果Circ-IRAKM在活动型结核病患者外周血中升高有统计学意义(t=9.096,P<0.001);Circ-IRAKM在结核病患者外周血的AUC为0.966,特异性为0.995,灵敏度为0.937;且其表达与外周血巨噬细胞相对值/绝对值呈正相关;数据库预测其可能通过NF-κB信号通路参与病原-宿主博弈过程。结论Circ-IRAKM可作为结核病患者诊断及预后的候选特异性生物分子标志物。 展开更多
关键词 结核病 环状RNA 特异性分子标志物
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家蚕(Bombyx mori)血细胞研究进展 被引量:2
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作者 杨丽群 徐曼 崔红娟 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期973-978,共6页
家蚕是具有重要经济价值的驯化昆虫,也是完成全基因组测序的具有重要研究价值的鳞翅目模式昆虫。家蚕血液在蚕体的生长发育过程中担负着储存能量、伤口愈合、传递压力、免疫防御等重要生理功能。基于传统的细胞形态学观察方法已经不能... 家蚕是具有重要经济价值的驯化昆虫,也是完成全基因组测序的具有重要研究价值的鳞翅目模式昆虫。家蚕血液在蚕体的生长发育过程中担负着储存能量、伤口愈合、传递压力、免疫防御等重要生理功能。基于传统的细胞形态学观察方法已经不能对家蚕血细胞的生物学功能进行深入研究。近几年,本实验室通过5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)标记法和细胞特异性的分子标记等方法,对家蚕血细胞的种类、血细胞的增殖发育机制和血细胞的免疫防御功能等进行了较为系统的研究,本文概述在上述几个研究方向中取得的最新进展,为该领域后续深入研究提供理论依据和技术参考。 展开更多
关键词 家蚕 血细胞发育 特异分子标记 细胞免疫
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基于转录组测序开发的一个小麦叶锈菌特异分子标记 被引量:1
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作者 武文月 王丽珊 +5 位作者 郭鹏 王菲 王逍冬 刘大群 王海燕 孟庆芳 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期1221-1229,共9页
小麦叶锈菌毒性变异频繁,新的毒性小种不断出现,往往导致小麦抗叶锈病品种在推广种植几年后的抗性丧失。因此,开发用于田间小麦叶锈病的诊断与预测预报的特异性分子标记具有重要意义。在前期已经完成小麦叶锈菌PHNT转录组测序的基础上,... 小麦叶锈菌毒性变异频繁,新的毒性小种不断出现,往往导致小麦抗叶锈病品种在推广种植几年后的抗性丧失。因此,开发用于田间小麦叶锈病的诊断与预测预报的特异性分子标记具有重要意义。在前期已经完成小麦叶锈菌PHNT转录组测序的基础上,本研究拟在数据库中挑选候选效应蛋白,利用实时荧光定量PCR明确其在叶锈菌侵染小麦后不同时间点的表达模式,根据差异表达分析筛选出候选效应蛋白,再根据编码候选效应蛋白的基因序列设计引物,对小麦叶锈菌PHNT基因组DNA进行PCR扩增,旨在开发小麦叶锈菌特异性分子标记。结果在转录组数据库中筛选出24个候选效应蛋白,qPCR检测明确其中17个具有明显的表达差异。PCR扩增结果表明,基于候选效应蛋白基因PTTG-05290设计的引物在小麦叶锈菌PHNT中获得一条920 bp的条带,且在检测的25种叶锈菌生理小种中均稳定存在,而在小麦条锈菌、菜豆锈菌、枣树锈菌、柳树锈菌、苹果树锈菌及芦苇锈菌6种锈菌中不能获得有效扩增,表明该引物在小麦叶锈菌中具有特异性。qPCR结果表明,PTTG-05290在叶锈菌侵染小麦4 d时达到表达高峰,表达量为0 d的218倍,而0.5 d时便大量检测到该基因。因此,PTTG-05290可作为分子标记用于小麦叶锈菌的田间早期检测及预测预报,对小麦抗叶锈病品种在田间的合理布局具有重要意义。 展开更多
关键词 小麦叶锈菌 效应蛋白 特异性分子标记 PCR 检测
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肝癌特异性分子标志物glypican-3的研究进展
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作者 韩乃寒 武墨青 +2 位作者 陈跃 王文爽 李福川 《生命科学》 CSCD 北大核心 2022年第8期1046-1053,共8页
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上最常见的癌症之一,死亡率极高,因而HCC的早期诊断十分重要。磷脂酰肌醇蛋白-3(glypican-3,GPC3)的mRNA和蛋白质表达水平在HCC患者体内显著增高,但在正常人和良性肝病患者体内不表达或低... 肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上最常见的癌症之一,死亡率极高,因而HCC的早期诊断十分重要。磷脂酰肌醇蛋白-3(glypican-3,GPC3)的mRNA和蛋白质表达水平在HCC患者体内显著增高,但在正常人和良性肝病患者体内不表达或低水平表达,因此已成为HCC诊断和靶向治疗的特异性生物标志物。本文对GPC3的最新研究进展进行了详细综述,包括其分子结构、生物学功能、在HCC发展过程中的作用、血清学检测方法以及以之为靶点的HCC靶向治疗等。 展开更多
关键词 肝细胞癌 特异性分子标志物 磷脂酰肌醇蛋-3
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陆地棉L-D_(1)等位基因特异性分子标记的开发及应用
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作者 姜辉 郑锦秀 +7 位作者 王永翠 张超 王秀丽 陈莹 高明伟 王家宝 柴启超 赵军胜 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2021年第5期412-421,共10页
【目的】L-D_(1)基因调控陆地棉叶形。本研究设计特异分子标记精准鉴定L-D_(1)等位基因,为其在陆地棉冠层结构改良中的应用提供支撑。【方法】利用具有鲁棉研28号遗传背景的L-D_(1)等位基因近等基因系,分析不同等位基因组合对叶形的影... 【目的】L-D_(1)基因调控陆地棉叶形。本研究设计特异分子标记精准鉴定L-D_(1)等位基因,为其在陆地棉冠层结构改良中的应用提供支撑。【方法】利用具有鲁棉研28号遗传背景的L-D_(1)等位基因近等基因系,分析不同等位基因组合对叶形的影响。根据4个等位基因的启动子和编码区的多态性设计特异分子标记,并对不同叶形中的等位基因进行检测。【结果】L-D_(1)基因从3叶期开始调控叶片叶裂的形成,4~8叶期叶裂不断加深,从9叶期开始基本稳定;L-D_(1)等位基因不同组合可形成相似叶形,仅从形态上难以准确辨别。克隆获得L-D_(1)位点4个等位基因起始密码子前约4 kb的启动子片段,发现24个SNPs(Single nucleotide polymorphism,单核苷酸多态性)、1个133 bp及1个14 bp的插入缺失。根据等位基因启动子及编码区的SNP和缺失插入开发了1个Indel分子标记InDel_8和2个衍生酶切扩增多态性序列标记dCAPS_192、dCAPS_519,分别为l2、L2o、L2s的特异分子标记。【结论】根据陆地棉中控制叶形的L-D_(1)等位基因间的差异开发了3个特异性分子标记,可用来鉴定不同的L-D1等位基因。 展开更多
关键词 冠层改良 叶形 L-D_(1)位点 特异分子标记 陆地棉
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基于SLAF-seq技术开发长穗偃麦草染色体特异分子标记 被引量:31
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作者 陈士强 秦树文 +5 位作者 黄泽峰 戴毅 张璐璐 高营营 高勇 陈建民 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期727-734,共8页
长穗偃麦草1E及7E染色体上带有重要的抗赤霉病基因,开发大量相关染色体特异分子标记有助于准确定位抗性基因及获得可用于辅助育种紧密连锁的标记。基于SLAF-seq技术,获得了368个长穗偃麦草1E染色体特异片段,随机选取80个特异片段设计引... 长穗偃麦草1E及7E染色体上带有重要的抗赤霉病基因,开发大量相关染色体特异分子标记有助于准确定位抗性基因及获得可用于辅助育种紧密连锁的标记。基于SLAF-seq技术,获得了368个长穗偃麦草1E染色体特异片段,随机选取80个特异片段设计引物,开发了20个长穗偃麦草1E染色体特异分子标记、2个长穗偃麦草基因组特异分子标记及26个其他特异分子标记,效率达60%。用这些特异标记能稳定检测出不同小麦-长穗偃麦草衍生材料中的1E染色体或片段。通过标记与优良性状的共分离特性,获得与相关基因紧密连锁的标记,将为小麦抗性育种中的分子标记辅助选择提供依据。 展开更多
关键词 长穗偃麦草 SLAF-seq技术 染色体特异分子标记 小麦赤霉病 分子标记辅助选择
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簇毛麦6V染色体短臂特异分子标记的开发和应用 被引量:12
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作者 王春梅 别同德 +2 位作者 陈全战 曹爱忠 陈佩度 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1595-1600,共6页
为开发簇毛麦6V染色体短臂特异的分子标记,并利用这些标记对缺失系进行鉴定,选用11个RGA和17对STS引物进行多态性分析,其中1个RGA引物和1对STS引物在对普通小麦扬麦5号、簇毛麦及普通小麦-簇毛麦6VS/6AL易位系进行多态性分析时,分别检... 为开发簇毛麦6V染色体短臂特异的分子标记,并利用这些标记对缺失系进行鉴定,选用11个RGA和17对STS引物进行多态性分析,其中1个RGA引物和1对STS引物在对普通小麦扬麦5号、簇毛麦及普通小麦-簇毛麦6VS/6AL易位系进行多态性分析时,分别检测到一条约1000bp和约800bp的多态性片段,将这两个标记转化为稳定的特异性分子标记,分别命名为CINAU17-1086和CINAU18-723。运用这两对引物对一系列材料进行扩增,只有含6V染色体短臂的材料才能扩增出相应的特异条带,表明这两个标记均位于簇毛麦6VS上。进一步利用簇毛麦6VS缺失添加系、易位系将CINAU17-1086标记定位在簇毛麦6VSFL0.58与FL0.70之间,将CINAU18-723标记定位在簇毛麦6VSFL0.45与着丝粒之间。利用这两个特异标记对通过花粉辐射获得的部分簇毛麦6VS结构变异材料进行PCR鉴定,其结果与细胞学鉴定结果一致。CINAU17-1086和CINAU18-723标记可用来快速检测和追踪导入普通小麦背景中的簇毛麦6VS染色体片段,并对缺失系的断点进行了初步界定。 展开更多
关键词 簇毛麦 抗病基因类似物(RGA) 位点标签序列(STS) 染色体特异分子标记 缺失系
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基于抑制消减杂交开发长穗偃麦草(Lophopyrum elongatum)特异分子标记 被引量:9
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作者 葛江燕 陈士强 +4 位作者 高营营 高勇 朱雪 黄泽峰 陈建民 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1818-1826,共9页
分别以二倍体长穗偃麦草和普通小麦中国春的基因组DNA作实验组和对照组,运用抑制消减杂交(SSH)技术去除2个基因组DNA之间的同源序列,获得长穗偃麦草特异的DNA片段构建的单向抑制消减文库,并对随机克隆测序。根据测序结果设计引物,获得3... 分别以二倍体长穗偃麦草和普通小麦中国春的基因组DNA作实验组和对照组,运用抑制消减杂交(SSH)技术去除2个基因组DNA之间的同源序列,获得长穗偃麦草特异的DNA片段构建的单向抑制消减文库,并对随机克隆测序。根据测序结果设计引物,获得36个长穗偃麦草基因组特异分子标记,成功率高达69.2%。这些标记均能在具有长穗偃麦草E染色体的不同小麦背景和不同世代中稳定表现,可用于小麦背景中跟踪长穗偃麦草染色体或片段。 展开更多
关键词 普通小麦 长穗偃麦草 基因组特异分子标记 SSH
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香鱼(Plecoglossus altivelis)养殖群体遗传多样性的AFLP分析及性别特异性分子标记筛选 被引量:6
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作者 闫松松 苗亮 +4 位作者 李明云 范慧慧 胡谋 陈炯 史雨红 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期395-399,共5页
采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术分析了香鱼(Plecoglossus altivelis)养殖群体的遗传多样性,并筛选性别特异性分子标记。结果表明,15对选扩引物组合共扩增到889个位点,其中多态性位点380个,多态率为42.74%;群体Nei氏遗传多样性指数为0... 采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术分析了香鱼(Plecoglossus altivelis)养殖群体的遗传多样性,并筛选性别特异性分子标记。结果表明,15对选扩引物组合共扩增到889个位点,其中多态性位点380个,多态率为42.74%;群体Nei氏遗传多样性指数为0.1454,Shannon氏指数I为0.2174。香鱼养殖群体的遗传多样性较丰富,处于中等偏上水平。仅引物组合E-ATG/M-CTG扩增到1条雄性特异性条带,长度为139bp。以该雄性特异性AFLP条带的DNA序列为模板,设计1对特异的PCR引物并在10尾已知性别的香鱼(雌雄各5尾)中扩增检验,结果显示5尾雄鱼均可扩增到目的条带而5尾雌鱼均无扩增。表明该序列是雄性特异性分子标记,可用于鉴别香鱼的遗传性别,并为香鱼的性别决定机制和性别控制研究奠定基础。 展开更多
关键词 香鱼 扩增片段长度多态性(AFLP) 养殖群体 遗传多样性 性别特异性标记
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鱼类性别特异分子标记筛选及分子性控育种研究现状与展望
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作者 刘洋 陈松林 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期32-41,共10页
本文系统介绍了鱼类性别特异分子标记筛选的研究历程、分子标记辅助性控育种的研究进展及展望。首先,作者回顾了我国鱼类性别特异分子标记的研究历程,包括探索期(2001—2006年),突破期(2007—2012年)和快速发展期(2013—2023),其中在突... 本文系统介绍了鱼类性别特异分子标记筛选的研究历程、分子标记辅助性控育种的研究进展及展望。首先,作者回顾了我国鱼类性别特异分子标记的研究历程,包括探索期(2001—2006年),突破期(2007—2012年)和快速发展期(2013—2023),其中在突破期重点描述了半滑舌鳎、黄颡鱼等性别特异分子标记的发现,为我国鱼类性别决定机制研究和性控育种提供了重要技术手段。其次介绍了分子标记辅助性控育种的研究进展,采用性别特异分子标记辅助培育出半滑舌鳎“鳎优1号”,黄颡鱼“全雄1号”、“全雄2号”等新品种,极大的推动了我国鱼类性别控制育种研究工作。最后,文章对我国鱼类性别特异分子标记筛选和分子标记辅助性控育种的未来发展方向进行了展望,提出今后应从持续开发养殖鱼类性别特异分子标记、强化鱼类性别特异分子标记筛选方法创新、优化鱼类性别特异标记的应用方法等方面加强鱼类分子标记辅助性控育种的研究。 展开更多
关键词 鱼类 性别特异分子标记 性控育种 研究历程 进展 展望
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基于竞争性杂交方法的猪-肠道微生物特异性互作靶点发掘 被引量:1
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作者 樊丽华 莫虹斐 +2 位作者 张晓峰 帅江冰 陈青 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期163-172,共10页
动物肠道中存在着一些参与猪肠道微生物互作的基因,这些基因具有一定的宿主特异性,利用其设计分子标记能准确识别粪便污染来源。该文共采集6个物种(猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅)的145个粪便样品,提取其DNA后利用竞争性杂交的基因片段富集方... 动物肠道中存在着一些参与猪肠道微生物互作的基因,这些基因具有一定的宿主特异性,利用其设计分子标记能准确识别粪便污染来源。该文共采集6个物种(猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅)的145个粪便样品,提取其DNA后利用竞争性杂交的基因片段富集方法(genome fragment enrichment,GFE),靶向筛选参与猪肠道微生物互作的特异性基因。经BLASTX分析发现,82%的猪特异性非冗余DNA片段存在相似序列,以拟杆菌纲(Bacteroidetes)(43.2%)、梭菌纲(Clostridia)(19.5%)、芽孢杆菌纲(Bacilli)(8.6%)相似序列为主。从蛋白质功能方面分析,61.5%的非冗余序列功能明确,有7.6%的序列与信息贮存及加工有关,12.8%的序列与细胞加工及信息传导有关,22%的序列与代谢有关,其中,碳水化合物和氨基酸的转移代谢相关序列含量最为丰富,均占总特异性序列的6.3%。研究发现,能够编码拟杆菌纲(Bacteroidetes)和梭菌纲(Clostridials)等表面蛋白、膜分泌蛋白及碳水化合物代谢蛋白的相关基因可作为猪特异性分子标记筛选的靶点。 展开更多
关键词 非点源污染 竞争性杂交 特异性基因组片段富集 功能注释 猪特异性分子标记
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