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大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的分离及其在抗虫植物基因工程中的应用 被引量：45
1
作者 高越峰 朱祯 +3 位作者 肖桂芳 朱玉 吴茜 李向辉 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1998年第5期405-411,共7页
大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制剂属于丝氨酸蛋白酶抑制剂，具有抗虫特性。从未成熟的大豆（ＧｌｙｃｉｎｅｍａｘＬ．）子叶中提取总ＲＮＡ，然后反转录成单链ｃＤＮＡ，以此为模板，用ＰＣＲ方法扩增出大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑... 大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制剂属于丝氨酸蛋白酶抑制剂，具有抗虫特性。从未成熟的大豆（ＧｌｙｃｉｎｅｍａｘＬ．）子叶中提取总ＲＮＡ，然后反转录成单链ｃＤＮＡ，以此为模板，用ＰＣＲ方法扩增出大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制剂基因，并克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＫＳ（＋）的ＳｍａⅠ位点上。序列分析表明：克隆片段大小为６６３ｂｐ，包含了基因完整的编码序列。编码多肽由２１７个氨基酸组成，其中包括Ｎ端２５个氨基酸组成的信号肽序列，１８１个氨基酸组成的成熟蛋白序列和Ｃ端１１个氨基酸组成的液泡定位信号序列。构建了此基因的一系列植物表达载体，用于烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．）、水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）、棉花（ＧｏｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．）等作物的转化。利用棉铃虫（ＨｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａＨｕｂｎｅｒ）对经ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交验证获得的转基因烟草进行了抗虫测试，结果表明，转基因烟草和对照烟草相比，具有明显的抗虫能力。 展开更多
关键词 大豆 胰蛋白酶抑制剂 抗虫 转基因烟草 基因工程
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大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及其转基因烟草抗虫性初探 被引量：19
2
作者 高越峰 朱祯 +2 位作者 朱玉 肖桂芳 李向辉 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1997年第9期5-9,共5页
从未成熟的大豆子叶中提取总RNA，利用RT－PCR方法扩增出大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因单一目的片段，克隆到pBluescriptKS（＋）SmaI位点上。序列分析表明，该基因与报导的序列高度同源：其核苷酸序列及推论的编码氨基酸序列的同源... 从未成熟的大豆子叶中提取总RNA，利用RT－PCR方法扩增出大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因单一目的片段，克隆到pBluescriptKS（＋）SmaI位点上。序列分析表明，该基因与报导的序列高度同源：其核苷酸序列及推论的编码氨基酸序列的同源率分别为99．5％和98．2％。由此，构建了大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的植物高效表达载体pBinSKTI。并采用农杆菌介导的叶盘法转化了烟草，获得的转基因烟草再生植株经抗虫测试表明：与对照烟草相比，具有明显的抗棉铃虫能力。 展开更多
关键词 大豆胰蛋白酶 抑制剂 抗虫基因 转基因烟草
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大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂(SKTI)研究进展 被引量：8
3
作者 赵洪锟 李启云 +1 位作者 王玉民 庄炳昌 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期218-222,共5页
大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂 (SKTI)是一种典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂 ,主要集中在大豆的子叶中。近 60年来 ,对其生化特性及结构已有较多研究 ,通常认为这种蛋白酶抑制剂具有贮藏、调节内源蛋白酶活性及植物防御等作用。研究表明 ,这种... 大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂 (SKTI)是一种典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂 ,主要集中在大豆的子叶中。近 60年来 ,对其生化特性及结构已有较多研究 ,通常认为这种蛋白酶抑制剂具有贮藏、调节内源蛋白酶活性及植物防御等作用。研究表明 ,这种蛋白酶抑制剂抗虫谱广 ,能显著抑制幼虫的生长发育不易产生抗性 ,对人畜无害 ,因此对其进行研究及开发利用具有重要的经济和社会效益。迄今为止 ,至少已有 4种基因被克隆 ,通过转基因技术在烟草、水稻、小麦等作物获得了抗性植株 .本文从SKTI的类型、基因克隆及生理功能等方面作一简单综述。 展开更多
关键词 类型 基因克隆 生理功能 分布频率 大豆 kunitz型胰蛋白酶抑制剂 SKTI
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植物抗虫基因工程中大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制基因的研究 被引量：2
4
作者 高越峰 王伟 朱祯 《自然杂志》 1998年第5期306-307,共2页
主要农作物、林木以及园艺植物由于受到多种害虫的危害,造成了较大的经济与营养损失.目前,普遍采用化学杀虫剂控制害虫的危害.这在一定程度上破坏了生态平衡,且造成了环境污染.另一个更为严重的问题是,由于长期施放农药,害虫已逐步对其... 主要农作物、林木以及园艺植物由于受到多种害虫的危害,造成了较大的经济与营养损失.目前,普遍采用化学杀虫剂控制害虫的危害.这在一定程度上破坏了生态平衡,且造成了环境污染.另一个更为严重的问题是,由于长期施放农药,害虫已逐步对其产生抗性,有些害虫已达到很难用药物控制的程度.因此。 展开更多
关键词 植物 抗虫基因工程 大豆 胰蛋白酶抑制剂
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多年生野生大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及分析 被引量：4
5
作者 赵洪锟 李启云 +3 位作者 王玉民 李玉秋 庄炳昌 董英山 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期191-194,共4页
利用RT-PCR方法,从对蚜虫高抗的多年生野生大豆短绒野大豆(G.tomentella)(2n=78)未成熟子叶中扩增到了大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂同源基因单一目的片段,该基因和蛋白分别被命名为KTiPW54和KTiPW54。序列分析表明:该片段为654 bp的完整... 利用RT-PCR方法,从对蚜虫高抗的多年生野生大豆短绒野大豆(G.tomentella)(2n=78)未成熟子叶中扩增到了大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂同源基因单一目的片段,该基因和蛋白分别被命名为KTiPW54和KTiPW54。序列分析表明:该片段为654 bp的完整编码序列,编码218个氨基酸残基,编码的蛋白与栽培大豆(G.max)、野生大豆(G.soja)、短绒野大豆(G.tomentella)的Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因编码蛋白高度保守的区域一致。将KTiPW54编码区克隆到表达载体pTWIN1,在宿主菌BL21(DE3)中经IPTG诱导获得高效表达。 展开更多
关键词 多年生野生大豆 kunitz型胰蛋白酶抑制剂 原核表达
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