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saRNA在转录水平激活人膀胱癌细胞p21^(WAF1/CIP1)的表达研究 被引量：5
1
作者 胡嘏 陈忠 +7 位作者 吴嘉 张勇 王骥 郭小林 徐华 李龙承 杨为民 叶章群 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2012年第3期165-168,173,共5页
目的探讨小激活RNA-dsP21-322上调人膀胱癌细胞系T24中抑癌基因p21WAF1/CIP1(p21)表达的效应。进一步分析dsP21-322是否还可上调p21前体mRNA的表达,以及增强RNA聚合酶Ⅱ蛋白与dsP21-322靶向的p21启动子区的联系。方法合成靶向p21启动子... 目的探讨小激活RNA-dsP21-322上调人膀胱癌细胞系T24中抑癌基因p21WAF1/CIP1(p21)表达的效应。进一步分析dsP21-322是否还可上调p21前体mRNA的表达,以及增强RNA聚合酶Ⅱ蛋白与dsP21-322靶向的p21启动子区的联系。方法合成靶向p21启动子区的小激活RNA序列dsP21-322及阴性对照(dsControl),并分别转染至T24细胞,RT-qPCR和WesternBlot分别检测p21mRNA、前体mRNA和蛋白表达的变化。ChIP检测RNA聚合酶Ⅱ蛋白与dsP21-322靶向的p21启动子富集的改变。结果 RT-qPCR和WesternBlot结果显示,dsP21-322可以明显上调T24细胞系中p21成熟mRNA、前体mRNA及p21蛋白的表达,且与dsControl相比,差异均有统计学意义(P<0.001)。此外,dsP21-322的转染可以明显增强RNA聚合酶Ⅱ蛋白与dsP21-322靶向的p21启动子区的联系。结论 dsP21-322上调抑癌基因p21表达是发生在转录水平的基因调控过程,这一特征的发现为后续RNA激活机制的研究提供了部分理论依据。 展开更多
关键词 rna激活 小激活rna p21前体mrna rna聚合酶Ⅱ p21启动子
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不同启动子相关双链小分子RNA介导激活p21 Waf1/Cip1 基因研究 被引量：3
2
作者 龚化 陈忠 +3 位作者 盖强强 汪成合 李凡 叶章群 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2990-2992,共3页
目的探讨针对p21基因启动子序列不同转录起始位点设计的小双链RNA（dsRNA）对p21基因表达的正向调控作用。方法针对p21基因启动子DNA序列设计合成4对dsRNA分子dsP21．382、dsP21-436、dsP21-484、dsP21—625，转染人体外培养的人膀胱肿... 目的探讨针对p21基因启动子序列不同转录起始位点设计的小双链RNA（dsRNA）对p21基因表达的正向调控作用。方法针对p21基因启动子DNA序列设计合成4对dsRNA分子dsP21．382、dsP21-436、dsP21-484、dsP21—625，转染人体外培养的人膀胱肿瘤细胞株5637细胞及T24细胞中，并以具有激活功能的dsRNA分子dsP21—322作为阳性对照，以未转染的5637和T24细胞为空白对照，以dsControl为阴性对照。采用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）和Westernblot等观察各dsRNA转染后，细胞内p21基因mRNA及蛋白表达量的差异，以及dsRNA转染对肿瘤细胞株生长的影响。结果PCR结果显示，与空白对照组比较，dsP21—382、dsP21-436、dsP21-484、dsP21-625分别上调5637细胞中p21mRNA的表达1．56、1．88、2．41和1．74倍（P〈0．05），dsP21-382、dsP21-436、dsP21-484、dsP21-625分别上调T24细胞中021mRNA的表达1．71、1．69、2．62和1．85倍（P〈0．05）。Westernblot结果显示，与空白对照组比较，p21蛋白表达的升高与021mRNA水平的升高一致。4对dsRNA均能显著抑制膀胱肿瘤细胞株的生长。结论dsRNA对基因表达正向调控作用可能是一种普遍现象。 展开更多
关键词 rna激活 小激活rna P21基因 启动子相关
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saRNA调控NIS基因介导^(131)I对肝癌HepG2细胞体外抑制作用的实验研究 被引量：2
3
作者 王国玉 夏伟 +1 位作者 倪晶 庄菊花 《标记免疫分析与临床》 CAS 2015年第11期1138-1143,共6页
目的探索通过小激活RNA(saRNA)调控钠碘转运体(NIS)基因特异性表达介导肝癌核素显像和治疗的可行性,为RNA激活(RNAa)技术介导核素基因治疗肿瘤的应用提供实验依据。方法 saRNA的设计合成:通过基因BLAST比对,设计与合成三条针对NIS基因的... 目的探索通过小激活RNA(saRNA)调控钠碘转运体(NIS)基因特异性表达介导肝癌核素显像和治疗的可行性,为RNA激活(RNAa)技术介导核素基因治疗肿瘤的应用提供实验依据。方法 saRNA的设计合成:通过基因BLAST比对,设计与合成三条针对NIS基因的saRNA序列;细胞转染:以LipofectaminTM2000为saRNA载体,将saRNA转染到肝癌Hep G2细胞后72h,采用Western blotting分析NIS蛋白的表达水平,筛选出RNAa效率最高的saRNA,并进一步分析saRNA转染后不同时相NIS的表达水平,以及saRNA浓度-NIS表达水平的浓度-效应关系;体外核素摄取实验:体外培养条件下,评价转染肝癌Hep G2细胞对125I的摄取;细胞生长增殖抑制实验:体外培养条件下,评价131I对转染肝癌细胞的生长抑制率。结果 saRNA可上调NIS基因表达水平,其中saRNA482序列上调NIS表达水平最高;saRNA上调NIS的峰值出现在转染后72h,NIS维持高表达水平在10d以上;且NIS上调水平随saRNA浓度增高而增高。体外培养条件下,转染细胞与未转染细胞的摄碘水平差别明显,其中最高者摄碘较对照细胞高出64倍。体外培养条件下,相对未转染组肝癌细胞,131I对转染组Hep G2细胞的生长抑制率为60.7%。结论本研究设计合成的靶向NIS基因的saRNA可上调肝癌细胞NIS的表达水平,增强肝癌细胞摄取放射性碘的能力,研究还证实,通过RNAa调控NIS基因表达可介导131I治疗肝癌的潜力。 展开更多
关键词 钠碘转运体 肝癌 HepG2 rnaa 小激活rna 131I
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saRNA上调人前列腺癌PC-3细胞中Numb基因表达的研究 被引量：2
4
作者 陈金飚 颜醒愚 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第4期439-441,444,共4页
目的基于小激活RNA(saRNA)的肿瘤治疗策略,筛选具有激活Numb基因功能并相对高效的saRNA分子。方法设计与合成针对Numb基因的3对候选小分子双链RNA(dsRNA)分子,对照组dsRNA(dsControl)设计成与人类基因组序列非同源。将dsRNA分子转染人... 目的基于小激活RNA(saRNA)的肿瘤治疗策略,筛选具有激活Numb基因功能并相对高效的saRNA分子。方法设计与合成针对Numb基因的3对候选小分子双链RNA(dsRNA)分子,对照组dsRNA(dsControl)设计成与人类基因组序列非同源。将dsRNA分子转染人前列腺癌细胞(PC-3细胞)。采用RT-qPCR法检测转染后PC-3细胞中靶基因Numb的mRNA表达水平。Western blot验证转染后PC-3细胞靶基因Numb的蛋白表达水平。结果 dsNumb-870、dsNumb-948均未能上调PC-3细胞中靶基因Numb mRNA和蛋白水平;而dsNumb-298能上调细胞内Numb mRNA和蛋白水平。结论 dsNumb-298具有特异性激活PC-3细胞中Numb基因表达的功能。 展开更多
关键词 小激活rna NUMB 人前列腺癌PC-3细胞
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小激活RNA上调抑癌基因p21表达及其应用前景 被引量：1
5
作者 严静 黄益玲 黄利鸣 《生命科学》 CSCD 北大核心 2020年第6期574-580,共7页
小激活RNA(small activating RNA,saRNA)是新近发现的能够靶向作用于基因启动子区域,并在转录水平诱导基因表达的小分子双链RNA。RNA激活通过重新开启内源性基因的表达、恢复蛋白质的天然功能来发挥治疗作用,在医学上具有巨大的应用前... 小激活RNA(small activating RNA,saRNA)是新近发现的能够靶向作用于基因启动子区域,并在转录水平诱导基因表达的小分子双链RNA。RNA激活通过重新开启内源性基因的表达、恢复蛋白质的天然功能来发挥治疗作用,在医学上具有巨大的应用前景。抑癌基因p21的主要作用是使细胞周期停滞于G1/S和G2/M期,从而抑制细胞增殖。该文就saRNA上调抑癌基因p21表达的生物学意义及saRNA药物应用的可行性作一综述。 展开更多
关键词 小激活rna rna激活 抑癌基因p21 核酸药物
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小激活RNA在胃肠道肿瘤研究中的应用
6
作者 王森泰 昝新全 +1 位作者 万岱维 支巧明 《中国血液流变学杂志》 CAS 2022年第1期155-160,共6页
小激活RNA(small activating RNA,saRNA)是一种人工合成的双链小分子核酸,通过靶向作用于靶基因启动子区域,特异性上调靶基因的表达,近年来被用于恢复抑癌基因表达以达到治疗恶性肿瘤的目的,是未来有希望实现肿瘤精准治疗的一种新工具... 小激活RNA(small activating RNA,saRNA)是一种人工合成的双链小分子核酸,通过靶向作用于靶基因启动子区域,特异性上调靶基因的表达,近年来被用于恢复抑癌基因表达以达到治疗恶性肿瘤的目的,是未来有希望实现肿瘤精准治疗的一种新工具。胃肠道是肿瘤的好发部位,晚期胃肠道恶性肿瘤是胃肠外科医生面临的主要挑战之一,saRNA的发现推动了靶向治疗胃肠道肿瘤的研究。该文就近年来saRNA在胃肠道肿瘤的研究应用进行综述。 展开更多
关键词 小激活rna rna诱导的基因激活 胃肠道肿瘤 核酸药物
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钙离子通道蛋白TRPV5小激活RNA慢病毒载体及其稳定转染细胞株的构建 被引量：1
7
作者 曾滔 段小鹿 +3 位作者 杨州 麦新 刘旸 曾国华 《临床泌尿外科杂志》 2016年第3期259-263,共5页
目的:构建钙离子通道蛋白TRPV5小激活RNA(SaRNA)慢病毒载体,建立稳定激活TRPV5表达的大鼠肾小管上皮细胞株(NRK细胞株)。方法:针对大鼠TRPV5基因的启动子区域,设计并合成5条特异性SaRNA序列,通过脂质体转染和Western blot筛选出激活效... 目的:构建钙离子通道蛋白TRPV5小激活RNA(SaRNA)慢病毒载体,建立稳定激活TRPV5表达的大鼠肾小管上皮细胞株(NRK细胞株)。方法:针对大鼠TRPV5基因的启动子区域,设计并合成5条特异性SaRNA序列,通过脂质体转染和Western blot筛选出激活效应最强的SaRNA序列,连入慢病毒表达载体中构建重组质粒LV3-TRPV5-SaRNA,对重组质粒进行测序鉴定后进行慢病毒包装;利用生产的慢病毒颗粒感染NRK细胞,经嘌呤霉素筛选得到阳性克隆后进行扩增培养,通过RT-PCR和Western blot检测扩增后的阳性克隆细胞中TRPV5的mRNA和蛋白表达水平。结果:Western blot的检测结果显示SaRNA-320可以明显激活即上调TRPV5的表达水平;测序结果显示目的序列SaRNA-320正确插入LV3表达载体中;SaRNA-320慢病毒颗粒稳定感染的NRK细胞中TRPV5的mRNA和蛋白表达水平均明显升高。结论:成功构建了大鼠TRPV5基因的SaRNA慢病毒重组载体并获得TRPV5稳定过表达的NRK细胞株,为进一步利用小激活RNA技术以及研究钙离子通道在含钙结石的病因及防治中的作用及机制提供了扎实的实验基础。 展开更多
关键词 TRPV5 小激活rna 慢病毒 含钙结石
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小激活RNA(saRNA)--肿瘤治疗新途径 被引量：1
8
作者 王运 黄文华 孙军 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期979-984,共6页
在基因的表达调控过程中,一系列非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)发挥着广泛作用.然而,作为其重要成员的小激活RNA(small activating RNA,saRNA)却没有得到足够的认识和关注.本篇综述旨在介绍saRNA的机制与功能,并评估它的应用前景.文... 在基因的表达调控过程中,一系列非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)发挥着广泛作用.然而,作为其重要成员的小激活RNA(small activating RNA,saRNA)却没有得到足够的认识和关注.本篇综述旨在介绍saRNA的机制与功能,并评估它的应用前景.文中归纳该领域的最新进展,特别是有关肿瘤治疗的研究.saRNA能识别基因启动子上特定序列、诱导相应基因的转录,从而实现基因激活.这不仅与siRNA(small interfering RNA)的抑制作用相反,而且有其独特的动力学特征.目前,saRNA研究主要集中于肿瘤领域,并发现它对某些肿瘤的生长和转移具有抑制作用,因而有望开辟肿瘤治疗的新途径.本文结尾简要探讨了saRNA在开发新抗癌药物等方面的应用潜力. 展开更多
关键词 非编码rna 小激活rna 基因激活 肿瘤
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小激活RNA(saRNA)与恶性肿瘤的研究进展 被引量：1
9
作者 孙雨沛 胡火军 +1 位作者 李格 黄益玲 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2018年第1期52-55,共4页
在基因的表达调控过程中,一系列非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)发挥着广泛作用。RNA激活(RNA activation,RNAa)是近来发现的由小分子双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)靶向作用于基因启动子区域在转录水平诱导基因表达的基因调节现... 在基因的表达调控过程中,一系列非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)发挥着广泛作用。RNA激活(RNA activation,RNAa)是近来发现的由小分子双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)靶向作用于基因启动子区域在转录水平诱导基因表达的基因调节现象。具有激活功能的小dsRNA称之为小激活RNA(small activating RNA,saRNA)。与RNAi的沉默效果相比,RNAa的激活作用更为持久,它为肿瘤、代谢及遗传性疾病的治疗提供了一个崭新的思路和方法,将成为重要的分子生物学工具,应用于实验研究和疾病的基因治疗当中。本文将从saRNA的发现、saRNA的特征及其在肿瘤调控和治疗中的潜在作用予以综述。 展开更多
关键词 小激活rna 基因激活 恶性肿瘤
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