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逆转录病毒介导的小干扰RNA稳定抑制了LRP16基因表达 被引量:5
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作者 韩为东 李琦 +4 位作者 赵亚力 母义明 李雪 宋海静 郝好杰 《生物技术通讯》 CAS 2004年第4期326-329,共4页
RNA干涉是近年被广泛关注的一项技术,通过19~21nt的双链核酸介导使靶基因mRNA特异降解,目前已被广泛应用于细胞水平的基因功能研究。通过沉默LRP16基因表达介绍一项利用逆转录病毒介导发夹环样小干扰RNA的策略。首先选择了LRP16基因mRN... RNA干涉是近年被广泛关注的一项技术,通过19~21nt的双链核酸介导使靶基因mRNA特异降解,目前已被广泛应用于细胞水平的基因功能研究。通过沉默LRP16基因表达介绍一项利用逆转录病毒介导发夹环样小干扰RNA的策略。首先选择了LRP16基因mRNA翻译起始位点下游+374nt和+668nt位置分别作为小干扰RNA作用靶位点,通过设计21nt的反义序列,构建了pL374和pL6682个以pLPC为骨架的逆转录病毒载体,针对绿色荧光蛋白序列构建pGFPi载体做阴性对照,茎环样结构小RNA由U6启动子驱动转录生成。3个载体分别与VSVG共转染293GP2细胞,包装假病毒,再分别感染MCF-7细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定生成小干扰RNA的细胞。Northernblot实验表明pL374和pL668可分别将LRP16基因抑制90%和60%,为进一步研究LRP16基因功能奠定了基础。另外,首次将mU6启动子序列插入pLPC逆转录病毒载体骨架,将其改造为可介导发夹环样小干扰RNA产生的质粒载体。 展开更多
关键词 逆转录病毒 小干扰rna MCF-7细胞 LRP16基因 表达 抑制
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siRNAs介导的基因沉默技术和相关应用的研究进展 被引量:3
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作者 陈长宝 青春 陆树良 《上海第二医科大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第11期1184-1187,共4页
RNA干扰(RNA i)是由双链RNA(doub le-stranded RNA,dsRNA)介导的、序列特异的转录后基因沉默机制,是一古老的细胞反应通路,其在抵抗病毒感染、抑制转座子活动、调控内源性基因表达等方面发挥重要作用。近年来,短链RNA干扰(siRNAs)已成... RNA干扰(RNA i)是由双链RNA(doub le-stranded RNA,dsRNA)介导的、序列特异的转录后基因沉默机制,是一古老的细胞反应通路,其在抵抗病毒感染、抑制转座子活动、调控内源性基因表达等方面发挥重要作用。近年来,短链RNA干扰(siRNAs)已成功地应用于哺乳动物中,该文就其介导的基因沉默技术和相关应用的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 rna干扰 双链rna 转录后基因沉默 短链rna干扰 基因治疗
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病毒编码的RNA沉默抑制子的特征及其生物技术应用 被引量:3
3
作者 孙燕霞 刘红梅 《山东科学》 CAS 2008年第2期21-26,38,共7页
RNA沉默是一种依赖核酸序列特异性的RNA降解过程,是动物、植物抵抗病毒等外源核酸的一种保守防御机制。而针对寄主的这种防御机制,许多病毒演化出RNA沉默抑制子以克服这种防御反应。本文综述了几种动物、植物病毒抑制子的结构和作用方式... RNA沉默是一种依赖核酸序列特异性的RNA降解过程,是动物、植物抵抗病毒等外源核酸的一种保守防御机制。而针对寄主的这种防御机制,许多病毒演化出RNA沉默抑制子以克服这种防御反应。本文综述了几种动物、植物病毒抑制子的结构和作用方式,讨论了病毒抑制子之间的交叉抑制功能,病毒运动和沉默抑制子之间的关系,病毒RNA和亚病毒寄生物通过沉默抑制子而进行的自我保护原理,抑制子对于miRNA(microRNA)途径的影响以及病毒抑制子在生物技术方面的应用。 展开更多
关键词 rna沉默 病毒沉默抑制子 小分子干扰rna rna
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低频超声联合靶向纳米微泡介导siRNA转染肝癌细胞的实验研究 被引量:3
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作者 吴博林 程文 +4 位作者 乔强 韩雪 荆慧 张颢 梁宏健 《医学影像学杂志》 2016年第5期837-842,共6页
目的探讨低频超声联合靶向纳米微泡介导的NET-1 siRNA转染人肝癌细胞株HepG 2的最佳输出声功率。方法 1)以磷脂复合物为原料、以半乳糖苷化多聚赖氨酸为靶向配体,利用薄膜水化法配合机械震荡法制备靶向纳米微泡,利用生物素-亲和素系统,... 目的探讨低频超声联合靶向纳米微泡介导的NET-1 siRNA转染人肝癌细胞株HepG 2的最佳输出声功率。方法 1)以磷脂复合物为原料、以半乳糖苷化多聚赖氨酸为靶向配体,利用薄膜水化法配合机械震荡法制备靶向纳米微泡,利用生物素-亲和素系统,将NET-1 siRNA与靶向纳米微泡偶联,制备成肝癌靶向载NET-1siRNA纳米微泡;2)采用CGZZ型低频超声基因转染治疗仪,频率为1.00MHz,单路晶片输出声功率在0.11-3.5W,占空比50%;3)将HepG 2细胞分别接种在培养板中,随机分为6组进行低频超声辐照实验;4)以MTT法检测细胞增殖情况;进行Quantitative Realtime PCR检测NET-1 mRNA表达情况;Western Blot法检测NET-1蛋白的表达。结果 C组、D组、E组和F组的细胞增殖能力与A组比较细胞增殖显著受到抑制(P〈0.05)。C组、D组、E组和F组的细胞增殖在转染后48h分别抑制了54.39%、24.66%、42.49%和63.39%。NET-1mRNA表达抑制率各组间差异有统计学意义(P〈0.05),D组NET-1 mRNA表达抑制率较其余组明显提高(P〈0.05)。Western Blot电泳结果显示D组的条带表达最弱、范围最小,D组NET-1蛋白表达抑制率92.81%,与同期的B组(26.45%)、C组(43.39%)、F组(25.14%)比较差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论低频超声联合靶向纳米微泡能有效促进NET-1 siRNA对肝癌细胞的转染,并抑制肝癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 肝细胞癌 纳米微泡 低频超声 SIrna 声功率
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靶向PB2基因的特异性siRNA抑制禽流感病毒(AIV)复制 被引量:3
5
作者 刘丹 亓文宝 +5 位作者 孟庆文 秦红刚 李文超 司昌德 刘家森 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期245-249,共5页
根据siRNA设计原则,设计并合成5对靶向禽流感病毒(AIV)PB2基因的siRNA(PB2374,PB2665,PB2936,PB21031和PB21233),将其转染MDCK细胞,分别于转染前和转染后感染H5N1禽流感病毒A/Goose/Guang dong1/96株;在转染后24h、48h和72h分别收集上清... 根据siRNA设计原则,设计并合成5对靶向禽流感病毒(AIV)PB2基因的siRNA(PB2374,PB2665,PB2936,PB21031和PB21233),将其转染MDCK细胞,分别于转染前和转染后感染H5N1禽流感病毒A/Goose/Guang dong1/96株;在转染后24h、48h和72h分别收集上清液;通过血凝试验(HA)和Real-time PCR检测siRNA抑制AIV增殖的效果。血凝试验结果表明:所设计的5对siRNA中,PB2374抑制AIV增殖的效率为68%~71%,PB2963抑制AIV增殖效率为78%~81%;Real-time PCR检测到PB2374转染组PB2基因的转录水平与对照组比较降低3~3.3倍,PB2963转染组PB2基因的转录水平降低3.9~4.2倍。无论siRNA是先于还是迟于AIV感染,这两对siRNA都能明显地抑制AIV的增殖;本研究结果为开发抗AIV治疗制剂和动物机体抗AIV研究奠定了基础。 展开更多
关键词 AIM PB2 SIrna 抑制
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siRNA抗肝癌国内研究进展 被引量:2
6
作者 胡蓉 康丽 陈自然 《内江师范学院学报》 2010年第2期42-47,共6页
综述了国内siRNA在肝癌治疗中的研究现状.在肝癌治疗中,运用siRNA技术构建相应的siRNA载体,分别作用于与肝癌发生相关的癌基因、抑癌基因及其他相关因子等,可在一定程度上抑制癌基因表达、抑癌基因突变、细胞周期素的过度表达、过度表... 综述了国内siRNA在肝癌治疗中的研究现状.在肝癌治疗中,运用siRNA技术构建相应的siRNA载体,分别作用于与肝癌发生相关的癌基因、抑癌基因及其他相关因子等,可在一定程度上抑制癌基因表达、抑癌基因突变、细胞周期素的过度表达、过度表达的生长因子和受体以及肝癌细胞的侵袭转移能力.这些方面的研究均取得了可喜的成果,部分研究已从体外试验过渡到体内试验,为肝癌的临床治疗奠定了基础.siRNA技术为肝癌以及其他肿瘤的治疗开辟了一条新途径.但siRNA技术作为一项即将应用于临床的新技术仍存在许多问题,因此,作为临床治疗目前条件尚不成熟,仍需进一步研究. 展开更多
关键词 小分子干扰rna 肝癌 基因治疗
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小分子干扰RNA下调星形细胞上调基因1的表达对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响 被引量:2
7
作者 秦瑞英 华彩虹 朱丽红 《新乡医学院学报》 CAS 2014年第7期524-527,共4页
目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)下调星形细胞上调基因1(AEG-1)表达对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法卵巢癌细胞株SKOV3分为3组:空白对照组(不做任何处理)、阴性对照组(对照siRNA转染)和观察组(AEG-1 siRNA转染)。用反转录聚合酶链反... 目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)下调星形细胞上调基因1(AEG-1)表达对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法卵巢癌细胞株SKOV3分为3组:空白对照组(不做任何处理)、阴性对照组(对照siRNA转染)和观察组(AEG-1 siRNA转染)。用反转录聚合酶链反应观察AEG-1 siRNA对AEG-1基因表达的影响;甲基噻唑基四唑法观察AEG-1 siRNA对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测AEG-1 siRNA对卵巢癌SKOV3细胞凋亡和细胞周期的影响。结果空白对照组和阴性对照组AEG-1 mRNA表达、SKOV3细胞增殖、细胞凋亡率及在DNA合成前期(G0/G1期)、合成期(S期)、合成后期(G2/M期)的细胞比例差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组SKOV3细胞AEG-1 mRNA表达显著低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。观察组SKOV3细胞增殖在24、48、72 h较空白对照组和阴性对照组均显著减慢,差异有统计学意义(P<0.01)。观察组SKOV3细胞凋亡率显著高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01);观察组SKOV3细胞在DNA合成前期(G0/G1期)细胞比例显著高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01),而合成期(S期)、合成后期(G2/M期)的细胞比例均显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01),差异均有统计学意义。结论 siRNA可通过下调卵巢癌SKOV3细胞AEG-1基因的表达,抑制其增殖,促进其凋亡。 展开更多
关键词 星形细胞上调基因1 卵巢癌细胞 小分子干扰rna 细胞凋亡
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RNA干扰机制的研究进展 被引量:2
8
作者 宋敬东 王健伟 +2 位作者 吴围屏 韩金祥 洪涛 《生物技术通讯》 CAS 2006年第3期409-411,共3页
RNA干扰(RNAi)广泛存在于各种生物体中,是参与细胞防御与分化调控的重要机制之一。RNAi的作用由双链RNA启动,通过在转录、转录后和翻译等多个水平上对同源基因表达的特异阻断和抑制来实现,清晰地阐明其作用机制将为功能基因组学、发育... RNA干扰(RNAi)广泛存在于各种生物体中,是参与细胞防御与分化调控的重要机制之一。RNAi的作用由双链RNA启动,通过在转录、转录后和翻译等多个水平上对同源基因表达的特异阻断和抑制来实现,清晰地阐明其作用机制将为功能基因组学、发育生物学,以及抗肿瘤、抗病毒的新策略研究提供重要的理论依据。本文综述了近年来有关RNAi机制的研究进展。 展开更多
关键词 转录基因沉默 转录后基因沉默 翻译水平沉默 短干扰rna 微小rna
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RNA干涉技术用于p53基因表达的研究 被引量:1
9
作者 祁小飞 马跃云 +1 位作者 黄瑞 韩泽广 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期211-213,共3页
目的利用RNAi技术研究p53基因表达。方法以质粒为载体,介导体外合成的具有与p53基因目的区域同源的特殊结构的DNA片段,通过脂质体将携带此片段的质粒载体导入COS-7细胞,利用载体的U6-RNA启动子,不断在体内产生21-23ntsiRNA,引起目的基因... 目的利用RNAi技术研究p53基因表达。方法以质粒为载体,介导体外合成的具有与p53基因目的区域同源的特殊结构的DNA片段,通过脂质体将携带此片段的质粒载体导入COS-7细胞,利用载体的U6-RNA启动子,不断在体内产生21-23ntsiRNA,引起目的基因p53的沉默并用Westernblot检测p53的表达水平。结果通过质粒载体介导体外合成的具有特殊结构的DNA片段,能成功地导致p53蛋白的表达下降。结论RNAi技术可作为研究肿瘤基因的有效手段。 展开更多
关键词 rna干涉技术 表达的研究 rnai技术 P53基因表达 COS-7细胞 Western DNA片段 BLOT检测 特殊结构 体外合成 基因P53 p53蛋白 质粒载体 Irna 载体介导 肿瘤基因 脂质体 启动子
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Use of RNAi silencing to target preconditioned glial cell line-derived neurotrophic factor in neuronal apoptosis 被引量:1
10
作者 Hongliang Guo Xinhua Li +7 位作者 Jing Mang Ying Xing Jinting He Guihua Xu Shijun Yan LifengLiu Chunli Mei Zhongxin Xu 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2011年第7期510-516,共7页
Several studies have suggested that exogenous glial cell line-derived neurotrophic factor may pro-tect neurons from cerebral ischemic injury. However, the mechanisms underlying the neuroprotec-tive effects of endogeno... Several studies have suggested that exogenous glial cell line-derived neurotrophic factor may pro-tect neurons from cerebral ischemic injury. However, the mechanisms underlying the neuroprotec-tive effects of endogenous glial cell line-derived neurotrophic factor remain unclear. The present experiments sought to elucidate the influence of various conditioned media on neuronal apoptosis, using a normal culture medium for astrocytes, an astrocyte medium highly expressing glial cell line-derived neurotrophic factor, and an astrocyte medium in which glial cell line-derived neurotro-phic factor expression was silenced using RNAi technology. The results confirmed that the use of RNAi silencing to target pretreated glial cell line-derived neurotrophic factor expression promoted neuronal apoptosis. In addition, oxygen and glucose deprivation preconditioning was found to upregulate glial cell line-derived neurotrophic factor expression, and significantly reduce neuronal apoptosis. 展开更多
关键词 glial cell line-derived neurotrophic factor ASTROCYTE NEURON short interfering rna APOPTOSIS neural regeneration
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RNA干扰的途径和机制 被引量:1
11
作者 李绍祥 郭汉斌 曹建彪 《昆明医科大学学报》 CAS 2012年第11期148-151,共4页
RNA干扰(RNA interference,RNA)i是由双链RNA介导的序列特异的基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达,具有高效性和高特异性的特点.现就RNAi的两种途径:小干扰RNA和微小RNA的特点和机制作一综述.
关键词 rna干扰 小干扰rna 微小rna
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短干扰RNA抑制人宫颈癌HeLa细胞Ku80基因表达 被引量:1
12
作者 熊华 于世英 张孟贤 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期400-402,410,共4页
目的针对内源性Ku80基因序列体外构建短干扰RNA(siRNA)线性DNA转录载体,观察其在细胞内产生的siRNA对该基因表达的影响。方法构建的线性DNA转录载体经脂质体导入宫颈癌HeLa细胞内,转录产生21 bp的短双链siRNA,并用免疫印迹法分析Ku80基... 目的针对内源性Ku80基因序列体外构建短干扰RNA(siRNA)线性DNA转录载体,观察其在细胞内产生的siRNA对该基因表达的影响。方法构建的线性DNA转录载体经脂质体导入宫颈癌HeLa细胞内,转录产生21 bp的短双链siRNA,并用免疫印迹法分析Ku80基因在蛋白水平表达的情况。结果体外成功构建出siRNA线性DNA转录载体LS1/LAS1和LS2/LAS2;载体分别导入HeLa细胞内生成相应siRNA;与空白对照组比较,实验组均能特异性抑制Ku80基因的表达;其抑制效果和时间点与所选基因靶位相关。结论由线性DNA载体转录生成的siRNA在细胞内特异性抑制内源性基因表达,为Ku80用于肿瘤靶向基因治疗提供了一个新的实验依据。 展开更多
关键词 rna干扰 短干扰rna Ku80基因 基因治疗
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RNA干扰技术在胃癌治疗中的研究进展 被引量:1
13
作者 李三党 刘宏斌 《现代肿瘤医学》 CAS 2014年第12期2993-2996,共4页
RNA干扰(RNA interference,RNAi)主要通过导入双链RNA(double strands RNA,dsRNA)进而靶向抑制转录后基因的沉默,小分子干扰RNA(short interfering RNA,siRNA),是RNA干涉的调控的关键。由于RNAi对基因沉默的高效、特异性,在胃癌治疗中,... RNA干扰(RNA interference,RNAi)主要通过导入双链RNA(double strands RNA,dsRNA)进而靶向抑制转录后基因的沉默,小分子干扰RNA(short interfering RNA,siRNA),是RNA干涉的调控的关键。由于RNAi对基因沉默的高效、特异性,在胃癌治疗中,可明显影响胃癌细胞的生物学特性,故这一技术目前已被广泛应用于与胃癌发生相关的基因、蛋白、通路和酶等研究,为胃癌的治疗提供了一种新的途径。 展开更多
关键词 rna干扰 小分子干扰rna 胃癌
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短干扰RNA特异性抑制哺乳动物β淀粉样前体蛋白裂解酶基因表达 被引量:1
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作者 胡海涛 董炜疆 +4 位作者 冯改丰 刘朝晖 刘苏虎 杨广笑 王全颖 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2006年第6期622-629,共8页
目的:探讨β淀粉样前体蛋白裂解酶(-βsite APP cleav ing enzym e,BACE)的短干扰RNA(short interfering RNA s,siRNA)是否能抑制BACE在哺乳动物细胞中的表达,为阿尔茨海默病(AD)的治疗提供新的手段。方法:采用PCR分别扩增增强型绿色荧... 目的:探讨β淀粉样前体蛋白裂解酶(-βsite APP cleav ing enzym e,BACE)的短干扰RNA(short interfering RNA s,siRNA)是否能抑制BACE在哺乳动物细胞中的表达,为阿尔茨海默病(AD)的治疗提供新的手段。方法:采用PCR分别扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、U 6启动子和靶向BACE的特异性小干扰RNA(siBACE),随后将相应的序列片段克隆入真核表达载体pLXSN,通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体pLXSN/EGFP-U 6-siBACE进行鉴定;制备稳定高表达BACE基因的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株,用荧光显微镜和免疫组织化学的方法观察siRNA对BACE表达的影响。结果:成功构建了靶向BACE的短干扰RNA的逆转录病毒载体pLXSN/EGFP-U 6-siBACE,并能特异性地抑制BACE在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株中的表达。结论:成功构建了针对BACE的短干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U 6-siBACE,并能有效抑制哺乳动物BACE基因的表达,为利用RNA干扰技术作为治疗AD的新方法提供了重要的实验基础。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病/治疗 rna 小分子干扰 淀粉样Β蛋白前体 基因 短干扰rna Β分泌酶
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靶向HBx小干扰RNA表达载体构建及其功能探讨 被引量:1
15
作者 高国生 翁彭剑 +4 位作者 纪礽斌 李德周 李永燕 李红山 丁世雄 《中国卫生检验杂志》 CAS 2011年第7期1682-1684,共3页
目的:设计和构建乙型肝炎病毒(HBV)X基因(HBx)特异性的小干扰RNA(siRNA)体内表达载体,筛选抑制X基因表达的有效siRNA,并初步探讨其对HBV复制功能的影响。方法:以X基因为目的基因,以产生siRNA质粒载体pSilencerTM-U6为表达模板,细胞内转... 目的:设计和构建乙型肝炎病毒(HBV)X基因(HBx)特异性的小干扰RNA(siRNA)体内表达载体,筛选抑制X基因表达的有效siRNA,并初步探讨其对HBV复制功能的影响。方法:以X基因为目的基因,以产生siRNA质粒载体pSilencerTM-U6为表达模板,细胞内转录合成3条siRNA,并构建携带荧光素酶报告基因的重组质粒载体plucF-HBx。将重组质粒载体plucF-HBx与产生siRNA的质粒pSilencerTM-U6共转染HepG2细胞,检测荧光素酶活性以筛选出抑制荧光素酶表达的有效siRNA,逆转录聚合酶链反应检测HBx mRNA的表达,进一步证实siRNA对HBx表达的抑制效果,然后将siRNA转染HepG2.2.15,酶联免疫吸附法和荧光定量PCR检测siRNA对HBV复制的影响。结果:合成的3条siRNA中有1条抑制荧光素酶表达,抑制效率为76.3%,并能特异性抑制HBV的复制。结论:成功构建并筛选到针对X基因表达的有效siRNA质粒,为HBV的基因治疗奠定基础。 展开更多
关键词 rna干扰 乙型肝炎病毒 SIrna 表达载体 基因治疗
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核糖核酸干扰(RNAi)在生物医学研究中的应用
16
作者 吴二喜 印大中 王凤飞 《生命科学研究》 CAS CSCD 2005年第2期95-98,共4页
核糖核酸干扰(RNAi)是指一个由双链RNA诱导具有相同碱基序列的靶标RNA降解的现象,它是沉默基因表达的一个十分有效的手段.RNAi导致基因沉默的机制可分为以下两步:首先由核酸酶Dicer切割长的双链RNA形成小片段碱基(19~25)的siRNA.然后,... 核糖核酸干扰(RNAi)是指一个由双链RNA诱导具有相同碱基序列的靶标RNA降解的现象,它是沉默基因表达的一个十分有效的手段.RNAi导致基因沉默的机制可分为以下两步:首先由核酸酶Dicer切割长的双链RNA形成小片段碱基(19~25)的siRNA.然后,这些siRNA组成一个RNA诱导沉默复合体(RISC),并且siRNA被一个内源激酶磷酸化,双链siRNA打开,让反义RNA引导RISC至其目的信使RNA(mRNA),从而使其目的mRNA内切降解.RNAi技术可以应用到许多生命科学研究方面,如功能基因组以及医药研究.同时讨论了RNAi的一些最新进展如siRNA的设计和导入细胞的方法. 展开更多
关键词 核糖核酸干扰 小片段干扰性核糖核酸 基因沉默 功能基因组
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靶向载脂蛋白M基因小干扰RNA表达载体构建及其功能
17
作者 黄刚 祝成亮 +1 位作者 潘峰 刘芳 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2007年第5期345-348,共4页
目的设计和构建载脂蛋白M基因特异性的小干扰RNA体内表达载体,筛选抑制载脂蛋白M表达的有效小干扰RNA,并初步探讨载脂蛋白M的功能。方法以载脂蛋白M为目的基因,以产生小干扰RNA质粒载体pSilencerTM2.1-U6为表达模板,细胞内转录合成4条... 目的设计和构建载脂蛋白M基因特异性的小干扰RNA体内表达载体,筛选抑制载脂蛋白M表达的有效小干扰RNA,并初步探讨载脂蛋白M的功能。方法以载脂蛋白M为目的基因,以产生小干扰RNA质粒载体pSilencerTM2.1-U6为表达模板,细胞内转录合成4条小干扰RNA,并构建携带荧光素酶报告基因的重组质粒载体plucF-载脂蛋白。将重组质粒载体plucF-载脂蛋白与产生小干扰RNA的质粒pSilencerTM2.1-U6共转染293T细胞,定量测量荧光素酶活性,初步筛选出抑制荧光素酶表达的有效小干扰RNA,然后将小干扰RNA转染L-02,逆转录聚合酶链反应检测载脂蛋白M mRNA的表达,进一步证实小干扰RNA对载脂蛋白M表达的抑制效果,酶联免疫吸附法检测有效小干扰RNA对载脂蛋白AⅠ、载脂蛋白B和载脂蛋白E合成和分泌的影响。结果合成的4条小干扰RNA中有2条抑制荧光素酶表达,抑制效率分别为86%和91%,并特异性抑制肝细胞载脂蛋白M mRNA的表达;有效小干扰RNA能够有效抑制载脂蛋白AⅠ合成和分泌(P<0.05),而载脂蛋白B和载脂蛋白E的含量无明显改变(P>0.05)。结论成功构建并筛选到针对载脂蛋白M基因表达的有效小干扰RNA质粒,为研究冠心病的发病机制奠定基础。 展开更多
关键词 生物工程学 rna干扰 载脂蛋白M 小干扰rna 表达载体 基因表达 冠心病
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iRNA:一种新兴的肿瘤治疗方法
18
作者 邹叔彪 陈志哲 刘庭波 《医学综述》 2007年第9期678-680,共3页
干扰RNA不仅是基因功能研究的一种工具,同时也成为一种通过特异调控基因达到减轻病理的手段。基于前期的体内外实验研究,干扰RNA将用于阐明肿瘤发病机制和开发治疗手段等方面。通过特异下调相关基因达到治疗的作用。然后一些重大问题,... 干扰RNA不仅是基因功能研究的一种工具,同时也成为一种通过特异调控基因达到减轻病理的手段。基于前期的体内外实验研究,干扰RNA将用于阐明肿瘤发病机制和开发治疗手段等方面。通过特异下调相关基因达到治疗的作用。然后一些重大问题,诸如体内导入,目的基因的不完全抑制,非特异免疫应答,旁观者效应等,仍将是干扰RNA成功应用于临床之前面对和必需克服的障碍。 展开更多
关键词 肿瘤治疗 干扰rna 小干扰rna
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Tie2-siRNA表达载体对子宫内膜癌Ishikawa细胞株生物学行为的影响
19
作者 吴婵 周怀君 +1 位作者 寻庆英 李荣 《江苏医药》 CAS 2016年第8期879-882,F0002,共5页
目的探讨Tie2-siRNA表达载体对子宫内膜癌Ishikawa细胞株生物学行为的影响。方法将表达Tie2-siRNA的碱基片段插入含有巨细胞病毒启动子、新霉素抗性基因及绿色荧光蛋白报告基因的质粒中,应用脂质体包涵体技术将质粒转染入子宫内膜癌Ishi... 目的探讨Tie2-siRNA表达载体对子宫内膜癌Ishikawa细胞株生物学行为的影响。方法将表达Tie2-siRNA的碱基片段插入含有巨细胞病毒启动子、新霉素抗性基因及绿色荧光蛋白报告基因的质粒中,应用脂质体包涵体技术将质粒转染入子宫内膜癌Ishikawa细胞株,以减少Tie2基因的表达,并采用逆转录PCR及Western blot方法鉴定。用MTT实验描绘各组细胞增殖曲线,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果成功转染后Tie2基因的mRNA转录水平及蛋白表达水平抑制率分别为75.5%及56.4%,Ishikawa细胞增殖72-h抑制率为73.9%,凋亡率为35.9%。结论体外下调Tie2基因的转录及表达可抑制肿瘤生长,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 Tie2基因 子宫内膜癌 Ishikawa细胞株 小干扰rna
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siRNA在鼻咽癌基因治疗中的研究进展
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作者 张书萍 李晓江 隋军 《医学综述》 2013年第5期835-837,共3页
鼻咽癌是我国华南、西南地区高发的恶性肿瘤之一。随着分子生物学重组DNA技术的不断进步,鼻咽癌的基因治疗得到了迅猛发展,依据肿瘤自身以及发生机制而制订的个性化治疗方案已经成为鼻咽癌治疗的热点。小分子干扰RNA(siRNA)技术已逐渐... 鼻咽癌是我国华南、西南地区高发的恶性肿瘤之一。随着分子生物学重组DNA技术的不断进步,鼻咽癌的基因治疗得到了迅猛发展,依据肿瘤自身以及发生机制而制订的个性化治疗方案已经成为鼻咽癌治疗的热点。小分子干扰RNA(siRNA)技术已逐渐成为鼻咽癌等头颈肿瘤的重要研究方向。现就siRNA及其干扰技术在鼻咽癌基因治疗中的研究进展予以综述。 展开更多
关键词 小分子干扰rna 鼻咽肿瘤 基因沉默
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