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甘蔗锌指蛋白基因ShSAP1的克隆与表达模式 被引量：10
1
作者 李晓君 蔡文伟 +3 位作者 张树珍 许莉萍 陈萍 王俊刚 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期868-875,共8页
植物中具有A20/AN1锌指结构域的蛋白与逆境应答密切相关,在甘蔗热带种Saccharum officinarum拔地拉Badila中克隆到一个具有A20/AN1锌指结构域的锌指蛋白基因ShSAP1。为研究ShSAP1的基因结构和表达特性,采用PCR和Southern blotting分析了... 植物中具有A20/AN1锌指结构域的蛋白与逆境应答密切相关,在甘蔗热带种Saccharum officinarum拔地拉Badila中克隆到一个具有A20/AN1锌指结构域的锌指蛋白基因ShSAP1。为研究ShSAP1的基因结构和表达特性,采用PCR和Southern blotting分析了ShSAP1的基因组结构,通过半定量RT-PCR对ShSAP1在甘蔗不同部位、不同胁迫和不同激素处理下的表达模式进行了分析。结果表明,ShSAP1的5＇UTR区有两段内含子,大小分别为202 bp和1 052 bp,在Badila中有1~2个拷贝;ShSAP1在甘蔗成熟植株根茎叶中均有表达,在茎秆中的表达量随着茎节成熟而递增;在幼苗阶段,ShSAP1的表达能被高盐、模拟干旱、GA3、ABA和ET诱导增强。以上结果表明,ShSAP1可能在甘蔗成熟与逆境应答中具有重要作用。 展开更多
关键词 甘蔗 SAP A20/AN1锌指蛋白 shsap1 非生物胁迫
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甘蔗ShSAP1基因的启动子克隆与序列分析 被引量：3
2
作者 李晓君 武媛丽 +2 位作者 张焱珍 杨本鹏 张树珍 《中国农学通报》 CSCD 2014年第12期272-278,共7页
启动子在转基因育种中具有重要地位,为了发掘高效的胁迫诱导和组织特异型启动子,提高目的基因的表达效率,根据甘蔗逆境相关蛋白家族基因ShSAP1的基因组序列,利用Genome Walking法对ShSAP1的启动子进行了分离,并对其序列进行了生物信息... 启动子在转基因育种中具有重要地位,为了发掘高效的胁迫诱导和组织特异型启动子,提高目的基因的表达效率,根据甘蔗逆境相关蛋白家族基因ShSAP1的基因组序列,利用Genome Walking法对ShSAP1的启动子进行了分离,并对其序列进行了生物信息学分析。分离获得了1243 bp的启动子序列,该序列具有启动子的核心元件,还包含了干旱等胁迫相关的应答元件、MYB/MYC转录因子识别与结合元件、光应答元件及组织特异性相关元件,说明ShSAP1的启动子可能具有逆境应答及组织特异表达特性,值得开展进一步的功能研究。 展开更多
关键词 shsap1 启动子 克隆 顺式作用元件
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甘蔗锌指蛋白基因ShSAP1的RNAi载体构建及对甘蔗的转化 被引量：1
3
作者 李晓君 王俊刚 +1 位作者 武媛丽 张树珍 《热带作物学报》 CSCD 2011年第6期993-997,共5页
植物中具有A20/AN1锌指结构域的蛋白参与了逆境应答,为研究甘蔗A20/AN1型锌指蛋白基因ShSAP1的功能及在甘蔗抗逆育种方面的价值,本研究通过构建ShSAP1基因的RNAi载体并进行甘蔗的遗传转化,以期通过反向遗传学进行ShSAP1的功能分析。将Sh... 植物中具有A20/AN1锌指结构域的蛋白参与了逆境应答,为研究甘蔗A20/AN1型锌指蛋白基因ShSAP1的功能及在甘蔗抗逆育种方面的价值,本研究通过构建ShSAP1基因的RNAi载体并进行甘蔗的遗传转化,以期通过反向遗传学进行ShSAP1的功能分析。将ShSAP1锌指编码区片段分别以正向和反向插入到中间载体pTCK303内含子的两侧,构建中间载体pTCK-iShSAP1,而后把干扰片段连入pCAMBIA-GUS中,获得RNAi表达载体pCAMBIA-iShSAP1,将该载体转导根癌农杆菌EHA105,通过农杆菌介导法侵染甘蔗胚性愈伤组织,并对部分转化幼苗进行了初步的PCR鉴定。经过限制性内切酶分析和测序验证,RNAi载体pCAMBIA-iShSAP1构建成功;转化幼苗经PPT抗性筛选后,获得了58株抗性植株,对抗性幼苗进行了Bar基因的PCR检测,得到6株PCR阳性植株。本研究完成了ShSAP1的RNAi载体构建及对甘蔗的遗传转化,为ShSAP1的功能研究打下了一定的基础。 展开更多
关键词 shsap1 pTCK303 载体 RNA干扰 基因功能
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甘蔗锌指蛋白基因ShSAP1表达产物的亚细胞定位
4
作者 李晓君 孔冉 +3 位作者 赵婷婷 武媛丽 郭婷 张树珍 《热带作物学报》 CSCD 2011年第11期2080-2083,共4页
甘蔗锌指蛋白ShSAP1可能参与了甘蔗成熟与逆境应答的过程。为了研究ShSAP1的功能,可通过亚细胞定位研究ShSAP1的定位特点。首先将ShSAP1基因的编码区序列连接到植物表达载体pCAMBIA1302中,构建ShSAP1与绿色荧光蛋白基因融合的植物表达载... 甘蔗锌指蛋白ShSAP1可能参与了甘蔗成熟与逆境应答的过程。为了研究ShSAP1的功能,可通过亚细胞定位研究ShSAP1的定位特点。首先将ShSAP1基因的编码区序列连接到植物表达载体pCAMBIA1302中,构建ShSAP1与绿色荧光蛋白基因融合的植物表达载体pCAMBIA-ShSAP1,然后采用基因枪转化法转入洋葱表皮细胞,在荧光显微镜下观察ShSAP1与GFP融合表达产物在洋葱表皮细胞中的亚细胞定位,结果表明ShSAP1-GFP融合蛋白定位在细胞膜、细胞质和细胞核中。 展开更多
关键词 甘蔗 shsap1 锌指蛋白 亚细胞定位
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ShSAP1的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量：1
5
作者 李晓君 周文吉 +1 位作者 周启武 王文荣 《江苏农业科学》 北大核心 2015年第3期43-45,共3页
将ShSAP1的阅读框连接到原核表达载体p ET32a(+)中,构建成ShSAP1原核表达载体PET-ShSAP1,然后将其转入宿主菌BL21,经IPTG诱导后,宿主菌表达出与预期分子量大小相符的35 ku的融合蛋白;将纯化后的融合蛋白免疫家兔,获得了ShSAP1的特异性... 将ShSAP1的阅读框连接到原核表达载体p ET32a(+)中,构建成ShSAP1原核表达载体PET-ShSAP1,然后将其转入宿主菌BL21,经IPTG诱导后,宿主菌表达出与预期分子量大小相符的35 ku的融合蛋白;将纯化后的融合蛋白免疫家兔,获得了ShSAP1的特异性抗血清;以融合蛋白作抗原,用间接ELISA法测定其抗血清效价为1∶25 000。 展开更多
关键词 甘蔗 shsap1 锌指蛋白 原核表达 多克隆抗体
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