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日本血吸虫SjPP基因原核表达蛋白的酶活性
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作者 姚利晓 王欣之 +2 位作者 傅志强 陶丽红 林矫矫 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期555-558,共4页
分别以磷酸苏氨酸多肽(K-R-pT-I—R—R)和4-硝基苯基磷基二钠盐(pNPP)为底物,研究原核表达的日本血吸虫丝/苏氨酸蛋白磷酸酶重组蛋白rSjPP的酶活性,检测二价金属阳离子(Mn^2+、Ni^2+、Mg^2+、Ca^2+)、温度、pH值对rSjPP酶... 分别以磷酸苏氨酸多肽(K-R-pT-I—R—R)和4-硝基苯基磷基二钠盐(pNPP)为底物,研究原核表达的日本血吸虫丝/苏氨酸蛋白磷酸酶重组蛋白rSjPP的酶活性,检测二价金属阳离子(Mn^2+、Ni^2+、Mg^2+、Ca^2+)、温度、pH值对rSjPP酶活性的影响。结果显示,rSjPP重组蛋白可以有效地水解磷酸苏氨酸多肽,具有丝/苏氨酸蛋白磷酸酶活性。rSjPP酶活性的最适温度为60℃,最适pH值为8.0。1~4mmol/L Ni^2+对rSjPP酶活力有促进作用,但Mn^2+、Mg^2+、Ca^2+等阳离子对rSjPP的酶活力影响不大。 展开更多
关键词 日本血吸虫 丝/苏氨酸蛋白磷酸酶 酶活性 影响因子
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绿僵菌第五类Ser/Thr蛋白磷酸酶基因的克隆及表达特征分析 被引量:1
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作者 徐飞 彭国雄 夏玉先 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期360-367,共8页
【目的】克隆绿僵菌第五类Ser/Thr蛋白磷酸酶(PP5)基因,了解该基因及其编码产物的结构特征和两种产孢模式(微循环产孢和正常产孢)中的表达特征。【方法】通过绿僵菌中PP5基因EST序列与全基因组数据库比对,获得PP5基因DNA序列;通过同源... 【目的】克隆绿僵菌第五类Ser/Thr蛋白磷酸酶(PP5)基因,了解该基因及其编码产物的结构特征和两种产孢模式(微循环产孢和正常产孢)中的表达特征。【方法】通过绿僵菌中PP5基因EST序列与全基因组数据库比对,获得PP5基因DNA序列;通过同源蛋白比对预测PP5基因的DNA结构并设计引物,PCR扩增获取PP5全长cDNA序列;通过在线分析工具及生物软件进行蛋白结构分析。采用实时荧光定量PCR检测PP5基因在两种产孢模式中的表达特征。【结果】PP5基因长2100 bp,含7个外显子和6个内含子;cDNA开放阅读框长为1428 bp(GenBank登录号HQ317137),编码475个氨基酸;一级、二级及三级结构分析均显示较保守的蛋白磷酸酶结构特征。实时荧光定量PCR分析表明,PP5基因在绿僵菌微循环产孢的不同阶段表达水平具有显著性差异,特别是在孢子接种16、24、32 h高表达,而在正常产孢模式下表达量非常少。【结论】克隆了绿僵菌的PP5基因,详细了解了该基因及其编码产物的结构特征,发现了该基因在微循环产孢孢子形成后期高表达的重要特征,为进一步研究该基因在微循环产孢中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 绿僵菌 微循环产孢 ser/thr蛋白磷酸酶 实时荧光定量PCR
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