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SENP1与CerBb-2蛋白表达在乳腺癌中的临床意义 被引量：3
1
作者 陈军 王坚 +2 位作者 顾红玉 李启驹 成志刚 《诊断学理论与实践》 2009年第2期175-179,共5页
目的:探讨乳腺癌组织中类泛素化蛋白酶1(SENP1)和原癌基因CerBb-2蛋白的表达,并分析两者与乳腺癌病理因素的关系。方法:采用ABC免疫组化染色法,检测乳腺癌及乳腺良性病变组织(对照组)中SENP1蛋白的表达;同时采用EnVision免疫组化染色方... 目的:探讨乳腺癌组织中类泛素化蛋白酶1(SENP1)和原癌基因CerBb-2蛋白的表达,并分析两者与乳腺癌病理因素的关系。方法:采用ABC免疫组化染色法,检测乳腺癌及乳腺良性病变组织(对照组)中SENP1蛋白的表达;同时采用EnVision免疫组化染色方法检测这2种组织中CerBb-2蛋白的表达。结果:SENP1蛋白在乳腺癌中的阳性率为60.78%(62/102),在乳腺良性病变中的阳性率为16.67%(5/30),两者间差异有统计学意义(P<0.01);SENP1的表达与乳腺癌分化程度、肿瘤细胞淋巴结转移情况和患者TNM分期相关(P<0.05)。乳腺癌组织中CerBb-2的阳性率为50.98%(52/102),对照组阳性率为10.00%(3/30),两者间差异有统计学意义(P<0.01)。乳腺癌组织中CerBb-2的表达与肿瘤临床分期及淋巴结转移情况相关(P<0.05)。SENP1的表达与CerBb-2的表达呈正相关。结论:SENP1和CerBb-2均对乳腺癌的增殖、生长、侵袭和转移起重要作用,有望成为肿瘤治疗的新靶点。 展开更多
关键词 乳腺癌 类泛素修饰 类泛素化蛋白酶 CERBB-2 免疫组织化学
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核糖体蛋白S9在多发性骨髓瘤中的表达及对其细胞生物学功能的影响 被引量：2
2
作者 宋鹍鹏 舒鹏 +2 位作者 马炬雷 王兵 陈博 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期175-182,共8页
目的明确核糖体蛋白S9(RPS9)在多发性骨髓瘤中的表达情况,并明确其对骨髓瘤细胞生物学特性的影响及相应机制。方法 选取10例健康志愿者骨髓单个核细胞(CON组)与30例多发性骨髓瘤患者骨髓CD138+细胞(CD138+组),实时荧光定量PCR检测RPS9在... 目的明确核糖体蛋白S9(RPS9)在多发性骨髓瘤中的表达情况,并明确其对骨髓瘤细胞生物学特性的影响及相应机制。方法 选取10例健康志愿者骨髓单个核细胞(CON组)与30例多发性骨髓瘤患者骨髓CD138+细胞(CD138+组),实时荧光定量PCR检测RPS9在mRNA水平的表达,并选取3例CON与11例CD138+细胞,Westernblot检测RPS9在蛋白水平的变化,同时选取GSE19784数据集,检测RPS9的表达与患者总体生存率、核因子-κB(NF-κB)、类泛素蛋白修饰分子(SUMO)、泛素通路之间的关系。随后构建RPS9-短发夹RNA(shRNA)敲低载体,使用流式细胞仪检测感染效率、实时荧光定量PCR与Westernblot检测敲低效率后。RPMI8226分为CON与RPS9-shRNA组,使用膜联蛋白V别藻青蛋白/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡的变化、CCK8法检测细胞增殖的变化、PI染色法检测细胞周期的变化。并构建类泛素蛋白修饰分子特异蛋白酶1(SENP1)过表达载体,Westernblot确定过表达效率后,检测RPS9抑制后SENP1表达的变化,并在RPS9-shRNA中转染SENP1过表达载体,Westernblot检测CON、RPS9-shRNA、RPS9-shRNA-SENP1细胞中NF-κB通路P65、抑制因子κBα(IκBα)磷酸化水平的变化,膜联蛋白V/PI双染法检测细胞凋亡的变化。结果 RPS9在10例健康志愿者骨髓单个核细胞(CON)以及30例多发性骨髓瘤患者骨髓CD138+细胞中相对表达量分别为1.00±0.12和5.45±0.71(t=4.291,P=0.0036),Westernblot中大多数骨髓瘤CD138+细胞中RPS9呈现高表达,RPS9的高表达同时与患者髓外浸润相关,并在GSE19784数据集中与患者总体生存率相关。RPMI8226在感染CON与RPS9-shRNA慢病毒48h后,流式细胞仪证实两组细胞感染效率均在90%以上,实时荧光定量PCR与Westernblot证实RPS9在mRNA与蛋白水平的表达均受到抑制。RPMI8226CON与RPS9-shRNA感染病毒48h后,CON与RPS9-shRNA组细胞膜联蛋白V阳性细胞比例分别为3.47±0.37和18.60±1.64,RPS9-shRNA组显著高于CON组(t=9.015,P=0.00 展开更多
关键词 核糖体蛋白S9 多发性骨髓瘤 核因子-ΚB信号通路 类泛素蛋白修饰分子特异蛋白酶1
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大鼠SUMO特异性蛋白酶1催化区蛋白制备及功能鉴定
3
作者 孟利 杜彩萍 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期31-38,共8页
目的:制备大鼠SUMO特异性蛋白酶1(sentrin-specific protease,SENP1)催化结构域(SENP1C)蛋白,并鉴定其酶活性。方法:分别以大鼠SENP1-pcDNA3.1和EGFP-pcDNA3.1重组体为模板,PCR扩增目的基因,克隆入pGEM-T载体;酶切鉴定后,再亚克隆入原... 目的:制备大鼠SUMO特异性蛋白酶1(sentrin-specific protease,SENP1)催化结构域(SENP1C)蛋白,并鉴定其酶活性。方法:分别以大鼠SENP1-pcDNA3.1和EGFP-pcDNA3.1重组体为模板,PCR扩增目的基因,克隆入pGEM-T载体;酶切鉴定后,再亚克隆入原核表达载体pET-28a;阳性重组体导入原核表达细胞BL-21,异丙基硫半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白质表达;SDS-PAGE及考马斯亮蓝染色鉴定蛋白质的表达。Ni-NTA吸附纯化蛋白质并透析处理,SDS-PAGE及考马斯亮蓝染色鉴定蛋白质的纯度;1μmol/L及5μmol/L Tat-EGFP分别孵育HT22细胞不同时间,荧光显微镜下观察细胞转染情况。采用5μmol/L Tat-SENP1C预孵育HT22细胞10 h,免疫印迹检测整体蛋白质的SUMO化水平;用5μmol/L Tat-SENP1C预孵育HT22细胞或过表达Myc-Akt1和HA-SUMO1的HT22细胞10 h后,免疫沉淀和免疫印迹检测内源性和外源性Akt1与SUMO1的结合(SUMO化)。结果:Tat-SENP1C-pET-28a和Tat-EGFP-pET-28a重组原核表达载体成功构建,IPTG可以诱导蛋白质高表达;采用Ni-NTA纯化和透析可获得较高纯度的蛋白质;5μmol/L Tat-EGFP孵育HT22细胞10 h后,蛋白质穿膜效率较高;Tat-SENP1C重组蛋白可以显著降低HT22细胞中整体蛋白质的SUMO化以及内源性和外源性Akt1 SUMO化。结论:Tat-SENP1C-pET-28a和Tat-EGFP-pET-28a重组原核表达载体构建成功,且被IPTG诱导后可高效表达蛋白质;纯化的Tat-SENP1C蛋白具有较强的穿膜能力及酶活性。 展开更多
关键词 SUMO特异性蛋白酶1 催化结构域 原核表达载体 去SUMO化 蛋白激酶Bα
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体外去SUMO化体系的建立及应用
4
作者 王岳飞 《河南大学学报（医学版）》 CAS 2012年第2期121-123,127,共4页
目的构建体外去SUMO化系统用于药物筛选。方法大肠杆菌表达人Senp2催化活性结构域即Senp2C和SUMO1化的RanGAP1△C。结果 Ni 2+柱纯化获得有活力的酶Senp2C和底物蛋白质即RanGAP1△C-SUMO1。结论建立体外去SUMO化系统,可筛选影响去SUMO... 目的构建体外去SUMO化系统用于药物筛选。方法大肠杆菌表达人Senp2催化活性结构域即Senp2C和SUMO1化的RanGAP1△C。结果 Ni 2+柱纯化获得有活力的酶Senp2C和底物蛋白质即RanGAP1△C-SUMO1。结论建立体外去SUMO化系统,可筛选影响去SUMO化活性的药物。 展开更多
关键词 Senp2 SUMO1 去SUMO化 药物筛选
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类泛素化蛋白酶1基因的表达与肝癌细胞株侵袭转移的关系
5
作者 刘延 李湘竑 杨定华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期309-313,共5页
目的:研究类泛素化蛋白酶-1(sentrin-specific protease-1,SENP-1)基因在不同侵袭潜能肝细胞肝癌细胞株及人永生化肝细胞中mRNA和蛋白的表达水平及其与肝癌细胞侵袭能力的关系。方法:使用RT-PCR、Real-time PCR、Western blotting和免... 目的:研究类泛素化蛋白酶-1(sentrin-specific protease-1,SENP-1)基因在不同侵袭潜能肝细胞肝癌细胞株及人永生化肝细胞中mRNA和蛋白的表达水平及其与肝癌细胞侵袭能力的关系。方法:使用RT-PCR、Real-time PCR、Western blotting和免疫荧光方法对肝癌细胞株MHCC97L(低侵袭性)、MHCC97H和HCCLM3(高侵袭性)、SMMC-7721和HepG2(无明显侵袭性)SENP-1 mRNA和蛋白表达水平进行检测,以人永生化肝细胞株HL-7702为对照,分析SENP-1的表达与肝癌细胞株侵袭转移能力的关系。结果:RT-PCR和Real-time PCR检测结果显示,SENP-1 mRNA(F=5.658;P=0.042)和蛋白(F=88.909,P=0.000)在肝癌细胞株中的表达随着肝癌细胞株侵袭潜能的增高而增高;Western blotting检测结果显示,5种肝癌细胞株SENP-1蛋白水平均显著高于人永生化肝细胞株;免疫荧光法观察发现,SENP-1蛋白在肝癌细胞株内主要为胞质表达,部分胞核表达。结论:SENP-1基因在肝癌细胞株中的高表达可能具有促进肝癌细胞侵袭转移的作用。 展开更多
关键词 类泛素化蛋白酶-1基因 肝细胞癌 侵袭 转移
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