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血小板膜抗原的提取及其免疫原性研究 被引量:1
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作者 李振奇 马印图 +1 位作者 王更银 王全立 《华北国防医药》 2006年第1期11-13,共3页
目的:建立血小板外膜蛋白复合物(outer membrane protein complex,OMPC)的攫取方法,为研制具有临床诊断价值的多克隆抗体提供依据。方法:分别以DTT裂解法、SDS破碎法、NP-40裂解法和TritonX-100裂解法提取血小板膜抗原,利用SDS-P... 目的:建立血小板外膜蛋白复合物(outer membrane protein complex,OMPC)的攫取方法,为研制具有临床诊断价值的多克隆抗体提供依据。方法:分别以DTT裂解法、SDS破碎法、NP-40裂解法和TritonX-100裂解法提取血小板膜抗原,利用SDS-PAGE电泳、动物实验、蛋白免疫印迹分析和ELISA评价裂解效果和免疫原性。结果:在4种方法中,TritonX-100裂解法效果最好,其主要含有分子量从50.160kD的几乎所有血小板膜糖蛋白和少量小分子的蛋白。结论:TritonX-100裂解血小板获得的OMPC溶解性好、免疫原性强,具有广泛的抗原交叉反应性,以此作为动物免疫或作为偶联多糖抗原的载体具有很好的应用前景。 展开更多
关键词 血小板 裂解 外膜蛋白复合物 免疫原性
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一种经济、高效的提取微生物胞内色素的方法 被引量:6
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作者 韩亚蓉 《现代生物医学进展》 CAS 2008年第3期521-522,共2页
目的:探索建立一种经济、高效的直接抽提微生物胞内色素的方法。方法:收集刚进入生长平稳期的产生色素的菌株,菌体沉淀用灭菌PBS洗尽非生物体颗粒。菌体沉淀充分分散在丙酮里,随后把菌体在冰浴条件下行超声波裂解细胞,超声裂解功率与时... 目的:探索建立一种经济、高效的直接抽提微生物胞内色素的方法。方法:收集刚进入生长平稳期的产生色素的菌株,菌体沉淀用灭菌PBS洗尽非生物体颗粒。菌体沉淀充分分散在丙酮里,随后把菌体在冰浴条件下行超声波裂解细胞,超声裂解功率与时间随菌体种类而变化,用丙酮萃取法获得色素粗产品。结果:采用超声波裂解萃取法获得了较好的抽提效果。结论:超声波裂解法是一种高效、经济简单的提取微生物胞内色素的好方法,值得推广。 展开更多
关键词 生物活性物质 色素 超声波裂解法 丙酮
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新城疫强毒株F蛋白裂解位点串联基因的构建及其原核表达 被引量:3
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作者 刘成宏 金扩世 +5 位作者 金宁一 鲁会军 贾雷立 陈义锋 金明兰 姜鲲 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期73-76,共4页
目的构建鸡新城疫(ND)强毒株多裂解位点串联基因表达载体,为建立NDV强弱毒株的ELISA鉴别方法奠定基础。方法人工合成一段包含4种不同NDV强毒株裂解位点的基因Fe(F prote in multitude epi-position),其中各裂解位点之间用Linker(GGGGS)... 目的构建鸡新城疫(ND)强毒株多裂解位点串联基因表达载体,为建立NDV强弱毒株的ELISA鉴别方法奠定基础。方法人工合成一段包含4种不同NDV强毒株裂解位点的基因Fe(F prote in multitude epi-position),其中各裂解位点之间用Linker(GGGGS)使其串联,然后进行2倍和4倍拷贝,并定向克隆至原核表达质粒pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a(+)/2Fe和pET-28a(+)/4Fe,进行表达和Western blot鉴定。结果构建的原核表达重组质粒pET-28a(+)/2Fe和pET-28 a(+)/4Fe测序正确。Western blot检测结果表明,2Fe、4Fe蛋白均与新城疫强毒株F48E9阳性血清呈阳性反应,而与新城疫弱毒株V4阳性血清呈阴性反应。结论已成功构建NDV强毒株F蛋白裂解位点串联基因表达载体,为建立NDV强弱毒株的ELISA鉴别方法提供理论依据。 展开更多
关键词 新城疫 强毒株 裂解位点 串联基因
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牛D型产气荚膜梭菌肠毒血症间接ELISA诊断方法的建立 被引量:3
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作者 金鑫 李云霄 +3 位作者 张营 单雪梅 于丹 任春雨 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期308-314,共7页
根据菌体蛋白可以刺激机体产生相应抗体的原理,建立了以产气荚膜梭菌粗提菌体蛋白为抗原的检测牛D型产气荚膜梭菌抗体的间接ELISA。结果显示,D型产气荚膜梭菌菌体裂解抗原最适包被浓度为50μg/mL,最适包被条件为37℃1 h;被检血清的最适... 根据菌体蛋白可以刺激机体产生相应抗体的原理,建立了以产气荚膜梭菌粗提菌体蛋白为抗原的检测牛D型产气荚膜梭菌抗体的间接ELISA。结果显示,D型产气荚膜梭菌菌体裂解抗原最适包被浓度为50μg/mL,最适包被条件为37℃1 h;被检血清的最适稀释度为1∶100,酶标二抗的最适工作浓度为1∶1 000,血清与酶标二抗的反应时间均为37℃1 h;最适封闭时间为37℃1 h;PBST稀释液中脱脂乳的浓度为30 g/L;底物最适反应条件为室温25 min;阴阳性临界值为0.032。对采集于吉林省延边州的100份牛血清样品采用建立的间接ELISA进行了检测;结果,阳性率为11.0%。经特异性试验、重复性试验和与琼脂扩散抗体检测法比较,采用裂解菌体蛋白为抗原建立的ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。 展开更多
关键词 D型产气荚膜梭菌 裂解抗原 间接ELISA
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菌株HYR-08色素的理化性质的初步研究 被引量:3
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作者 韩亚蓉 雨田 《现代生物医学进展》 CAS 2008年第6期1071-1074,共4页
目的:探讨菌株HYR-08分泌的生物活性物质-色素的理化性质。方法:收集刚进入生长平稳期的菌株,采用酸热、研磨、酶解和超声波四种不同的破壁方法进行破壁,随后用丙酮萃取法获得色素粗产品。比较了该色素在蒸馏水、无水乙醇、甲醇、丙酮... 目的:探讨菌株HYR-08分泌的生物活性物质-色素的理化性质。方法:收集刚进入生长平稳期的菌株,采用酸热、研磨、酶解和超声波四种不同的破壁方法进行破壁,随后用丙酮萃取法获得色素粗产品。比较了该色素在蒸馏水、无水乙醇、甲醇、丙酮、四氢呋喃、氯仿中的溶解情况。同时我们也分析了酸碱度、光照和温度对该色素稳定性的影响。结果:超声波裂解法的提取效率最高。色素提取物在上述溶剂中的溶解能力由高到低依次为:四氢呋喃、丙酮、氟仿、无水乙醇、蒸馏水、甲醇。色素的稳定性对碱的耐受性明显强于酸。该色素提取物的稳定性与温度的升高及水浴时间的延长呈负相关。相同功率紫外光对该色素提取物的破坏能力要强于日光。结论:超声波裂解法是一种相对高效、经济简单的提取菌株HYR-08中色素的好方法。菌株HYR-08的色素提取物具有良好的对酸碱、温度和光照的耐受能力,提示该色素具有良好的生物医药开发前景。 展开更多
关键词 生物活性物质 Β-胡萝卜素 超声波裂解法 酸碱度 理化性质
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猪源新城疫病毒F蛋白裂解位点对BHK-21细胞特异性膜融合的影响 被引量:1
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作者 刘振江 鲁会军 +8 位作者 李国江 刘昊 郭欢欢 刘燕瑜 岳云强 凡敏 陆飞 秦艳青 金宁一 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2011年第12期881-884,F0002,共5页
目的研究猪源新城疫病毒F蛋白裂解位点区氨基酸序列对其特异性膜融合作用的影响。方法采用基因定点突变及基因重组的方法,测定突变猪源新城疫病毒JL01株F蛋白裂解位点区基因序列,并将阳性突变质粒与猪源新城疫病毒HN基因共转染BHK-21细... 目的研究猪源新城疫病毒F蛋白裂解位点区氨基酸序列对其特异性膜融合作用的影响。方法采用基因定点突变及基因重组的方法,测定突变猪源新城疫病毒JL01株F蛋白裂解位点区基因序列,并将阳性突变质粒与猪源新城疫病毒HN基因共转染BHK-21细胞,通过面积判断法和细胞计数法分析细胞融合效率。结果突变株RF4细胞融合效率为0.58±0.10,与野毒株的0.55±0.02接近。RF5融合效率较高,为0.69±0.05;RF3融合效率较低,为0.25±0.02。结论猪源新城疫病毒F蛋白裂解位点的改变对其特异性膜融合作用有一定影响。 展开更多
关键词 猪源新城疫病毒 融合蛋白 裂解位点 特异性膜融合
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