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SV40LT基因重组腺病毒载体的包装、鉴定及用于转染日本血吸虫童虫细胞的研究 被引量：1
1
作者 刘碧源 曾庆仁 +4 位作者 余平 杨胜辉 蔡力汀 周军 张顺科 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1016-1020,共5页
目的构建携带SV40LT基因的重组腺病毒表达载体,制备具有感染力的重组腺病毒,观察其转染日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)童虫细胞后的表达情况。方法采用体外连接法构建好的携带SV40LT基因的重组腺病毒质粒(AdHu5-SV40LT)转化Stbl... 目的构建携带SV40LT基因的重组腺病毒表达载体,制备具有感染力的重组腺病毒,观察其转染日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)童虫细胞后的表达情况。方法采用体外连接法构建好的携带SV40LT基因的重组腺病毒质粒(AdHu5-SV40LT)转化Stbl2感受态菌,获得重组腺病毒质粒后,经Pac I酶切线性化后转染293A细胞,获得出重组腺病毒(AdHu5-SV40LT)。将重组腺病毒感染Sj童虫细胞,采用RT-PCR和免疫组织化学检测SV40LT基因的表达情况。结果重组腺病毒载体质粒可转染293A细胞并可在293A细胞内进行有效的复制;提取病毒DNA进行PCR检测证实含有SV40LT目的基因。以重组腺病毒能感染Sj童虫细胞,经RT-PCR和免疫组化检测有SV40LT基因在细胞中的表达。结论成功包装了具有感染能力的含SV40LT基因的重组腺病毒,感染Sj童虫细胞后目的基因有表达,为进一步探索日本血吸虫细胞永生化提供了实验依据。 展开更多
关键词 SV40LT基因 腺病毒载体 日本血吸虫 童虫细胞
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条件培养基对日本血吸虫童虫培养细胞LDH及AgNORs的影响 被引量：1
2
作者 罗超 明珍平 +3 位作者 钟沁萍 叶青 蒋明森 董惠芬 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期552-556,I0004,共6页
目的以乳酸脱氢酶(LDH)及核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)为评价指标,观察条件培养基对日本血吸虫童虫培养细胞的影响。方法灌注法获取21d虫龄的日本血吸虫虫体,冷消化法制备细胞悬液,调细胞为1×106个/ml,联合法接种细胞。将接种... 目的以乳酸脱氢酶(LDH)及核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)为评价指标,观察条件培养基对日本血吸虫童虫培养细胞的影响。方法灌注法获取21d虫龄的日本血吸虫虫体,冷消化法制备细胞悬液,调细胞为1×106个/ml,联合法接种细胞。将接种于小盖玻片上的血吸虫细胞随机分为对照(0h)组和24、48、72h3个实验组共4组。对照组用常规培养基即RPMI-1640含20%小牛血清附加常量抗生素(青霉素1×105U/L,链霉素100mg/L)培养,实验组培养基为常规培养基分别与培养24、48、72h的鼻咽癌细胞上清液的条件培养基1∶1的混合液。培养第7天,对培养细胞进行LDH及AgNORs染色;每组随机选取300个LDH染色细胞、50个AgNORs染色细胞输入HPIAS-2000图像分析仪测定培养细胞的吸光度(A)值,并作统计分析。结果日本血吸虫童虫细胞在不同条件培养基作用下,其LDH及AgNORs着色均比对照组深,其中72h组细胞着色最深,其次是48h组,再是24h组,对照组细胞着色最浅,条件培养基培养的各组细胞,LDH含量及AgNORsA值显著大于对照组细胞(q24=8.5287,q48=15.4253,q72=27.6207,P均<0.01;q24=13.5690,q48=18.7288,q72=27.0356,P均<0.01)。72h的条件培养基作用日本血吸虫童虫细胞后,培养细胞的LDH含量及AgNORsA值明显较对照组高(q0/72=27.6207,P<0.01;q0/72=27.0356,P<0.01),亦高于其他组(q24/72=19.0919,q48/72=11.8426,P均<0.01;q24/72=13.5690,q48/72=18.7288,P均<0.01)。结论条件培养基可明显增强日本血吸虫童虫培养细胞LDH的活性及增加AgNORs的含量,且72h的条件培养基对童虫培养细胞的影响最大。 展开更多
关键词 日本血吸虫 条件培养基 童虫细胞 乳酸脱氢酶 核仁组织区相关嗜银蛋白
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日本血吸虫童虫细胞免疫母鼠的子代抗攻击感染的保护性研究
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作者 刘涛 伍宁 +1 位作者 蔡力汀 胡立平 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期751-758,共8页
目的以2种日本血吸虫易感小鼠为动物模型,探讨日本血吸虫(Schistosoma japonicum,S.j)童虫细胞免疫母鼠的子代鼠抗日本血吸虫攻击感染的应答水平。方法用S.j童虫细胞分别免疫昆明母鼠和Balb/c母鼠,将免疫母鼠或正常母鼠与相应鼠种的正... 目的以2种日本血吸虫易感小鼠为动物模型,探讨日本血吸虫(Schistosoma japonicum,S.j)童虫细胞免疫母鼠的子代鼠抗日本血吸虫攻击感染的应答水平。方法用S.j童虫细胞分别免疫昆明母鼠和Balb/c母鼠,将免疫母鼠或正常母鼠与相应鼠种的正常公鼠进行配对饲养,用其子代鼠建立2个感染模型共4组(A1:免疫昆明子代感染组;B1:正常昆明子代感染对照组;A2:免疫Balb/c子代感染组;B2:正常Balb/c子代感染对照组);计数A1、B1、A2、B2组经日本血吸虫尾蚴攻击感染后从其子代鼠体内收获的虫荷和每克肝卵荷(liver eggs per gram,LEPG);测量上述4组小鼠经HE染色后的肝组织切片内虫卵肉芽肿的大小;间接ELISA检测血清中抗S.j可溶性童虫抗原(soluble juvenile worm antigens,SJWA)IgG(H+L)水平。结果与正常昆明株、Balb/c株子代对照组B1、B2组相比,2组S.j童虫活细胞免疫母鼠子代A1、A2组均表现出不同程度的抗攻击感染的免疫力,尤其抗生殖效果显得尤为突出。其中,A1获得35.6%的减虫率和59.4%的LEPG减卵率;A2获得29.8%的减虫率和47.4%的LEPG减少率。从肝脏外表来看,B1、B2组子代对照鼠肝脏的坏死程度明显高于A1、A2免疫子代鼠。此外,A1组肝脏虫卵肉芽肿平均直径和面积比B1组分别减少23.8%和43.4%,A2组肝脏虫卵肉芽肿平均直径和面积较B2组减少28.4%和50.3%。A1、A2与B1、B2各指标结果的组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。间接ELISA结果显示,不同时间点采集的2株免疫子代鼠血清中的抗SJWA-IgG水平高于同期相应对照组血清中的特异性IgG水平。结论用S.j童虫细胞接种母鼠所诱生的保护性免疫能传给子代,进而使子代鼠产生针对后天初次感染的保护性免疫。 展开更多
关键词 日本血吸虫 童虫细胞 昆明鼠 BALB/C鼠 子代鼠
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