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鸡沙门菌16S rRNA甲基化酶的检测及扩散机制
1
作者 刘淑莉 赵磊 +5 位作者 李德喜 张素梅 胡功政 陈玉霞 赵金凤 杜向党 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期259-262,267,共5页
为了解鸡沙门菌16S rRNA甲基化酶基因(armA,rmtA,rmtB,rmtC,rmtD,rmtE和npmA)的扩散机制,在分离鉴定沙门菌的基础上,分别进行药敏试验、耐药基因检测、质粒接合及电转化、质粒分型、Southern blot以及耐药基因遗传环境分析等。结果显示... 为了解鸡沙门菌16S rRNA甲基化酶基因(armA,rmtA,rmtB,rmtC,rmtD,rmtE和npmA)的扩散机制,在分离鉴定沙门菌的基础上,分别进行药敏试验、耐药基因检测、质粒接合及电转化、质粒分型、Southern blot以及耐药基因遗传环境分析等。结果显示,在分离的21株沙门菌中,只有1株对阿米卡星和庆大霉素高度耐药,且armA基因阳性。多次尝试进行质粒接合试验均未获成功,但质粒转化试验成功获得了转化子。质粒分型和Southern blot证实armA位于IncFⅡ质粒上。armA基因的遗传背景分析表明,该基因位于一个两端具有插入序列IS26的复合转座子上。本研究在动物源沙门菌检测到16SrRNA甲基化酶基因armA,且证实armA基因位于IncFⅡ质粒的复合转座子上,提示转座子和质粒均可在armA基因的水平扩散中发挥重要作用。 展开更多
关键词 鸡 沙门菌 armA基因 SOUTHERN BLOT
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表达NDV HN蛋白的减毒雏沙门菌ΔcrpC79-13(pcDNA3.0-HN)的构建及生物学特性研究 被引量：4
2
作者 李蒙 余祖华 +5 位作者 郁川 程相朝 尚珂 陈桂华 翟崇凯 田文静 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期290-295,共6页
为了构建表达鸡新城疫病毒(N D V)血凝素-神经氨酸酶(H N)蛋白的重组减毒雏沙门菌,以p M D18-HN为模板,经PCR扩增出HN基因后定向插入真核表达载体pc DNA3.0中,构建重组质粒pc DNA-3.0-HN,再通过电转化的方法将重组质粒转入雏沙门菌Δcrp... 为了构建表达鸡新城疫病毒(N D V)血凝素-神经氨酸酶(H N)蛋白的重组减毒雏沙门菌,以p M D18-HN为模板,经PCR扩增出HN基因后定向插入真核表达载体pc DNA3.0中,构建重组质粒pc DNA-3.0-HN,再通过电转化的方法将重组质粒转入雏沙门菌Δcrp C79-13中,构建重组减毒雏沙门菌Δcrp C79-13(pc DNA3.0-HN),并进一步研究其生物学特性及侵染Vero细胞后HN蛋白在细胞内的表达情况。PCR和酶切结果显示,重组菌Δcrp C79-13(pc DNA3.0-HN)构建成功;生物学特性结果显示,重组菌失去了利用麦芽糖、丙三醇和山梨醇及分解H2S等的能力,生长速度显著地低于野生株C79-13,且可稳定遗传HN基因;间接免疫荧光试验结果显示,在重组菌侵染Vero细胞后第48小时可检测到HN蛋白特异性荧光。雏鸡口服攻毒试验结果表明,重组菌Δcrp C79-13(pc DNA3.0-HN)的半数致死量约为野生株C79-13的421.6×106倍。以上结果表明,本研究成功构建了能瞬时表达NDV HN蛋白的口服重组减毒雏沙门菌,为进一步将其开发为新型鸡白痢-新城疫基因工程口服活疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 减毒雏沙门菌 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶 生物学特性 口服疫苗
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柔嫩艾美尔球虫与肠炎沙门菌混合感染对雏鸡盲肠菌群的影响 被引量：3
3
作者 王琪 崔宁 +2 位作者 王方昆 李红梅 赵孝民 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2081-2085,共5页
为探讨柔嫩艾美尔球虫与肠炎沙门菌单独感染及混合感染对盲肠肠道菌群的影响,12日龄莱航鸡口服单独或混合感染柔嫩艾美尔球虫或肠炎沙门菌,18日龄通过16SrRNA Miseq高通量测序检测鸡盲肠菌群组成。结果表明,18日龄莱航鸡盲肠内主要菌群... 为探讨柔嫩艾美尔球虫与肠炎沙门菌单独感染及混合感染对盲肠肠道菌群的影响,12日龄莱航鸡口服单独或混合感染柔嫩艾美尔球虫或肠炎沙门菌,18日龄通过16SrRNA Miseq高通量测序检测鸡盲肠菌群组成。结果表明,18日龄莱航鸡盲肠内主要菌群为厚壁菌门和拟杆菌门。与柔嫩艾美尔球虫或肠炎沙门菌单独感染相比,混合感染导致肠杆菌科明显增加,毛螺菌科明显减少;因此,柔嫩艾美尔球虫与肠炎沙门菌混合感染对盲肠肠道菌群的影响与两者单独感染明显不同。 展开更多
关键词 混合感染 柔嫩艾美尔球虫 肠炎沙门菌 肠道菌群
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萘啶酸耐药甲型副伤寒沙门菌gyrA基因突变的研究
4
作者 陈菁 孙桂芹 王宗欣 《浙江检验医学》 2009年第3期24-26,共3页
目的研究绍兴地区萘啶酸耐药甲型副伤寒沙门菌gyrA基因突变情况。方法对52株甲型副伤寒沙门菌进行基因扩增,PCR产物纯化后进行双向测序,用OMIGA2.0软件对DNA回旋酶A亚单位序列进行分析比对,确定gyrA基因突变。结果萘啶酸耐药甲型副伤寒... 目的研究绍兴地区萘啶酸耐药甲型副伤寒沙门菌gyrA基因突变情况。方法对52株甲型副伤寒沙门菌进行基因扩增,PCR产物纯化后进行双向测序,用OMIGA2.0软件对DNA回旋酶A亚单位序列进行分析比对,确定gyrA基因突变。结果萘啶酸耐药甲型副伤寒沙门菌在gyrAQRDR区域氨基酸残基83或87位点发生点突变;其中83位点发生突变51株,87位点发生突变1株;未发现两个位点同时突变菌株;gyrAQRDR区域其他部位未发现突变。结论gyrA基因83位点突变与甲型副伤寒沙门菌耐萘啶酸有直接关系,gyrA基因87位点单突变也可导致对萘啶酸耐药;绍兴地区近两年耐萘啶酸甲型副伤寒沙门菌菌株主要为83位点TCC→TTC(Ser→Phe)突变。 展开更多
关键词 甲型副伤寒沙门菌 萘啶酸耐药 GYRA基因
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肠炎沙门菌sopE2基因缺失株的构建及其生物学活性的鉴定
5
作者 蔺志杰 汤佩佩 +5 位作者 陶明新 陈韵 耿士忠 潘志明 李求春 焦新安 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期279-285,共7页
为研究sopE 2基因对肠炎沙门菌(Salm onella enteritidis)的生物学特性的影响及其与sopE功能差异,本研究以λ-Red介导的同源重组法构建了肠炎沙门菌C50336ΔsopE 2缺失株,并构建了以p BR322质粒介导的sopE2基因回复株。测定了肠炎沙门... 为研究sopE 2基因对肠炎沙门菌(Salm onella enteritidis)的生物学特性的影响及其与sopE功能差异,本研究以λ-Red介导的同源重组法构建了肠炎沙门菌C50336ΔsopE 2缺失株,并构建了以p BR322质粒介导的sopE2基因回复株。测定了肠炎沙门菌野生株、sopE 2缺失株及其回复株的基本生物学特性,包括对人肠上皮细胞Caco-2 BBE及小鼠巨噬细胞RAW 264.7的黏附、侵袭能力及对小鼠的半数致死量。结果显示,肠炎沙门菌sopE 2基因缺失对其生长、生化特性无影响;肠炎沙门菌C50336对Caco-2 BBE细胞的黏附率约为20%,侵袭率约为10%,对RAW264.7细胞的黏附率约为55%,侵袭率约为20%,sopE 2基因缺失对肠炎沙门菌C50336黏附能力无影响,侵袭能力有所下降,但无统计学差异;肠炎沙门菌C50336对小鼠的半数致死量为5.0×105CF U,sopE 2基因缺失株及回复株对小鼠的半数致死量均为3.2×105 CFU,表明sopE 2基因缺失对肠炎沙门菌的毒力无显著影响。本研究为进一步探讨sopE 2基因在肠炎沙门菌感染过程中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 肠炎沙门菌 sopE2基因缺失 生物学活性鉴定
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