目的研究藻红蛋白不同亚基对人直肠癌SW-480细胞的抑制作用。方法通过盐析和DEAE-Sepha-rose FF柱层析从龙须菜中获得高纯度藻红蛋白,然后通过脲变性、CM-Sepharose F F阳离子交换层析与透析复性,获得具活性的PE亚基,采用MTT法检测藻红...目的研究藻红蛋白不同亚基对人直肠癌SW-480细胞的抑制作用。方法通过盐析和DEAE-Sepha-rose FF柱层析从龙须菜中获得高纯度藻红蛋白,然后通过脲变性、CM-Sepharose F F阳离子交换层析与透析复性,获得具活性的PE亚基,采用MTT法检测藻红蛋白亚基对SW-480细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测藻红蛋白亚基对SW-480细胞凋亡的影响。结果 PE亚基对SW-480有较强的生长抑制作用,其中以β亚基最为显著,当β亚基剂量为20μg/mL,作用时间48 h时,其对SW-480细胞的抑制率达72.64%。结论藻红蛋白及其亚基对SW-480细胞株的生长具有较强的抑制作用,β亚基效果最好,预示其具有一定的抗肿瘤潜力。展开更多
目的糖尿病患者结肠癌的发病率显著高于非糖尿病人群,晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)在糖尿病患者体内生成明显增多。文中观察AGEs对人结肠癌细胞SW-480增殖的影响及其机制。方法体外培养人结肠癌细胞SW-480,...目的糖尿病患者结肠癌的发病率显著高于非糖尿病人群,晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)在糖尿病患者体内生成明显增多。文中观察AGEs对人结肠癌细胞SW-480增殖的影响及其机制。方法体外培养人结肠癌细胞SW-480,以终浓度分别为100μg/ml、200μg/ml、500μg/ml的AGE-BSA处理细胞24h,并设正常对照组和BSA对照组进行比较。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SW-480细胞活力,利用流式细胞术检测细胞周期的改变,实时荧光定量PCR测定晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)mRNA、细胞周期素D1(cyclin D1)mRNA的表达。结果①MTT结果示100μg/ml、200μg/ml、500μg/mlAGE-BSA作用SW-480细胞24 h后可以显著促进细胞增殖(P<0.05),并呈浓度依赖性。②流式细胞术结果示200μg/mlAGE-BSA干预组24 h后可以减少SW-480细胞G1期百分率,同时增加S期百分率,与正常对照组比较具有统计学差异(P<0.05)。③实时荧光定量PCR结果示与正常对照组相比,200μg/mlAGE-BSA干预后可以上调RAGEmRNA和cyclin D1 mRNA的表达(P<0.05)。结论 AGEs能促进SW-480细胞的增殖,其机制可能与上调RAGEmRNA和cyclin D1 mRNA的表达,加速细胞G1期向S期转换相关。展开更多
文摘目的:探讨上皮膜蛋白1(epithelial membrane protejn-1,EMP1)在人结直肠癌(colorectal carcinoma,CRC)组织中的表达水平及其过表达对CRC SW-480细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:免疫组织化学、Western blotting方法检测63例CRC组织及31例癌旁组织中EMP1的表达水平,分析EMP1表达与CRC临床病理参数的关系。慢病毒介导将pLenti6-EMP1质粒转染SW-480细胞,建立EMP1过表达细胞,转染plenti6/V5-DEST空白质粒为对照。Real-time PCR及Western blotting检测转染后SW-480细胞株中EMP1的表达,MTT、流式细胞术及Transwell实验分别检测EMP1过表达对SW-480细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。结果:EMP1蛋白在人CRC组织的表达显著低于癌旁组织(0.257±0.022 vs 0.863±0.086,P<0.05),并且其表达水平在不同T分期、有无淋巴结转移、临床分期以及组织分级组间表达有显著差异(P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤部位无关(P>0.05)。成功构建EMP1过表达的LeEMP1细胞。与LeEmpty细胞相比,LeEMP1细胞的增殖能力显著下降[(60.94±4.04)%vs(100.00±0.00)%,P<0.05],凋亡率显著升高[(12.10±1.30)%vs(3.10±0.60)%,P<0.05]、侵袭转移能力显著降低[穿膜细胞数:(87.00±12.00)vs(178.00±21.00)个,P<0.05]。LeEMP1细胞Caspase-9表达显著高于LeEmpty细胞(0.764±0.073 vs 0.231±0.029,P<0.05),VEGFC表达显著降低(0.185±0.022 vs 0.663±0.065,P<0.05)。结论:人CRC组织中EMP1蛋白表达明显减低,过表达EMP1能够抑制CRC SW-480细胞的恶性生物学行为,其可能通过调控Caspase-9和VEGFC的表达来发挥作用。
