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丹参通络解毒汤对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞自噬的影响 被引量:8
1
作者 王婷婷 李鑫辉 +1 位作者 戴超男 李彩云 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2023年第4期65-70,共6页
目的 观察丹参通络解毒汤对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)自噬的影响,探讨其保护CMECs的机制。方法 体外培养CMECs,复制缺氧/复氧损伤细胞模型,通过慢病毒转染沉默MALAT1,将细胞分为过表达SRPK1组、过表达SRPK1联合含药血清... 目的 观察丹参通络解毒汤对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)自噬的影响,探讨其保护CMECs的机制。方法 体外培养CMECs,复制缺氧/复氧损伤细胞模型,通过慢病毒转染沉默MALAT1,将细胞分为过表达SRPK1组、过表达SRPK1联合含药血清组、空载组、空载联合含药血清组,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3B及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达,RT-PCR检测LC3B mRNA表达,免疫荧光染色检测LC3B表达。结果 与过表达SRPK1组比较,过表达SRPK1联合含药血清组和空载组细胞Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax和Beclin1蛋白表达、LC3BⅡ/LC3BⅠ比值及LC3B mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与过表达SRPK1联合含药血清组比较,空载联合含药血清组细胞Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax和Beclin1蛋白表达、LC3BⅡ/LC3BⅠ比值及LC3B mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01);与空载组比较,空载联合含药血清组细胞Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax和Beclin1蛋白表达、LC3BⅡ/LC3BⅠ比值及LC3B mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论 丹参通络解毒汤能抑制缺氧/复氧损伤引起的CMECs自噬,进而保护CMECs,其机制可能与下调MALAT1表达,抑制SRPK1表达有关。 展开更多
关键词 丹参通络解毒汤 缺氧/复氧 MALAT1 自噬 srpk1 心肌微血管内皮细胞
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丹参通络解毒汤含药血清调控MALAT1对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞的保护作用及机制研究 被引量:2
2
作者 夏旭婷 李昇聪 +2 位作者 李鑫辉 蒋啸 李彩云 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2024年第1期110-116,共7页
目的研究丹参通络解毒汤含药血清调控转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)的保护作用及机制。方法体外培养大鼠CMECs,构建缺氧/复氧损伤细胞模型,转染过表达/沉默空白MALAT1慢病毒,将细胞分为过表... 目的研究丹参通络解毒汤含药血清调控转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)的保护作用及机制。方法体外培养大鼠CMECs,构建缺氧/复氧损伤细胞模型,转染过表达/沉默空白MALAT1慢病毒,将细胞分为过表达空白+中药组、过表达MALAT1+中药组、过表达MALAT1组、沉默空白+中药组、沉默MALAT1组、沉默MALAT1+中药组,分别予相应血清培养,免疫荧光染色检测Beclin-1蛋白表达,Western blot检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(SRPK1)、丝氨酸丰富剪接因子1(SRSF1)、血管内皮生长因子(VEGF)及Bax蛋白表达,RT-PCR检测MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达。结果与过表达空白+中药组比较,过表达MALAT1+中药组Beclin-1蛋白表达升高,SRPK1、SRSF1、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01),VEGF蛋白表达显著降低(P<0.01),MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与过表达MALAT1组比较,过表达MALAT1+中药组Beclin-1蛋白表达降低,SRPK1、SRSF1、Bax蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05),VEGF蛋白表达显著升高(P<0.01),MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达显著降低(P<0.05);与沉默空白+中药组比较,沉默MALAT1+中药组Beclin-1蛋白表达降低,SRPK1、SRSF1、Bax蛋白表达显著降低(P<0.01),VEGF蛋白表达显著升高(P<0.01),MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达显著降低(P<0.01);与沉默MALAT1组比较,沉默MALAT1+中药组Beclin-1蛋白表达降低,SRPK1、SRSF1、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05),VEGF表达显著升高(P<0.01),MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论上调MALAT1表达可促进缺氧/复氧损伤模型CMECs自噬,丹参通络解毒汤含药血清能通过抑制MALAT1表达抑制自噬、促进血管新生,其机制可能与下调SRPK1、SRSF1表达有关。 展开更多
关键词 丹参通络解毒汤 缺氧/复氧 心肌微血管内皮细胞 自噬 MALAT1 srpk1 SRSF1
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SRPK1激活PI3K/AKT通路对三阴性乳腺癌细胞恶性进展的影响
3
作者 姜丽 王慧慧 +2 位作者 柯龙珠 李功卓 罗莉 《医学分子生物学杂志》 CAS 2024年第2期161-165,共5页
目的探索SRPK1与PI3K/AKT途径在三阴性乳腺癌恶性进展中的作用。方法免疫组化实验检测三阴性乳腺癌组织以及癌旁组织SRPK1的表达水平;将三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞分为3个实验组:siSRPK1组、siNC组以及LY294002组。通过MTT实验检... 目的探索SRPK1与PI3K/AKT途径在三阴性乳腺癌恶性进展中的作用。方法免疫组化实验检测三阴性乳腺癌组织以及癌旁组织SRPK1的表达水平;将三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞分为3个实验组:siSRPK1组、siNC组以及LY294002组。通过MTT实验检测MDA-MB-231细胞的增殖能力;通过Transwell实验分析MDA-MB-231细胞的侵袭能力;通过流式细胞术分析MDA-MB-231细胞的凋亡率;通过蛋白免疫印迹检测PI3K/AKT信号通路以及SRPK1蛋白的表达水平。结果和三阴性乳腺癌的癌旁组织比较,三阴性乳腺癌组织SRPK1的表达水平增加。与siNC组比较,siSRPK1以及LY294002组的MDA-MB-231细胞增殖能力下降(P<0.05);siSRPK1以及LY294002组的MDA-MB-231细胞侵袭数减少(P<0.05);siSRPK1以及LY294002组的MDA-MB-231细胞凋亡率升高(P<0.05);siSRPK1以及LY294002组的MDAMB-231细胞PI3K、AKT蛋白水平降低(P<0.05)。结论SRPK1在三阴性乳腺癌组织中高表达,抑制SRPK1表达后,三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖以及侵袭能力降低,凋亡率增加,这一过程与SRPK1调控PI3K/AKT通路相关。 展开更多
关键词 srpk1 PI3K 生长 AKT 三阴性乳腺癌 凋亡 侵袭 进展
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猪SRPK1基因的电子克隆 被引量:3
4
作者 俄广鑫 刘娣 +4 位作者 谢雨彤 祝继原 杨少成 王嘉博 赵金凤 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期101-104,共4页
用小鼠和人的SRPK1基因的编码区序列通过NCBI数据库进行比较和检索,得到一个高同源性的猪cDNA序列和4个猪SRPK1基因的ESTs。利用DNAMAN软件将以上片段进行拼接,得到了一条较长的拼接片段X-1。ORF finder和Blast 2 sequence程序分析。结... 用小鼠和人的SRPK1基因的编码区序列通过NCBI数据库进行比较和检索,得到一个高同源性的猪cDNA序列和4个猪SRPK1基因的ESTs。利用DNAMAN软件将以上片段进行拼接,得到了一条较长的拼接片段X-1。ORF finder和Blast 2 sequence程序分析。结果表明,X-1中包含一个完整的长为1 968 bp的编码区,编码656个氨基酸,且此编码区DNA序列与人的SRPK1基因有91.73%的一致性,氨基酸序列的一致性为92.93%。 展开更多
关键词 srpk1 生物信息学 电子克隆 开放读码框查找
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丹参通络解毒汤通过调控Beclin-1对缺氧/复氧CMECs的保护作用及机制 被引量:1
5
作者 夏旭婷 李昇聪 +2 位作者 李鑫辉 蒋啸 李彩云 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2323-2328,共6页
目的:探讨丹参通络解毒汤(DSTLJD)通过调控Beclin-1对缺氧/复氧(H/R)大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)的保护作用及机制。方法:体外培养CMECs,构建H/R细胞模型,通过慢病毒转染过表达和沉默Beclin-1。将细胞随机分为pcDNA-Beclin-1组(过表... 目的:探讨丹参通络解毒汤(DSTLJD)通过调控Beclin-1对缺氧/复氧(H/R)大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)的保护作用及机制。方法:体外培养CMECs,构建H/R细胞模型,通过慢病毒转染过表达和沉默Beclin-1。将细胞随机分为pcDNA-Beclin-1组(过表达Beclin-1载体组)、control-pcDNA+DSTLJD组(过表达空载体+丹参通络解毒汤组)、pcDNA-Beclin-1+DSTLJD组(过表达Beclin-1载体+丹参通络解毒汤组)、Beclin-1-siRNA组(沉默Beclin-1载体组)、control-siRNA+DSTLJD组(沉默空载体+丹参通络解毒汤组)、Beclin-1-siRNA+DSTLJD组(沉默Beclin-1载体+丹参通络解毒汤组)。Western Blot法检测丝氨酸/精氨酸蛋白激酶1(SRPK1)、丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1(SRSF1)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及自噬相关蛋白(Atg5)蛋白表达,ELISA法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)表达,RT-PCR法检测肺癌转移相关转录本1(MALAT1)、SRPK1、SRSF1 mRNA表达。结果:与control-pcDNA+DSTLJD组比较,pcDNA-Beclin-1+DSTLJD组ATG5蛋白表达显著升高(P<0.01),eNOS蛋白表达显著下降(P<0.01),SOD水平下降(P<0.05),MDA水平升高(P<0.05);与pcDNA-Beclin-1组比较,pcDNA-Beclin-1+DSTLJD组ATG5蛋白表达下降(P<0.05),eNOS蛋白表达显著升高(P<0.01),SRPK1、SRSF1蛋白及mRNA表达均显著下降(P<0.01),MALAT1 mRNA表达显著下降(P<0.01),SOD水平升高(P<0.05),MDA水平下降(P<0.05);与control-siRNA+DSTLJD组比较,Beclin-1-siRNA+DSTLJD组ATG5蛋白表达显著下降(P<0.01),eNOS蛋白表达升高(P<0.05),SOD水平升高(P<0.05),MDA水平下降(P<0.05);与Beclin-1-siRNA组比较,Beclin-1-siRNA+DSTLJD组ATG5蛋白表达下降(P<0.05),eNOS蛋白表达升高(P<0.05),SRPK1、SRSF1蛋白及mRNA表达均下降(P<0.01,P<0.05),MALAT1 mRNA表达显著下降(P<0.01),SOD水平升高(P<0.05),MDA水平下降(P<0.05)。结论:丹参通络解毒汤可能通过抑制MALAT1-Beclin-1轴,降低ATG5蛋白,增强eNOS蛋白,上调SOD,下调MDA保护心肌微血管内皮细胞。 展开更多
关键词 丹参通络解毒汤 心肌微血管内皮细胞 自噬 BECLIN-1 肺癌转移相关转录本1 丝氨酸/精氨酸蛋白激酶1 丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1
原文传递
猪精氨酸-丝氨酸蛋白激酶1(SRPK1)克隆表达及功能初步分析 被引量:3
6
作者 俄广鑫 刘娣 +6 位作者 张冬杰 杨秀琴 崔羽 祝继原 杨少成 王嘉博 谢宇彤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1379-1386,共8页
本研究旨在阐明猪SRPK1基因的分子特点和表达谱。以大白猪为研究对象,利用RT-PCR技术克隆SRPK1基因CDS区域,同时利用反向PCR(inverse PCR,I-PCR)技术得到猪部分SRPK1的5′UTR序列;利用生物信息学方法分析SRPK1基因核苷酸序列及编码蛋白... 本研究旨在阐明猪SRPK1基因的分子特点和表达谱。以大白猪为研究对象,利用RT-PCR技术克隆SRPK1基因CDS区域,同时利用反向PCR(inverse PCR,I-PCR)技术得到猪部分SRPK1的5′UTR序列;利用生物信息学方法分析SRPK1基因核苷酸序列及编码蛋白序列的结构特点;利用荧光定量PCR(real-time PCR)检测SRPK1在1和30日龄大白猪及杜洛克的心脏、肌肉、脾脏、肝脏、肾脏、肺脏、胃、小肠、大肠、脑的表达情况;构建猪骨骼肌损伤模型,研究在骨骼肌发育过程中SRPK1基因的表达特性。结果,将克隆片段拼接得到长2499bp的大白猪SRPK1基因序列,包含了1968bp完整CDS区域,分析表明其编码含656个氨基酸的蛋白质;包括2个P_Kc结构域,猪SRPK1蛋白序列与人和黑猩猩的相似性较高。通过生物信息学方法预测所得5′UTR含有多个转录结合位点:HSF1、HSF2、Ik-1、IK-2、SRY、SP1MyoD、USF、E47、p300、CP2、RREB-1、E2F和AP-1。利用荧光定量PCR研究发现,表达结果显示猪该基因表达具有组织和种间特异性,主要都是在胃、大肠和小肠中表达。SR-PK1基因在整个损伤修复过程中的表达反复出现升高和降低。5′UTR处有多个和肌肉生长相关蛋白的转录结合位点,主要在消化系统组织表达,在骨骼肌修复中表达上调,推测其可能与骨骼肌细胞发育或其他肌肉生长相关因子的表达有关。 展开更多
关键词 精氨酸/丝氨酸蛋白激酶1 实时荧光定量PCR 反向PCR 骨骼肌损伤模型 生物信息学分析
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大鼠脑及胸腺内SR蛋白特异性激酶1的定位研究
7
作者 金玉祥 姚敏 +3 位作者 杨晓明 姜虹 程琰 邢苗 《白求恩军医学院学报》 2004年第1期3-4,F002,共3页
目的 观察SR蛋白特异性激酶 (SRPK) 1在大鼠脑和胸腺等组织细胞内的分布。方法 采用免疫组化以及免疫电镜技术对SRPK1组织学分布和超微结构定位进行系统研究。结果 光镜下SRPK1或SRPK1类蛋白免疫阳性细胞广泛存在于大鼠脑及胸腺内。... 目的 观察SR蛋白特异性激酶 (SRPK) 1在大鼠脑和胸腺等组织细胞内的分布。方法 采用免疫组化以及免疫电镜技术对SRPK1组织学分布和超微结构定位进行系统研究。结果 光镜下SRPK1或SRPK1类蛋白免疫阳性细胞广泛存在于大鼠脑及胸腺内。在中枢神经系统内存在核团差异性。在肾和肝脏组织内未见SRPK1免疫阳性细胞 ,SRPK1免疫阳性物质在脑神经元和胸腺细胞核内呈斑点状分布。电镜下SRPK1或SRPK1类蛋白主要分布在染色质间颗粒簇 (IGc)和染色质周边纤维(PGs)上 ,核仁内主要存在于DFC区。 展开更多
关键词 SR蛋白 srpk1 胸腺 大鼠
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Clone and Bioinformatics Analysis of Pig SRPK1 Gene 5' UTR Region
8
作者 E Guangxin LIU Di +2 位作者 YANG Xiuqin ZHANG Dongjie YU Cui 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2011年第3期22-27,共6页
Part 5' UTR region of pig SRPK1 gene was cloned by inverse PCR (I-PCR), then a 425 bp gene sequence was acquired. A promoter region in -1--309 bp was predicted by online tool (TFSEARCH) and 32 binding sites of tr... Part 5' UTR region of pig SRPK1 gene was cloned by inverse PCR (I-PCR), then a 425 bp gene sequence was acquired. A promoter region in -1--309 bp was predicted by online tool (TFSEARCH) and 32 binding sites of transcription with scores higher than 85 were getten, of which scores of Spl, MyoD, and HSF2 were over 90. Some of these binding sites of transcription factors were connected with promoters, but TATA-box, which was important to gene expression, hadn't been found in this region. By using PCR-SSCP method to search SNPs this part (5' UTR of SRPK1 in pig), total of 40 Large White pigs were obtained as the research objects, but no polymorphism were found. Thus, 5' UTR of SRPK1 was speculated with a characteristic of high conservation, while it might have been directly or indirectly selected in commercial breeding. The paper provided a further feature of SRPK1 gene in molecular genetics. 展开更多
关键词 PIG srpk1 BIOINFORMATICS transcription factor SSCP inverse PCR (I-PCR)
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剪接因子SR-蛋白特异的激酶—SRPK1的发现 被引量:1
9
作者 桂建芳 《细胞生物学杂志》 CSCD 1996年第2期49-54,共6页
1977年,当美国麻省理工学院的PhillipSharp和冷泉港实验室的Richard Roberts分别领导的两个研究小组在研究腺病毒(adenov-irus)和其mRNA之间的杂种分子发现了基因割裂(split)现象时,他们立刻感到诺贝尔已带着他的遗产敲开了他们的心扉... 1977年,当美国麻省理工学院的PhillipSharp和冷泉港实验室的Richard Roberts分别领导的两个研究小组在研究腺病毒(adenov-irus)和其mRNA之间的杂种分子发现了基因割裂(split)现象时,他们立刻感到诺贝尔已带着他的遗产敲开了他们的心扉。果然,一个新的称为RNA剪接Splicing的研究领域从此诞生了,16年后,随着这一领域的不断开拓,当时这一发现的领导者Phillip Sharp和Richard 展开更多
关键词 激酶 剪接因子 SR蛋白 srpk1
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丝氨酸/精氨酸蛋白激酶1在放射性肺纤维化中的作用及其机制研究
10
作者 张旭涛 张迁 +6 位作者 王瀚 王斌 刘峰舟 吴侃 阮柏 张敏 王小成 《实用心脑肺血管病杂志》 2022年第7期81-85,共5页
目的 分析丝氨酸/精氨酸蛋白激酶1(SRPK1)在放射性肺纤维化(RIPF)中的作用及其机制。方法2021年3月至2022年2月,将30只2月龄C57BL/6J雌性小鼠随机分为对照组、模型组和干预组,各10只。对照组小鼠不进行干预;模型组和干预组小鼠均构建RIP... 目的 分析丝氨酸/精氨酸蛋白激酶1(SRPK1)在放射性肺纤维化(RIPF)中的作用及其机制。方法2021年3月至2022年2月,将30只2月龄C57BL/6J雌性小鼠随机分为对照组、模型组和干预组,各10只。对照组小鼠不进行干预;模型组和干预组小鼠均构建RIPF模型,建模成功后干预组小鼠腹腔注射SRPK1抑制剂——SRPIN340,模型组小鼠给予相同剂量的PBS;两组均干预16周,其中模型组小鼠死亡5只,干预组死亡3只。干预结束后收集各组小鼠全肺组织及肺泡灌洗液,采用HE染色观察小鼠肺组织结构,Masson染色观察小鼠肺组织细胞外基质(ECM)沉积情况,羟脯氨酸试剂盒检测小鼠肺组织羟脯氨酸水平,ELISA检测小鼠肺泡灌洗液中IL-6、IL-8、IL-13、转化生长因子β(TGF-β)1水平,免疫荧光法检测小鼠肺组织CD45+T淋巴细胞计数,免疫组化法检测小鼠肺组织精氨酸酶1(Arg-1)、SRPK1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平。结果 HE染色结果显示,模型组小鼠肺组织出现明显的损伤和结构紊乱,肺泡壁增厚扭曲,可见大量病灶形成;干预组小鼠肺组织出现轻微损伤,肺组织结构较模型组完整,肺泡壁增厚现象减少。Masson染色结果显示,模型组小鼠肺组织中出现大量ECM沉积;与模型组相比,干预组小鼠肺组织ECM沉积明显减少。模型组、干预组小鼠肺组织羟脯氨酸水平高于对照组(P<0.05);干预组小鼠肺组织羟脯氨酸水平低于模型组(P<0.05)。模型组、干预组小鼠肺泡灌洗液中IL-6、IL-8、IL-13、TGF-β1水平高于对照组(P<0.05);干预组小鼠肺泡灌洗液中IL-6、IL-8、IL-13、TGF-β1水平低于模型组(P<0.05)。模型组、干预组小鼠肺组织CD45+T淋巴细胞计数高于对照组(P<0.05);干预组小鼠肺组织CD45+T淋巴细胞计数低于模型组(P<0.05)。模型组小鼠肺组织Arg-1、SRPK1、α-SMA表达水平高于对照组(P<0.05);干预组小鼠肺组织Arg-1、SRPK1表达水平高于对照组、低于模型组, 展开更多
关键词 肺纤维化 放射性肺纤维化 丝氨酸/精氨酸蛋白激酶1 巨噬细胞
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SRPK家族成员SRPK1与肿瘤的关系
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作者 张进稳 《医学检验与临床》 2020年第2期46-49,共4页
SRPK1是SRPK基因家族的重要成员,近年来发现该基因及其表达产物与肿瘤的发生、发展及其治疗均存在密切关系.本文将从SRPK1的基因结构、与肿瘤发生、顺铂抵抗的关系及其在肿瘤治疗中的作用等方面做一综述.
关键词 srpk1 剪接因素 肿瘤 顺铂抵抗 肿瘤治疗
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