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基于重组蛋白SP41的布鲁氏菌间接ELISA检测方法的建立及初步应用
被引量：
6
1
作者
张辉
陈创夫
+3 位作者
乔军
王远志
曹旭东
任艳
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期624-628,共5页
对布鲁氏菌黏附素SP41蛋白进行表达、纯化,以表达重组蛋白为包被抗原,建立了检测布鲁氏菌病绵羊血清抗体的间接ELISA方法。克隆布鲁氏菌SP41基因,PRC、酶切、测序鉴定正确后,构建pET-32a(+)-SP41原核表达载体,转化表达菌E.coliBL21(DE3)...
对布鲁氏菌黏附素SP41蛋白进行表达、纯化,以表达重组蛋白为包被抗原,建立了检测布鲁氏菌病绵羊血清抗体的间接ELISA方法。克隆布鲁氏菌SP41基因,PRC、酶切、测序鉴定正确后,构建pET-32a(+)-SP41原核表达载体,转化表达菌E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达重组SP41蛋白,纯化表达产物后包被酶标反应板,方阵滴定法进行最佳血清稀释度和最侍抗原浓度的筛选,结果显示重组蛋白SP41最佳抗原包被浓度为0.6mg/L,最佳血清稀释度为1:50。交叉试验、阻断试验、重复性试验表明,该方法重复性好、特异性强。利用此方法检测217份绵羊血清样本,结果表明该方法的阳性检出率要高于虎红平板试验和试管凝集试验。
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关键词
布鲁氏菌
sp
41
基因
间接ELISA
原文传递
牛种布鲁氏菌SP41基因的克隆及序列分析
2
作者
谢冰
丁家波
+5 位作者
杨宏军
何洪彬
宋玲玲
侯佩莉
仲跻峰
马卫明
《山东农业科学》
2012年第9期1-4,共4页
根据GenBank上发表的牛种布鲁氏菌SP41基因序列,设计合成了一对特异性引物。从牛A19疫苗中提取全基因组DNA作为模板,PCR扩增出SP41基因,连入pEASY-T3载体,测序结果表明,扩增的片段含有1 302个核苷酸,编码433个氨基酸的成熟蛋白,与已报...
根据GenBank上发表的牛种布鲁氏菌SP41基因序列,设计合成了一对特异性引物。从牛A19疫苗中提取全基因组DNA作为模板,PCR扩增出SP41基因,连入pEASY-T3载体,测序结果表明,扩增的片段含有1 302个核苷酸,编码433个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的布鲁氏菌2308、A-13334、S19、9-941序列的氨基酸同源性为100%;与布鲁氏菌ATCC、CCM4915、M28、M5-90、NI的氨基酸同源性为99.8%。布鲁氏菌SP41基因的克隆,为获得重组SP41蛋白及对其结构和功能的研究奠定了基础。
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关键词
牛种布鲁氏菌
sp
41
基因
克隆
序列分析
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职称材料
题名
基于重组蛋白SP41的布鲁氏菌间接ELISA检测方法的建立及初步应用
被引量：
6
1
作者
张辉
陈创夫
乔军
王远志
曹旭东
任艳
机构
新疆地方与民族发病教育部重点实验室
石河子大学动物科技学院
石河子大学医学院
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期624-628,共5页
基金
国际科技合作基金资助项目(2006DFA33740)
文摘
对布鲁氏菌黏附素SP41蛋白进行表达、纯化,以表达重组蛋白为包被抗原,建立了检测布鲁氏菌病绵羊血清抗体的间接ELISA方法。克隆布鲁氏菌SP41基因,PRC、酶切、测序鉴定正确后,构建pET-32a(+)-SP41原核表达载体,转化表达菌E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达重组SP41蛋白,纯化表达产物后包被酶标反应板,方阵滴定法进行最佳血清稀释度和最侍抗原浓度的筛选,结果显示重组蛋白SP41最佳抗原包被浓度为0.6mg/L,最佳血清稀释度为1:50。交叉试验、阻断试验、重复性试验表明,该方法重复性好、特异性强。利用此方法检测217份绵羊血清样本,结果表明该方法的阳性检出率要高于虎红平板试验和试管凝集试验。
关键词
布鲁氏菌
sp
41
基因
间接ELISA
Keywords
Brucella
sp
41
gene
indirect
ELISA
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
牛种布鲁氏菌SP41基因的克隆及序列分析
2
作者
谢冰
丁家波
杨宏军
何洪彬
宋玲玲
侯佩莉
仲跻峰
马卫明
机构
山东农业大学动物科技学院
山东省农业科学院奶牛研究中心
中国兽医药品监察所
出处
《山东农业科学》
2012年第9期1-4,共4页
基金
公益性行业(农业)科研专项(200903027)
现代农业(奶牛)产业技术体系科学家岗位项目
文摘
根据GenBank上发表的牛种布鲁氏菌SP41基因序列,设计合成了一对特异性引物。从牛A19疫苗中提取全基因组DNA作为模板,PCR扩增出SP41基因,连入pEASY-T3载体,测序结果表明,扩增的片段含有1 302个核苷酸,编码433个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的布鲁氏菌2308、A-13334、S19、9-941序列的氨基酸同源性为100%;与布鲁氏菌ATCC、CCM4915、M28、M5-90、NI的氨基酸同源性为99.8%。布鲁氏菌SP41基因的克隆,为获得重组SP41蛋白及对其结构和功能的研究奠定了基础。
关键词
牛种布鲁氏菌
sp
41
基因
克隆
序列分析
Keywords
Brucella
abortus
sp
41
gene
Clone
Sequence
analysis
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于重组蛋白SP41的布鲁氏菌间接ELISA检测方法的建立及初步应用
张辉
陈创夫
乔军
王远志
曹旭东
任艳
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
6
原文传递
2
牛种布鲁氏菌SP41基因的克隆及序列分析
谢冰
丁家波
杨宏军
何洪彬
宋玲玲
侯佩莉
仲跻峰
马卫明
《山东农业科学》
2012
0
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职称材料
已选择
0
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参考文献
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