miR-103a-3p靶向RCAN1对MPP^+诱导的帕金森病细胞模型损伤的影响及机制研究 被引量：7

1

作者 徐向玲 李强 +1 位作者 李春梅 孙巧丽 《解放军医药杂志》 CAS 2020年第10期29-35,共7页

目的研究miR-103a-3p对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)细胞模型损伤的影响和机制。方法采用不同浓度MPP+作用于SK-N-SH细胞24 h,细胞计数(CCK-8)试剂盒检测细胞存活情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,确定MPP+浓度,建立P... 目的研究miR-103a-3p对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)细胞模型损伤的影响和机制。方法采用不同浓度MPP+作用于SK-N-SH细胞24 h,细胞计数(CCK-8)试剂盒检测细胞存活情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,确定MPP+浓度,建立PD细胞模型。RT-qPCR检测PD细胞模型miR-103a-3p和钙调蛋白1(RCAN1)表达。将miR-103a-3p模拟物(miR-103a-3p mimics)、RCAN1小干扰RNA分别转染SK-N-SH细胞,经MPP+处理24 h,采用CCK-8和流式细胞术分别检测SK-N-SH存活和凋亡情况。Western blot检测细胞周期素D1(CyclinD1)和活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase-3)蛋白表达变化。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-103a-3p对RCAN1的靶向调控作用。将miR-103a-3p mimics与RCAN1过表达载体共转染SK-N-SH细胞,经MPP+处理24 h,检测细胞存活和凋亡情况。结果0.1、0.2、0.4 mmol/L的MPP+处理后SK-N-SH细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。选择0.2 mmol/L MPP+建立PD细胞模型。PD细胞模型中miR-103a-3p的表达显著降低,RCAN1 mRNA和蛋白的表达显著升高(P<0.01)。过表达miR-103a-3p或干扰RCAN1表达后,MPP+诱导的SK-N-SH细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著降低,CyclinD1蛋白的表达显著升高,Cleaved-caspase-3蛋白的表达显著降低(P<0.01)。miR-103a-3p mimics和WT-RCAN1共转染组SK-N-SH细胞荧光素酶活性高于miR-NC和WT-RCAN1共转染组(P<0.01)。与过表达miR-103a-3p比较,同时过表达miR-103a-3p和RCAN1后MPP+诱导的SK-N-SH细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,CyclinD1蛋白的表达显著降低,Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论在PD细胞模型中,过表达miR-103a-3p通过靶向RCAN1可减轻MPP+引起的SK-N-SH细胞存活抑制和凋亡。miR-103a-3p和RCAN1是PD的潜在治疗靶点。 展开更多

关键词 帕金森病 sk-n-sh细胞 miR-103a-3p 钙调蛋白1 细胞周期素D1 活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 1-甲基-4-苯基吡啶离子 细胞凋亡

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MnCl2和MPP^＋诱导SK-N-SH细胞氧化应激及自噬的比较 被引量：4

2

作者 刘文丽 窦长松 +4 位作者 王裕 赵鹏 傅娟玲 姚碧云 周宗灿 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 2017年第2期96-100,共5页

目的 研究锰和1-甲基-4-苯基吡啶（MPP^＋）引起人神经母细胞瘤（SK-N-SH）细胞氧化应激和自噬的异同,进一步探讨锰神经毒性机制.方法 以0.0625、0.125、0.25、0.5、1.0和2.0 mmol/L MnCl2和MPP^＋分别处理SK-N-SH细胞24 h,采用3-（4,5... 目的 研究锰和1-甲基-4-苯基吡啶（MPP^＋）引起人神经母细胞瘤（SK-N-SH）细胞氧化应激和自噬的异同,进一步探讨锰神经毒性机制.方法 以0.0625、0.125、0.25、0.5、1.0和2.0 mmol/L MnCl2和MPP^＋分别处理SK-N-SH细胞24 h,采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）试验检测细胞存活率;0.125、0.25、0.5 mmol/L MnCl2和MPP^＋分别处理细胞24 h,采用流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）含量,激光共聚焦显微镜观察细胞自噬体,蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测自噬相关蛋白P62和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达.结果 与对照组比较,0.0625-2.0 mmol/L MnCl2和0.125-2.0 mmol/L MPP^＋处理组SK-N-SH细胞存活率均明显降低,且0.25-2.0 mmol/L MnCl2处理组SK-N-SH细胞存活率明显低于相同剂量MPP^＋处理组（均P〈0.05）;与对照组比较,0.125-0.25 mmol/L MnCl2和0.125-0.5 mmol/L MPP^＋处理组SK-N-SH细胞内ROS含量均明显增加,0.25-0.5 mmol/L MPP^＋处理组细胞内ROS含量明显高于相同剂量MnCl2处理组（均P〈0.05）;与对照组比较,0.25-0.5 mmol/L MnCl2和MPP^＋处理组细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值均明显增加,P62表达均明显下降,且0.125-0.5 mmol/L MPP^＋处理组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值明显高于相同剂量MnCl2处理组,0.125和0.25 mmol/L MPP^＋处理组P62表达水平明显低于相同剂量MnCl2处理组（均P〈0.05）.结论 MnCl2和MPP^＋均可引起SK-N-SH细胞氧化应激,诱导自噬,且MPP^＋对SK-N-SH细胞自噬的诱导作用明显高于MnCl2. 展开更多

关键词 锰 1-甲基-4-苯基吡啶 自噬 氧化应激 sk-n-sh细胞 MPP+

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山茱萸羟甲基糠醛对冈田酸致神经细胞形态及细胞骨架损伤的保护作用 被引量：4

3

作者 张如意 朴景华 +2 位作者 楚晋 徐艳玲 李林 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 2008年第6期417-421,共5页

目的观察山茱萸活性成分山茱萸羟甲基糠醛(HMF)对蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸(OA)致神经细胞骨架系统损伤的拮抗作用。方法不同浓度的HMF与人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞预孵育24h,弃去培养液,加100nmol/LOA损伤4h后,用MTT法测定细胞存活... 目的观察山茱萸活性成分山茱萸羟甲基糠醛(HMF)对蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸(OA)致神经细胞骨架系统损伤的拮抗作用。方法不同浓度的HMF与人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞预孵育24h,弃去培养液,加100nmol/LOA损伤4h后,用MTT法测定细胞存活率,激光共聚焦显微镜观察细胞的微管、微丝结构。结果HMF(12.5～200μg/mL)与SK-N-SH神经细胞预孵育能明显拮抗OA致细胞存活率的下降,使损伤的微管、微丝结构基本恢复正常。结论HMF能够拮抗蛋白磷酸酶抑制剂致神经细胞损伤,其机制与保护细胞骨架系统有关。 展开更多

关键词 羟甲基糠醛 山茱萸 蛋白磷酸酶 冈田酸 sk—n—sh细胞 阿尔茨海默病

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新烟碱类杀虫剂吡虫啉和啶虫脒对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的毒性作用 被引量：3

4

作者 黄钰婷 李敬尧 +3 位作者 张琪 王丹 周群芳 卢晓霞 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期59-69,共11页

吡虫啉和啶虫脒是目前使用较广的2种新烟碱类杀虫剂,它们在环境、食品和人体样品中的普遍残留,对人体健康构成威胁,但目前关于其对人的神经毒性仍知之甚少。本文以人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞为模型,采用体外细胞实验,研究不同浓度吡虫... 吡虫啉和啶虫脒是目前使用较广的2种新烟碱类杀虫剂,它们在环境、食品和人体样品中的普遍残留,对人体健康构成威胁,但目前关于其对人的神经毒性仍知之甚少。本文以人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞为模型,采用体外细胞实验,研究不同浓度吡虫啉和啶虫脒暴露对细胞活力、细胞形态、烟碱型乙酰胆碱受体(nAChRs)α7亚基的mRNA和蛋白表达、乙酰胆碱酯酶活性以及氧化应激的影响,为这2种杀虫剂的健康风险评价提供依据。实验中,先将SK-N-SH细胞分别暴露于不同浓度的吡虫啉和啶虫脒24 h,通过测定细胞活力,确定2种杀虫剂的10%抑制浓度(IC_(10))值。在此基础上,设定3个梯度的低暴露浓度(0.01、0.1和1 mmol·L^(-1))和溶剂对照,研究吡虫啉和啶虫脒对SK-N-SH细胞其他指标的影响(暴露24 h后)。细胞活力、氧化损伤和乙酰胆碱酯酶活性分别用相应的试剂盒测定,细胞形态用倒置光学显微镜观察,nAChRsα7亚基的mRNA和蛋白表达分别用RT-qPCR和Western Blot测定。结果表明,吡虫啉和啶虫脒的IC_(10)值分别约为1.5 mmol·L^(-1)和2.0 mmol·L^(-1)。1 mmol·L^(-1)吡虫啉对nAChRα7的mRNA表达和蛋白表达均显著提高,对乙酰胆碱酯酶活性有显著抑制,并引起细胞显著的氧化应激(P<0.05)。0.1 mmol·L^(-1)吡虫啉对乙酰胆碱酯酶活性有显著抑制(P<0.05)。1 mmol·L^(-1)啶虫脒对nAChRα7的mRNA表达和蛋白表达均有显著提高(P<0.05)。为进一步揭示吡虫啉的影响,对0.1 mmol·L^(-1)吡虫啉暴露组和溶剂对照组细胞进行了转录组分析,发现吡虫啉暴露对一些神经退行性疾病相关基因及其他一些重要通路相关基因有显著影响。本研究证明,吡虫啉和啶虫脒在非致死浓度条件下会对细胞产生一系列显著影响,吡虫啉的影响大于啶虫脒。 展开更多

关键词 吡虫啉 啶虫脒 sk-n-sh细胞 急性毒性 神经毒性 nAChRα7亚基

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黄芪甲苷通过JAK2/STAT3通路减轻MPP+诱导的帕金森病SK-N-SH细胞模型损伤 被引量：3

5

作者 黄万刚 杨东风 +3 位作者 冯佳良 黄淮 高超 徐正虎 《临床和实验医学杂志》 2021年第12期1256-1260,共5页

目的探讨黄芪甲苷对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)细胞模型损伤的影响及分子机制。方法将对数期的SK-N-SH细胞按照随机数字表法分为Mock组、MPP+组、Ast组和AG490组。Mock组采用常规培养,MPP+组采用0.6 mmol/L的MPP+处... 目的探讨黄芪甲苷对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)细胞模型损伤的影响及分子机制。方法将对数期的SK-N-SH细胞按照随机数字表法分为Mock组、MPP+组、Ast组和AG490组。Mock组采用常规培养,MPP+组采用0.6 mmol/L的MPP+处理,Ast组采用40 nmol/L黄芪甲苷预处理2 h后再用0.6 mmol/L的MPP+处理,AG490组采用1μmol/L酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)通路抑制剂AG490和40 nmol/L的黄芪甲苷预处理2 h后再用0.6 mmol/L的MPP+处理。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA探针法检测活性氧(ROS)水平,试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性,蛋白质印迹法检测活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3/-9(Clevaed Caspase-3/-9)、磷酸化酪氨酸蛋白激酶2(p-JAK2)和磷酸化信号转导子和转录激活子3(p-STAT3)蛋白表达。结果与Mock组比较,MPP+处理的SK-N-SH细胞存活率和SOD活性明显降低,p-JAK2和p-STAT3蛋白表达明显下调,凋亡率、LDH活性、ROS水平、Clevaed Caspase-3和Clevaed Caspase-9的表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);黄芪甲苷处理能够逆转MPP+诱导的SK-N-SH细胞损伤;而JAK2/STAT3通路抑制剂AG490逆转了黄芪甲苷对SK-N-SH细胞损伤保护作用。结论黄芪甲苷通过激活JAK2/STAT3信号通路减轻MPP+诱导的SK-N-SH细胞损伤。 展开更多

关键词 黄芪甲苷 sk-n-sh细胞 帕金森病 JAK2/STAT3信号通路

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白芍总苷对阿尔茨海默病的保护作用及机制的研究 被引量：3

6

作者 李岩 李宁 +1 位作者 赵飞飞 冯宗妹 《职业与健康》 CAS 2014年第17期2525-2528,共4页

目的探讨白芍总苷(total glucosides of paeony,TGP)对阿尔茨海默病(AD)的保护作用及其作用机制。方法实验共分为7组,分别为正常对照组(Control组)、模型组[连二亚硫酸钠(Na2S2O4)缺氧无保护组]及TGP各干预组(剂量分别为50、100、200、... 目的探讨白芍总苷(total glucosides of paeony,TGP)对阿尔茨海默病(AD)的保护作用及其作用机制。方法实验共分为7组,分别为正常对照组(Control组)、模型组[连二亚硫酸钠(Na2S2O4)缺氧无保护组]及TGP各干预组(剂量分别为50、100、200、400、800 mg/L)。采用Na2S2O4建立人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞缺氧损伤模型,Na2S2O4于不同浓度TGP干预1 h后加入,作用16 h。利用倒置相差显微镜观察各组SK-N-SH细胞生长及形态的变化;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法测定各组SK-N-SH细胞的存活率;利用蛋白免疫印迹(western blot)法检测SK-N-SH细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达水平。结果形态学研究显示,正常对照组SK-N-SH细胞呈圆形,较少有突起,为贴壁细胞,折光性较强;模型组多数细胞肿胀,折光度减弱,最终细胞成团、漂浮,并有许多细胞崩解物,TGP各浓度组均较模型组细胞数量较多,折光性明显增强,细胞裂解碎片减少,多数细胞重新贴壁伸展;TGP 100、200、400、800 mg/L干预组能够有效改善SK-N-SH细胞缺氧损伤造成的细胞死亡率的增加;TGP 50、100、200、400、800 mg/L干预明显抑制SK-N-SH细胞缺氧损伤造成的Caspase-3蛋白表达的增加。结论 TGP对AD具有明显的保护作用,其作用机制与通过调控Caspase-3蛋白的表达影响神经细胞的凋亡相关。 展开更多

关键词 白芍总苷 阿尔茨海默病 sk—n-sh细胞 缺氧损伤 细胞凋亡 CASPASE-3

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PARK2介导的线粒体自噬对锰诱导的神经细胞毒性的作用 被引量：1

7

作者 张玥 胡宏涛 +3 位作者 赵颖 蒋智钢 周远忠 范奇元 《遵义医科大学学报》 2023年第1期44-51,共8页

目的用SK-N-SH细胞构建PARK2基因过表达/敲除稳转株,用于阐明PARK2和锰毒性的关系。方法慢病毒转染SK-N-SH细胞构建PARK2基因过表达/敲低细胞稳转株,分为3组:空载质粒组、PARK2过表达组和PARK2敲低组。以900μM Mn^(2+)对各组细胞染毒2... 目的用SK-N-SH细胞构建PARK2基因过表达/敲除稳转株,用于阐明PARK2和锰毒性的关系。方法慢病毒转染SK-N-SH细胞构建PARK2基因过表达/敲低细胞稳转株,分为3组:空载质粒组、PARK2过表达组和PARK2敲低组。以900μM Mn^(2+)对各组细胞染毒24 h后,用荧光探针检测细胞内ROS水平,电镜下观察细胞内自噬小体数量,WB法检测OPTN、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白的表达,ELISA法检测细胞培养基中DA水平。结果与空载质粒组比,PARK2过表达组细胞内Parkin蛋白表达增多、ROS水平降低、自噬小体数量增多、P62和OPTN蛋白表达下调、LC3Ⅱ/Ⅰ值增加及DA水平升高(P<0.05)。PARK2敲低组细胞内Parkin蛋白表达降低、P62和OPTN蛋白表达上调(P<0.05),而ROS水平、自噬小体数量、LC3Ⅱ/Ⅰ值以及DA含量与空载质粒组无差异。结论过表达PARK2基因能提高Parkin蛋白的表达,促进细胞内线粒体自噬来清除受损的线粒体,从而保护细胞。OPTN和P62蛋白可能作为PARK2的下游蛋白参与线粒体自噬过程。 展开更多

关键词 sk-n-sh 锰 PARK2 LC3Ⅱ/Ⅰ OPTn P62 线粒体自噬

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复方瑞康欣对吗啡依赖人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞[Ca^(2+)]_i的影响 被引量：2

8

作者 吴明松 罗素元 +3 位作者 王大忠 李晓东 汤贤春 凌锌 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期833-835,共3页

目的观察复方瑞康欣对吗啡依赖人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞[Ca2+]i的影响并探讨其机制。方法SK-N-SH细胞周期同步化后,用10μmol/L的吗啡作用48 h,建立吗啡依赖细胞模型;再用复方瑞康欣含药血清干预12 h,纳洛酮戒断,Fluo 3-AM标记后,流... 目的观察复方瑞康欣对吗啡依赖人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞[Ca2+]i的影响并探讨其机制。方法SK-N-SH细胞周期同步化后,用10μmol/L的吗啡作用48 h,建立吗啡依赖细胞模型;再用复方瑞康欣含药血清干预12 h,纳洛酮戒断,Fluo 3-AM标记后,流式细胞仪检测SK-N-SH细胞内游离Ca2+荧光强度。结果复方瑞康欣含药血清中、高剂量组细胞内游离Ca2+荧光强度均降低,与空白血清戒断组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论复方瑞康欣的戒毒作用可能与其下调细胞Ca2+水平有关。 展开更多

关键词 复方瑞康欣 吗啡依赖 中药血清药理学 细胞内钙离子 sk—n—sh细胞

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姜黄提取物对Na_2S_2O_4诱导SK-N-SH细胞凋亡的保护作用 被引量：2

9

作者 郝淑芹 王亚辉 王四平 《现代中西医结合杂志》 CAS 2014年第2期127-129,136,共4页

目的观察姜黄提取物对Na2S2O4诱导SK-N-SH细胞凋亡的保护作用及其机制。方法取相同代的SK-N-SH细胞随机分为正常对照组、模型组、姜黄提取物低浓度(20μmol/L)组、姜黄提取物中浓度(40μmol/L)组、姜黄提取物高浓度(80μmol/L)组。用分... 目的观察姜黄提取物对Na2S2O4诱导SK-N-SH细胞凋亡的保护作用及其机制。方法取相同代的SK-N-SH细胞随机分为正常对照组、模型组、姜黄提取物低浓度(20μmol/L)组、姜黄提取物中浓度(40μmol/L)组、姜黄提取物高浓度(80μmol/L)组。用分光光度法检测姜黄提取物对细胞外SOD、MDA的影响,通过MTT比色法检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡率,采用Western blot检测法检测细胞Caspase-3蛋白的表达情况。结果与模型组比较,姜黄提取物各组细胞存活率升高(P<0.01),姜黄提取物各组SK-N-SH细胞培养液内的MDA水平均明显降低(P均<0.01),而SOD水平均明显升高(P均<0.01),同时Caspase-3活性受到抑制。结论姜黄提取物能够通过抗氧化作用抑制Na2S2O4对SK-N-SH细胞凋亡作用。 展开更多

关键词 姜黄提取物 血管性痴呆 CASPASE-3 sk—n—sh细胞 乳酸脱氢酶 丙二醛 超氧物歧化酶

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没食子儿茶素没食子酸酯拮抗百草枯诱导SK-N-SH细胞凋亡的机制 被引量：2

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作者 齐春丽 韩春明 +2 位作者 吴铎 徐辰 吕俊华 《中国新药与临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期827-831,共5页

目的探讨茶多酚中主要活性成分没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)拮抗百草枯诱导人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞凋亡的作用机制。方法培养SK-N-SH细胞并给予400μmol.L-1百草枯作用72 h诱导细胞凋亡,建立细胞凋亡模型。实验分为6组:空白... 目的探讨茶多酚中主要活性成分没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)拮抗百草枯诱导人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞凋亡的作用机制。方法培养SK-N-SH细胞并给予400μmol.L-1百草枯作用72 h诱导细胞凋亡,建立细胞凋亡模型。实验分为6组:空白对照组、百草枯模型组、维生素E(10μmol.L-1)组和EGCG(10、5、1μmol.L-1)3个剂量组。药物处理细胞2 h后,加入百草枯,72 h后检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的含量,罗丹明123染色及流式细胞术测线粒体膜电位,RT-PCR检测细胞bcl-2 mRNA与bax mRNA表达情况。结果与空白对照组比较,百草枯模型组细胞SOD活性降低,MDA和ROS含量增加,线粒体膜电位下降,bcl-2 mRNA表达减弱,bax mRNA表达增强,bcl-2/bax比值降低(均P<0.01)。对百草枯损伤的SK-N-SH细胞,维生素E和EGCG可明显提高SOD活性,降低MDA和ROS的含量,恢复线粒体膜电位,增强bcl-2 mRNA表达,减弱bax mRNA表达,升高bcl-2/bax比值(P<0.05或P<0.01)。结论 EGCG拮抗百草枯诱导SK-N-SH细胞凋亡的机制可能与提高细胞抗氧化能力、保护线粒体结构和功能的完整性。 展开更多

关键词 没食子儿茶素没食子酸酯 百草枯 细胞凋亡 sk-n-sh细胞 抗氧化

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大肠杆菌胞外囊泡对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖、凋亡和迁移的影响 被引量：2

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作者 唐波 何大维 +3 位作者 李典 郭文浩 张丹 魏光辉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期334-339,共6页

目的研究大肠杆菌胞外囊泡(E.coli-OMVs)对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法采用差速离心法提取大肠杆菌胞外囊泡,观察囊泡形态并测定囊泡粒径范围。随机分为4组:正常对照组、胞外囊泡低剂量组(100μg/m L E.coli... 目的研究大肠杆菌胞外囊泡(E.coli-OMVs)对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法采用差速离心法提取大肠杆菌胞外囊泡,观察囊泡形态并测定囊泡粒径范围。随机分为4组:正常对照组、胞外囊泡低剂量组(100μg/m L E.coli-OMVs)、胞外囊泡中剂量组(500μg/m L E.coli-OMVs)和胞外囊泡高剂量组(1000μg/m L E.coli-OMVs)。MTT检测各组细胞增殖能力;TUNEL和Western blot分别检测各组细胞凋亡情况及凋亡相关蛋白caspase3的表达;Transwell检测各组细胞迁移能力。结果透射电镜下E.coli-OMVs呈双层膜、中空、圆形或椭圆形,其内含低密度或高密度物质,具有明显的异质性,粒径分析结果表明其直径分布在30~450 nm。与对照组相比,经E.coli-OMVs干预后,SK-N-SH细胞增殖能力显著降低;细胞凋亡增加,caspase3蛋白表达水平明显上调;而迁移能力显著降低(P<0.05)。结论 E.coli-OMVs对SK-N-SH细胞具有直接杀伤作用,有望成为难治性神经母细胞瘤的治疗药物。 展开更多

关键词 sk-n-sh细胞 大肠杆菌胞外囊泡 增殖 凋亡 迁移

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白花丹素通过调控miR-499a-5p表达对阿尔茨海默病细胞凋亡和氧化损伤的影响 被引量：2

12

作者 余骁 徐伟杰 夏乐宏 《中国药师》 CAS 2022年第2期221-226,共6页

目的:探讨白花丹素(PL)调控miR-499a-5p表达对阿尔茨海默病(AD)细胞模型凋亡和氧化损伤的影响。方法:采用β-淀粉样蛋白片段25-35(Aβ_(25-35),5μmol·L^(-1))诱导SK-N-SH细胞24 h建立AD细胞模型。将SK-N-SH细胞分为正常对照组(正... 目的:探讨白花丹素(PL)调控miR-499a-5p表达对阿尔茨海默病(AD)细胞模型凋亡和氧化损伤的影响。方法:采用β-淀粉样蛋白片段25-35(Aβ_(25-35),5μmol·L^(-1))诱导SK-N-SH细胞24 h建立AD细胞模型。将SK-N-SH细胞分为正常对照组(正常培养的细胞)、模型组(5μmol·L^(-1)Aβ_(25-35))、PL低(5μmol·L^(-1)Aβ_(25-35)+10μmol·L^(-1)PL)、中(5μmol·L^(-1)Aβ_(25-35)+20μmol·L^(-1)PL)、高(5μmol·L^(-1)Aβ_(25-35)+40μmol·L^(-1)PL)剂量组、miR-NC组(转染miR-NC,5μmol·L^(-1)Aβ_(25-35))、miR-499a-5p组(转染miR-499a-5p,5μmol·L^(-1)Aβ_(25-35))、PL+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC,40μmol·L^(-1)PL,5μmol·L^(-1)Aβ_(25-35))、PL+anti-miR-499a-5p组(转染anti-miR-499a-5p,40μmol·L^(-1)PL,5μmol·L^(-1)Aβ_(25-35))。采用试剂盒检测细胞丙二醛(MDA)水平以及活性氧(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测剪切型半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase3)和剪切型半胱氨酸蛋白酶9(cleaved-caspase9)蛋白表达;RT-qPCR检测miR-499a-5p表达。结果:与正常对照组比较,模型组SK-N-SH细胞凋亡率、MDA水平、cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白水平显著升高(P<0.05),SOD和GSH-Px活性、miR-499a-5p相对水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,PL低、中、高剂量组SK-N-SH细胞凋亡率、MDA水平、cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白水平显著降低(P<0.05),SOD和GSH-Px活性、miR-499a-5p相对水平显著升高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-499a-5p组SK-N-SH细胞凋亡率、MDA水平、cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白水平显著降低(P<0.05),SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。抑制miR-499a-5p表达显著减弱PL处理对细胞凋亡、MDA水平、cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白水平以及SOD和GSH-Px活性的影响(P<0.05)。结论:PL通过上调miR-499a-5p表达可减轻Aβ_(25-35)诱导的SK-N-SH细胞凋亡和氧化应激损伤。 展开更多

关键词 白花丹素 阿尔茨海默病 β-淀粉样蛋白片段25-35 sk-n-sh细胞 凋亡 氧化应激

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甘薯提取物体外促进PC12和SK-N-SH细胞增殖及突起生长作用研究 被引量：1

13

作者 孙丽华 郑晓亮 +3 位作者 颜冬梅 屠凌岚 李昉赟 王茵 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2011年第1期149-152,共4页

观察甘薯提取物促进体外培养的PC12和SK-N-SH细胞的增值和突起生长作用。采用体外培养PC12和SK-N-SH细胞,以MTT法检测PC12和SK-N-SH细胞的活性率,以细胞突起长度超过2倍胞体或突起数目3个以上者为阳性细胞计算阳性细胞率来评价甘薯提取... 观察甘薯提取物促进体外培养的PC12和SK-N-SH细胞的增值和突起生长作用。采用体外培养PC12和SK-N-SH细胞,以MTT法检测PC12和SK-N-SH细胞的活性率,以细胞突起长度超过2倍胞体或突起数目3个以上者为阳性细胞计算阳性细胞率来评价甘薯提取物对体外培养PC12和SK-N-SH细胞的增值和突起生长的促进作用。实验发现甘薯提取物能够促进PC12和SK-N-SH细胞的突起数目增加,长度增长,阳性细胞数增多,具有一定的神经营养作用,是一种很好的神经保护剂。 展开更多

关键词 甘薯提取物 PC12细胞 sk-n-sh细胞 增殖 突起生长

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LINC01296调控Wnt/β-catenin信号通路影响SK-N-SH细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭 被引量：1

14

作者 王青松 夏鹰 陈焕雄 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2020年第12期2116-2125,共10页

该研究探讨长链非编码RNA LINC01296(lncRNA LINC01296)是否通过调控Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路而调节人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH增殖、凋亡、迁移及侵袭。采用qRT-PCR法检测神经母细胞瘤组织与瘤旁组织中LINC01296的表... 该研究探讨长链非编码RNA LINC01296(lncRNA LINC01296)是否通过调控Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路而调节人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH增殖、凋亡、迁移及侵袭。采用qRT-PCR法检测神经母细胞瘤组织与瘤旁组织中LINC01296的表达水平;体外培养SK-N-SH细胞,随机分为Control组(正常培养SK-N-SH细胞)、si-NC组(si-NC转染至SK-N-SH细胞)、si-LINC01296组(si-LINC01296转染至SK-N-SH细胞)、LiCl组(Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理SK-N-SH细胞)、si-LINC01296+LiCl组(si-LINC01296与LiCl共同处理SK-N-SH细胞);采用甲基噻唑基四唑(MTT)与克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki67)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase3)、Wnt1、β-catenin蛋白表达量。结果显示与瘤旁组织比较,神经母细胞瘤组织中LINC01296的表达水平降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-LINC01296组细胞活力显著降低(P<0.05),克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数显著减少(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05),Wnt1、β-catenin、Ki67、N-cadherin蛋白水平显著降低(P<0.05),E-cadherin、cleaved-caspase3蛋白水平显著升高(P<0.05);激活Wnt/β-catenin信号通路可部分逆转干扰LINC01296表达对SK-N-SH细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响(P<0.05);与LiCl组比较,si-LINC01296+LiCl组细胞活力显著降低(P<0.05),克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数显著减少(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05),Wnt1、β-catenin、Ki67、N-cadherin蛋白水平显著降低(P<0.05),E-cadherin、cleaved-caspase3蛋白水平显著升高(P<0.05)。该研究得出,干扰LINC01296表达可抑制SK-N-SH细胞增殖、迁移、侵袭及诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路� 展开更多

关键词 lncRnA LInC01296 WnT/Β-CATEnIn信号通路 sk-n-sh细胞 增殖 迁移 侵袭 凋亡

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甘薯提取物对Aβ_(25-35)所致SK-N-SH细胞损伤的保护作用初探 被引量：1

15

作者 孙丽华 郑晓亮 +3 位作者 鲁健章 颜冬梅 屠凌岚 王茵 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1359-1361,1407,共4页

观察甘薯提取物对Aβ25-35所致SK-N-SH细胞损伤的保护作用。将人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH)分为空白对照组、模型组、甘薯提取物(即受试物)0.1、1.0、10.0μg/mL低、中、高剂量组和12.5μmol/L多奈哌齐阳性对照组,用20.0 mmol/L Aβ25-3... 观察甘薯提取物对Aβ25-35所致SK-N-SH细胞损伤的保护作用。将人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH)分为空白对照组、模型组、甘薯提取物(即受试物)0.1、1.0、10.0μg/mL低、中、高剂量组和12.5μmol/L多奈哌齐阳性对照组,用20.0 mmol/L Aβ25-35造成SK-N-SH细胞损伤,MTT法测定细胞存活率,考察甘薯提取物对SK-N-SH细胞的保护作用。实验表明甘薯提取物可明显提高Aβ25-35诱导的SK-N-SH细胞存活率,并呈剂量相关性,同时能够明显改善Aβ25-35诱导的SK-N-SH损伤细胞的细胞形态变化。具有一定的神经营养及保护作用。 展开更多

关键词 甘薯提取物 人神经母细胞瘤细胞(sk-n-sh) AΒ25-35

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没食子儿茶素没食子酸酯对百草枯诱导SK-N-SH细胞凋亡的保护作用 被引量：1

16

作者 李冰 韩春明 徐辰 《中国新药与临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期183-187,共5页

目的探讨茶多酚中主要活性成分没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对百草枯诱导人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞凋亡的保护作用。方法培养的SK-N-SH细胞给予400μmol·L-1百草枯诱导细胞凋亡。实验分为6组:空白对照组、百草枯模型组、... 目的探讨茶多酚中主要活性成分没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对百草枯诱导人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞凋亡的保护作用。方法培养的SK-N-SH细胞给予400μmol·L-1百草枯诱导细胞凋亡。实验分为6组:空白对照组、百草枯模型组、维生素E(10μmol·L-1)组和3个EGCG(1、5、10μmol·L-1)剂量组。以药物处理细胞2h后,加入百草枯,72h后MTT法检测细胞活力,取培养细胞上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与空白对照组相比,百草枯明显降低细胞活力(P<0.01),增加LDH漏出量(P<0.01),细胞膜结构不完整,出现空泡等凋亡现象,细胞凋亡发生率达到30.5%。EGCG处理后,显著提高细胞活力,减少LDH的漏出和降低细胞凋亡率(P<0.01),其中10μmol·L-1组的作用明显高于5μmol·L-1组或1μmol·L-1组(P<0.05或P<0.01)。结论EGCG具有抑制百草枯诱导的SK-N-SH细胞凋亡作用。 展开更多

关键词 没食子儿茶素没食子酸酯 百草枯 细胞凋亡 sk-n-sh细胞 茶多酚

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新生牛牛脑活性肽NBBP-1对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖和相关基因表达的影响

17

作者 刘用金 李祺福 +4 位作者 黄晓明 石松林 宋建晔 梁盈 武福云 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第2期208-211,222,共5页

目的:应用新生牛牛脑活性肽NBBP-1处理人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,观察NBBP-1对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖和相关基因表达的影响。方法:通过细胞计数、流式细胞仪、光学显微镜、免疫细胞化学方法检测细胞的变化。结果:经60μg/mLNBB... 目的:应用新生牛牛脑活性肽NBBP-1处理人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,观察NBBP-1对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖和相关基因表达的影响。方法:通过细胞计数、流式细胞仪、光学显微镜、免疫细胞化学方法检测细胞的变化。结果:经60μg/mLNBBP-1处理后,SK-N-SH细胞生长抑制率高达90.09%,细胞周期被阻滞在G0/G1,细胞核裂解成多个,免疫细胞化学染色结果显示,经处理后bcl-2抗凋亡基因蛋白表达减弱,而p53、fas、bax等促凋亡基因蛋白表达增强。结论:新生牛牛脑活性肽NBBP-1对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡具有显著的诱导作用,其诱导癌细胞凋亡的机理与其调节和干预癌基因bcl-2和p53、fas、bax等抑癌基因的表达有关。 展开更多

关键词 新生牛牛脑活性肽 sk-n-sh细胞 细胞凋亡

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山莨菪碱通过lncRNA LINC00657/miR-496通路对MPP^(+)诱导SK-N-SH细胞损伤的保护作用研究 被引量：1

18

作者 齐献忠 邢英瀛 秦慧兵 《新中医》 CAS 2021年第21期7-12,共6页

目的:探讨山莨菪碱(Ani)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导SK-N-SH细胞损伤的作用及分子机制。方法:将SK-N-SH细胞分为Con组,MPP^(+)组,MPP+Ani-L、M、H组,MPP^(+)+si-NC组,MPP^(+)+si-LINC00657组,MPP^(+)+Ani+pcDNA组,MPP^(+)+Ani+pc... 目的:探讨山莨菪碱(Ani)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导SK-N-SH细胞损伤的作用及分子机制。方法:将SK-N-SH细胞分为Con组,MPP^(+)组,MPP+Ani-L、M、H组,MPP^(+)+si-NC组,MPP^(+)+si-LINC00657组,MPP^(+)+Ani+pcDNA组,MPP^(+)+Ani+pcDNA-LINC00657组。试剂盒检测丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽(GSH)活性;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测Bcl-2、Bax蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LINC00657和miR-496的表达;双荧光素酶报告实验检测LINC00657和miR-496的靶向关系。结果:不同浓度山莨菪碱处理后,MPP+诱导SK-N-SH细胞中MDA含量降低,GSH活性升高,细胞凋亡率降低,Bcl-2表达水平升高,Bax表达水平降低,LINC00657表达水平降低,miR-496表达水平升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。LINC00657靶向调控miR-496的表达;抑制LINC00657表达后,MPP+诱导SK-N-SH细胞中MDA含量降低,GSH活性升高,细胞凋亡率降低,Bcl-2表达水平升高,Bax表达水平降低(P<0.05)。LINC00657过表达逆转了山莨菪碱对MPP^(+)诱导SK-N-SH细胞损伤的作用。结论:山莨菪碱通过调控lncRNA LINC00657/miR-496通路对MPP+诱导SK-N-SH细胞损伤起保护作用。 展开更多

关键词 山莨菪碱 lncRnA LInC00657 miR-496 帕金森病 sk-n-sh细胞 损伤

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羊栖菜多糖通过miR-7抑制MPP+诱导的SK-N-SH损伤

19

作者 李茜 李永秋 +2 位作者 张冬森 高轩 高海凤 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1449-1455,共7页

目的羊栖菜多糖(SFPS)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的SK-N-SH损伤的影响及分子机制。方法将SK-N-SH细胞用0.3 mmol·L^(-1)的MPP+处理作为模型(Model)组;以正常培养的细胞作为对照(Con)组,用质量浓度分别为10、30、100 mg... 目的羊栖菜多糖(SFPS)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的SK-N-SH损伤的影响及分子机制。方法将SK-N-SH细胞用0.3 mmol·L^(-1)的MPP+处理作为模型(Model)组;以正常培养的细胞作为对照(Con)组,用质量浓度分别为10、30、100 mg·L^(-1)的羊栖菜多糖和0.3 mmol·L^(-1)的MPP+处理作为羊栖菜多糖低、中、高浓度组;将SK-N-SH细胞再分为Model+miR-NC组、Mod-el+miR-7组、Model+SFPS-H+anti-miR-NC组、Model+SFPS-H+anti-miR-7组;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-7表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;试剂盒检测细胞MDA含量、SOD活性和培养液中LDH含量。结果不同浓度羊栖菜多糖处理后,MPP+诱导的SK-N-SH细胞中miR-7表达水平升高,细胞的凋亡率降低,Bax表达水平降低,Bcl-2表达水平升高,MDA含量和LDH水平降低,SOD活性升高。过表达miR-7后,MPP+诱导的SK-N-SH细胞的凋亡率降低,Bax表达水平降低,Bcl-2表达水平升高,MDA含量和LDH水平降低,SOD活性升高。抑制miR-7逆转了羊栖菜多糖对MPP+诱导的SK-N-SH细胞损伤的作用。结论羊栖菜多糖可能通过上调miR-7抑制MPP+诱导的SK-N-SH细胞损伤。 展开更多

关键词 羊栖菜多糖 miR-7 sk-n-sh细胞 帕金森病

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硝酸镧诱导SK-N-SH细胞氧化应激和自噬的作用 被引量：1

20

作者 来丽叶 智翠娜 +2 位作者 傅娟玲 赵鹏 姚碧云 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2020年第10期750-755,共6页

目的研究硝酸镧〔La(NO3)3〕在引起人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞毒性中氧化应激和自噬的作用机制。方法 La(NO3)30.125,0.25,0.5,1.0,2.0和4.0 mmol·L^-1处理SK-N-SH细胞24 h,MTT法检测细胞存活率。La(NO3)3 0.5,1.0和2.0 mmol... 目的研究硝酸镧〔La(NO3)3〕在引起人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞毒性中氧化应激和自噬的作用机制。方法 La(NO3)30.125,0.25,0.5,1.0,2.0和4.0 mmol·L^-1处理SK-N-SH细胞24 h,MTT法检测细胞存活率。La(NO3)3 0.5,1.0和2.0 mmol·L^-1处理细胞24 h,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)含量和线粒体膜电位,激光共聚焦显微镜检测细胞自噬体数量,Western印迹法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/Ⅰ比值,P62,Parkin和PTEN诱导假定激酶1(PINK1)蛋白表达水平。结果 MTT结果显示,与细胞对照组相比,La(NO3)3≤0.5 mmol·L^-1对细胞存活率无显著影响,La(NO3)31.0,2.0和4.0 mmol·L^-1组细胞存活率均显著降低(P<0.05,P<0.01)。流式细胞术结果显示,与细胞对照组相比,La(NO_3)_30.5 mmol·L^-1组细胞ROS含量无明显差异,La(NO3)31.0和2.0 mmol·L^-1组细胞ROS含量均显著升高(P<0.05,P<0.01),La(NO3)30.5,1.0和2.0 mmol·L^-1组线粒体膜电位均显著降低(P<0.05,P<0.01)。激光共聚焦结果显示,与细胞对照组相比,La(NO3)30.5,1.0和2.0 mmol·L^-1组细胞自噬体数量均显著增加(P<0.05,P<0.01)。Western印迹结果显示,与细胞对照组相比,La(NO3)30.5,1.0和2.0 mmol·L^-1组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、Parkin和PINK1蛋白表达均显著升高(P<0.05),P62蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论La(NO3)3可诱导SK-N-SH细胞发生氧化应激、线粒体功能障碍,同时可诱导SK-N-SH细胞产生细胞自噬和线粒体自噬。 展开更多

关键词 硝酸镧 sk-n-sh细胞 氧化应激 线粒体膜电位 自噬

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