甲基化抑制剂5-aza-2′-deoxycytidine对K562细胞SHP-1基因表达及细胞增殖与凋亡的影响 被引量：7

1

作者 罗建民 李燕 +6 位作者 杨琳 刘小军 温树鹏 王福旭 张敬宇 张学军 董作仁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期309-314,共6页

本研究探讨5-氮杂胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-CdR)对K562细胞中抑癌基因SHP-1的转录调控作用及对K562细胞增殖凋亡的生物学影响,为寻找肿瘤治疗新靶点提供实验依据。采用MSP方法检测SHP-1基因甲基化状态,MTT法检测不同剂量(0.5... 本研究探讨5-氮杂胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-CdR)对K562细胞中抑癌基因SHP-1的转录调控作用及对K562细胞增殖凋亡的生物学影响,为寻找肿瘤治疗新靶点提供实验依据。采用MSP方法检测SHP-1基因甲基化状态,MTT法检测不同剂量(0.5,1,2μmol/L)5-aza-CdR作用K562细胞1,3,5天时对K562细胞存活率的影响,流式细胞术(FCM)分析5-aza-CdR作用1,3,5天时细胞周期及凋亡率的变化,实时定量PCR(FQ-PCR)和Westernblot方法检测5-aza-CdR处理前后SHP-1mRNA及蛋白表达水平、p-STAT5蛋白表达变化。结果表明,K562细胞中存在SHP-1基因的甲基化,5-aza-CdR作用使K562细胞中SHP-1mRNA和蛋白重新表达,而p-JAK2蛋白表达随之呈下降趋势;5-aza-CdR明显抑制K562细胞增殖,并与药物浓度及作用时间呈正相关。JAK2特异性抑制剂AG490明显抑制K562细胞增殖;5-aza-CdR可使K562细胞凋亡率增加,且作用也呈时间依赖性,用药1,3,5天细胞凋亡率分别为9.3%,24.2%,37.7%。2μmol/L的5-aza-CdR处理24小时后,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G0/G1期。5-aza-CdR作用1,3,5天时G2/M期细胞比例分别为30.7%,23.4%,19.3%。结论:特异性甲基化转移酶抑制剂5-aza-CdR能使K562细胞中沉默的SHP-1基因重新表达,并可能通过JAK/STAT路径活化抑制白血病细胞增殖并诱导其凋亡。 展开更多

关键词 甲基化抑制剂 5-氮杂脱氧胞苷 K562细胞 shp-1基因 白血病 细胞增殖

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气道上皮细胞Src同源区2蛋白酪氨酸磷酸酶1基因敲除对慢性阻塞性肺疾病肺气肿表型的影响

2

作者 徐双兰 陈子 +5 位作者 杨姣 樊则琴 刘婷 张新婷 曾冰倩 邢西迁 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期339-345,共7页

目的构建并鉴定气道上皮细胞条件性Src同源区2蛋白酪氨酸磷酸酶1(SHP-1)基因敲除小鼠,观察慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)患者气道上皮SHP-1表达情况及SHP-1表达缺陷对肺气肿小鼠表型的影响。方法检测慢阻肺患者肺组织中气道上皮SHP-1的表达... 目的构建并鉴定气道上皮细胞条件性Src同源区2蛋白酪氨酸磷酸酶1(SHP-1)基因敲除小鼠,观察慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)患者气道上皮SHP-1表达情况及SHP-1表达缺陷对肺气肿小鼠表型的影响。方法检测慢阻肺患者肺组织中气道上皮SHP-1的表达情况。采用CRISPR/Cas9技术构建SHP-1^(flox/flox)转基因小鼠,并将其与气道上皮细胞Clara蛋白10-环化重组酶与雌激素受体融合转基因小鼠(CC10-CreER^(+/+))进行交配,腹腔注射他莫昔芬后,获得气道上皮SHP-1基因敲除小鼠(SHP-1^(flox/flox)CC10-CreER^(+/-),SHP-1^(Δ/Δ))。提取小鼠鼠尾和肺组织DNA,经PCR扩增后判别小鼠的基因型;通过qRT-PCR、Western blot、免疫荧光等方法验证气道上皮细胞SHP-1基因的敲除效果。使用弹性蛋白酶构建肺气肿小鼠模型,评估各组小鼠肺气肿严重程度。结果慢阻肺患者气道上皮SHP-1表达显著下调。基因型鉴定证实SHP-1^(Δ/Δ)小鼠表达CC10-CreER及SHP-1-flox。他莫昔芬诱导后,我们从DNA、RNA及蛋白水平证明SHP-1^(Δ/Δ)小鼠气道上皮细胞中SHP-1蛋白表达缺失,表明气道上皮细胞特异性SHP-1基因敲除小鼠构建成功。肺气肿动物模型中,SHP-1^(Δ/Δ)小鼠与对照组相比,肺气肿表型更为严重,表现为肺组织肺泡结构紊乱,肺泡壁破裂融合形成肺大疱。结论本研究成功建立并鉴定气道上皮细胞SHP-1基因敲除小鼠模型,为深入阐明SHP-1在慢阻肺进程中的作用及其机制提供了新的实验工具。 展开更多

关键词 肺疾病 慢性阻塞性 肺气肿 shp-1 气道上皮细胞 基因敲除

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弥漫大B细胞淋巴瘤SHP-1、p15和SOCS-1基因异常甲基化的研究 被引量：2

3

作者 窦红菊 叶为德 +4 位作者 唐勇 王鸣明 庄衍 朱琦 胡钧培 《白血病．淋巴瘤》 CAS 2013年第11期658-660,664,共4页

目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者SHP-1 、p15和SOCS-1基因异常甲基化在DLBCL的发生、发展中的意义.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应（PCR）技术研究DLBCL淋巴组织标本中SHP-1、p15和SOCS-1基因启动子区域CpG岛的甲基化状态... 目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者SHP-1 、p15和SOCS-1基因异常甲基化在DLBCL的发生、发展中的意义.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应（PCR）技术研究DLBCL淋巴组织标本中SHP-1、p15和SOCS-1基因启动子区域CpG岛的甲基化状态.结果 50例DLBCL患者中有48例（96％）存在SHP-1基因启动子区甲基化,26例（52％）有p15基因启动子区域甲基化,28例（56％）有SOCS-1基因启动子区的甲基化,而15例对照（淋巴结良性反应性增生）组则无SHP-1、p15和SOCS-1基因的甲基化现象.结论 在DLBCL患者中存在的SHP-1、p15和SOCS-1基因启动子区甲基化现象,初步表明SHP-1、p15和SOCS-1基因甲基化在DLBCL的发生、发展中具有一定作用,并对DLBCL的去甲基化治疗提供了理论依据. 展开更多

关键词 淋巴瘤 大B-细胞 弥漫性 基因 shp-1 基因 p15 基因 SOCS-1 甲基化

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SHP-1基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖活性的影响 被引量：3

4

作者 谢亚琳 梁继珍 +4 位作者 刘斐烨 张军一 谢剑明 罗荣城 李荣 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期1024-1027,共4页

目的初步观察转染SHP-1基因前后MDA-MB-231细胞SHP-1蛋白表达情况及转染SHP-1基因对MDA-MB-231细胞增殖能力的影响。方法构建真核表达载体pEGFP-C3-SHP-1,利用脂质体转染法转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,经G418筛选阳性克隆。用免疫细胞化学... 目的初步观察转染SHP-1基因前后MDA-MB-231细胞SHP-1蛋白表达情况及转染SHP-1基因对MDA-MB-231细胞增殖能力的影响。方法构建真核表达载体pEGFP-C3-SHP-1,利用脂质体转染法转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,经G418筛选阳性克隆。用免疫细胞化学和Westernblot检测SHP-1基因在MDA-MB-231细胞中的稳定表达情况,并通过MTT法观察细胞生长曲线。结果蛋白水平证实,转染细胞内有SHP-1基因的高表达,转染后细胞增殖能力明显受抑制(P<0.05)。结论向无SHP-1基因表达的MDA-MB-231细胞内转染SHP-1基因并使其稳定表达,可以使MDA-MB-231细胞的增殖受到抑制,为以后进一步探讨SHP-1基因的功能打下了基础。 展开更多

关键词 shp-1基因 酪氨酸磷酸酶 乳腺癌/分子病理 MDA-MB-231细胞

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Marc145细胞SHP-1、SHP-2结构域的克隆表达及抗体的制备与纯化 被引量：1

5

作者 杜东颖 崔春晓 +4 位作者 冯亚琼 王冬梅 郭嘉 张莹莹 夏平安 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1605-1609,共5页

应用RT-PCR技术从Marc145细胞中克隆出SHP-1、SHP-2结构域基因的cDNA序列,并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-SHP-1、pET-SHP-2,转化大肠杆菌BL21,在IPTG的诱导下成功表达相对分子质量大小约为37 500、40 100的... 应用RT-PCR技术从Marc145细胞中克隆出SHP-1、SHP-2结构域基因的cDNA序列,并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-SHP-1、pET-SHP-2,转化大肠杆菌BL21,在IPTG的诱导下成功表达相对分子质量大小约为37 500、40 100的融合蛋白,将纯化过的融合蛋白分别免疫小鼠,制备鼠源血清,采用间接ELISA和Western Blot试验方法检测,ELISA测定多克隆抗体的血清效价为1∶12 800;Western Blot试验结果证明,制备的鼠抗pET-SHP-1、pET-SHP-2多克隆抗体可以与重组蛋白进行特异性结合,从而证明重组蛋白具有较好的免疫原性。采用硫酸铵盐析与DE-52离子交换层析相结合的方法提取并纯化血清得到纯度较高的鼠抗SHP-1、SHP-2抗体IgG。结果验证了Marc145细胞SHP-1、SHP-2的存在,克隆出了Marc145细胞SHP-1、SHP-2结构域基因并成功表达,为后续试验和研究奠定了基础。 展开更多

关键词 shp-1 shp-2 克隆 原核表达 多克隆抗体

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地西他滨抑制SHP-1基因甲基化对MDS细胞株Skm-1增殖及凋亡影响 被引量：2

6

作者 韩颖 张晋 +3 位作者 季静 庞艳彬 化罗明 邵宗鸿 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1561-1567,共7页

目的:探讨DCA作用于MDS细胞模型后的表型及分子机制,通过细胞增殖、侵袭迁移及细胞凋亡等多重维度研究化疗药物作用于MDS细胞后的反应,揭示DCA治疗MDS的分子机理及其与SHP-1基因甲基化的关系。方法:采用MTT法测定不同浓度DCA处理后的MD... 目的:探讨DCA作用于MDS细胞模型后的表型及分子机制,通过细胞增殖、侵袭迁移及细胞凋亡等多重维度研究化疗药物作用于MDS细胞后的反应,揭示DCA治疗MDS的分子机理及其与SHP-1基因甲基化的关系。方法:采用MTT法测定不同浓度DCA处理后的MDS细胞存活率,采用Transwell实验检测DCA对MDS细胞侵袭和迁移能力的影响,应用AnnexinV-FITC/PI法检测细胞凋亡情况,Western blot免疫蛋白印迹和real time PCR实验研究DCA治疗MDS的作用机制。结果:实验发现,DCA作用于MDS skm-1细胞能抑制肿瘤增殖,且2.0及5.0μmol/L DCA组相对0.5μmol/L DCA组与阴性对照组相比吸光度降低、抑制效应更加明显。与对照组比较,应用DCA后MDS skm-1细胞穿过Transwell上室底膜的数量显著下降。在0.5、2.0及5.0μmol/L DCA处理后,MDS细胞凋亡率依次为4.54%、9.31%及16.58%,对照组细胞凋亡率为3.20%。这表明,细胞凋亡率随DCA浓度显著增加。在经不同浓度DCA处理的MDS细胞系中,SHP-1基因甲基化状态随着药物浓度升高而减弱,SHP-1表达量升高,STAT3表达量减少,而STAT3磷酸化水平则受到明显抑制。结论:通过对DCA作用于MDS细胞后的表型反应分析,发现其主要通过抑制增殖和转移并诱导凋亡来干预MDS,并具有药物剂量依赖性,这揭示了DCA治疗能够改善SHP-1基因的甲基化进而抑制p-STAT3表达的分子机制。 展开更多

关键词 shp-1基因 甲基化 MDS SKM-1 地西他滨

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人脑蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1基因克隆与原核表达 被引量：2

7

作者 李晓婷 谢欣梅 +2 位作者 赵清辉 庞晓斌 杜冠华 《河南大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2013年第4期435-438,共4页

从人脑组织中提取mRNA,通过RT-PCR扩增出目标cDNA,构建蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1-pEASY-E1重组质粒.将重组质粒转化进E.coli TOP10感受态细胞中,筛选阳性克隆进行验证,将测序正确的质粒转化到E.coli Transetta感受态细胞中表达SHP-1.进一步... 从人脑组织中提取mRNA,通过RT-PCR扩增出目标cDNA,构建蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1-pEASY-E1重组质粒.将重组质粒转化进E.coli TOP10感受态细胞中,筛选阳性克隆进行验证,将测序正确的质粒转化到E.coli Transetta感受态细胞中表达SHP-1.进一步对SHP-1表达的诱导温度和IPTG浓度等条件进行优化.结果显示,所克隆的SHP-1基因片断经PCR鉴定和测序分析,与目标基因完全相符.通过蛋白表达条件的优化,发现20℃,0.4mmol/L IPTG对表达菌株进行诱导时,SHP-1可溶性蛋白表达量最大. 展开更多

关键词 shp-1 基因克隆 蛋白表达

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SHP-1 mRNA在髓系白血病患者中的表达及临床意义 被引量：2

8

作者 刘学东 刘晓 +2 位作者 李英华 张永晓 李志赏 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期975-979,共5页

目的:探讨造血细胞磷酸酶(SHP-1)信使核糖核酸(mRNA)在髓系白血病患者中的表达及其与治疗效果和慢性髓系白血病(CML)临床分期的关系。方法:54例CML患者,30例初诊急性髓系白血病(AML)患者,10例非恶性肿瘤常规查体者做对照组(CG),应用SYBR... 目的:探讨造血细胞磷酸酶(SHP-1)信使核糖核酸(mRNA)在髓系白血病患者中的表达及其与治疗效果和慢性髓系白血病(CML)临床分期的关系。方法:54例CML患者,30例初诊急性髓系白血病(AML)患者,10例非恶性肿瘤常规查体者做对照组(CG),应用SYBR Green荧光定量PCR的方法,检测骨髓或外周血单个核细胞中SHP-1 mRNA的表达情况。结果:CG、慢性髓系白血病慢性期(CP-CML)、进展期CML、AML组SHP-1 mRNA的相对表达水平分别为:1.15±0.62,4.96±1.76,2.60±0.90,0.45±0.20。CML患者SHP-1 mRNA表达水平较CG组表达水平显著增高(P<0.05)。CML患者中,CP-CML患者的SHP-1 mRNA表达水平非常显著高于进展期CML患者(P<0.0001)。AML患者较CG组SHP-1 mRNA表达水平明显降低(P=0.0442)。CP-CML患者伊马替尼(IM)治疗3个月时的治疗反应理想组初诊时SHP-1 mRNA表达水平为5.712±0.4476,非常显著地高于反应不佳或失败组4.044±0.3701(P=0.0090)。AML患者诱导化疗达完全缓解组(CR)初诊时SHP-1 mRNA表达水平为0.4984±0.05164,高于未完全缓解组(non-CR)0.3537±0.02388(P=0.0017)。结论:CML患者SHP-1 mRNA表达水平高于AML患者,且与CML疾病进展相关;初诊时SHP-1 mRNA表达水平可以作为预测CP-CML对伊马替尼早期治疗反应及AML患者诱导化疗效果的指标。 展开更多

关键词 shp-1 MRNA 髓系白血病 抑癌基因 疾病进展

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骨髓增生异常综合征患者SHP-1基因启动子甲基化状态及相关机制的探讨 被引量：2

9

作者 张翼骛 赵丹丹 +6 位作者 赵伟鹏 赵海丰 赵智刚 王亚非 吴晓雄 韩晓旗 达万明 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期108-112,共5页

目的探讨SHP-1基因异常甲基化在骨髓增生异常综合征（MDS）发生、发展中的作用和相关机制。方法将63例MDS患者根据IPSS积分系统分为较低危和较高危组。采用甲基化特异性PCR（MS-PCR）对MDS细胞系SKK-1细胞和MDS患者骨髓细胞进行SHP．1... 目的探讨SHP-1基因异常甲基化在骨髓增生异常综合征（MDS）发生、发展中的作用和相关机制。方法将63例MDS患者根据IPSS积分系统分为较低危和较高危组。采用甲基化特异性PCR（MS-PCR）对MDS细胞系SKK-1细胞和MDS患者骨髓细胞进行SHP．1基因启动子甲基化状态的检测；用Westernblot方法检测正常对照者和患者骨髓单个核细胞和SKK-1细胞磷酸化信号传导和转录激活因子3（p-STAT3）蛋白的表达。结果SKK．1细胞存在SHP-1基因启动子部分甲基化，正常对照者骨髓细胞均为非甲基化，较高危组MDS患者SHP-1启动子甲基化率显著高于较低危组（63．3％对24．2％）（P〈0．05）；按WHO分型中染色体核型和骨髓原始细胞比例分组，SHP-1启动子甲基化率在RAEB-Ⅱ、核型差组和骨髓原始细胞占0．11-0．19组显著增高（P〈0．05）；SKK-1细胞中存在p-STAT3蛋白的表达，较高危组MDS患者P-STAT3蛋白的表达显著高于较低危组（66．7％对18．2％）；相关分析显示SHP-1启动子甲基化的出现与p-STAT3蛋白的表达有相关性。结论SHP．1基因启动子的异常甲基化在MDS的发病和疾病进展中发挥作用，其机制可能涉及STAT3信号通路的激活，检测MDS患者SHP-1启动子甲基化状态有助于对疾病预后的判断。 展开更多

关键词 骨髓增生异常综合征 基因 shp-1 DNA甲基化 磷酸化 STAT3

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过表达SHP-1对人慢性髓系白血病急变细胞系K562生物学特征的影响 被引量：2

10

作者 李英华 刘学东 +4 位作者 郭秀芬 刘晓 罗建民 李志赏 张永晓 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期988-992,共5页

目的探讨SHP-1基因对K562细胞系增殖、凋亡、细胞周期分布和集落形成的影响。方法将携带SHP-1基因和绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒表达载体转染K562细胞,SYBR Green荧光定量PCR和Western blot法检测转染细胞SHP-1 m RNA和蛋白的表达情... 目的探讨SHP-1基因对K562细胞系增殖、凋亡、细胞周期分布和集落形成的影响。方法将携带SHP-1基因和绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒表达载体转染K562细胞,SYBR Green荧光定量PCR和Western blot法检测转染细胞SHP-1 m RNA和蛋白的表达情况;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布;光学显微镜和电子显微镜下观察细胞形态;TUNEL法检测细胞凋亡;培养细胞集落并比较不同组间集落形成的数量和大小。结果培养第3天,K562SHP-1细胞的OD值为(0.35±0.02),K562EGFP细胞的OD值为(0.47±0.05),两者差异有统计学意义(P=0.011)。随着培养天数的延长,与K562EGFP细胞相比K562SHP-1细胞出现G0/G1期细胞比例增加和G2/M+S期细胞比例降低及凋亡增加,培养第5天K562SHP-1细胞G0/G1期比例为(56.37±2.27)、凋亡率为(26.13±1.16),K562EGFP细胞G0/G1期比例为(31.67±3.21),凋亡率为(9.00±1.22),两者比较差异有统计学意义(P=0.000)。K562SHP-1细胞集落形成能力(26.3±5.2)较K562EGFP细胞(54.7±8.6)有所降低(P=0.000);K562SHP-1细胞BCR-ABL1蛋白的表达水平(0.78±0.15)低于K562EGFP细胞(1.27±0.24)(P=0.040)。结论过表达SHP-1基因抑制K562细胞增殖和集落形成,促进细胞凋亡,导致细胞周期阻滞在G0/G1期,并降低K562细胞中BCR-ABL1蛋白水平。 展开更多

关键词 shp-1基因 K562细胞 凋亡 增殖 细胞周期 集落形成

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逆转录病毒介导的SHP-1基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达 被引量：1

11

作者 梁继珍 李荣 +2 位作者 张军一 郑航 罗荣城 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期902-905,共4页

目的构建逆转录病毒表达载体pLNCX2-SHP-1,获取重组逆转录病毒,并将SHP-1基因转导入乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法采用RT-PCR方法从高表达SHP-1的人乳腺癌细胞株MCF-7中克隆出SHP-1基因全长cDNA,构建重组逆转录病毒表达载体pLNCX2-SHP-1... 目的构建逆转录病毒表达载体pLNCX2-SHP-1,获取重组逆转录病毒,并将SHP-1基因转导入乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法采用RT-PCR方法从高表达SHP-1的人乳腺癌细胞株MCF-7中克隆出SHP-1基因全长cDNA,构建重组逆转录病毒表达载体pLNCX2-SHP-1,通过脂质体介导将其转染入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定产病毒的细胞株,将病毒感染人乳腺癌细胞MDA-MB-231。采用Western blotting方法检测SHP-1基因在MDA-MB-231细胞中的表达情况。结果成功构建重组逆转录病毒表达载体pLNCX2-SHP-1,转染包装细胞PT67,筛选出对G418具有稳定抗性的克隆PT67/SHP-1,获取重组逆转录病毒上清液,并感染人乳腺癌细胞MDA-MB-231。从蛋白水平证实,感染后的MDA-MB-231有SHP-1基因的表达。结论将SHP-1基因定向克隆入逆转录病毒载体的方法可成功获取重组逆转录病毒,感染MDA-MB-231细胞得到稳定表达SHP-1基因MDA-MB-231/SHP-1,为进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 shp-1 酪氨酸磷酸酶 乳腺肿瘤 基因重组 逆转录病毒

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SHP-1基因与白血病/淋巴瘤

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作者 李英华 罗建民 《国际病理科学与临床杂志》 CAS 2007年第6期507-510,共4页

SHP-1基因是近年来发现的抑癌基因,通过对下游信号蛋白分子磷酸酪氨酸脱磷酸化而终止、消弱细胞生长信号或激活凋亡信号负调控造血细胞的分化、发育和增殖。启动子甲基化是SHP-1基因沉默的主要机制,SHP-1表达降低及缺如与造血细胞的恶... SHP-1基因是近年来发现的抑癌基因,通过对下游信号蛋白分子磷酸酪氨酸脱磷酸化而终止、消弱细胞生长信号或激活凋亡信号负调控造血细胞的分化、发育和增殖。启动子甲基化是SHP-1基因沉默的主要机制,SHP-1表达降低及缺如与造血细胞的恶性转化及增殖优势表型有密切的关系,并与白血病/淋巴瘤的形成、侵袭性及预后相关。 展开更多

关键词 shp-1 抑癌基因 基因沉默 甲基化

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SHP-1对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭的影响及机制初步探讨

13

作者 黄维甄 邹爱梅 +2 位作者 石敏 罗荣城 李荣 《热带医学杂志》 CAS 2011年第3期253-256,F0003,共5页

目的探讨SHP-1对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭能力的影响。方法 MCF-7细胞株分别瞬时转染SHP-1的特异性siRNA干扰序列;然后分别通过RT-PCR和Western-blot检测MCF-7细胞干扰前后SHP-1基因和蛋白表达变化,并通过RT-PCR检测干扰前后MMP-9基因变... 目的探讨SHP-1对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭能力的影响。方法 MCF-7细胞株分别瞬时转染SHP-1的特异性siRNA干扰序列;然后分别通过RT-PCR和Western-blot检测MCF-7细胞干扰前后SHP-1基因和蛋白表达变化,并通过RT-PCR检测干扰前后MMP-9基因变化;通过Transwell小室实验检测干扰SHP-1对细胞侵袭能力的影响。结果 RT-PCR和Western-blot证实SHP-1在人乳腺癌细胞株MCF-7中有表达以及SHP-1SiRNA的干扰效率;干扰SHP-1后,MMP-9的表达量上调;Transwell小室实验证实,与MCF-7阴性干扰对照及空白对照细胞相比,siRNA组的侵袭能力显著增强(P<0.001)。结论乳腺癌MCF-7中SHP-1的表达水平高低和该细胞侵袭能力高低呈负相关,其侵袭可能和MMP-9的表达呈正相关。 展开更多

关键词 shp-1基因 乳腺癌 侵袭 MCF-7细胞

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表观遗传学药物对弥漫大B细胞淋巴瘤SU-DHL-4细胞株增殖及SHP-1基因表达的影响

14

作者 刘林 李佳佳 张凤 《泰山医学院学报》 CAS 2020年第2期100-102,共3页

目的探讨去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)及组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(N-Hydroxy-N-phenyloctanediamide,SAHA)对弥漫大B细胞淋巴瘤SU-DHL-4细胞株增殖及抑癌基因蛋白酪氨酸磷... 目的探讨去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)及组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(N-Hydroxy-N-phenyloctanediamide,SAHA)对弥漫大B细胞淋巴瘤SU-DHL-4细胞株增殖及抑癌基因蛋白酪氨酸磷酸酶-1基因(Src-homologydomain2-containingprotein tyrosine phosphatase-1,SHP-1)表达的影响。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测5-Aza-CdR及SAHA对SU-DHL-4细胞株增殖的影响,SYBR Green相对定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测SHP-1基因表达水平。结果5-Aza-CdR及SAHA均可抑制SU-DHL-4细胞的增殖,且表现为浓度依赖性;1μmol/L5-Aza-CdR及2μmol/SAHA联合应用后,SU-DHL-4细胞的增殖抑制率增高为52.23%,且不同药物浓度间吸光度比较(P<0.01);5-Aza-CdR及SAHA均能使SU-DHL-4细胞中SHP-1重新表达,且联合应用后表达量更高。结论表观遗传学药物能显著抑制弥漫大B细胞淋巴瘤SU-DHL-4细胞株增殖,可能与其诱导的SHP-1基因的表观遗传改变和SHP-1的再表达有关。 展开更多

关键词 表观遗传学药物 弥漫大B细胞淋巴瘤 SU-DHL-4细胞株 shp-1基因

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SHP-1与c-kit基因在慢性髓系白血病中表达水平的研究

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作者 季静 郭明 +1 位作者 韩颖 高明 《医学研究与教育》 CAS 2013年第5期16-18,27,共4页

目的探讨造血细胞磷酸酶(SHP-1)基因、c-kit基因在慢性髓系白血病患者中的表达及其与白血病转化和预后的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测SHP-1 mRNA、c-kit mRNA分别在慢性髓系白血病慢性期、急变期及正常对照组中的表达... 目的探讨造血细胞磷酸酶(SHP-1)基因、c-kit基因在慢性髓系白血病患者中的表达及其与白血病转化和预后的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测SHP-1 mRNA、c-kit mRNA分别在慢性髓系白血病慢性期、急变期及正常对照组中的表达。结果慢性期和急变期SHP-1 mRNA的表达均低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),慢性期和急变期比较差异无统计学意义(P>0.05)。慢性期和急变期c-kit mRNA的表达均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),急变期c-kit mRNA的表达均高于慢性期,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SHP-1基因与c-kit基因可作为判断慢性髓系白血病患者转归及预后的指标。 展开更多

关键词 慢性髓系白血病 shp-1 C-KIT 基因

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Flt3、c-kit和SHP-1基因在急性白血病中的作用

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作者 韩颖 王静 +1 位作者 李会敏 范丽霞 《医学研究与教育》 CAS 2010年第1期18-20,共3页

目的探讨Flt3、造血细胞磷酸酶(SHP-1)基因与原癌基因c-kit在髓系白血病患者中的表达以及其与白血病发生和预后的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测52例髓系白血病患者(实验组)及33例正常对照组Flt3、SHP-1与c-kitmRNA表达... 目的探讨Flt3、造血细胞磷酸酶(SHP-1)基因与原癌基因c-kit在髓系白血病患者中的表达以及其与白血病发生和预后的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测52例髓系白血病患者(实验组)及33例正常对照组Flt3、SHP-1与c-kitmRNA表达。结果急性髓系白血病(AML)患者的Flt3及c-kit平均表达水平高于对照组,SHP-1平均表达水平均低于对照组(P<0.05);34例初治AML患者中,Flt3+及c-kit+的完全缓解率低于Flt3-及c-kit-者,而SHP-1则相反。结论Flt3、c-kit对于白血病的转归、预测白血病的复发、监测微小残留病变有重要的意义,SHP-1可能作为潜在的抑癌基因与Flt3、c-kit基因参与白血病的发生。 展开更多

关键词 白血病 FLT3 C-KIT shp-1 基因 聚合酶链反应

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肝纤维化病理过程中肝组织蛋白酪氨酸磷酸酶SHP1的动态表达

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作者 靳丽敏 郝礼森 +5 位作者 刘玉龄 杨小师 展宗媛 陈盼盼 苗笑佳 何宇 《川北医学院学报》 CAS 2022年第3期275-278,共4页

目的:探讨肝纤维化病理过程中肝组织蛋白酪氨酸磷酸酶SHP1的动态表达。方法:50只SD大鼠随机分为对照组(n=10)和模型组(n=40),大鼠肝纤维化模型采用腹腔注射四氯化碳法构建,Masson三色及HE染色测定大鼠肝脏组织的病理学改变,Western blo... 目的:探讨肝纤维化病理过程中肝组织蛋白酪氨酸磷酸酶SHP1的动态表达。方法:50只SD大鼠随机分为对照组(n=10)和模型组(n=40),大鼠肝纤维化模型采用腹腔注射四氯化碳法构建,Masson三色及HE染色测定大鼠肝脏组织的病理学改变,Western blot、免疫组织化学染色和Real-time PCR测定大鼠肝组织的SHP1表达。结果:免疫组织化学染色显示,正常大鼠肝组织表达少量SHP1,主要位于细胞浆,且随大鼠肝纤维化的加重,肝组织SHP1表达逐渐增加(P<0.05),主要分布于纤维化区域及汇管区。Western blot及Real-time PC检测显示,造模不同时间(2、4、6、8周)大鼠肝组织中SHP1蛋白表达(相对积分光密度值分别为0.53±0.04、0.73±0.04、0.87±0.03、1.10±0.07)及mRNA表达(分别为对照组的1.14、1.36、1.49及1.61倍)均高于对照组(相对积分光密度值为0.35±0.07,mRNA表达为1,P<0.05),并随肝纤维化的加重逐渐增加(P<0.05)。结论:大鼠肝纤维化病理过程中肝组织的SHP1蛋白及mRNA表达均逐渐升高,且升高程度与肝纤维化程度一致。 展开更多

关键词 肝纤维化 shp1 基因表达

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少量胃癌细胞SHP1基因启动子区CpG岛甲基化的状态

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作者 康亚妮 赖登攀 +2 位作者 张晓丽 陈健 赵小东 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期871-875,共5页

目的检测胃癌细胞中SHP1基因启动子区CpG岛异常甲基化状态。方法使用甲基化分析软件Cpgplot预测SHP1基因转录起始位点-1 000 bp^1 340 bp区域的CpG岛并用MethPrimer软件设计甲基化特异性PCR(MSP)引物;建立一种基于Bisulfite修饰、无需提... 目的检测胃癌细胞中SHP1基因启动子区CpG岛异常甲基化状态。方法使用甲基化分析软件Cpgplot预测SHP1基因转录起始位点-1 000 bp^1 340 bp区域的CpG岛并用MethPrimer软件设计甲基化特异性PCR(MSP)引物;建立一种基于Bisulfite修饰、无需提取DNA而直接检测少量细胞甲基化的新方法,并将其用于胃癌细胞SHP1基因启动子区甲基化状态的检测;克隆MSP产物、Sanger测序、分析测序峰图;比较Bisulfite修饰前后序列并分析CpG位点甲基化状态。结果 MSP引物均位于SHP1基因第一外显子区近转录起始位点;CpG岛长度>200 bp、GC含量>50%、Obs/Exp>0.60;MSP检测仅出现甲基化引物特异性扩增条带,提示该区域高甲基化。结论胃癌细胞中SHP1基因启动子区CpG岛存在高甲基化。 展开更多

关键词 胃癌 甲基化 shp1基因 甲基化特异性PCR

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SHP1基因诱导慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡及红系分化

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作者 杨军 刘晓力 +2 位作者 杜庆锋 李宁 周淑芸 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期653-656,共4页

目的探讨SHP1基因在诱导K562细胞凋亡及红系分化中的作用。方法应用RT-PCR法克隆SHP1基因全长cDNA序列并克隆于真核表达载体pcDNA3.0,脂质体转染使其基因在K562细胞中过表达。Hoechst33258染色和FACS(AnnexinⅤ-PI双标)分析检测转基因后... 目的探讨SHP1基因在诱导K562细胞凋亡及红系分化中的作用。方法应用RT-PCR法克隆SHP1基因全长cDNA序列并克隆于真核表达载体pcDNA3.0,脂质体转染使其基因在K562细胞中过表达。Hoechst33258染色和FACS(AnnexinⅤ-PI双标)分析检测转基因后K562细胞凋亡;联苯胺蓝染色和血型糖蛋白A(GPA)表达检测分析细胞分化情况。结果 pcDNA3-SHP1转染K562细胞,RT-PCR、蛋白免疫印迹分析证实SHP1在K562细胞中表达。转染48h后,K562细胞出现凋亡,AnnexinⅤ-PI双标FACS分析细胞凋亡率为16.84%,与转染空载体pcDNA3.0(6.23%)相比差异有统计学意义(P=0.000)。联苯胺蓝染色细胞阳性率14.67%,GPA表达率19.38%,与转染空载体组比较差异也有统计学意义(P=0.005)。结论 SHP1能有效地诱导K562细胞凋亡与红系分化。 展开更多

关键词 shp1基因 K562细胞 细胞凋亡 红系分化

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