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基因枪介导的小麦叶片瞬间表达体系的优化及应用
被引量：
1
1
作者
邢莉萍
钱晨
+4 位作者
李颖波
俞奇
曹爱忠
王秀娥
陈佩度
《麦类作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期143-150,共8页
麦类作物的叶片单细胞瞬间表达是一种高效而快速的基因功能验证方法,尤其适用于麦类作物与白粉病菌的互作系统,但由于影响参数较多、参检基因表达频率低而尚未广泛应用。本研究使用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,对影响表达效率的...
麦类作物的叶片单细胞瞬间表达是一种高效而快速的基因功能验证方法,尤其适用于麦类作物与白粉病菌的互作系统,但由于影响参数较多、参检基因表达频率低而尚未广泛应用。本研究使用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,对影响表达效率的多个转化参数进行优化,筛选出表达频率最高的参数组,即小麦叶片采用固体保鲜培养基固定,钨粉用量为每枪300μg,质粒DNA用量为每枪750ng,可裂膜氦压为1 350psi,可裂膜与受体膜距离6mm,受体与阻挡网距离6cm,与先前报道的方法相比表达频率有显著提高。应用上述参数在感病小麦品种离体叶片中过量表达一个已知具有抗白粉病功能的簇毛麦SGT1基因,结果表明该基因瞬间表达使互作细胞吸器指数降低,表现为对白粉病菌侵入和吸器形成具有抑制作用,在一定程度上增强了表达细胞对白粉病菌的抗性,使目标基因的抗性功能再次得到印证。本研究还进一步运用该优化体系开展瞬间表达介导的基因沉默(TIGS)实验,将携带抗白粉病基因Pm21的抗病小麦品种南农9918和感病小麦品种扬麦158中的内源SGT1和RAR1分别或同时沉默,结果显示南农9918的叶片表皮与白粉菌互作细胞的吸器指数增高,在一定程度上降低了表达细胞对白粉菌的抗性。而扬麦158中互作细胞的吸器指数较对照变化不显著。说明这两个基因均分别参与了Pm21介导的抗白粉病信号途径,且二者共同作用与白粉病抗性关系更加密切。
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关键词
小麦
叶片表皮细胞
瞬间表达
白粉菌互作
sgt
1
rar
1
下载PDF
职称材料
新模式植物短柄二叶草SGT1和RAR1基因沉默和蛋白纯化载体构建
被引量：
1
2
作者
张岳平
瞿华香
《植物遗传资源学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期138-144,共7页
短柄二叶草作为一种新型的模式植物,已成为当前研究热点。其具有基因组小、生长周期短、生存环境简单和容易人工转化等重要生理和遗传特性,被认为是一种潜力巨大的人类研究能源和粮食作物的重要模式植物。SGT1和RAR1基因是高度保守的并...
短柄二叶草作为一种新型的模式植物,已成为当前研究热点。其具有基因组小、生长周期短、生存环境简单和容易人工转化等重要生理和遗传特性,被认为是一种潜力巨大的人类研究能源和粮食作物的重要模式植物。SGT1和RAR1基因是高度保守的并与植物抗病功能紧密相关的重要基因。本文采用Gateway克隆技术构建了SGT1和RAR1的基因沉默表达载体。阳性克隆载体经PCR、酶切和测序鉴定。为进一步研究SGT1和RAR1互作蛋白及其功能,采用该克隆技术将基因cDNA全长克隆至串联亲和纯化蛋白表达载体pEarleyGate205中,为纯化SGT1和RAR1及其互作蛋白提供了基础。正确的阳性克隆载体经农杆菌介导转化至短柄二叶草Bd21获得转化株,以期进一步研究SGT1和RAR1基因及蛋白互作对于短柄二叶草抗病功能的影响。
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关键词
短柄二叶草
sgt
1和
rar
1
基因沉默
Gateway克隆
串联亲和纯化
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职称材料
题名
基因枪介导的小麦叶片瞬间表达体系的优化及应用
被引量：
1
1
作者
邢莉萍
钱晨
李颖波
俞奇
曹爱忠
王秀娥
陈佩度
机构
南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室
出处
《麦类作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期143-150,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31101206)
全国高校博士点基金项目(20100097120036)
+1 种基金
江苏省自然科学基金项目(BK2011636)
国家转基因重大专项(2011ZX08002-001)
文摘
麦类作物的叶片单细胞瞬间表达是一种高效而快速的基因功能验证方法,尤其适用于麦类作物与白粉病菌的互作系统,但由于影响参数较多、参检基因表达频率低而尚未广泛应用。本研究使用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,对影响表达效率的多个转化参数进行优化,筛选出表达频率最高的参数组,即小麦叶片采用固体保鲜培养基固定,钨粉用量为每枪300μg,质粒DNA用量为每枪750ng,可裂膜氦压为1 350psi,可裂膜与受体膜距离6mm,受体与阻挡网距离6cm,与先前报道的方法相比表达频率有显著提高。应用上述参数在感病小麦品种离体叶片中过量表达一个已知具有抗白粉病功能的簇毛麦SGT1基因,结果表明该基因瞬间表达使互作细胞吸器指数降低,表现为对白粉病菌侵入和吸器形成具有抑制作用,在一定程度上增强了表达细胞对白粉病菌的抗性,使目标基因的抗性功能再次得到印证。本研究还进一步运用该优化体系开展瞬间表达介导的基因沉默(TIGS)实验,将携带抗白粉病基因Pm21的抗病小麦品种南农9918和感病小麦品种扬麦158中的内源SGT1和RAR1分别或同时沉默,结果显示南农9918的叶片表皮与白粉菌互作细胞的吸器指数增高,在一定程度上降低了表达细胞对白粉菌的抗性。而扬麦158中互作细胞的吸器指数较对照变化不显著。说明这两个基因均分别参与了Pm21介导的抗白粉病信号途径,且二者共同作用与白粉病抗性关系更加密切。
关键词
小麦
叶片表皮细胞
瞬间表达
白粉菌互作
sgt
1
rar
1
Keywords
Transient
expression
Wheat
Leaf
epidermal
cell
Bgt
interaction
sgt
1
/
rar
1
分类号
S512.1 [农业科学—作物学]
S330
下载PDF
职称材料
题名
新模式植物短柄二叶草SGT1和RAR1基因沉默和蛋白纯化载体构建
被引量：
1
2
作者
张岳平
瞿华香
机构
中南大学研究生院隆平分院
湖南农业大学农学院
出处
《植物遗传资源学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期138-144,共7页
基金
国家"863"计划项目(2006AA10Z1A6-3)
国家"十一五"重大科技攻关项目(2006BA520A01)
文摘
短柄二叶草作为一种新型的模式植物,已成为当前研究热点。其具有基因组小、生长周期短、生存环境简单和容易人工转化等重要生理和遗传特性,被认为是一种潜力巨大的人类研究能源和粮食作物的重要模式植物。SGT1和RAR1基因是高度保守的并与植物抗病功能紧密相关的重要基因。本文采用Gateway克隆技术构建了SGT1和RAR1的基因沉默表达载体。阳性克隆载体经PCR、酶切和测序鉴定。为进一步研究SGT1和RAR1互作蛋白及其功能,采用该克隆技术将基因cDNA全长克隆至串联亲和纯化蛋白表达载体pEarleyGate205中,为纯化SGT1和RAR1及其互作蛋白提供了基础。正确的阳性克隆载体经农杆菌介导转化至短柄二叶草Bd21获得转化株,以期进一步研究SGT1和RAR1基因及蛋白互作对于短柄二叶草抗病功能的影响。
关键词
短柄二叶草
sgt
1和
rar
1
基因沉默
Gateway克隆
串联亲和纯化
Keywords
Brachypodium
distachyon
sgt
1
and
rar
1
Gene
silence
TAP
Gateway
cloning
分类号
Q943 [生物学—植物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基因枪介导的小麦叶片瞬间表达体系的优化及应用
邢莉萍
钱晨
李颖波
俞奇
曹爱忠
王秀娥
陈佩度
《麦类作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
下载PDF
职称材料
2
新模式植物短柄二叶草SGT1和RAR1基因沉默和蛋白纯化载体构建
张岳平
瞿华香
《植物遗传资源学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
下载PDF
职称材料
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0
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