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多重PCR系统的建立及其在社区型甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌中PVL噬菌体分型中的应用
1
作者 马笑雪 孙丹丹 罗恩杰 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期865-869,共5页
目的从基因组型和表型两方面解析从医院环境中分离出的社区型甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌(MRSA),对携带杀白细胞素(PVL)基因的MRSA中的PVL溶原噬菌体进行分型。方法聚合酶链式反应(PCR)解析菌株所携带的SCCmec基因岛型及PVL毒素基因;... 目的从基因组型和表型两方面解析从医院环境中分离出的社区型甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌(MRSA),对携带杀白细胞素(PVL)基因的MRSA中的PVL溶原噬菌体进行分型。方法聚合酶链式反应(PCR)解析菌株所携带的SCCmec基因岛型及PVL毒素基因;凝固酶试验测定菌株的凝固酶型;设计8组PCR反应组合检测PVL溶原噬菌体型。结果 36株菌株所携带的SCCmec基因岛分型多样化。携带Ⅳc型SCCmec的菌株占多数,为16株(44.4%),其次为携带Ⅱ型SCCmec的菌株,为10株(27.8%)。各菌株所携带的SCCmec型别与菌株的凝固酶分型高度一致。经多重PCR检测,6株PVL阳性菌株所携带的PVL噬菌体型分别为φ108PVL型(3株),φ2958PVL型(1株)和φSa2mw型(2株)。结论院内分离的社区型MRSA的基因型和表型多样化,PVL噬菌体分型的多重PCR系统具有可应用性,应用此系统对鉴别具有异构六角形头部和伸长形头部的PVL溶原噬菌体有意义。 展开更多
关键词 甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌 sccmec基因岛 PVL基因 噬菌体分型 多重PCR
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迷你SCC重组质粒的构建及ccr重组酶对SCCmec基因岛的整合功能研究
2
作者 马笑雪 孙丹丹 罗恩杰 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2011年第2期85-89,共5页
目的构建4组迷你SCC重组质粒载体,并导入受体菌N315ex中,验证并比较ccrC和ccrAB重组酶具有识别特异性DNA片段,进而把Ⅴ型或Ⅱ型SCCmec基因岛整合入细菌染色体上的功能。方法以转化株0342(pSR5C)和N315(pSR2AB)中抽提的染色体DNA为模板,... 目的构建4组迷你SCC重组质粒载体,并导入受体菌N315ex中,验证并比较ccrC和ccrAB重组酶具有识别特异性DNA片段,进而把Ⅴ型或Ⅱ型SCCmec基因岛整合入细菌染色体上的功能。方法以转化株0342(pSR5C)和N315(pSR2AB)中抽提的染色体DNA为模板,PCR扩增DNA片段attⅤ和attⅡ,并连接到pYT3载体上,构建pYTattⅤ和pYTattⅡ;将PCR扩增的重组酶基因ccrC0342和ccrAB315分别交叉克隆到pYTattⅤ和pYTattⅡ上,构建重组质粒,并导入N315ex受体菌,在适宜温度培育下充分表达质粒,应用在不同温度培养下含药培养基上菌落数量变化及PCR方法,检测各转化株中质粒整合频率,验证质粒插入方向。结果成功构建4组迷你SCC重组质粒。转化株N315ex(pSR5attⅤ)、N315ex(pSR5attⅡ)和N315ex(pSR2attⅡ)中迷你SCC质粒以不同频度和特定方向整合入细菌染色体中,整合效率分别为8.600%、0.005%和7.200%。N315ex(pSR2attⅤ)中未见整合发生。结论与ccrAB仅可识别Ⅱ型SCCmec基因岛的attⅡ相比,ccrC重组酶可识别V型SCCmec的attⅤ和Ⅱ型SCCmec的attⅡ两组DNA片段,发挥其重组整合作用。 展开更多
关键词 金黄葡萄球菌 sccmec基因岛 重组酶 ccrC基因 ccrAB基因 质粒载体
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