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基于免疫磁分离的荧光微球免疫层析法检测猪霍乱沙门氏菌 被引量:12
1
作者 黄震 夏诗琪 +2 位作者 刘道峰 刘成伟 赖卫华 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2017年第2期217-223,共7页
建立了基于免疫磁分离的荧光微球免疫层析法,检测猪霍乱沙门氏菌。待检样品经免疫磁分离富集和热洗脱处理后,用荧光微球免疫层析试纸条进行检测。每毫克纳米磁珠标记30μg抗体制备的免疫磁珠,对浓度为10~2~10~6CFU/mL的猪霍乱沙门氏菌... 建立了基于免疫磁分离的荧光微球免疫层析法,检测猪霍乱沙门氏菌。待检样品经免疫磁分离富集和热洗脱处理后,用荧光微球免疫层析试纸条进行检测。每毫克纳米磁珠标记30μg抗体制备的免疫磁珠,对浓度为10~2~10~6CFU/mL的猪霍乱沙门氏菌的捕获率均大于90%,特异性好;在pH=6时,以300μg/mg猪霍乱沙门氏菌单抗11D8-D4标记荧光微球,制备免疫荧光微球;以2.0 mg/mL猪霍乱沙门氏菌单抗5F11-B11喷涂检测线(T线),以1.0 mg/mL驴抗鼠IgG喷涂质控线(C线),制备免疫层析试纸条。采用建立的基于免疫磁分离的荧光微球免疫层析方法检测猪霍乱沙门氏菌,在PBS缓冲液中检出限为1.5×10~5CFU/mL,牛奶中检出限为7.6×10~5CFU/mL,与直接采用荧光微球免疫层析方法检测相比,检出限分别降低了10倍和200倍。本方法可有效富集牛奶中的沙门氏菌,避免了基质干扰,灵敏度大大提高,具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 免疫磁分离 荧光微球 免疫层析 猪霍乱沙门氏菌
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猪霍乱沙门氏菌的快速分离鉴定 被引量:9
2
作者 徐引弟 郭爱珍 +2 位作者 贾爱卿 刘维红 陈焕春 《畜牧与兽医》 北大核心 2007年第2期8-11,共4页
猪霍乱沙门氏菌是引起仔猪副伤寒的主要病原菌,给养猪业造成重大危害。本文旨在建立一套细菌快速分离鉴定方法,为该病流行病学调查提供有效手段。从临床初诊为仔猪副伤寒的病猪采集粪便,接种亚硒酸盐亮绿增菌液增菌后,划线于SS琼脂培养... 猪霍乱沙门氏菌是引起仔猪副伤寒的主要病原菌,给养猪业造成重大危害。本文旨在建立一套细菌快速分离鉴定方法,为该病流行病学调查提供有效手段。从临床初诊为仔猪副伤寒的病猪采集粪便,接种亚硒酸盐亮绿增菌液增菌后,划线于SS琼脂培养基,挑无色透明菌落纯化。纯化菌落用美国B IOLOG自动细菌鉴定仪GN2肠杆菌鉴定板鉴定,同时用常规生化鉴定管鉴定,结果符合猪霍乱沙门氏菌的生化特征。PCR扩增invA基因,测序鉴定PCR产物,结果与猪霍乱沙门氏菌参考序列同源性达99%以上。分离菌株接种小白鼠,证明其对小白鼠有致病性。用沙门氏菌属标准血清检测证实其抗原式为6,7∶c∶1,5,符合猪霍乱沙门氏菌的抗原特征。应用以上方法从全国各地病料中分离鉴定了40多株猪霍乱沙门氏菌,为猪霍乱沙门氏菌病的流行病学调查提供了依据,同时证明该方法切实可行。 展开更多
关键词 猪霍乱沙门氏菌 细菌鉴定 PCR 血清型
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一种新型肠粘膜保护剂——载铜蒙脱石对肠粘膜屏障功能影响的研究 被引量:9
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作者 郭彤 许梓荣 赵晶晶 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期75-80,共6页
以蒙脱石(MMT)为原料,通过阳离子交换反应合成载铜蒙脱石(MMT-Cu)。为探讨载铜蒙脱石对肠粘膜屏障功能的影响,采用体外培养的单层Caco-2细胞模型为研究对象,以细菌易位数量和肠绒毛损伤程度做为指标进行研究。结果表明:MMT-Cu可明显减少... 以蒙脱石(MMT)为原料,通过阳离子交换反应合成载铜蒙脱石(MMT-Cu)。为探讨载铜蒙脱石对肠粘膜屏障功能的影响,采用体外培养的单层Caco-2细胞模型为研究对象,以细菌易位数量和肠绒毛损伤程度做为指标进行研究。结果表明:MMT-Cu可明显减少(P<0.01)E.coliK88、S.choleraesuis侵入到Caco-2细胞内的数量,与对照组相比,下降了2logCFU/mL~3logCFU/mL;并能显著降低(P<0.01)LDH的释放量。扫描电子显微镜下观察可见,加入MMT-Cu一段时间后,当E.coliK88和S.choleraesuis粘附Caco-2细胞时,微绒毛依旧排列整齐、致密,可见肠上皮细胞保持完好。结果表明,MMT-Cu对肠粘膜具有屏障作用,可作为一种消化道粘膜保护剂。 展开更多
关键词 载铜蒙脱石 肠粘膜屏障 CACO-2细胞 大肠杆菌K88 猪霍乱沙门氏菌
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Severe infection with multidrug-resistant Salmonella choleraesuis in a young patient with primary sclerosing cholangitis 被引量:2
4
作者 Philip G Ferstl Claudia Reinheimer +4 位作者 Katalin Jozsa Stefan Zeuzem Volkhard AJ Kempf Oliver Waidmann Georgios Grammatikos 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2017年第11期2086-2089,共4页
Massive global spread of multidrug-resistant(MDR) Salmonella spp. expressing extended-spectrum beta-lactamase(ESBL) and additional resistance to fluoroquinolones has often been attributed to high international mobilit... Massive global spread of multidrug-resistant(MDR) Salmonella spp. expressing extended-spectrum beta-lactamase(ESBL) and additional resistance to fluoroquinolones has often been attributed to high international mobility as well as excessive use of oral antibiotics in livestock farming. However, MDR Salmonella spp. have not been mentioned as a widespread pathogen in clinical settings so far. We demonstrate the case of a 25-year-old male with primary sclerosing cholangitis who tested positive for MDR Salmonella enterica serotype Choleraesuis expressing ESBL and fluoroquinolone resistance. The pathogen was supposedly acquired during a trip to Thailand, causing severe fever, cholangitis andpancreatitis. To our knowledge, this is the first report of Salmonella enterica serotype Choleraesuis in Europe expressing such a multidrug resistance pattern. ESBL resistance of Salmonella enterica spp. should be considered in patients with obstructive biliary tract pathology and travel history in endemic countries. 展开更多
关键词 Biliary physiology Infectious disease Multidrug resistance Primary sclerosing cholangitis Salmonella choleraesuis
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草鱼片猪霍乱沙门氏菌生长的控制 被引量:1
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作者 李娜 蔡俊鹏 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期163-167,171,共6页
为了有效控制生鱼片等生食食品携带致病菌的生长,比较了物理(超高压)、化学(双氧水)和生物(蛭弧菌BDM01)三种方法对草鱼片上接种的猪霍乱沙门氏菌进行消除和控制的效果,并对被处理鱼片进行了感官评定。结果表明,与对照组相比,三种方法... 为了有效控制生鱼片等生食食品携带致病菌的生长,比较了物理(超高压)、化学(双氧水)和生物(蛭弧菌BDM01)三种方法对草鱼片上接种的猪霍乱沙门氏菌进行消除和控制的效果,并对被处理鱼片进行了感官评定。结果表明,与对照组相比,三种方法对草鱼片猪霍乱沙门氏菌均有很好的控制作用(p<0.05);且蛭弧菌控制猪霍乱沙门氏菌的生物方法优于超高压和双氧水的物理、化学方法。与其他两种方法相比,蛭弧菌M01处理鱼片的生物方法能在较长时间内(48h)控制草鱼片猪霍乱沙门氏菌的增长,保持鱼片良好的感官状态。虽然在25℃保存/保鲜期间,生物处理组的猪霍乱沙门氏菌的初始浓度高于其他两种方法的处理组,但其增长受到更大的控制。结果表明,在受低度污染的鱼片保鲜中,蛭弧菌技术具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 控制生长 草鱼片 猪霍乱沙门氏菌 超高压 H2O2 蛭弧菌
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载铜蒙脱石对病原菌黏附Caco-2细胞的影响 被引量:1
6
作者 曹授俊 郭彤 +1 位作者 李桂伶 关文怡 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第9期19-22,共4页
为了探讨载铜蒙脱石(MMT-Cu)对大肠杆菌K88和猪霍乱沙门菌的黏附作用,试验采用Ca-co-2细胞培养模型,观察被标记的大肠杆菌K88、猪霍乱沙门菌对载铜蒙脱石的黏附作用;并在培养液中加入载铜蒙脱石,计算其对细菌黏附的阻断率,测定胞内乳酸... 为了探讨载铜蒙脱石(MMT-Cu)对大肠杆菌K88和猪霍乱沙门菌的黏附作用,试验采用Ca-co-2细胞培养模型,观察被标记的大肠杆菌K88、猪霍乱沙门菌对载铜蒙脱石的黏附作用;并在培养液中加入载铜蒙脱石,计算其对细菌黏附的阻断率,测定胞内乳酸脱氢酶(LDH)的释放情况。结果表明:测试菌与Caco-2细胞的黏附率分别为13.23%和10.78%;载铜蒙脱石对病原菌黏附Caco-2细胞均有不同程度的阻断作用,对大肠杆菌K88、猪霍乱沙门菌的阻断率分别为67.38%和60.45%,并能极显著降低LDH的释放(P<0.01)。说明载铜蒙脱石可有效阻断病原菌黏附,从而防治肠道细菌感染和细菌移位,可作为一种消化道黏膜保护剂。 展开更多
关键词 载铜蒙脱石 CACO-2细胞 黏附 大肠杆菌K88 猪霍乱沙门菌
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Immure response induced by oral DNA vaccination against FMDV delivered by attenuated Salm onella choleraesuis C500
7
作者 Liu Mingqiu Niu Xiaofeng +2 位作者 Yan Jingran Yan Weiyao Zheng Zhaoxin 《Frontiers in Biology》 CSCD 2006年第2期110-114,共5页
A recombinant strain of Salmonella choleraesuis C500,containing a eukaryotic expression plasmid pBO1 with the immune-dominant epitope of foot-and-mouth disease virus,was constructed.Specific immune response to this re... A recombinant strain of Salmonella choleraesuis C500,containing a eukaryotic expression plasmid pBO1 with the immune-dominant epitope of foot-and-mouth disease virus,was constructed.Specific immune response to this recombinant strain was evaluated by oral administration of the recombinant live bacteria pBO1/S.cho in rabbits.Results showed that T cell response and specific antibody production were elicited.This approach may present a general strategy for eliciting immune responses with DNA vaccine delivered by live bacterial vectors.The stimulated indexes of T lymphoproliferation by specific antigens of FMDV in rabbits,can reach up to 11.0 and an antibody titer of 1/32 as detected in the erum with liquid block ELISA. 展开更多
关键词 Salmonella choleraesuis foot-and-mouth disease virus recombinant live vaccine
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猪霍乱沙门氏菌C500株△crp△asd缺失株平衡致死载体系统的构建及鉴定 被引量:31
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作者 徐引弟 郭爱珍 +2 位作者 刘维红 贾爱卿 陈焕春 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期366-372,共7页
猪霍乱沙门氏菌C500株是用化学方法致弱、用于预防仔猪副伤寒的弱毒疫苗株,虽具有较好的免疫原性,但仍有一定的残余毒力。为了研制更加安全并保持C500株良好免疫原性的弱毒株,及将C500开发为适于粘膜免疫的疫苗活载体,本文构建了猪霍乱... 猪霍乱沙门氏菌C500株是用化学方法致弱、用于预防仔猪副伤寒的弱毒疫苗株,虽具有较好的免疫原性,但仍有一定的残余毒力。为了研制更加安全并保持C500株良好免疫原性的弱毒株,及将C500开发为适于粘膜免疫的疫苗活载体,本文构建了猪霍乱沙门氏菌C500株△crp△asd双缺失株平衡致死载体系统。首先构建含缺失320bp的crp(cAMP受体蛋白)基因与蔗糖敏感基因(sacB)的重组自杀性质粒,与C500接合转移,两步法筛选无抗性的△crp缺失株,用PCR证实基因组crp基因的缺失突变。用同样方法在crp缺失株基础上构建asd(天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶)基因缺失株。该缺失株生长必需外源DAP(二氨基庚二酸)。进一步鉴定△crp缺失株的表型、生长特性、毒力等,结果表明△crp△asd缺失株构建成功。△crp△asd缺失株可以用来作为宿主载体平衡致死系统来高效表达外源基因,为深入研究以C500株为载体的口服多价疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猪霍乱沙门氏菌C500株 △crp/asd缺失株 重组自杀性质粒 asd平衡致死系统
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猪霍乱沙门氏菌的分离与鉴定以及PCR检测方法的建立 被引量:20
9
作者 陈弟诗 郭万柱 +2 位作者 徐志文 李雯 王小玉 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第20期6020-6023,共4页
[目的]为了确定四川省某猪场初生仔猪大规模发病的原因。[方法]对发病仔猪进行细菌分离、培养特性及形态结构观察、生化鉴定、药敏试验、动物致病性试验和血清型鉴定,并建立PCR快速检测方法。[结果]从发病仔猪体内分离到1株优势菌,初步... [目的]为了确定四川省某猪场初生仔猪大规模发病的原因。[方法]对发病仔猪进行细菌分离、培养特性及形态结构观察、生化鉴定、药敏试验、动物致病性试验和血清型鉴定,并建立PCR快速检测方法。[结果]从发病仔猪体内分离到1株优势菌,初步鉴定为沙门氏菌。根据沙门氏菌invB基因设计的1对引物进行PCR扩增,得到408bp的特异性条带,PCR产物经T-A克隆测序证实为invB基因,与参比序列具有非常高的同源性,说明该PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性。经血清学试验确定该分离株为猪霍乱沙门氏菌,毒力试验和药敏试验结果表明分离菌致病性很强,对头孢三嗪、氯霉素、氧氟沙星等敏感。[结论]该研究为沙门氏菌病原鉴定与疾病诊断提供了依据。 展开更多
关键词 猪霍乱沙门氏菌 分离 鉴定 PCR
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嗜酸乳杆菌和两歧双歧杆菌体外粘附Caco-2细胞及其对病原菌粘附性能的影响 被引量:19
10
作者 郭彤 胥保华 +1 位作者 马玉龙 魏华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期527-531,共5页
以Caco-2细胞作为体外模式,观察嗜酸乳杆菌、两歧双歧杆菌、大肠杆菌K88和猪霍乱沙门氏菌对Caco-2细胞的粘附特性,并探讨嗜酸乳杆菌和两歧双歧杆菌的抗粘附作用。结果表明,所试4种细菌菌株均表现出很强的粘附Caco-2细胞的特性;粘附抑制... 以Caco-2细胞作为体外模式,观察嗜酸乳杆菌、两歧双歧杆菌、大肠杆菌K88和猪霍乱沙门氏菌对Caco-2细胞的粘附特性,并探讨嗜酸乳杆菌和两歧双歧杆菌的抗粘附作用。结果表明,所试4种细菌菌株均表现出很强的粘附Caco-2细胞的特性;粘附抑制试验表明,无论在排斥试验、竞争试验还是置换试验,嗜酸乳杆菌或两歧双歧杆菌均能明显抑制大肠杆菌K88和猪霍乱沙门氏菌的粘附;杀菌试验表明,嗜酸乳杆菌或两歧双歧杆菌上清液均能显著抑制病原菌的生长,但上清液用胰蛋白酶、蛋白酶K、乳酸脱氢酶处理后,杀菌作用明显降低,表明杀菌作用是乳酸和蛋白质样物质共同作用的结果。 展开更多
关键词 CACO-2细胞 粘附 抑制 嗜酸乳杆菌 两歧双歧杆菌 大肠杆菌K88 猪霍乱沙门氏菌
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实时荧光PCR检测食品中丙型副伤寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌 被引量:17
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作者 郑秋月 赵彤彤 +3 位作者 袁慕云 许龙岩 荣策 曹际娟 《食品科技》 CAS 北大核心 2014年第2期297-301,共5页
建立实时荧光PCR检测丙型副伤寒沙门氏菌(S.Paratyphi C/Salmonella paratyphi C)和猪霍乱沙门氏菌(S.Choleraesuis/Salmonella Choleraesuis)的方法。根据GenBank公布的丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门氏菌序列,分别设计引物和Taqman探针... 建立实时荧光PCR检测丙型副伤寒沙门氏菌(S.Paratyphi C/Salmonella paratyphi C)和猪霍乱沙门氏菌(S.Choleraesuis/Salmonella Choleraesuis)的方法。根据GenBank公布的丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门氏菌序列,分别设计引物和Taqman探针,使用168株不同血清型的沙门氏菌和21株变形杆菌等非沙门氏菌进行实时荧光PCR检测的特异性试验,可以实现特异性检测丙型副伤寒沙门氏菌,并且可以同时检测丙型副伤寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌。经模拟污染样品检测,灵敏度可达到2~5 cfu/mL的添加浓度。该方法可以快速检测食品中丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门氏菌。 展开更多
关键词 实时荧光PCR 丙型副伤寒沙门菌 猪霍乱沙门氏菌 食品 检测
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单抗竞争ELISA检测猪沙门氏菌感染方法的建立与应用 被引量:13
12
作者 殷月兰 潘志明 +2 位作者 孟书霞 黄金林 焦新安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期65-68,76,共5页
以猪霍乱沙门氏菌作为包被抗原 ,利用沙门氏菌O7单克隆抗体酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪霍乱沙门氏菌抗体。经过研究确定抗原包被浓度为 2×1 0 8CFU/ml,血清检测稀释度为 1∶1 6,酶标抗体浓度为 1∶70 0 ,包被液为碳酸盐缓冲... 以猪霍乱沙门氏菌作为包被抗原 ,利用沙门氏菌O7单克隆抗体酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪霍乱沙门氏菌抗体。经过研究确定抗原包被浓度为 2×1 0 8CFU/ml,血清检测稀释度为 1∶1 6,酶标抗体浓度为 1∶70 0 ,包被液为碳酸盐缓冲液 ( 0 .0 5MpH9.6)。应用单抗竞争ELISA和平板凝集试验 (PAT)同时对 5 0 6份血清进行猪霍乱抗体检测 ,PAT的检出率为 3 .60 % ,ELISA检出率为 5 .75 % ,两者符合率达 96.4%。试验结果表明 ,ELISA方法敏感性高 ,特异性强 ,稳定性和重复性好 ,操作简便。本方法的建立在猪群沙门氏菌感染的检疫、实验室诊断的标准化及流行病学调查方面具有应用价值。 展开更多
关键词 单抗竞争ELISA 应用 霍乱沙门氏菌 检测方法 副伤寒
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猪霍乱沙门氏菌C78-1株Δcrp缺失株的构建及其生物学特性初步研究 被引量:16
13
作者 郁川 程相朝 +3 位作者 赵战勤 张春杰 李银聚 吴庭才 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期587-593,共7页
通过自杀性质粒介导的等位交换技术构建猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失株,并对其生物学特性进行初步研究。首先以猪霍乱沙门氏菌C78-1基因组为模板进行PCR,扩增出crp基因上下游片段(1 048和1 743 bp),并分别将其克隆入自杀性质粒pR... 通过自杀性质粒介导的等位交换技术构建猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失株,并对其生物学特性进行初步研究。首先以猪霍乱沙门氏菌C78-1基因组为模板进行PCR,扩增出crp基因上下游片段(1 048和1 743 bp),并分别将其克隆入自杀性质粒pRE112上,构建含缺失320 bpcrp基因的重组自杀性质粒pREΔcrp。运用重组自杀性质粒介导的等位交换技术,两步法筛选C78-1的Δcrp缺失株。进一步的生物学特性研究表明,缺失株的血清型与亲本菌株C78-1一致,且能够稳定遗传缺失的crp基因,但其生化特性和生长速度与C78-1相比发生明显改变,小鼠致死性试验结果表明其毒力较C78-1降低约750倍。以上结果均证实,作者成功构建了猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失突变株,缺失株遗传稳定,毒力显著降低,为进一步开发猪霍乱沙门氏菌的弱毒疫苗菌株奠定了基础。 展开更多
关键词 猪霍乱沙门氏菌C78-1 crp基因 重组自杀性质粒 接合转移 Δcrp缺失株
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规模化猪场猪霍乱沙门氏菌的分离鉴定与药敏试验 被引量:14
14
作者 刘俊伟 张海棠 +3 位作者 张志鹏 赵彩丽 申红艳 王自良 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第4期146-148,共3页
采集新乡市某规模化猪场疑似猪沙门氏菌病的病料,通过细菌分离培养、生化鉴定、动物试验和药敏试验,分离到1株革兰氏阴性小杆菌,该菌在麦康凯琼脂平板上呈细小、无色半透明、光滑、圆整的菌落,对葡萄糖、木糖醇、赖氨酸、甘露醇、蔗糖... 采集新乡市某规模化猪场疑似猪沙门氏菌病的病料,通过细菌分离培养、生化鉴定、动物试验和药敏试验,分离到1株革兰氏阴性小杆菌,该菌在麦康凯琼脂平板上呈细小、无色半透明、光滑、圆整的菌落,对葡萄糖、木糖醇、赖氨酸、甘露醇、蔗糖、果糖和山梨醇反应阳性,对甘露糖、硫化氢、苯丙氨酸、尿素酶反应呈阴性,可致死小白鼠,确定所分离的细菌为猪霍乱沙门氏菌。该菌对头孢噻呋、左旋氧氟沙星等敏感,对诺氟沙星和新霉素中介,对氟苯尼考、氨苄西林、庆大霉素等耐药。该研究为猪沙门氏菌病的防治提供理论依据。 展开更多
关键词 猪霍乱沙门氏菌 分离鉴定 药敏试验
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猪霍乱沙门氏菌C78-1株ΔcrpΔasd缺失株平衡致死载体系统的构建及生物学特性研究 被引量:14
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作者 张明亮 张春杰 +4 位作者 程相朝 赵战勤 李正 王慧 郁川 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期373-379,共7页
为开发减毒猪霍乱沙门氏菌的活疫苗载体,通过自杀性质粒介导的细菌同源重组技术,构建了猪霍乱沙门氏菌C78-1株ΔcrpΔasd双基因缺失株,并对其生物学特性进行探讨。首先构建含有缺失1 488bp asd基因的重组自杀性质粒pREΔasd,然后与已构... 为开发减毒猪霍乱沙门氏菌的活疫苗载体,通过自杀性质粒介导的细菌同源重组技术,构建了猪霍乱沙门氏菌C78-1株ΔcrpΔasd双基因缺失株,并对其生物学特性进行探讨。首先构建含有缺失1 488bp asd基因的重组自杀性质粒pREΔasd,然后与已构建完成的ΔcrpC78-1缺失株进行接合转移,采用两步法筛选无抗性的C78-1的ΔcrpΔasd双缺失株。PCR鉴定结果表明,C78-1的ΔcrpΔasd双缺失株构建成功;进一步研究表明,该缺失株的生长需要外源的二氨基庚二酸(DAP),且能稳定遗传缺失的asd基因,与C78-1相比,其血清型未发生变化,但其生长速度明显减慢。ΔcrpΔasd C78-1双缺失株可接受asd+质粒作为宿主平衡致死系统高效稳定地表达外源基因,为开发以C78-1为载体的口服多价疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猪霍乱沙门氏菌C78-1株 Asd+平衡致死系统 重组自杀性质粒 活疫苗载体
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猪霍乱沙门菌载体介导猪瘟病毒DNA免疫研究 被引量:11
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作者 乔红伟 孙金福 +3 位作者 韩文瑜 李作生 余兴龙 涂长春 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期865-870,共6页
构建了猪瘟病毒(CSFV)主要保护性抗原E2基因的真核表达质粒pVAXE2。将其电转化猪霍乱沙门氏菌C500疫苗株,得到了携带pVAXE2质粒的猪霍乱沙门氏菌工程菌株S.C500pVAXE2,对该菌株的特征、培养特性和生化特性进行了鉴定。分别用1×108... 构建了猪瘟病毒(CSFV)主要保护性抗原E2基因的真核表达质粒pVAXE2。将其电转化猪霍乱沙门氏菌C500疫苗株,得到了携带pVAXE2质粒的猪霍乱沙门氏菌工程菌株S.C500pVAXE2,对该菌株的特征、培养特性和生化特性进行了鉴定。分别用1×108CFU、2×109CFUS.C500pVAXE2经口服或肌肉注射免疫小鼠和家兔,间接ELISA检测免疫动物的特异性抗体,在第三次免疫后2周用20ID50猪瘟兔化弱毒和致死量猪霍乱沙门氏菌强毒株对免疫兔进行攻击。结果表明,S.C500pVAXE2保持了猪霍乱沙门氏菌原有形态特征、培养特性和生化特性,免疫鼠和兔都产生了抗CSFV和猪霍乱沙门菌的ELISA抗体,免疫家兔能抵抗猪瘟兔化弱毒株和猪霍乱沙门氏菌强毒株的攻击。显示了以S.C500为DNA运输载体构建二联或多联猪用疫苗的可行性。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 DNA免疫 猪霍乱沙门菌弱毒疫苗株
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5种中药对猪霍乱沙门菌的抑菌作用 被引量:12
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作者 李东 于丹 +5 位作者 曾范利 宗颖 时坤 李健明 赵丹 杜锐 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期318-322,共5页
为研究黄连、黄芩、五倍子、黄柏和鱼腥草提取物对猪霍乱沙门菌的抑菌效果,采用超声波处理,乙醇回流,水浴加热的方法提取5种中药的有效成分,采用2倍稀释法分别测定提取物对猪霍乱沙门菌的最小抑菌质量浓度(mini-mum inhibitory concentr... 为研究黄连、黄芩、五倍子、黄柏和鱼腥草提取物对猪霍乱沙门菌的抑菌效果,采用超声波处理,乙醇回流,水浴加热的方法提取5种中药的有效成分,采用2倍稀释法分别测定提取物对猪霍乱沙门菌的最小抑菌质量浓度(mini-mum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌质量浓度(minimum bactericidal concentration,MBC),采用肉汤稀释棋盘法,测定提取物对猪霍乱沙门菌的联合抑菌效果。结果显示,黄连单独抑菌时的MIC值较其他中药的MIC值低,且与黄芩、五倍子联合用药时MIC值由7.81×103 mg/L降到3.91×103 mg/L。而黄芩与黄连、黄柏、五倍子、鱼腥草联合用药时MIC值均降低。黄芩与其他4种药联合用药后抑菌效果增强,且与五倍子联合用药时FICI值小于0.5表现为协同作用,并且2种药物的MIC降低明显。结果表明,黄连、黄芩、五倍子对猪霍乱沙门菌有较好的抑菌作用,黄连、黄芩、五倍子联用时,抑菌效果为协同或相加作用;黄芩与鱼腥草联用时抑菌效果为无关作用;黄柏与鱼腥草联用时抑菌效果也为无关作用。 展开更多
关键词 中药提取物 猪霍乱沙门菌 抑菌活性 联合抑菌作用
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大肠杆菌K_(88ac)与LT(A^-B^+)抗原基因质粒在猪霍乱沙门氏菌弱毒株中的表达 被引量:6
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作者 韩文瑜 黎诚耀 +1 位作者 梁焕春 王世若 《兽医大学学报》 CSCD 1992年第1期7-10,共4页
应用细菌质粒转化技术,将大肠杆菌K_(?)与LT(A^-B^+)抗原基因重组质粒转入猪霍乱沙门氏菌弱毒菌苗株中.对获得的其中8个转化子进行鉴定的结果表明,转化的细菌仍保持沙门氏菌的形态、生化及抗原特性,同时可稳定地表达K(?)和LT-B两种抗原... 应用细菌质粒转化技术,将大肠杆菌K_(?)与LT(A^-B^+)抗原基因重组质粒转入猪霍乱沙门氏菌弱毒菌苗株中.对获得的其中8个转化子进行鉴定的结果表明,转化的细菌仍保持沙门氏菌的形态、生化及抗原特性,同时可稳定地表达K(?)和LT-B两种抗原.用微量间接血凝试验、抗甘露糖豚鼠红细胞凝集试验(MRHA)、ELISA等对转化菌表达的K(?)抗原进行了测定,用间接免疫溶血试验对其表达的LT-B抗原进行了测定.结果,这两种抗原在转化的细菌中均可高效表达.电镜下观察,转化的细菌在其表面形成菌毛样结构.这种转化细菌表现出猪霍乱沙门氏菌与产肠毒素性大肠杆菌的两种抗原特性,为这种双价工程菌苗的研制提供了有价值的候选菌株.本研究结果还表明,猪霍乱沙门氏菌弱毒菌苗株可作为基因转化的有效受体菌. 展开更多
关键词 大肠杆菌 霍乱 基因表达
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猪霍乱沙门菌缺失株ΔcyaC78-1和ΔcrpΔcyaC78-1的构建及其生物学特性比较 被引量:10
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作者 张俊峰 张春杰 +6 位作者 程相朝 尚珂 陈松彪 张明亮 郁川 何雷 赵战勤 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期781-788,共8页
为开发更加安全有效且遗传背景清晰的减毒猪霍乱沙门菌活疫苗,运用自杀性质粒介导的等位交换技术缺失cya基因,分别构建猪霍乱沙门菌缺失株ΔcyaC78-1和ΔcrpΔcyaC78-1,并将两者的生物学特性与ΔcrpC78-1和疫苗株C500进行比较。以猪霍... 为开发更加安全有效且遗传背景清晰的减毒猪霍乱沙门菌活疫苗,运用自杀性质粒介导的等位交换技术缺失cya基因,分别构建猪霍乱沙门菌缺失株ΔcyaC78-1和ΔcrpΔcyaC78-1,并将两者的生物学特性与ΔcrpC78-1和疫苗株C500进行比较。以猪霍乱沙门菌C78-1为模板,分别扩增cya基因的上臂和下臂,然后通过中间转移载体pBluescriptⅡSK(+)克隆至自杀性质粒pRE112中,构建重组自杀性质粒pREΔcya,再与C78-1和ΔcrpC78-1分别进行接合转移,通过两步法筛选ΔcyaC78-1和ΔcrpΔcyaC78-1。PCR及测序结果表明,ΔcyaC78-1和ΔcrpΔcyaC78-1构建成功。生物学特性检测结果表明,所构建的ΔcyaC78-1和ΔcrpΔcyaC78-1的血清型和生化特性与ΔcrpC78-1保持一致,并能够稳定遗传Δcya基因;两者的生长速度明显慢于疫苗株C500,且ΔcrpΔcyaC78-1的生长速度最慢。小鼠毒力试验表明,ΔcyaC78-1的毒力高于ΔcrpC78-1约1.7倍,较疫苗菌株C500下降至58.2%,但ΔcrpΔcyaC78-1的毒力较ΔcrpC78-1下降至0.194%,较C500下降至0.065%。构建的猪霍乱沙门菌缺失株ΔcyaC78-1、ΔcrpΔcyaC78-1遗传稳定,背景清晰,毒力降低,尤其是ΔcrpΔcyaC78-1双缺失株的毒力较疫苗株C500降低显著,为筛选更加高效的减毒猪霍乱沙门菌疫苗和进一步开发适用于猪的口服活疫苗载体奠定了良好基础。 展开更多
关键词 猪霍乱沙门菌 ΔcyaC78-1 ΔcrpΔcyaC78-1 重组自杀性质粒 毒力 生物学特性 减毒活疫苗
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1株跨属感染猪霍乱沙门菌和大肠杆菌烈性噬菌体的分离及其生物学特性 被引量:9
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作者 张玉宇 张敏 +1 位作者 黄赞 林焱 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期2032-2038,共7页
从健康猪肠道内容物分离鉴定猪霍乱沙门菌(Salmonella choleraesuis,S.choleraesuis)的烈性噬菌体,并对其进行生物学特性分析。以S.choleraesuis 13122为宿主菌,用双层平板法从猪肠道黏膜和食糜样品中分离噬菌体,用电镜形态观察和基因... 从健康猪肠道内容物分离鉴定猪霍乱沙门菌(Salmonella choleraesuis,S.choleraesuis)的烈性噬菌体,并对其进行生物学特性分析。以S.choleraesuis 13122为宿主菌,用双层平板法从猪肠道黏膜和食糜样品中分离噬菌体,用电镜形态观察和基因组测序确定其分类,用点滴法和双层平板法测定其在大肠杆菌上的宿主谱,用浊度法测定其裂菌效力。分离到1株猪霍乱沙门菌噬菌体,命名为沙门菌噬菌体L6jm(Salmonella phage L6jm)。L6jm头部呈正多面体直径约75 nm,具有非收缩性的尾部,长约190 nm,其基因组无整合酶基因和细菌基因组,故判定为烈性噬菌体;L6jm可感染S.choleraesuis 13122并跨属感染1株大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)244,同时,可裂解9株大肠杆菌,包括1株产肠毒素大肠杆菌(ETEC);L6jm在S.choleraesuis 13122和E.coli 244上的最佳感染复数分别为0.01和0.001;潜伏期均为15 min,暴发期分别为145和125 min;L6jm在≤50℃,pH为3~11时稳定;L6jm在液体培养基中对S.choleraesuis 13122有显著(P<0.05)的抑菌效果,对ETEC104在MOI 100时也可产生显著(P<0.05)的抑菌效果。L6jm可跨属感染S.choleraesuis和E.coli,且能裂解1株ETEC,具有防治沙门菌和大肠杆菌感染的应用潜力。 展开更多
关键词 猪霍乱沙门菌 噬菌体 跨属感染 生物学特性 裂菌效力
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