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过表达RhoD对人黑素瘤A375细胞骨架和迁移侵袭的影响 被引量:1
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作者 温斯健 倪娜娜 +5 位作者 周晓伟 吴琼 王小坡 宋昊 张韡 孙建方 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期871-875,共5页
目的:探讨RhoD对人黑素瘤细胞株A375细胞骨架、迁移和侵袭能力等的影响及作用机制。方法实验分为A375-RhoD组和A375-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)组,分别用携带RhoD的慢病毒载体和阴性对照慢病毒载体转染。罗丹明标记鬼笔环肽染色观察... 目的:探讨RhoD对人黑素瘤细胞株A375细胞骨架、迁移和侵袭能力等的影响及作用机制。方法实验分为A375-RhoD组和A375-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)组,分别用携带RhoD的慢病毒载体和阴性对照慢病毒载体转染。罗丹明标记鬼笔环肽染色观察细胞骨架,Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力,流式细胞仪检测细胞周期,Western印迹法检测丝切蛋白、磷酸化丝切蛋白、Diaph2和RhoD的表达。结果与A375-EGFP组细胞相比,A375-RhoD组细胞体积增大,应力纤维变细,软弱无力,黏着斑增多;丝状伪足形成增加;皱褶缘和板状伪足无明显变化。Transwell迁移实验显示,A375-EGFP组和A375-RhoD组平均每200倍视野下穿膜细胞数分别为152.67±11.23和72.67±5.03,两组间差异有统计学意义(t =11.25,P 〈0.05)。Transwell人工基底膜侵袭试验显示,A375-EGFP组和A375-RhoD组平均每200倍视野下穿膜细胞数分别为78.33±12.34和9.00±1,两组间差异有统计学意义(t=9.70,P〈0.05)。A375-EGFP和A375-RhoD两组间G1期、S期和G2期细胞所占百分比差异均无统计学意义(P〉0.05)。Western印迹结果显示,A375-RhoD组细胞可在RhoD的刺激下激活下游信号效应分子Diaph2,促进其表达,而A375-EGFP组未能激活,两组间丝切蛋白和磷酸化丝切蛋白表达差异不显著。结论 RhoD过表达可能通过下游效应分子Diaph2调节细胞骨架进而抑制A375细胞的迁移和侵袭能力。 展开更多
关键词 黑色素瘤 实验性 GTP磷酸水解酶类 细胞骨架 细胞迁移分析 A375细胞 rhod
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基于修正A值法的西安市大气环境容量与剩余容量估算 被引量:24
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作者 李文慧 陈洁 +1 位作者 王繁强 毛明策 《安全与环境工程》 CAS 北大核心 2013年第4期71-75,共5页
以箱模型为基本模型,利用陕西省气象台1961—2008年的气象资料,推导出了大气环境容量宏观总量控制修正A值法,并基于修正A值法估算了西安市各区县大气环境容量,新的国家剩余容量。结果表明:西安市除临潼区A值大于国标A值外,其余各区县A... 以箱模型为基本模型,利用陕西省气象台1961—2008年的气象资料,推导出了大气环境容量宏观总量控制修正A值法,并基于修正A值法估算了西安市各区县大气环境容量,新的国家剩余容量。结果表明:西安市除临潼区A值大于国标A值外,其余各区县A值小于国标A值;在新的国家《空气质量标准》的要求下,西安市SO2、NOx、PM10的环境容量值分别为9.552×104 t/a、6.652×104 t/a、9.546×104 t/a;根据全国第一次污染源普查2010年数据库,计算了西安市各区县SO2和NOx理想容量与中低架源排放量的差值及西安市大气中SO2和NOx的剩余容量,碑林区和莲湖区应注意改善中、低架源SO2的排放;新城区、碑林区、莲湖区、雁塔区、阎良区和高陵县应注意改善中、低架源NOx的排放;西安市SO2和NOx没有剩余容量,总体排放量超过环境容量的值分别为2.279×104 t/a和2.336×104 t/a,因此应对SO2和NOx的排放进行总量控制。该研究可为西安市大气污染物排放的总量控制提供科学依据。 展开更多
关键词 大气环境容量 剩余容量 箱模型 修正A值法 西安市
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紫色非硫细菌质粒的制备与性质 被引量:4
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作者 吴大庆 钱新民 孙克非 《生物技术》 CAS CSCD 1998年第5期13-15,18,共4页
介绍一种适于紫色非硫细菌质粒的制各方法,该法简单,易操作,质粒DNA纯度好,收率高,通过在加富培养基上连续传代数次,质粒DNA可自行消除。
关键词 紫色非硫细菌 细菌 质粒制备 质粒消除
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Gateway技术构建人RhoD慢病毒表达载体及转染人黑素瘤A375细胞株 被引量:1
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作者 温斯健 倪娜娜 +5 位作者 周晓伟 吴琼 王小坡 宋昊 张韡 孙建方 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期998-1002,共5页
目的构建人RhoD基因的慢病毒载体并进行慢病毒包装和鉴定,转染人黑素瘤细胞A375,使其过表达RhoD蛋白,为后续研究RhoD在黑素瘤中的作用奠定基础。方法Gateway技术构建携带增强型绿色荧光蛋白EGFP的RhoD慢病毒载体,经PCR及基因测序鉴... 目的构建人RhoD基因的慢病毒载体并进行慢病毒包装和鉴定,转染人黑素瘤细胞A375,使其过表达RhoD蛋白,为后续研究RhoD在黑素瘤中的作用奠定基础。方法Gateway技术构建携带增强型绿色荧光蛋白EGFP的RhoD慢病毒载体,经PCR及基因测序鉴定后,与辅助质粒pLV/helper-SL3,pLV/helper—SIA及pLV/helper—SL5混合采用脂质体法制备DNA-Lipofectamine2000复合物,并共同转染293FT细胞进行慢病毒包装,产生相应慢病毒颗粒,通过定量PCR方法测定病毒滴度。包装好的慢病毒转染人黑素瘤A375细胞,荧光显微镜下观察荧光表达情况,流式细胞仪检测转染效率;实验分为A375(未处理对照组)、A375-EGFP(不含目的基因的空病毒对照组)和A375-RhoD(含RhoD基因的病毒组)三组,采用实时荧光定量PCR(QPCR)及免疫印记法(western blotting,WB)验证耽扣在A375-RhoD组细胞中的过表达。结果通过PCR、基因测序证实,慢病毒表达载体pLV[Exp]-EGFP/Neo—CMV〉hRhoD构建成功。与辅助质粒共转染293FT细胞包装出具高效感染力的慢病毒,经测定病毒滴度为(5.13±2)×10^8TU/mL。转染A375细胞后可见明显的绿色荧光表达,流式检测转染效率大于80%;A375-RhoD组RhoDmRNA及蛋白水平均较A375-EGFP组和A375组细胞中明显增高。结论成功构建RhoD慢病毒表达载体,包装出具高效感染力的慢病毒颗粒并成功转染人黑素瘤A375细胞,为进一步研究RhoD在黑素瘤中的作用提供实验基础。 展开更多
关键词 rhod基因 慢病毒 载体 GATEWAY技术 过表达 A375
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甲醛诱导球形红假单胞菌絮凝性能 被引量:2
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作者 程树培 葛岚 +2 位作者 王玉水 邓良伟 崔益斌 《南京大学学报(自然科学版)》 CSCD 1995年第3期415-423,共9页
光合细菌球形红假单胞菌经甲醛(FA)诱变获得高絮凝菌株的最佳反应组合条件是15mM的FA、35℃的反应温度,5min反应时间和pH为7的反应液。经初、复筛后获得高絮凝性能理想菌株P9479,其100min自然絮凝沉降... 光合细菌球形红假单胞菌经甲醛(FA)诱变获得高絮凝菌株的最佳反应组合条件是15mM的FA、35℃的反应温度,5min反应时间和pH为7的反应液。经初、复筛后获得高絮凝性能理想菌株P9479,其100min自然絮凝沉降效率是出发菌株的2.34倍。聚合硫酸铁絮凝P9479与出发菌株P9100的最佳浓度分别为0.77‰和2.4‰根据测定的E~t曲线,在絮凝30min的同等条件下,P9479在人工废水中菌液絮凝效率达90%,比出发菌株高出17%,而聚合硫酸铁的用量比出发菌株低68%。在CODcr为8720mg/L味精度水中絮凝P9479的最佳聚铁浓度为2‰,絮凝30min的效率达80%,而出发菌株P9100的聚合硫酸铁最佳浓度为4‰,效率仅为50%。在同等絮凝效果的前提下P9479比P9100节约聚合梳酸铁69%。 展开更多
关键词 甲醛 球形红假单胞菌 絮凝 废水处理 环境微生物
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抑制荧光法测定痕量硫酸特布他林 被引量:1
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作者 张丽红 《漳州师范学院学报(自然科学版)》 2009年第4期70-74,共5页
基于在pH=3.50的邻苯二甲酸氢钾-HCl缓冲溶液中罗丹明6G(Rhod.6G)可发射强而稳定的荧光,NaIO4能氧化Rhod.6G使荧光信号猝灭,硫酸特布他林(Terbutaline Sulfate,TBS)能抑制NaIO4的氧化反应使Rhod.6G的荧光信号增强,且TBS的含量与△F值呈... 基于在pH=3.50的邻苯二甲酸氢钾-HCl缓冲溶液中罗丹明6G(Rhod.6G)可发射强而稳定的荧光,NaIO4能氧化Rhod.6G使荧光信号猝灭,硫酸特布他林(Terbutaline Sulfate,TBS)能抑制NaIO4的氧化反应使Rhod.6G的荧光信号增强,且TBS的含量与△F值呈线性关系,据此建立了NaIO4氧化罗丹明6G荧光法测定痕量TBS的新方法.该法的线性范围为0.026-5.2(ngmL-1),线性回归方程为△F=3.515+24.95C1TBS(ngmL-1),n=6,相关系数r=0.9991,检出限为5.8×10-12gmL-1,灵敏度高.本方法已成功用于实际样品中TBS1121含量的测定.同时探讨了抑制荧光法测定痕量TBS的反应机理. 展开更多
关键词 硫酸特布他林 罗丹明6G 抑制荧光法
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DETECTION OF Ca^(2+)-DEPENDENT NEURONAL ACTIVITY SIMULTANEOUSLY WITH DYNAMIC CHANGES IN CEREBRAL BLOOD VOLUME AND TISSUE OXYGENATION FROM THE LIVE RAT BRAIN
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作者 CONGWU DU ZHONGCHI LUO +4 位作者 MEI YU HELENE BENVENISTE MELISSA TULLY RUBING PAN BRITTON CHANCE 《Journal of Innovative Optical Health Sciences》 SCIE EI CAS 2009年第2期189-200,共12页
We present a catheter-based optical diffusion and fluorescence(ODF)probe to study the functional changes of the brain in vivo.This ODF probe enables the simultaneous detection ofthe multi-wavelength absorbance and fl... We present a catheter-based optical diffusion and fluorescence(ODF)probe to study the functional changes of the brain in vivo.This ODF probe enables the simultaneous detection ofthe multi-wavelength absorbance and fluorescence emission from the living rat brain.Our previous studies,including a transient stroke experiment of the rat brain as well as the brainresponse to cocaine,have established the feasibility of simultaneously determining changes incerebral blood volume(CBV),tissue oxygenation(StO2)and intracellular calcium([Ca^(2+)]i,using the fluorescence indicator Rhod2).Here,we present our preliminary results of somatosensory response to electrical forepaw stimulation obtained from the rat cortical brain by using theODF probe,which indicate that the probe could track brain activation by directly detecting[Ca^(2+)]i along with separately distinguishing CBV and StO2 in real time.The changes of CBV,StO2 and[Ca^(2+)]i are comparable with the blood-oxygen-level-dependent(BOLD)response tothe stimulation obtained using functional magnetic resonance imaging(fMRI).However,thehigh temporal resolution of the optical methodology is advanced,thus providing a new modalityfor brain functional studies to understand the hemodynamic changes that underlie the neuronalactivity. 展开更多
关键词 Optical spectroscopy calcium fluorescence rhod2 labeling brain ischemia and cocaine addiction forepaw stimulation.
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分光光度法测定硝酸镓注射液中硝酸镓含量
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作者 周伯庭 徐平声 +2 位作者 李新中 龚尧峰 沈德利 《中南药学》 CAS 2005年第1期30-31,共2页
目的用分光光度法测定硝酸镓注射液主药硝酸镓的含量,为建立硝酸镓注射液的质量标准做准备.方法用甲苯-甲基异丁基酮(MIBK)(6:3.5)从盐酸溶液中萃取镓离子缔合络合物,在557.0 nm测定其吸光度以计算硝酸镓的含量.结果该方法线性范围为0.4... 目的用分光光度法测定硝酸镓注射液主药硝酸镓的含量,为建立硝酸镓注射液的质量标准做准备.方法用甲苯-甲基异丁基酮(MIBK)(6:3.5)从盐酸溶液中萃取镓离子缔合络合物,在557.0 nm测定其吸光度以计算硝酸镓的含量.结果该方法线性范围为0.4~2.0μg·mL-1(r=0.9999),回收率100.05%;RSD=1.2%(n=5),稳定性强,吸光度3 h无明显变化.结论分光光度法可以作为硝酸镓注射液的含量测定方法. 展开更多
关键词 注射液 含量测定方法 分光光度法 主药 RSD 准备 吸光度 硝酸 MIBK 离子缔合
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POWER OF DUAL-WAVELENGTH APPROACHES IN STUDYING PHYSIOLOGICAL AND FUNCTIONAL CHANGES OF INTACT HEART AND IN VIVO BRAIN
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作者 ZHONGCHI LUO CONGWU DU 《Journal of Innovative Optical Health Sciences》 SCIE EI CAS 2011年第3期261-268,共8页
Since the dual-wavelength spectrophotometer was developed,it has been widely used for studying biological samples and applied to extensive investigations of the electron transport in respiration and redox cofactors,re... Since the dual-wavelength spectrophotometer was developed,it has been widely used for studying biological samples and applied to extensive investigations of the electron transport in respiration and redox cofactors,redox state,metabolic control,and the generation of reactive oxygen species in mitochondria.Here,we discuss some extension of dual-wavelength approaches in our research to study the physiological and functional changes in intact hearts and in vivo brain.Specifically,we aimed at(1)making nonratiometricfluorescent indicator become ratiometricfluorescence function for investigation of Ca^(2+) dynamics in live tissue;(2)eliminating the effects of physiological changes on measurement of intracellular calcium;(3)permitting simultaneous imaging of multiple physiological parameters.The animal models of the perfused heart and transiently ischemic insult of brain are used to validate these approaches for physiological applications. 展开更多
关键词 DUAL-WAVELENGTH optical spectroscope and biomedical imaging HEART BRAIN rhod2 fluorescence
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催化过氧化氢氧化罗丹明B-四苯硼化钠荧光猝灭法测定痕量钼
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作者 刘佳铭 黄丽钗 +1 位作者 陈芳 林彬彬 《漳州师范学院学报(自然科学版)》 2008年第3期60-63,共4页
基于HCl介质和90℃加热10min的条件下,罗丹明B(Rhod.B)与四苯硼化钠(NaB(C6H6)4)作用生成的[Rhod.B]+.[B(C6H6)4]-离子缔合物能发射强而稳定的荧光,[Rhod.B]+.[B(C6H6)4]被H2O2氧化而发生荧光猝灭,Mo(VI)能催化H2O2氧化[Rhod.B]+.[B(C6H... 基于HCl介质和90℃加热10min的条件下,罗丹明B(Rhod.B)与四苯硼化钠(NaB(C6H6)4)作用生成的[Rhod.B]+.[B(C6H6)4]-离子缔合物能发射强而稳定的荧光,[Rhod.B]+.[B(C6H6)4]被H2O2氧化而发生荧光猝灭,Mo(VI)能催化H2O2氧化[Rhod.B]+.[B(C6H6)4]的反应,导致其荧光剧烈猝灭,且△F与Mo(VI)含量呈线性关系,据此建立了催化H2O2氧化[Rhod.B]+.[B(C6H6)4]离子缔合物荧光法测定痕量钼的新方法.本法的线性范围为4.00~400(pg/L),工作曲线的回归方程为△F=67.27.+0.3243 CMo(VI)(pg/L),n=6,相关系数r=0.9981,检出限(LD)为0.92pg/L.用于实际样品中痕量Mo(VI)的测定,结果满意.同时探讨了离子缔合物荧光法定痕量钼的反应机理. 展开更多
关键词 MO(VI) 罗丹明B-四苯硼化钠离子缔合物 催化荧光法
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