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PCR-RSSO基础上HLA-Ⅰ、Ⅱ基因分型的研究 被引量：8
1
作者 肖露露 郝桂琴 +3 位作者 叶欣 陈洪涛 谭茵 张升 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第1期58-61,共4页
目的：通过对PCR－DNA技术的分析，探讨人类白细胞抗原（HLA）基因分型方法。方法：采用PCR反向序列特异性寡核苷酸（polymerase chain reaction-reverse sequence specific oligonucleotide,PCR-RSSO)杂交技术，建立改良半量扩增体系... 目的：通过对PCR－DNA技术的分析，探讨人类白细胞抗原（HLA）基因分型方法。方法：采用PCR反向序列特异性寡核苷酸（polymerase chain reaction-reverse sequence specific oligonucleotide,PCR-RSSO)杂交技术，建立改良半量扩增体系全自动HLA－I、Ⅱ等位基因分型方法，进行了635份血液标本HLA－A、B、C、DR、DQ等位基因分型，其中166份DNA同时采用序列特异性引物技术（PCR－SSP）和手工全量扩增体系PCR－RSSO技术。对全自动半量PCR－RSSO、PCR－SSP、手工PCR－RSSO 3种方法做两两比较。结果；全自动半量PCR－RSSO的分型成功率为98．4％（3124／3175），PCR－SSP为98．8％（656／664），手工PCR－RSSO为88．3％（733／830）。经χ^2检验，全自动半量PCR－RSSO与PCR－SSP的分型成功率无统计学差异，与手工PCR－RSSO有显著差异（P＜0．05）。结论：PCR－RSSO可识别HLA－I、Ⅱ共706个等位基因，覆盖WHO命名委员会2000年公布的36个等位基因的75．43％；对706个HLA等位基因的分型均为中－高分辨率，有分辨纯合子等位基因的能力；易长期保存书面的实验原始资料，即杂交条；具有成本低、劳动强度低、省时和DNA消耗量少等优点。PCR－RSSO适合于造血干细胞移植和建立造血干细胞及脐带血干细胞库的组织配型。 展开更多
关键词 HLA抗原 聚合酶链反应 等位基因 序列分析 DNA 反向杂交 序列特异性寡核苷酸
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大仓鼠DNA指纹谱探针的筛选 被引量：2
2
作者 宋铭晶 徐来祥 张知彬 《兽类学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期287-292,共6页
采用一种简便提取高质量DNA的方法,从大仓鼠肝脏组织中提取其总DNA,分别以人工合成的微卫星核心序列(GTG)5和(CA)8做单一引物,进行特异引物PCR反应。电泳检测后回收15条特异性片段。与被标记过的大仓鼠基因组DNA反向杂交结果表明,15个... 采用一种简便提取高质量DNA的方法,从大仓鼠肝脏组织中提取其总DNA,分别以人工合成的微卫星核心序列(GTG)5和(CA)8做单一引物,进行特异引物PCR反应。电泳检测后回收15条特异性片段。与被标记过的大仓鼠基因组DNA反向杂交结果表明,15个片段中(GTG)5-8、(CA)8-1b和(CA)8-5b产生了较强的阳性信号。我们依据3个片段的测序结果设计适合DIG标记的探针,该探针得到的大仓鼠不同地理种群个体的指纹图谱有较高的个体特异性和种群多态性,而且与传统的来源于其它生物重复序列的探针如33.6和33.15形成的指纹图谱相比得到的变异适中,便于统计。 展开更多
关键词 大仓鼠 DNA指纹谱 探针 微卫星 反向杂交
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国有资本参股会影响民营企业的内部控制质量吗?——基于“反向混改”的效用分析 被引量：4
3
作者 余怒涛 池怡麟 王佳妮 《科学决策》 CSSCI 2023年第12期19-36,共18页
混合所有制改革是进一步巩固和完善社会主义基本经济制度的重要举措,在推动经营机制转换、优化市场资源配置、提升企业运营效率等方面取得了显著成效。但是现有关于混合所有制改革经济后果的研究多集中在“正向混改”领域,而“反向混改... 混合所有制改革是进一步巩固和完善社会主义基本经济制度的重要举措,在推动经营机制转换、优化市场资源配置、提升企业运营效率等方面取得了显著成效。但是现有关于混合所有制改革经济后果的研究多集中在“正向混改”领域,而“反向混改”领域的研究相对较少,且对于民营企业内部治理机制缺乏深入系统的分析。为此,文章以2003-2021年A股上市公司为样本,研究国有资本的加入对民营企业内部控制质量产生的影响。研究发现:首先,国有资本参股能够通过提高民营企业的治理水平、增加媒体关注度、缓解民营企业的融资约束从而显著提升民营企业的内部控制质量。其次,进一步分析表明,国有资本参股的积极作用在有政治关联的企业和非家族企业更为显著;同时对于国资主体而言,其正面作用在地方国有企业及内部控制质量高的国有企业中更为明显。最后,本文发现,国有企业参股在内部控制战略、经营、报告、合规等层面均发挥一定积极作用,从而促进了民营企业内部控制整体质量提升。文章的发现丰富了“反向混改”经济后果以及企业内部控制质量影响因素的相关文献,为深化混合所有制改革提供了新的理论支撑和经验证据。 展开更多
关键词 混合所有制改革 “反向混改” 内部控制 公司治理
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用核糖体RNAITS区序列寡核苷酸探针鉴定临床常见真菌
4
作者 黄媛 陈建魁 +1 位作者 谢湘峰 尹秀云 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2004年第5期461-463,共3页
目的 :建立一种快速鉴定临床常见真菌菌种的方法。方法 :选取真菌核糖体RNA的ITS区为靶基因 ,设计通用引物和种特异性探针 ,将 3个属的 6种临床常见真菌 (白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、新型隐球菌、烟曲霉和黄曲霉 )的种特异性... 目的 :建立一种快速鉴定临床常见真菌菌种的方法。方法 :选取真菌核糖体RNA的ITS区为靶基因 ,设计通用引物和种特异性探针 ,将 3个属的 6种临床常见真菌 (白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、新型隐球菌、烟曲霉和黄曲霉 )的种特异性探针加尾后固定于硝酸纤维素膜上 ;用标记生物素的真菌通用引物扩增 11种医学真菌DNA ,产物与固定在膜上的探针杂交。结果 :通用引物可以扩增所试 11种医学重要真菌的DNA ,扩增片段长度约为 5 6 0bp。 6种真菌扩增产物只与其对应的探针杂交。结论 :此方法快速、简便、特异 ,适合常规实验室开展。 展开更多
关键词 医学真菌 ITS区 聚合酶链反应 反向杂交 DNA 核糖体 寡核苷酸探针
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反向杂交检测乙型肝炎病毒耐药突变方法的优化及其初步评估 被引量：1
5
作者 刘彦辰 黄爱龙 +3 位作者 胡源 胡接力 赖国旗 张文露 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期884-889,共6页
目的建立一种HBV耐药突变的反向杂交检测方法，并对该方法进行优化和评估。方法针对拉米夫定、阿德福韦酯和恩替卡韦3种药物10个耐药位点的常见耐药突变形式，合成兼顾HBV8种基因型的26条简并探针，并固定于同一张带正电荷的尼龙膜上，... 目的建立一种HBV耐药突变的反向杂交检测方法，并对该方法进行优化和评估。方法针对拉米夫定、阿德福韦酯和恩替卡韦3种药物10个耐药位点的常见耐药突变形式，合成兼顾HBV8种基因型的26条简并探针，并固定于同一张带正电荷的尼龙膜上，与地高辛标记的待测样本聚合酶链反应（PCR）产物进行杂交。为了提高检测灵敏度和特异性，从PeR产物标记地高辛的数目，紫外交联探针的能量强度，以及杂交和严格洗脱4个方面进行优化。为了证实方法的可行性，从检测特异性、灵敏度和临床标本的检测准确性3个方面进行评估。结果当检测体系为引物标记3个地高辛分子，紫外交联的能量强度选择1500×0．1mJ／cm2，杂交温度选择42℃，严格洗脱条件选择44℃，用0．5×SSC和0．1％十二烷基硫酸钠严格洗脱30min时，可获得灵敏、特异的结果。在该检测体系的评估中，当PCR产量在10mg／L以上，可以被检测到，且绝大多数探针特异性较好。临床标本的检测结果与直接测序法的检测结果符合率为93．9％（31／33）。结论该方法可以对HBV拉米夫定、阿德福韦和恩替卡韦耐药突变同时进行检测，是一种简便、快速、灵敏的分析方法，但部分探针的特异性有待进一步提高。对于180／181、202／204这4个位点的探针，由于两两距离较近，同一探针序列包含2个位点的密码子，杂交会相互干扰，通过组合距离较近的2个位点的密码子的各种形式来设计探针，可能有助于取得更好的结果。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 寡核苷酸序列分析 核苷(酸)类似物 耐药 反向杂交
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反向杂交检测肝癌相关乙型肝炎病毒前C区突变方法的建立和应用 被引量：1
6
作者 赵芝梅 朱宇 +4 位作者 吴燕 樊春笋 陈陶阳 甘愉 屠红 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期266-272,共7页
背景与目的：日益增多的研究表明，乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）DNA前C区G1896A和G1899A突变是肝癌发生的危险因素。本研究旨在建立简单、快速、灵敏和准确的检测HBV前C区突变的反向杂交方法，并应用于检测江苏省启东地区HBV... 背景与目的：日益增多的研究表明，乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）DNA前C区G1896A和G1899A突变是肝癌发生的危险因素。本研究旨在建立简单、快速、灵敏和准确的检测HBV前C区突变的反向杂交方法，并应用于检测江苏省启东地区HBV DNA前C区突变与肝癌发生的关系。方法：设计并合成HBV DNA前C区1896和1899位点的特异性探针，通过优化条件建立特异、敏感的杂交体系，并与直接测序检测结果进行比较。将该方法应用于检测启东100例肝癌和100例慢性HBV携带者（对照组），分析HBV DNA前C区突变与肝癌的关系。结果：反向杂交对血清样本的最低检测下限为HBV DNA 103 copy/mL，检测混合感染时比直接测序更占优势，混合株中10％以上的突变株均可被检测。启东地区HBV DNA前C区G1899A突变与肝癌高发具有相关性（P=0.000, OR=4.846, 95%CI：2.240～10.485），而G1896A突变未见其相关性。结论：反向杂交检测HBV DNA前C区突变方便、快速、准确，可有效监控肝癌的发生，适合临床大规模推广应用。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 前C区 反向杂交 突变 肝癌
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应用肽核酸反向杂交技术检测HBV阿德福韦耐药突变株 被引量：1
7
作者 单雪峰 谢素兰 +1 位作者 黄爱龙 胡源 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期943-946,共4页
目的:建立一种肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)反向杂交技术,用于检测乙肝病毒阿德福韦酯(adefovir dipivoxil,ADV)常见耐药突变位点。方法:利用反向杂交技术,设计出特异性的PNA探针,与PCR扩增后带有生物素标记的样本进行杂交;通过对... 目的:建立一种肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)反向杂交技术,用于检测乙肝病毒阿德福韦酯(adefovir dipivoxil,ADV)常见耐药突变位点。方法:利用反向杂交技术,设计出特异性的PNA探针,与PCR扩增后带有生物素标记的样本进行杂交;通过对探针浓度,杂交温度和时间等条件的优化建立起最佳反应条件。应用该技术检测了临床ADV治疗慢性乙肝患者的72例血清样本,与测序法比较了其检测的准确性。结果:(1)通过共价结合能够将PNA探针固定在尼龙膜上,特异性检测ADV常见耐药突变位点。(2)与直接测序法相比,PNA反向杂交技术检测准确性为97.88%。结论:通过优化杂交反应,建立起快速、灵敏的检测乙肝病毒ADV常见耐药突变位点的PNA反向杂交技术。 展开更多
关键词 肽核酸 反向杂交 乙型肝炎病毒 阿德福韦酯
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多等位基因PCR-SSO反相杂交法及其在HLA-DR_4亚型结构分析中的应用
8
作者 失迺硕 王亚新 陈诗书 《生物化学杂志》 CSCD 1993年第3期299-303,共5页
本文介绍一种适合于多等位基因定型和结构分析的反相顺序特异性寡核苷酸探针杂交方法。将化学合成的多种探针分别经脱氧核苷末端转移酶(TdT)催化,于3′端加上100个以上碱基的Poly(dT)尾,然后将各探针分别以斑点固定于同一张尼龙膜上。用... 本文介绍一种适合于多等位基因定型和结构分析的反相顺序特异性寡核苷酸探针杂交方法。将化学合成的多种探针分别经脱氧核苷末端转移酶(TdT)催化,于3′端加上100个以上碱基的Poly(dT)尾,然后将各探针分别以斑点固定于同一张尼龙膜上。用PCR法对该基因位点进行扩增,扩增的同时加入α-^(32)P-dCTP以直接参入放射标记,然后将PCR产物与膜固定探针杂交,以四甲基氯化铵根据探针长度统一洗涤温度。该方法克服了以往对同一份样品进行多个等位基因检测时需要进行多次探针标记和杂交的缺点。我们用该方法对中国人群MHC-Ⅱ类DR4多等位基因进行了研究。 展开更多
关键词 反相杂交法 多等位基因 检测
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聚合酶链反应-反向杂交快速检测巨细胞病毒糖蛋白gB、gH基因型变异
9
作者 周琳 钱景 +5 位作者 蔡挺 马伟杭 郑树森 U.Ullmann P.Rautenburg T.C.Harder 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期456-460,共5页
目的　建立一种简便、快速、敏感和特异的检测巨细胞病毒 (HCMV)糖蛋白gB、gH基因型变异的方法。方法　以HCMV糖蛋白基因gH、gBn、gBclv为靶序列 ,设计 17条具有型特异性的寡核苷酸探针 ,聚合酶链反应 (PCR)扩增目的片段 ,反向杂交检测 ... 目的　建立一种简便、快速、敏感和特异的检测巨细胞病毒 (HCMV)糖蛋白gB、gH基因型变异的方法。方法　以HCMV糖蛋白基因gH、gBn、gBclv为靶序列 ,设计 17条具有型特异性的寡核苷酸探针 ,聚合酶链反应 (PCR)扩增目的片段 ,反向杂交检测 2 3例中国和 6例德国移植患者HCMVgH、gBn、gBclv基因型变异 ,其结果与直接测序进行比较。结果　 2 3例中国患者HCMV糖蛋白为gH1和 2型 ,gB1、2和 3型 ,未见gB4型 ;而 6例德国患者的HCMV糖蛋白涵盖gH1和 2型 ,gB1、2、3及 4型。中、德两国患者均可同时感染 2种不同基因型的病毒株。反向杂交技术对检测患者同时感染不同基因型病毒株优于直接测序。结论　PCR 反向杂交技术具有简便、快速、敏感和特异的特点 ,适用于临床实验室检测HCMV糖蛋白基因型变异。 展开更多
关键词 糖蛋白 基因型变异 人类巨细胞病毒 聚合酶链反应 反向杂交 GB基因 GH基因 免疫学检测
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16SrRNA基因PCR加反相杂交检测细菌DNA方法的建立与初步应用 被引量：13
10
作者 俞惠民 尚世强 +3 位作者 洪文澜 孙眉月 滕懿群 金益人 《中国实用儿科杂志》 CSCD 北大核心 2000年第2期97-99,共3页
目的　探讨聚合酶链反应 (PCR)加反相杂交技术在细菌DNA检测中的应用。方法　以 16SrRNA基因为靶序列 ,设计引物及寡核苷酸探针 ,采用PCR法加反相杂交检测标准菌株及临床标本细菌NDA。结果　对 2 0种标准菌株进行PCR扩增 ,均出现 371bp... 目的　探讨聚合酶链反应 (PCR)加反相杂交技术在细菌DNA检测中的应用。方法　以 16SrRNA基因为靶序列 ,设计引物及寡核苷酸探针 ,采用PCR法加反相杂交检测标准菌株及临床标本细菌NDA。结果　对 2 0种标准菌株进行PCR扩增 ,均出现 371bp长度的DNA片段 ,敏感性试验可检测出 1× 10 -12 g的细菌DNA ,与人基因组及病毒无交叉反应 ;2 2份血培养阳性标本及 4份脑脊液培养阳性标本均扩增出 371bp长度DNA条带 ,反相杂交区分革兰阳性或阴性细菌与培养结果相符。结论　 16SrRNA基因PCR加反相杂交技术检则细菌DNA ,具有特异、敏感、快速、准确的特点 。 展开更多
关键词 细菌 聚合酶链反应 反相杂交 DNA 16SrRNA
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外阴白斑组织中人乳头瘤病毒的快速检测与基因分型 被引量：6
11
作者 沈柱 余春艳 崔大祥 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第24期2269-2273,共5页
目的　为探讨人乳头瘤病毒 (HPV)与外阴白斑发生的关系 ,应用通用引物聚合酶链式反应和反向点探针杂交方法对 5 8例外阴白斑进行 HPV6 ,1 1 ,1 6 ,1 8,3 1 ,3 3等型别进行快速检测及基因分型 .方法　将上述 6个病毒型别的特异性寡核苷... 目的　为探讨人乳头瘤病毒 (HPV)与外阴白斑发生的关系 ,应用通用引物聚合酶链式反应和反向点探针杂交方法对 5 8例外阴白斑进行 HPV6 ,1 1 ,1 6 ,1 8,3 1 ,3 3等型别进行快速检测及基因分型 .方法　将上述 6个病毒型别的特异性寡核苷酸探针依次固定在尼龙膜上 ,再与经通用引物 PCR扩增的 DNA靶序列杂交 ,即可在同一张膜上分辨出 6型 HPVDNA的任一型或几型 .结果　在我们检测的 5 8例外阴白斑患者中 ,总阳性检出率为 3 7.9% (2 2 /5 8) .其中 ,HPV6型 7例 (3 1 .8% )、HPV1 1型 5例 (2 2 .7% )、HPV6 /1 1型 (混合型 ) 2例 (9.1 % )、HPV1 6型 1 0例 (45 .5 % )、HPV1 8型 1例(4.5 % )、HPV3 1型 0例、HPV3 3型 1例 (4.5 % ) .经统计学分析 ,外阴白斑的发生与患者感染 HPV有显著相关性 (P<0 .0 1 ) .结论　良性型 HPV(HPV6 ,1 1 ,6 /1 1 )与恶性型 HPV(HPV1 6 ,1 8,3 3 ) 展开更多
关键词 乳头状瘤病毒 外阴白斑 基因分型
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生殖器溃疡中单纯疱疹病毒的检测和分型 被引量：9
12
作者 赖伟红 冯莲凤 +2 位作者 韩国柱 钟铭英 叶顺章 《中国麻风皮肤病杂志》 北大核心 2003年第1期4-5,共2页
目的 :　了解性病门诊生殖器溃疡患者中单纯疱疹病毒 (HSV)感染情况 ,并评价聚合酶链反应 (PCR) 微孔板反向杂交检测和分型方法在生殖器疱疹诊断中的意义。方法 :　采用病毒分离培养、普通PCR和PCR 微孔板反向杂交法同时对 2 0 0份生... 目的 :　了解性病门诊生殖器溃疡患者中单纯疱疹病毒 (HSV)感染情况 ,并评价聚合酶链反应 (PCR) 微孔板反向杂交检测和分型方法在生殖器疱疹诊断中的意义。方法 :　采用病毒分离培养、普通PCR和PCR 微孔板反向杂交法同时对 2 0 0份生殖器溃疡标本作了HSV检测与分型。结果 :　PCR 微孔板反向杂交法的敏感性和特异性分别为 98.1%和 95 .9% ,PCR 微孔板杂交法分型结果与病毒分离培养法和普遍PCR的分型结果完全相符。生殖器溃疡中HSV检出率为 3 0 % (60 / 2 0 0 ) ,其中HSV 2感染占 96.7% (5 8/ 60 )。结论 :　HSV 2是性病门诊患者生殖器溃疡的主要病因之一 ,PCR 微孔板反向杂交法是一种适用生殖器溃疡标本中HSV的检测与分型的快速。 展开更多
关键词 生殖器溃疡 单纯疱疹病毒 检测 聚合酶链反应 微孔板反向杂交 分型
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反向杂交法检测乙型肝炎病毒3种核苷（酸）类似物耐药突变 被引量：9
13
作者 刘彦辰 张文露 +5 位作者 胡源 赵丽 赖国旗 胡接力 杨凤 黄爱龙 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期414-418,共5页
目的 建立一种同时检测HBV 3种核苷（酸）类似物耐药突变的方法.方法 以基因库公布的981条HBV基因序列为基础,设计2对地高辛标记的通用引物,扩增HBV聚合酶的逆转录区.针对拉米夫定、阿德福韦和恩替卡韦10个耐药位点上的氨基酸替换形式,... 目的 建立一种同时检测HBV 3种核苷（酸）类似物耐药突变的方法.方法 以基因库公布的981条HBV基因序列为基础,设计2对地高辛标记的通用引物,扩增HBV聚合酶的逆转录区.针对拉米夫定、阿德福韦和恩替卡韦10个耐药位点上的氨基酸替换形式,设计26条特异性寡核苷酸探针,包括I169T,V173L/G,L180M,A181T/V,T184G,S202I/G,M204V/I,Q215S,N236T,M250V/I/L,并固定于带正电荷的尼龙膜上.利用地高辛标记的靶DNA扩增产物与固定于膜上的特异性探针的反向杂交,检测HBV 3种核苷（酸）类似物的耐药突变.应用反向杂交法分别检测HBV野生和耐药标准株,以及40例患者血清标本,观察其检测特异性和准确性.结果 反向杂交法检测HBV野生和耐药标准株,有效地区分了1169T,V173L,L180M,A1811T,T184G,S202I,M204V,Q215S,N236T,M250V 10个耐药位点上的特异性探针.40例患者血清标本中,37例临床病例的耐药检测结果 与直接测序法一致.结论 反向杂交法可以快速,准确的检测出HBV3种核苷类似物耐药突变,有助于这3种药物耐药的诊断和个体化治疗. 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 抗药性 自然 核苷(酸)类 反向杂交
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基于人因可靠性的核电厂数字化人机界面功能布局优化方法研究 被引量：8
14
作者 蒋建军 张力 +4 位作者 王以群 彭玉元 陈文 青涛 李鹏程 《原子能科学技术》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1666-1672,共7页
监视信息过程中,人的可靠性很大程度上取决于数字化人机界面中功能块之间的布局。本文提出了基于人因可靠性的核电厂数字化人机界面功能布局优化方法,对该优化方法建立了一个完整的优化流程,提出了线性逆向杂交方法,使用人因可靠性作为... 监视信息过程中,人的可靠性很大程度上取决于数字化人机界面中功能块之间的布局。本文提出了基于人因可靠性的核电厂数字化人机界面功能布局优化方法,对该优化方法建立了一个完整的优化流程,提出了线性逆向杂交方法,使用人因可靠性作为优化标准。对该优化方法进行实验分析,实验结果表明,线性逆向杂交方法有较好的稳定性,本文提出的优化方法有较好的精确性及收敛性。 展开更多
关键词 数字化人机界面 人因可靠性 功能块 布局 线性逆向杂交方法
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南美白对虾4种病原体可视化快速检测试剂盒(生物芯片法)的研发 被引量：6
15
作者 宋居易 刘昱辰 +2 位作者 张苏楠 江高伟 杨华卫 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第3期656-665,共10页
利用反向点杂交技术,研制灵敏度较高的南美白对虾4种病原体检测试剂盒,其检测指标包括致对虾急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND)、对虾白斑综合征病毒(WSSV)、对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)、对虾肝肠胞虫(EHP),用重组质... 利用反向点杂交技术,研制灵敏度较高的南美白对虾4种病原体检测试剂盒,其检测指标包括致对虾急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND)、对虾白斑综合征病毒(WSSV)、对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)、对虾肝肠胞虫(EHP),用重组质粒分别对其进行了最低检测限测试,并与现有推荐方法进行比较。本研究研发的检测试剂盒对4种病原体的最低检测限为1μl 10~100拷贝。特异性检测结果表明,4种病原体彼此不产生交叉反应,特异性良好,与各病原体推荐检测方法的结果相比,阳性符合率完全一致。本研究研发的检测试剂盒具有操作方便,灵敏度高,特异性好,检测时间短,设备要求简单等特点,适合应用于南美白对虾VpAHPND、WSSV、IHHNV、EHP的检测、筛查工作中。 展开更多
关键词 南美白对虾 病原体 生物芯片法 反向点杂交技术
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妇科门诊妇女人乳头瘤病毒感染现状及基因亚型分布 被引量：5
16
作者 黄江渝 唐建 +1 位作者 杨淑哲 刘成桂 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第27期3614-3616,共3页
目的：了解妇科门诊妇女宫颈人乳头瘤病毒（HPV）感染现状及基因亚型分布。方法采用PCR体外扩增和DNA反向点杂交相结合的DNA芯片技术检测HPV感染的基因亚型。结果共检测5052份妇科门诊患者宫颈脱落细胞样本，HPV感染总阳性率为17．52％... 目的：了解妇科门诊妇女宫颈人乳头瘤病毒（HPV）感染现状及基因亚型分布。方法采用PCR体外扩增和DNA反向点杂交相结合的DNA芯片技术检测HPV感染的基因亚型。结果共检测5052份妇科门诊患者宫颈脱落细胞样本，HPV感染总阳性率为17．52％。各年龄组 H PV感染差异有统计学意义（ P＜0．01），其中20～25岁组的阳性率分别高于26～30岁组和31～35岁组，差异均有统计学意义（ P＜0．01，P＜0．05）；36～40岁组的阳性率高于26～30岁组，差异有统计学意义（ P＜0．05）。高危亚型 HPV基因的阳性检出率（18．1％）高于低危亚型（5．5％），差异有统计学意义（P＜0．01）。高危亚型中以HPV52亚型最多，占15．03％，其次是HPV16和 HPV58亚型；低危亚型以 HPV81亚型居多，占7．98％。结论妇科门诊妇女HPV感染阳性率较高，且以高危亚型居多；建议针对不同年龄群开展HPV基因亚型的常规检测。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒亚型检测 PCR-反向点杂交 DNA芯片技术 妇科门诊
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3053例就诊女性人乳头瘤病毒感染现状分析 被引量：2
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作者 刘兴态 杨怡 +1 位作者 金心 王晟 《实用检验医师杂志》 2023年第1期93-96,共4页
目的 通过回顾并调查分析宜昌地区不同年龄段就诊女性人乳头瘤病毒(HPV)的感染和流行情况,为防治HPV提供理论依据。方法 选择国药葛洲坝中心医院2021年1月—2022年6月收治的3 053例就诊女性作为研究对象,根据年龄分为6组,分别为21~30岁... 目的 通过回顾并调查分析宜昌地区不同年龄段就诊女性人乳头瘤病毒(HPV)的感染和流行情况,为防治HPV提供理论依据。方法 选择国药葛洲坝中心医院2021年1月—2022年6月收治的3 053例就诊女性作为研究对象,根据年龄分为6组,分别为21~30岁组(229例)、31~40岁组(568例)、41~50岁组(1 102例)、51~60岁组(871例)、61~70岁组(235例)、>70岁组(48例)。采用聚合酶链反应(PCR)-反向杂交法进行HPV基因分型检测,统计并分析不同年龄组女性的HPV感染情况。结果 3 053例受检者中共检出HPV阳性421例,阳性率为13.79%。其中单一亚型感染328例,占所有感染的77.91%(328/421);双重亚型感染70例,占所有感染的16.63%(70/421);多重亚型感染23例,占所有感染的5.46%(23/421)。对不同年龄组女性的HPV感染阳性率进行统计分析,结果显示差异均有统计学意义,其中21~30岁组和51~60岁组的阳性率分别为18.34%(42/229)、16.19%(141/871),明显高于其他各组,分别为31~40岁组12.32%(70/568)、41~50岁组12.43%(137/1 102)、61~70岁组10.64%(25/235)、>70岁组12.50%(6/48)。高危亚型HPV的阳性检出率为10.12%(309/3 053),其中最常见的感染型别为HPV52亚型,共74例,占比为13.58%(74/545);其次是HPV58亚型,共45例,占比为8.26%(45/545);HPV16亚型共33例,占比为6.06%(33/545)。低危亚型以HPV44亚型居多,共41例,占比为7.52%(41/545);其次为HPV42亚型,共34例,占比为6.24%(34/545)。疑似高危型以HPV53亚型最多,占比为8.26%(45/545)。结论 宜昌地区不同年龄段女性的HPV感染情况有所不同,以高危型感染和单一感染为主,宫颈癌防治策略应针对不同年龄人群开展HPV基因亚型常规检测。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 聚合酶链反应-反向杂交 亚型
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PCR反向膜杂交法在CT、UU、NG三种性病筛查中的应用价值 被引量：2
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作者 王涛 王鹏 董丽 《中国医学创新》 CAS 2014年第31期55-57,共3页
目的:探讨PCR反向膜杂交法在CT、UU、NG三种性病筛查中的应用价值。方法:对1486例疑为泌尿生殖道感染患者分别采用PCR反向膜杂交法及荧光定量PCR(FQ-PCR)检测,并将检测结果与培养结果比较。结果:FQ-PCR检测CT、UU、NG阳性率高于培养法,... 目的:探讨PCR反向膜杂交法在CT、UU、NG三种性病筛查中的应用价值。方法:对1486例疑为泌尿生殖道感染患者分别采用PCR反向膜杂交法及荧光定量PCR(FQ-PCR)检测,并将检测结果与培养结果比较。结果:FQ-PCR检测CT、UU、NG阳性率高于培养法,比较差异有统计学意义(P<0.01);PCR反向膜杂交法与培养法及FQ-PCR检测阳性率比较差异均无统计学意义;PCR反向膜杂交法、FQ-PCR检测敏感性比较差异无统计学意义,但PCR反向膜杂交法检测特异性高于FQ-PCR,比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:PCR反向膜杂交法筛查CT、UU、NG准确,快速,且筛查特异性高于FQ-PCR,值得临床推广适用。 展开更多
关键词 PCR反向膜杂交法 荧光定量PCR CT UU NG
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中国正常人及类风湿关节炎病人MHC－Ⅱ类DR＿4亚型基因核苷酸序列初步分析 被引量：2
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作者 朱乃硕 王亚新 陈诗书 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 1994年第2期92-97,共6页
对中国人群正常人及类风湿关节炎病人ＤＲ＿４亚型基因决定型别特异性的第二个外显子进行体外扩增、克隆及序列分析显示，６例正常人及３例类风湿关节炎病人存在三种ＤＲ＿４亚型（ＤＲＢｌ０４０２，ＤＲＢｌ０４０５，ＤＲＢｌ．０４... 对中国人群正常人及类风湿关节炎病人ＤＲ＿４亚型基因决定型别特异性的第二个外显子进行体外扩增、克隆及序列分析显示，６例正常人及３例类风湿关节炎病人存在三种ＤＲ＿４亚型（ＤＲＢｌ０４０２，ＤＲＢｌ０４０５，ＤＲＢｌ．０４０６），中国人这三种亚型第二个外显子核苷酸序列与白种人一致。序列分析结果为进一步应用常规ＰＣＲ－ＳＳＯ法及ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法进行中国人ＤＲ＿４基因定型提供了依据。此外，还将序列分析结果与ＰＣＲ－ＳＳＯ杂交分析结果进行了比较，具备较全面的覆盖各亚型多态性区域的探针可以减少等位基因同源性干扰。 展开更多
关键词 DR 基因 DNA 类风湿性 关节炎
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皮肤感染性肉芽肿常见病原菌微孔板反向杂交检测法的研究 被引量：1
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作者 闫桢桢 姜海琴 +5 位作者 孙建方 沈永年 崔盘根 刘伟军 王洪生 刘维达 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期633-636,共4页
目的 探讨微孔板反向分子杂交技术与PCR-ELISA相结合的＂拟芯片＂法检测和鉴定皮肤感染性肉芽肿常见病原菌的方法.方法 选取、设计真菌和分枝杆菌两对通用引物,及10种皮肤感染性肉芽肿常见的病原菌：结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、海鱼... 目的 探讨微孔板反向分子杂交技术与PCR-ELISA相结合的＂拟芯片＂法检测和鉴定皮肤感染性肉芽肿常见病原菌的方法.方法 选取、设计真菌和分枝杆菌两对通用引物,及10种皮肤感染性肉芽肿常见的病原菌：结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、海鱼分枝杆菌、偶遇分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、申克孢子丝菌、卡氏枝孢霉、裴氏着色真菌、F.Monophora、白念珠菌的特异性探针;采用标准株验证通用引物、特异性探针并检测＂拟芯片＂法的敏感性、特异性;对19株临床分离株进行检测和鉴定.结果 两对通用引物均可扩增出对应的菌种基因序列,PCR产物经测序分析与预期相符;＂拟芯片＂法检测阴性标本吸光度为0.041±0.02,公式计算得临界值为0.101,在此基础上测得其敏感性为1×10～1×102个菌细胞/ml.各病原菌与相应的探针杂交,吸光度均＞ 0.101,为阳性;而与非对应的探针杂交,则吸光度＜0.101,为阴性,特异性高;对临床分离株的菌种鉴定准确率高.结论 ＂拟芯片＂法可应用于皮肤感染性肉芽肿常见病原菌的实验室快速检测和鉴定. 展开更多
关键词 肉芽肿 分枝杆菌感染 真菌感染 寡核苷酸反向杂交技术
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