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RT-PCR及RFLP分析技术对鸡传染性支气管炎病毒的诊断和S1基因分型的研究 被引量：27
1
作者 磨美兰 李康然 韦平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期277-282,共6页
本研究使用分别扩增整个S1糖蛋白基因 (引物A)和S1糖蛋白基因N_端高变区Ⅰ (引物B)的 2对引物对 3个IBV标准株M41、Connecticut、Arkansas及 5个地方分离株 (C60 ,D41A ,D41B ,A112 1,A1171)进行RT_PCR扩增。用引物A时 ,有 5个IBV毒株... 本研究使用分别扩增整个S1糖蛋白基因 (引物A)和S1糖蛋白基因N_端高变区Ⅰ (引物B)的 2对引物对 3个IBV标准株M41、Connecticut、Arkansas及 5个地方分离株 (C60 ,D41A ,D41B ,A112 1,A1171)进行RT_PCR扩增。用引物A时 ,有 5个IBV毒株扩增到目的片段 (172 0bp) ;用引物B时 ,所有 8个IBV毒株均得到与预计大小相符的目的产物 (2 2 8bp)。对 172 0bp的PCR产物用限制性内切酶HaeⅢ进行酶切 ,结果得出 3个不同的RFLP图谱 ,其中M41、Connecticut、D41B具有相同的HaeⅢ酶切图谱。Arkansas和D41A则分别具有互不相同的图谱 ;对 2 2 8bp的PCR产物进行DdeⅠ、RsaⅠ限制性内切酶消化 ,根据它们的RFLP图谱 ,8个IBV毒株可分为 5个基因型。综合 2对引物的PCR产物的RFLP分析结果 ,8个IBV毒株可分为 7个基因型 ,分型的结果与传统的血清学方法吻合。本研究建立的方法和技术具有快速、简单、特异、灵敏等优点 ,为现场流行毒株的定型(基因型 /血清型 )及其S1基因变异的跟踪研究以及更有效防制传染性支气管炎奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 S1基因 反转录酶多聚酶链反应 限制性片段多态性分析 分型
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18α-甘草酸下调“胶原蛋白凝胶三明治”培养的大鼠肝细胞P450酶活性及mRNA表达 被引量：24
2
作者 杨静 彭仁琇 于皆平 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期155-158,共4页
研究 18α 甘草酸 (18α GA)对肝细胞主要细胞色素P4 50 (CYP)药物代谢酶的影响 ,并初步探讨其分子机理 .采用“胶原蛋白凝胶三明治”培养的原代大鼠肝细胞 ,加 18α GA孵育 ,酶学测定CYP1A1(7 乙氧基异口恶唑O 脱乙基酶 ,EROD) ,CYP2E1... 研究 18α 甘草酸 (18α GA)对肝细胞主要细胞色素P4 50 (CYP)药物代谢酶的影响 ,并初步探讨其分子机理 .采用“胶原蛋白凝胶三明治”培养的原代大鼠肝细胞 ,加 18α GA孵育 ,酶学测定CYP1A1(7 乙氧基异口恶唑O 脱乙基酶 ,EROD) ,CYP2E1(苯胺羟化酶 ,ANH)和CYP3A(红霉素N 脱甲基酶 ,ERD)活性 ,逆转录聚合酶链反应测定CYP1A1,CYP2E1和CYP3A1mRNA表达水平 .结果可见 ,18α GA浓度依赖性 (50～ 4 0 0mg·L- 1)抑制大鼠肝细胞EROD ,ANH和ERD活性 ,2 0 0mg·L- 1作用最强 ,抑制率分别可达 59.6 % ,6 9.7%和 4 4 .7% ,且呈时间依赖性 ,于d 4达高峰 ;浓度依赖性 (50～ 2 0 0mg·L- 1)抑制CYP1A1,CYP2E1和CYP3A1mRNA表达水平 ,分别可达 4 4 .5% ,58.1%和 37.0 % .上述结果表明 18α GA在转录水平下调大鼠肝细胞CYP1A1。 展开更多
关键词 18Α-甘草酸 胶原蛋白凝胶三明治 细胞色素 P450 逆转录聚合酶链反应 mRNA
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中药滋补肝肾方对鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶mRNA表达的调节 被引量：24
3
作者 王辉 王莒生 +6 位作者 王萍 陶毅 蔡念宁 郁卫东 杨立新 郭念筠 陈清轩 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2003年第4期230-231,共2页
目的　探讨中药滋补肝肾方治疗白癜风的分子学作用机制。方法　采用定量逆转录 聚合酶链式反应(RT PCR)方法 ,观察中药滋补肝肾方对鼠B16黑素瘤细胞株酪氨酸酶mRNA表达的影响。结果　中药滋补肝肾方能使黑素瘤细胞酪氨酸酶mRNA表达水... 目的　探讨中药滋补肝肾方治疗白癜风的分子学作用机制。方法　采用定量逆转录 聚合酶链式反应(RT PCR)方法 ,观察中药滋补肝肾方对鼠B16黑素瘤细胞株酪氨酸酶mRNA表达的影响。结果　中药滋补肝肾方能使黑素瘤细胞酪氨酸酶mRNA表达水平增加。结论　中药滋补肝肾方能上调黑素细胞酪氨酸酶mRNA表达水平 ,这是其治疗白癜风的药理作用机制之一。 展开更多
关键词 中医药疗法 滋补肝肾方 鼠 B16黑素瘤 酪氨酸酶 MRNA表达 白癜风
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肝细胞色素P4501A1、2E1在非酒精性脂肪肝发病中的作用 被引量：10
4
作者 史洪涛 陈东风 +1 位作者 熊仁平 胡辂 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期358-360,共3页
目的　研究肝细胞色素P4 5 0 1A1、2E1在非酒精性脂肪肝大鼠中的表达及其意义。方法　荧光分光光度计法检测高脂饲料诱导 4 0只大鼠脂肪肝模型中P4 5 0 1A1活性 (7 乙氧异唑O 脱乙基酶 ,EROD)和 2E1活性 (苯胺羟化酶 ,ANH) ,免疫组化和W... 目的　研究肝细胞色素P4 5 0 1A1、2E1在非酒精性脂肪肝大鼠中的表达及其意义。方法　荧光分光光度计法检测高脂饲料诱导 4 0只大鼠脂肪肝模型中P4 5 0 1A1活性 (7 乙氧异唑O 脱乙基酶 ,EROD)和 2E1活性 (苯胺羟化酶 ,ANH) ,免疫组化和Westernblot方法测定肝细胞色素P4 5 0 1A1、2E1表达 ,逆转录聚合酶链反应测定其mRNA表达。结果　脂肪肝 2、4、8和 1 2周EROD活性分别为(32 5 .0 7± 5 9.6 8)、(345 .2 5± 4 9.2 8)、(4 6 8.95± 5 5 .2 8)和 (5 4 8.6 8± 4 3.2 5 )nmol·mg-1 ·min-1 ,与正常对照组的 (2 6 0 .4 2± 35 .32 )nmol·mg-1 ·min-1 比较明显增高 (P <0 .0 1 ) ,脂肪肝 2、4、8和 1 2周ANH活性分别为 (6 35 .6 8± 6 5 .4 8)、(735 .4 5± 76 .89)、(887.4 5± 85 .6 5 )和 (95 6 .5 8± 84 .4 7)nmol·mg-1 ·min-1 ,与正常对照组的 (5 0 0 .2 5± 78.34)nmol·mg-1 ·min-1 比较明显增高 (P <0 .0 1 ) ,肝细胞色素P4 5 0 1A1、2E1基因表达随脂肪肝程度的加重而增高。结论　脂肪肝引起的肝脏损害可能与肝细胞色素P4 5 0 1A1、2E1表达有关 。 展开更多
关键词 P450 非酒精性脂肪肝 肝细胞 表达 ANH 增高 对照组 色素 E1基因 逆转录聚合酶链反应
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精子蛋白17mRNA在卵巢癌中的表达及临床意义 被引量：11
5
作者 李芳秋 杨爱龙 +4 位作者 刘群 刘琦 吴元赭 郑宁 刘锦霞 《医学研究生学报》 CAS 2005年第6期493-495,共3页
目的:测定精子蛋白(Sp)17mRNA在肿瘤组织中表达情况。方法:设计合成特异性引物,建立测定人Sp17mRNA的RTPCR的方法,以β肌动蛋白(βactin)作为内标。检测13份原发卵巢癌组织标本、3份卵巢癌腹水标本和13份其他肿瘤组织标本。用正常睾丸组... 目的:测定精子蛋白(Sp)17mRNA在肿瘤组织中表达情况。方法:设计合成特异性引物,建立测定人Sp17mRNA的RTPCR的方法,以β肌动蛋白(βactin)作为内标。检测13份原发卵巢癌组织标本、3份卵巢癌腹水标本和13份其他肿瘤组织标本。用正常睾丸组织RNA作模板进行RTPCR作为阳性对照,正常卵巢组织为阴性对照。阳性对照可出现2个条带,其中Sp17扩增产物近500bp,βactin产物234bp。阴性对照仅出现βactin条带。结果:13份原发卵巢癌组织标本中,11例表达Sp17mRNA,阳性率为84.6%。3份卵巢癌腹水标本中,1份检出Sp17mRNA。其他肿瘤组织标本全部阴性。结论:Sp17mRNA在原发卵巢恶性肿瘤中高水平表达,可以作为临床诊断的辅助指标。 展开更多
关键词 精子蛋白17 逆转录聚合酶链反应 卵巢癌 诊断标记
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中国部分地区丙型肝炎病毒核心区基因分型的研究 被引量：12
6
作者 蔡怡珊 黄金宝 郑大利 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2006年第3期139-142,145,共5页
〔目的〕了解中国部分地区丙型肝炎病毒的基因分型。〔方法〕采用HCV核心区的型特异性引物PCR检测并以基因序列系统进化树法对中国部分地区人群的HCV进行基因分型。〔结果〕在来自中国福建、山东、台湾等9个省、市的HCV-RNA阳性标本中... 〔目的〕了解中国部分地区丙型肝炎病毒的基因分型。〔方法〕采用HCV核心区的型特异性引物PCR检测并以基因序列系统进化树法对中国部分地区人群的HCV进行基因分型。〔结果〕在来自中国福建、山东、台湾等9个省、市的HCV-RNA阳性标本中共发现4种HCV基因型和6种HCV基因亚型,各型名称为:1b、2a、3b、6a、6n和6。其中1b型占29.7%(19/64);2a型占4.7%(3/64);3b型占28.1%(18/64);6a型占34.4%(22/64);6n型占1.6%(1/64);6型占1.6%(1/64)。另从1名巴基斯坦藉入境人员血清标本中检出HCV1a型。〔结论〕HCV核心区的型特异性引物PCR和基因序列系统进化树法可较好地对HCV进行基因分型,中国与相邻的东南亚国家或地区一样存在着HCV基因多样性。 展开更多
关键词 肝炎病毒 丙型 基因分型 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 序列 进化树
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常见白血病融合基因筛查在白血病诊断与分型中的意义 被引量：11
7
作者 祝毓琳 张英 +3 位作者 朱平 杨英 杜金伟 刘静 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期236-239,共4页
目的: 分析病人白血病细胞染色体畸变涉及的86种融合基因和临床白血病类型的相关性,探讨常见融合基因筛查法在临床诊断和分型中的应用价值。方法: 收集161例初发或者复发的白血病患者及8例骨髓增生异常综合征(MDS)患者的骨髓细胞,提取R... 目的: 分析病人白血病细胞染色体畸变涉及的86种融合基因和临床白血病类型的相关性,探讨常见融合基因筛查法在临床诊断和分型中的应用价值。方法: 收集161例初发或者复发的白血病患者及8例骨髓增生异常综合征(MDS)患者的骨髓细胞,提取RNA,用32条特异性引物逆转录为cDNA,利用白血病29种染色体畸变形成的融合基因的86种mRNA剪接变异体引物,分8管进行多重RT PCR,筛查白血病融合基因。结合临床状态和形态学观察了解融合基因与白血病类型的关系。结果: 白血病中115例(71% )分别检测出10种白血病常见融合基因,包括AML1 /ETO、PML/RARα、PLZF/RARα、dupMLL、MLL/AF6、MLL/AF10、CBFβ/MYH11、BCR/ABL、Hox11、Evi1。其中52例慢性粒细胞白血病(CML)100%检出BCR/ABL; 25例急性早幼粒细胞白血病(APL)中88%检出融合基因,其中21例APL检测出PML/RARα, 1例APL检测出PLZF/RARα; AML1 /ETO阳性的17例急性白血病(AL)16例为FAB M2亚型, 1例为混合型白血病; CBFβ/MYH11阳性的4例AL3例为FAB分型的M4, 1例为M5,属于向粒单细胞系统分化的白血病。16例AL检测出MLL基因异常,其中MLL/AF6白血病均为FAB分型的M5,具有典型的原始单核细胞白血病的特征。17例急性淋巴细胞白血病(ALL) 5例检测出BCR/ABL。8例MDS病人中2例检测出融? 展开更多
关键词 白血病诊断 骨髓增生异常综合征(MDS) PML/RARΑ BCR/ABL 急性早幼粒细胞白血病 急性淋巴细胞白血病 慢性粒细胞白血病 融合基因 单核细胞白血病 基因筛查法 FAB分型 人白血病细胞 RT-PCR PLZF 染色体畸变 白血病患者
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盐酸小檗碱及其与环孢素A合用对大鼠肝脏和小肠CYP3A1的影响 被引量：10
8
作者 辛华雯 吴笑春 +4 位作者 李罄 余爱荣 仲明远 朱敏 刘幼英 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2004年第5期565-568,共4页
目的 :阐明盐酸小檗碱 (berberinechloride ,Ber)及其与环孢素A (cyclosporin ,CsA)合用对大鼠肝脏和小肠CYP3A1的影响。方法 :实验分 7组 :溶媒对照组、15 0mg·kg-1酮康唑组、10 0mg·kg-1Ber组、2 0 0mg·kg-1Ber组、4 5... 目的 :阐明盐酸小檗碱 (berberinechloride ,Ber)及其与环孢素A (cyclosporin ,CsA)合用对大鼠肝脏和小肠CYP3A1的影响。方法 :实验分 7组 :溶媒对照组、15 0mg·kg-1酮康唑组、10 0mg·kg-1Ber组、2 0 0mg·kg-1Ber组、4 5mg·kg-1CsA组、10 0mg·kg-1Ber +45mg·kg-1CsA组、2 0 0mg·kg-1Ber +45mg·kg-1CsA组 ,采用RT PCR和Westernblot等方法测定大鼠肝脏和小肠CYP3A1的表达水平。结果 :RT PCR结果显示 :灌胃给药 12d后 ,除了 10 0mg·kg-1Ber组外 ,其余各用药组对大鼠肝脏CYP3A1基因表达均有明显的抑制作用。Westernblot结果显示 :给药 6d后 ,2 0 0mg·kg-1Ber +45mg·kg-1CsA组对大鼠肝脏CYP3A1的表达有明显抑制作用 ;给药 12d后 ,10 0mg·kg-1Ber +45mg·kg-1CsA ,2 0 0mg·kg-1Ber +45mg·kg-1CsA组对大鼠肝脏和小肠CYP3A1的表达均有明显抑制作用。结论 :通过增强CsA对肝脏和小肠CYP3A1基因表达的抑制作用 ,从而减少CsA在肝脏和小肠的代谢及消除 ,可能是Ber增加CsA血浓度的重要机制。 展开更多
关键词 盐酸小檗碱 环孢素A 细胞色素P450酶 逆转录聚合酶链反应 WESTEM BLOT
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食管癌患者外周血CK20、CK19、CEA mRNA的表达及其临床病理意义 被引量：11
9
作者 王景美 杜艳 +4 位作者 郭英 吴平平 金月玲 田小强 黄培林 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2006年第6期414-418,共5页
目的:研究89例食管癌患者外周血中CK20、CK19及CEA mRNA的表达,并探讨其临床病理意义。方法:巢式RT-PCR技术检测89例食管癌患者术前外周血中CK20、CK19、CEA mRNA的表达。结果:89例食管癌患者外周血中CK20、CK19及CEA的阳性表达率分别为... 目的:研究89例食管癌患者外周血中CK20、CK19及CEA mRNA的表达,并探讨其临床病理意义。方法:巢式RT-PCR技术检测89例食管癌患者术前外周血中CK20、CK19、CEA mRNA的表达。结果:89例食管癌患者外周血中CK20、CK19及CEA的阳性表达率分别为49.44%、34.83%及52.81%;三基因同时检测时,至少1个基因检测结果为阳性的表达率为71.91%,与食管癌的淋巴结转移和(或)远处转移具有相关性。结论:CK20、CEA可作为检测食管癌患者外周血微转移的生物学标志,RT-PCR联合检测多种标志物可为了解肿瘤的恶性生物学行为、指导临床治疗方案的选择、判断预后及监测疗效提供依据。 展开更多
关键词 食管癌 逆转录-聚合酶链反应 CK20 CK19 癌胚抗原 微转移
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咪唑克生对实验性自身免疫性脑脊髓炎的行为、病理和免疫的影响 被引量：11
10
作者 王新施 郑荣远 陈艳艳 《中国临床神经科学》 2007年第6期570-577,共8页
目的:探讨咪唑克生(Ida)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的行为、病理和脊髓IL-12p40、IL-10、GFAPmRNA表达的影响。方法:用GPSCH免疫Wistar大鼠制作EAE模型,免疫后分别给予Ida0.5、1.5和4.5mg·kg-1。比较各组行为学和组织学的变... 目的:探讨咪唑克生(Ida)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的行为、病理和脊髓IL-12p40、IL-10、GFAPmRNA表达的影响。方法:用GPSCH免疫Wistar大鼠制作EAE模型,免疫后分别给予Ida0.5、1.5和4.5mg·kg-1。比较各组行为学和组织学的变化,用RT-PCR法测脊髓IL-12p40、IL-10和GFAP mRNA的表达。结果:与EAE组比Ida1.5mg·kg-1组和Ida4.5mg·kg-1组的行为学和病理变化减轻,脊髓IL-12p40mRNA表达降低,IL-10和GFAP mRNA表达升高(P<0.05)。结论:Ida对EAE有保护作用,可能与打乱促炎和抑炎细胞因子的平衡及促进星形胶质细胞增殖活化有关。 展开更多
关键词 咪唑克生 实验性自身免疫性脑脊髓炎 细胞因子 胶质纤维酸性蛋白 逆转录–聚合酶链反应
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兜兰DEFICIENS(DEF)-和GLOBOSA(GLO)-like基因的克隆及表达分析 被引量：11
11
作者 李冬梅 吕复兵 +3 位作者 朱根发 操君喜 李伟锋 孙映波 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期215-224,共10页
以‘同色兜兰’品种为材料,采用RT-PCR和RACE技术获得了DEFICIENS(DEF)-和GLOBOSA(GLO)-like基因的cDNA全长,命名为PcDEF和PcGLO,并用半定量RT-PCR和实时PCR研究了PcDEF和PcGLO在花芽发育过程和不同组织部位的表达特性。结果表明,PcDEF... 以‘同色兜兰’品种为材料,采用RT-PCR和RACE技术获得了DEFICIENS(DEF)-和GLOBOSA(GLO)-like基因的cDNA全长,命名为PcDEF和PcGLO,并用半定量RT-PCR和实时PCR研究了PcDEF和PcGLO在花芽发育过程和不同组织部位的表达特性。结果表明,PcDEF和PcGLO的全长cDNA分别为1 039bp和934bp,分别编码224和210个氨基酸;蛋白比对表明,PcDEF和PcGLO蛋白都具有典型MADS-box蛋白的MADS和K结构域;蛋白同源性分析显示,PcDEF和PcGLO与已登录的其它兰科植物的DEF/AP3和GLO/PI蛋白的相似性分别在75%～96%和87%～98%;系统进化树分析表明,PcDEF和PcGLO分别属于B类MADS-box蛋白家族的AP3和PI亚家族。表达分析显示,PcDEF和PcGLO在花芽发育中均有表达,PcDEF在成熟花、唇瓣和花瓣中的表达量高,在蕊柱、萼片、苞叶和根中次之,在花茎和叶中较低,在子房中几乎不表达;PcGLO在各组织中均有不同丰度的表达。 展开更多
关键词 兜兰 MADS-BOX基因 DEFICIENS基因 GLOBOSA基因 RACE 进化分析 RT-PCR
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白细胞介素-23、白细胞介素-17在支气管哮喘小鼠发病中的作用 被引量：10
12
作者 赵凯姝 张云峰 +3 位作者 成焕吉 孙萌 黄艳智 鲁继荣 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期639-642,共4页
目的探讨IL-23、IL-17在支气管哮喘发病中的作用。方法将30只健康雌性BALB/c小鼠随机分为3组:分别为卵白蛋白(OVA)致敏并激发的哮喘模型组(A组),OVA致敏、激发并予糖皮质激素治疗组(B组)及正常对照组(C组),每组10只。末次激发24h后,各... 目的探讨IL-23、IL-17在支气管哮喘发病中的作用。方法将30只健康雌性BALB/c小鼠随机分为3组:分别为卵白蛋白(OVA)致敏并激发的哮喘模型组(A组),OVA致敏、激发并予糖皮质激素治疗组(B组)及正常对照组(C组),每组10只。末次激发24h后,各组小鼠摘眼球取血,ELISA法检测其血清IL-17、IFN-γ和IL-23水平。收集支气管肺泡灌洗液(BALF),行嗜酸性粒细胞(EOS)计数。HE染色观察其肺组织病理改变。RT-PCR法检测其肺组织IL-17mRNA、IL-23mRNA表达。结果 1.B组多数小鼠未见明显行为学异常反应,肺组织病理损害也较A组明显减轻,BALF中EOS计数[(16.4±1.7)×107L-1]亦显著低于A组[(45.5±2.1)×107L-1](P<0.01)。2.A组小鼠血清IL-17、IL-23水平[(94.42±3.41)ng.L-1,(155.56±12.50)ng.L-1]均高于C组[(41.76±2.07)ng.L-1,(51.49±6.34)ng.L-1],IFN-γ水平[(20.91±1.59)ng.L-1]低于C组[(53.23±1.74)ng.L-1],其差异均有统计学意义(Pa<0.01);且IL-23与IL-17水平呈正相关(r=0.763,P<0.05),IL-23、IL-17与IFN-γ均无相关性。而B组小鼠血清IL-17、IL-23水平[(56.01±3.92)ng.L-1,(88.00±6.43)ng.L-1]均低于A组,IFN-γ水平[(31.66±1.29)ng.L-1]高于A组,其差异均有统计学意义(Pa<0.01)。3.A组小鼠肺组织IL-17mRNA、IL-23mRNA的表达均高于C组(Pa<0.01),且IL-23mRNA与IL-17mRNA表达量呈正相关(r=0.628,P<0.05);而B组小鼠肺组织IL-17mRNA、IL-23mRNA的水平均低于A组(Pa<0.01)。A组肺组织IL-17mRNA表达量与BALF中EOS计数呈正相关(r=0.849,P<0.01),IL-23mRNA表达量与BALF中EOS计数无相关性。结论 IL-17、IL-23参与哮喘大鼠的发病,IL-17可能与哮喘EOS增多有关,IL-23可能是通过诱导IL-17的产生间接促进哮喘发病,糖皮质激素对其有抑制作用。 展开更多
关键词 哮喘 白细胞介素-23 白细胞介素-17 干扰素-Γ 嗜酸性粒细胞 反转录-聚合酶链反应 糖皮质激素 小鼠
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蚓激酶对缺血再灌注大鼠脑内JAK-STAT通路的作用 被引量：10
13
作者 王莉安 毕辉 +2 位作者 纪红蕊 王玉平 杜智敏 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第24期1862-1865,共4页
目的研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织JAK1和STAT1蛋白及mRNA的表达以及给予蚓激酶(lumbrokinase)后二者的变化。方法线拴法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,随机分为蚓激酶高剂量组(1.2mg·kg-1)、蚓激酶中剂量组(0.6mg·kg... 目的研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织JAK1和STAT1蛋白及mRNA的表达以及给予蚓激酶(lumbrokinase)后二者的变化。方法线拴法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,随机分为蚓激酶高剂量组(1.2mg·kg-1)、蚓激酶中剂量组(0.6mg·kg-1)、蚓激酶低剂量组(0.3mg·kg-1)、阳性药脉络宁组(1.1mL·kg-1)、模型组和假手术组。再灌注开始时给予蚓激酶,连续给药3d,用免疫荧光染色法检测JAK1,STAT1蛋白的表达,半定量RT-PCR方法检测JAK1mRNA,STAT1mRNA的表达。结果模型组JAK1,STAT1蛋白和mRNA的表达均较假手术组显著升高;蚓激酶1.2mg·kg-1组和蚓激酶0.6mg·kg-1组JAK1蛋白和mRNA的表达均高于模型组;蚓激酶1.2mg·kg-1组STAT1蛋白和mRNA的表达均低于模型组。结论JAK1有抗神经细胞凋亡作用,STAT1有促进神经细胞凋亡作用,蚓激酶可能通过增加脑组织JAK1蛋白和mRNA表达、减少STAT1蛋白和mRNA的表达起到对脑组织的保护作用。 展开更多
关键词 蚓激酶 JAK-STAT 免疫荧光 逆转录聚合酶链反应
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XIAP、survivin、LPA及CA125在上皮性卵巢癌中的表达 被引量：8
14
作者 张意茗 张向宁 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第3期317-321,共5页
目的:探讨上皮性卵巢癌患者的组织标本中survivin mRNA和XIAP mRNA及血浆LPA和血清CA125表达与卵巢癌患者临床病理学指标的关系。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测50例上皮性卵巢癌及12例正常卵巢组织标本中survivin mRN... 目的:探讨上皮性卵巢癌患者的组织标本中survivin mRNA和XIAP mRNA及血浆LPA和血清CA125表达与卵巢癌患者临床病理学指标的关系。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测50例上皮性卵巢癌及12例正常卵巢组织标本中survivin mRNA和XIAP mRNA的表达,检测50例卵巢癌、44例卵巢良性疾病患者及20例健康女性血浆LPA和血清CA125的表达情况。结果:在正常卵巢标本与卵巢癌标本中,XIAP mRNA的阳性表达率分别为2/12(16.7%)、37/50(74%),差异有统计学意义(P<0.05);sur-vivin mRNA的阳性表达率分别为0、42/50(84%),差异有统计学意义(P<0.05)。survivin mRNA与XIAP mR-NA在卵巢癌组织中的表达呈正相关rs=0.03(P<0.05)。XIAPs、urvivin表达与肿瘤的病理分期、病理类型、淋巴结转移和腹水形成有关(P<0.05)。卵巢癌组血浆LPA均值为(7.67±3.02)μmol/L,阳性率为78.0%;卵巢良性疾病组LPA均值为(2.734±1.471)μmol/L,阳性率为27.3%,健康对照组LPA均值为(1.557±1.294)μmol/L,阳性率为5.0%,三者间的差异有统计学意义(P<0.05)。卵巢癌的诊断中LPA的特异度为75.0%,高于CA125;早期卵巢癌的诊断中二者联合检测的灵敏度最高,为85.7%;LPA的灵敏度为71.4%,高于CA125的28.6%,差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅱ-Ⅳ期患者血浆LPA水平较Ⅰ期显著升高(P<0.01);Ⅱ-Ⅳ期各期之间无显著性差异(P>0.05)。3种病理类型中LPA阳性率的差异无显著性(P>0.05)。结论:survivin和XIAP基因系重要的肿瘤相关基因,与卵巢癌的发生发展有关;血浆LPA诊断早期卵巢癌的特异性和敏感性均高于CA125,联合检测有较高的临床价值。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 基因 XIAP 基因 survivin 逆转录-聚合酶链反应 溶血磷脂酸
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左旋咪唑对实验性自身免疫性脑脊髓炎脊髓IFN-γ、TGF-β_1 mRNA表达的影响 被引量：10
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作者 吴赛珍 郑荣远 +3 位作者 卢晔芬 邱伟文 韩钊 张磊 《中国临床神经科学》 2006年第6期584-589,共6页
目的:探讨左旋咪唑(LMS)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)脊髓IFN--γ、TGF-β1mRNA表达的影响。方法:用GPSCH免疫Wistar大鼠制作EAE模型,分别在免疫前(LMS1组)、免疫同时(LMS2组)、免疫后(LMS3组)给LMS10mg·kg-1。比较各组行为学... 目的:探讨左旋咪唑(LMS)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)脊髓IFN--γ、TGF-β1mRNA表达的影响。方法:用GPSCH免疫Wistar大鼠制作EAE模型,分别在免疫前(LMS1组)、免疫同时(LMS2组)、免疫后(LMS3组)给LMS10mg·kg-1。比较各组行为学和组织学的变化,用RT-PCR测脊髓IFN-和TGF-β1mRNA的表达。结果:LMS1组和LMS2组的行为学表现和炎细胞浸润加重(P<0.01,P<0.05)。LMS3组出现EAE复发。与EAE组比,LMS1组和LMS2组脊髓IFN-mRNA表达升高,TGF-β1mRNA表达降低,但仅LMS2组有统计学意义(P<0.05)。结论:LMS可升高脊髓IFN-mRNA表达,降低TGF-β1mRNA表达,提示LMS对EAE的促发作用可能与Th1/Th2失衡有关。 展开更多
关键词 左旋咪唑 实验性自身免疫性脑脊髓炎 干扰素-Γ 转化生长因子-Β1 逆转录-聚合酶链反应
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纤维化及正常肝组织中血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA的表达 被引量：9
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作者 王卫卫 杨希山 +4 位作者 吴平生 王捷 张宏斌 李旭 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第5期477-478,482,共3页
目的探讨纤维化及正常肝组织中血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)mRNA的表达情况。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应法检测18例肝癌周围纤维化肝组织和12例正常肝脏组织中AT1RmRNA的表达,同时逆转录AT1R特异性片段和内参片段(GAPDH),以二者的... 目的探讨纤维化及正常肝组织中血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)mRNA的表达情况。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应法检测18例肝癌周围纤维化肝组织和12例正常肝脏组织中AT1RmRNA的表达,同时逆转录AT1R特异性片段和内参片段(GAPDH),以二者的积分吸光度比值作为该受体mRNA的相对表达量。结果纤维化肝组织AT1RmRNA的相对表达量明显高于正常肝组织(1.27±0.45vs0.71±0.21,P<0.01)。结论AT1R可能在肝纤维化的发生发展中起一定的作用。 展开更多
关键词 组织纤维化 肝脏 Ⅰ型血管紧张素Ⅱ受体 基因表达 逆转录聚合酶链反应
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金属硫蛋白及其基因在人胰腺癌细胞株中的表达及意义 被引量：7
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作者 谢勇 赵玉沛 +2 位作者 陈革 原春辉 李丽君 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期619-623,共5页
目的比较金属硫蛋白(MT)及其基因在人胰腺癌细胞株和耐药细胞株中的表达,探讨MT表达与胰腺癌细胞耐药的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MT基因的mRNA表达情况,采用镉/血红蛋白饱和-电化学分析法检测MT表达情况。结果人胰... 目的比较金属硫蛋白(MT)及其基因在人胰腺癌细胞株和耐药细胞株中的表达,探讨MT表达与胰腺癌细胞耐药的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MT基因的mRNA表达情况,采用镉/血红蛋白饱和-电化学分析法检测MT表达情况。结果人胰腺癌细胞株中的MT可由MT-1A、MT-1B、MT-1E、MT-1F、MT-1G、MT-1X及MT-2A基因编码;MT-1B、MT-1E、MT-1X及MT-2A基因和MT在人胰腺癌耐药细胞株中的表达水平显著增高(P<0.05)。结论人胰腺癌细胞株中的MT及其基因表达与胰腺癌细胞株的增殖及化疗耐药性相关。 展开更多
关键词 金属硫蛋白 逆转录聚合酶链反应 细胞培养 胰腺癌
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WT1基因在骨髓增生异常综合征患者外周血中的表达及临床意义 被引量：9
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作者 聂泽强 李晓云 +2 位作者 马爻芳 方敏 鲍杰 《陕西医学杂志》 CAS 2019年第8期977-980,共4页
目的:探讨WT1基因在骨髓增生异常综合征(MDS)患者中的表达情况及WT1基因与MDS发病及病情进展的关系。方法:采用逆转录-聚合酶链反应检测48例MDS患者,4例MDS-AL患者和10例正常人外周血中WT1基因的表达,并进行分析。结果:①4例MDS-AL患者... 目的:探讨WT1基因在骨髓增生异常综合征(MDS)患者中的表达情况及WT1基因与MDS发病及病情进展的关系。方法:采用逆转录-聚合酶链反应检测48例MDS患者,4例MDS-AL患者和10例正常人外周血中WT1基因的表达,并进行分析。结果:①4例MDS-AL患者的WT1阳性率100%,10例正常人的WT1阳性率0%,48例MDS患者WT1阳性率为27.1%。MDS组、MDS-AL组、对照组两两相比有统计学差异(P<0.05)。②将MDS按IPSS分组,WT1mRNA的表达水平在高危与中危及低危组之间差异均有统计学意义(P<0.05),中危与低危组、中危Ⅰ组与中危Ⅱ组之间无统计学差异(P>0.05)。WT1基因表达水平与IPSS评分值有相关性(r=0.74,P<0.05)。③WT1基因表达水平与原始细胞百分数密切相关(r=0.66,P<0.05)。④动态随访2例MDS患者,随着疾病进展,WT1的表达水平逐渐升高。结论:WT1基因在各类型MDS均高表达。WT1基因的表达与疾病的进展呈正相关,WT1基因表达情况与原始细胞百分比及IPSS评分均有明显相关性。其可作为临床上对MDS病情的高危评估,预测病情变化和动态监测治疗效果及判断预后的重要指标之一。 展开更多
关键词 骨髓增生异常综合征 急性白血病 国际预后评分系统 WT1基因 逆转录-聚合酶链反应 相关性
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广州地区扎幌样病毒的检出及基因型分析 被引量：8
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作者 刘翼 戴迎春 +4 位作者 李建栋 詹惠春 陈清 俞守义 聂军 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第10期1147-1149,1152,共4页
目的了解广州腹泻儿童是否存在扎幌样病毒(Sapporo-like virus,SLV)感染。方法在2003年秋冬季腹泻流行期间在南方医院儿科收集临床诊断为病毒性腹泻患儿的粪便标本,并采用半套式反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测。纯化阳性标本PCR产... 目的了解广州腹泻儿童是否存在扎幌样病毒(Sapporo-like virus,SLV)感染。方法在2003年秋冬季腹泻流行期间在南方医院儿科收集临床诊断为病毒性腹泻患儿的粪便标本,并采用半套式反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测。纯化阳性标本PCR产物并测序,然后将其同GenBank中的参比毒株序列比较。结果收集的169份标本中有1份SLV(CH03354)PCR扩增阳性,检出率为0.59%,同源性分析表明该毒株属于SLV GⅠ-1群。结论广州地区存在SLV所致感染,本次实验检出毒株基因型与安徽毒株不同,说明我国不同地区可能存在不同的SLV基因型。 展开更多
关键词 扎幌样病毒 人类杯状病毒 基因型 反转录聚合酶链反应
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辽宁省葫芦岛地区鼠类汉坦病毒的分离与鉴定 被引量：8
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作者 屈勇刚 杨国庆 +3 位作者 邹洋 剡根强 陈化新 张永振 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期513-517,共5页
目的研究葫芦岛地区鼠类中汉坦病毒的感染流行情况以及病毒的型别。方法采用夹夜法捕捉鼠类,间接免疫荧光法检测鼠肺中的汉坦病毒抗原,阳性较强的标本接种到Vero E6细胞分离病毒,RT-PCR对分离的病毒与阳性样品扩增核苷酸片段并测序,构... 目的研究葫芦岛地区鼠类中汉坦病毒的感染流行情况以及病毒的型别。方法采用夹夜法捕捉鼠类,间接免疫荧光法检测鼠肺中的汉坦病毒抗原,阳性较强的标本接种到Vero E6细胞分离病毒,RT-PCR对分离的病毒与阳性样品扩增核苷酸片段并测序,构建系统发生树进行分型与系统发生分析。结果在200份鼠肺标本中共检测到11个样品阳性,阳性率为5．5％。选择阳性较强的标本,接种到Vero E6细胞并连续传代后分离到3株病毒。用S片段(620-999 nt)与M片段G1区(180-580 nt)的核苷酸构建的系统发生树,结果表明葫芦岛分离的3株病毒均为S3亚型。用G2区的2003-2302 nt的核苷酸序列构建的系统发生树将来自不同地区的SEO型病毒可分为7个亚型,其中从葫芦岛地区分离的3株病毒与北京地区分离株CP211、ch302、dc501和山东省分离株SD10、SD227株的亲缘关系最近。结论葫芦岛地区鼠类中汉坦病毒的携带率较高,主要流行S3亚型SEOV。 展开更多
关键词 汉坦病毒 病毒分离 逆转录-聚合酶链反应 系统发生分析
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