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我国广东、福建地区2000～2001年手足口病肠道病毒71型分离株的种系进化分析 被引量：108
1
作者 林思恩 章青 +4 位作者 谢华萍 谢健萍 何家鑫 董巧丽 方肇寅 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期227-229,共3页
目的　采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测我国广东、福建地区 2 0 0 0～ 2 0 0 1年手足口病 (HFMD)散发病例中的肠道病毒 71型 (EV71) ,进而通过扩增VP1节段的核苷酸序列 ,进行毒株的种系进化分析。方法　以肠道病毒特异引物对EV 1、... 目的　采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测我国广东、福建地区 2 0 0 0～ 2 0 0 1年手足口病 (HFMD)散发病例中的肠道病毒 71型 (EV71) ,进而通过扩增VP1节段的核苷酸序列 ,进行毒株的种系进化分析。方法　以肠道病毒特异引物对EV 1、EV 2进行RT PCR ,经琼脂糖凝胶电泳鉴定为阳性的标本 ,进一步用EV71特异引物对 15 9S、16 2A进行RT PCR ,扩增的VP1节段经纯化后与测序载体pGEM T连接 ,转化大肠埃希菌DH5α ,筛选后测序。所得序列与我国深圳、上海、武汉地区的EV71流行株 ,中国台湾 1998年 4例HFMD暴发分离的EV71毒株 ,及来自美国、日本、匈牙利等国家地区的EV71毒株的核苷酸序列 ,用ClustalX 1 8和PHYLIP 3 5进行比对分析 ,构建种系进化树。结果　 2 5份标本检测EV71的阳性率为 2 0 % ,所得序列经种系进化分析 ,与肠道病毒 71型的其他毒株同源 ,与深圳 1998年HFMD散发分离的EV71毒株同源性为 94 % ,与上海 2 0 0 0年HFMD暴发分离株同源性为94 %～ 96 % ,与武汉 1987年HFMD病例中分离的毒株同源性为 91% ,而与国外EV71毒株同源性仅为82 %～ 84 %。结论　EV71是我国南方地区HFMD的主要病原之一 ;我国大陆地区的EV71毒株在种系进化上有较高的同源性 ;与我国台湾地区大部分分离株亦有 90 %～ 91%的核苷酸? 展开更多
关键词 HFMD 肠道病毒71型 种系 手足口病 毒株 暴发 RT-PCR 进化分析 同源性 分离株
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保妇康栓对人乳头状瘤病毒抑制作用的实验研究 被引量：63
2
作者 张小燕 卞美璐 +3 位作者 房青 陈庆云 陈志华 徐梅 《中日友好医院学报》 2007年第4期216-219,F0003,共5页
目的:探讨中药制剂保妇康栓对人乳头状瘤病毒(HPV)16亚型的抑制作用。方法:以不同浓度的含保妇康栓培养基体外培养宫颈癌细胞系CaSki和宫颈永生化细胞H8,相差显微镜下观察活细胞形态学变化;采用四甲基偶氮唑蓝比色法以及流式细胞术技术... 目的:探讨中药制剂保妇康栓对人乳头状瘤病毒(HPV)16亚型的抑制作用。方法:以不同浓度的含保妇康栓培养基体外培养宫颈癌细胞系CaSki和宫颈永生化细胞H8,相差显微镜下观察活细胞形态学变化;采用四甲基偶氮唑蓝比色法以及流式细胞术技术检测不同浓度保妇康栓对细胞增殖的影响;应用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测人乳头状瘤病毒HPV16亚型E6E7的表达。结果:不同浓度的保妇康栓可以抑制细胞的增殖;在药物作用下,CaSki细胞G1期细胞增加(P<0.05),G2、S期细胞减少(P<0.05),CaSki细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),而对H8细胞周期和凋亡率影响不明显;两种细胞HPV16E6E7基因片段mRNA表达均明显低于对照组(P<0.01)。结论:保妇康栓在体外抑制宫颈癌细胞系CaSki和宫颈永生化细胞H8增殖,其机制可能是通过抑制HPV16E6E7表达而抑制肿瘤细胞生长。 展开更多
关键词 保妇康栓 人乳头状瘤病毒 逆转录-聚合酶链反应
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抗凋亡基因survivin在急性白血病细胞表达及其临床意义 被引量：44
3
作者 林茂芳 孟小莉 +1 位作者 蔡真 叶琇锦 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期251-253,共3页
目的　探讨急性白血病 (AL)原代细胞survivin基因表达及其与AL疗效的关系。方法　应用RT PCR方法检测 50例初发AL患者survivin基因mRNA表达。结果　AL细胞survivinmRNA阳性率为 82 .0 % (50例中 41例 )。survivinmRNA阳性表达在急性淋... 目的　探讨急性白血病 (AL)原代细胞survivin基因表达及其与AL疗效的关系。方法　应用RT PCR方法检测 50例初发AL患者survivin基因mRNA表达。结果　AL细胞survivinmRNA阳性率为 82 .0 % (50例中 41例 )。survivinmRNA阳性表达在急性淋巴细胞白血病细胞 (89.5 % )较在急性非淋巴细胞白血病 (ANLL)细胞 (75 .0 % )稍多见 ,但均高于正常对照组 (33 .3 % ) ,P值分别 <0 .0 1 ,<0 0 5。在 2 2例ANLL患者白血病细胞中 ,survivinmRNA表达阴性者接受 1个疗程化疗后骨髓缓解(BMR)率 (83 .3 % )明显高于阳性者 (2 5 .0 % ,P =0 .0 2 3) ;1 3例ANLL患者接受高三尖杉酯碱和阿糖胞苷联合治疗 ,survivinmRNA阴性表达者BMR率 (1 0 0 .0 % )高于阳性表达者 (2 7.3 % ) ;survivin/ β actin >0 .6者BMR率低。结论　survivin基因在AL细胞高表达 。 展开更多
关键词 抗凋亡基因 SURVIVIN 急性白血病 细胞表达 临床意义 聚合酶链反应
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2008年广州地区手足口病的病原学研究 被引量：44
4
作者 朱冰 钟家禹 +6 位作者 夏慧敏 龚四堂 肖密丝 谢嘉慧 张莹莹 华亮 连广琬 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期127-130,共4页
目的了解广州地区2008年5—6月份手口足病的病原。方法设计肠道病毒71型、柯萨奇病毒A16型和肠道病毒属通用实时荧光RT—PCR引物和TaqMan探针，运用TaqMan实时荧光RT．PCR技术，对2008年5至6月，到广州市儿童医院就诊的疑似手足121病患... 目的了解广州地区2008年5—6月份手口足病的病原。方法设计肠道病毒71型、柯萨奇病毒A16型和肠道病毒属通用实时荧光RT—PCR引物和TaqMan探针，运用TaqMan实时荧光RT．PCR技术，对2008年5至6月，到广州市儿童医院就诊的疑似手足121病患儿咽拭子标本1023例（份），同时分别进行肠道病毒属、肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型检测。对肠道病毒属荧光RT—PCR检测阳性，而肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型荧光RT—PCR检测阴性的标本进行5’非编码区（Untranslated RegionUTR）的扩增和序列测定。结果在1023份临床标本中，肠道病毒属阳性434例，检出率为42．42％。其中，肠道病毒71型276例，柯萨奇病毒A16型126例，肠道病毒84型4份，埃可病毒11型3例，埃可病毒9型2例，柯萨奇病毒B3型3例，柯萨奇病毒A10型4例，柯萨奇病毒A6型3例，柯萨奇病毒A12或A5型6例，另有7例难以区分型别，没有混合感染。结论2008年5—6月广州地区手足口病的主要病原是肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型，并有肠道病毒84型、柯萨奇病毒A10型、柯萨奇病毒A12型、柯萨奇病毒A6型、柯萨奇病毒B3型、埃可病毒11型、埃可病毒9型等小部分其他型别肠道病毒感染。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒感染 柯萨奇病毒感染 逆转录聚合酶链反应
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人环氧合酶-2(hCOX-2)编码基因的克隆及其反义核酸转染胃癌细胞的初步研究 被引量：35
5
作者 吴汉平 吴开春 +4 位作者 李玲 幺立萍 兰梅 王新 樊代明 《世界华人消化杂志》 CAS 2000年第11期1211-1217,共7页
目的环氧合酶-2与肿瘤发生的关系已成为肿瘤研究的新热点之一,本研究旨在获得 hCOX-2编码基因序列,构建其正、反义真核表达载体,并用反义重组载体转染 COX-2高表达的胃癌细胞,以进一步研究其生物学作用及其在肿瘤发生中的作用机制。方... 目的环氧合酶-2与肿瘤发生的关系已成为肿瘤研究的新热点之一,本研究旨在获得 hCOX-2编码基因序列,构建其正、反义真核表达载体,并用反义重组载体转染 COX-2高表达的胃癌细胞,以进一步研究其生物学作用及其在肿瘤发生中的作用机制。方法按文献报道的hCOX-2核苷酸序列设计合成 PCR 引物,利用总 RNA 抽取试剂盒从 COX-2高表达的培养的人胃癌细胞系 SHC7901中提取细胞总 RNA,反转录合成 cDNA,再用PCR 方法扩增目的基因序列,PCR 产物经 DNA 序列测定证实后,利用引物5端引入的 EcoRⅠ,Xba Ⅰ酶切位点,通过粘端连接,将所获目的基因分别按正、反两个方向定向克隆入真核表达载体 pcDNA3.1中,对两种重组质粒分别进行相应的酶切鉴定,采用脂质体介导的方法用 COX-2反义核酸转染 SGC7901细胞,经 G418筛选后,随机挑选细胞克隆,通过 RT-PCR 检测COX-2 mRNA 水平的变化。结果应用 RT-PCR 反应扩增获得大小约1.9kb 的特异性片段,经 DNA 序列分析,证实与文献报道的 hCOX-2编码区序列一致,重组正义表达载体 pcDNA3.1/hCOX2(+)用 EcoRⅠ,Xba Ⅰ双酶切后,产生大小约5.4kb,1.9kb 的片段;重组反义表达载体 pcDNA3.1/hCOX2(-)通过 PstⅠ酶切,产生大小约4.5kb,1.5kb 与1.3kb 的片段,与预期结果相符,转染细胞经筛选后,随机挑选、扩增了3个细胞克隆,其中1个克隆稳定表达 COX-2反义核酸,RT-PCR 提示其 COX-2 mRNA 水平显著下降.结论成功克隆了 hCOX-2编码基因序列,并构建了其正、反义真核表达载体.反转录 PCR 是克隆基因的简便、有效方法.为扩增高 GC 含量的 cDNA 模板,可在 PCR 反应体系中加入适量的 DMSO,并采用较高退火温度.在 PCR 引物中加入限制性内切酶位点,可以方便地实现基因的定向克隆.COX-2反义核酸在胃癌细胞系 SGC7901中得到稳定转染,转染细胞 COX-2mRNA 表达显著受抑制. 展开更多
关键词 环氧合酶 反转录PCR 反义RNA 基因转染 胃肿瘤
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2型糖尿病患者皮下、大网膜脂肪组织脂联素mRNA表达的定量研究 被引量：30
6
作者 谷卫 曾文衡 船桥通 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期400-403,共4页
目的　探讨 2型糖尿病患者皮下及大网膜脂肪组织脂联素 (adiponectin)表达水平及与血脂联素、体重指数、腰臀比 (WHR)、胰岛素敏感性的相关关系。方法　用实时荧光定量RT PCR检测 2型糖尿病患者和非糖尿病患者皮下及大网膜脂肪组织脂联... 目的　探讨 2型糖尿病患者皮下及大网膜脂肪组织脂联素 (adiponectin)表达水平及与血脂联素、体重指数、腰臀比 (WHR)、胰岛素敏感性的相关关系。方法　用实时荧光定量RT PCR检测 2型糖尿病患者和非糖尿病患者皮下及大网膜脂肪组织脂联素mRNA的表达水平 ,用ELISA方法测定血浆脂联素水平。结果　 2型糖尿病患者大网膜脂肪组织脂联素mRNA表达水平较非糖尿病组显著下降 (P <0 .0 5 ) ;糖尿病组与非糖尿病组的血浆脂联素水平差异无显著性 ;糖尿病组大网膜脂肪组织脂联素mRNA表达与WHR成负相关 (r=- 0 .5 1,P <0 .0 5 )。糖尿病组血浆脂联素水平与大网膜脂肪组织脂联素mRNA的表达成正相关 (r=0 .5 7,P <0 .0 1)。结论　 2型糖尿病患者大网膜脂肪组织脂联素mRNA表达显著降低。内脏脂肪组织脂联素mRNA的表达水平可以作为胰岛素抵抗的重要参数。 展开更多
关键词 2型糖尿病 脂肪组织 脂联素 逆转录聚合酶链反应 实时荧光定量 相关性
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70例手足口病病原检测和临床分析 被引量：35
7
作者 张欣 闫惠平 +5 位作者 黄春 檀玉芬 马冬梅 张海萍 刘妍 王曙照 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期872-874,共3页
目的分析研究70例手足口病患者的临床一般情况及其致病原。方法采集70例手足口病患者（其中5岁以下儿童患者60例）的咽拭子标本，提取病毒RNA。用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）一步法检测肠道病毒（EV）的5′-UTR区基因、肠道病毒71型（... 目的分析研究70例手足口病患者的临床一般情况及其致病原。方法采集70例手足口病患者（其中5岁以下儿童患者60例）的咽拭子标本，提取病毒RNA。用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）一步法检测肠道病毒（EV）的5′-UTR区基因、肠道病毒71型（EV71）的Vp3～Vp1区基因、柯萨奇病毒A16（Cox—A16）的Vp3～Vp1区基因。结果在70例手足口病患者中，咽拭子标本肠道病毒核酸阳性率为42．8％（30／70）。在30例肠道病毒核酸阳性病原中，EV71占66．7％（20／30）。5岁以下儿童有EV71肠道病毒、或Cox-A16病毒、或非EV71及非Cox—A16的其他肠道病毒感染病例。而5岁以上的儿童和成人患者则只有EV71肠道病毒感染病例。39例4d内采集的咽拭子标本病原核酸阳性检测率平均为66．7％（26／39），31例5d以后采集的标本病原核酸阳性检测率是12．9％（4／31），差异有统计学意义（χ^2=20．4，P〈0．01）。结论手足口病以0—5岁婴幼儿患病为主，但成人也可发病。用RT—PCR检测病原核酸阳性的手足口病患者以EV71为主，且以发病后4d内阳性检测率高。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒感染 逆转录聚合酶链反应 评价研究
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白血病29种染色体畸变形成的融合基因分析 被引量：32
8
作者 李志刚 吴敏媛 +1 位作者 朱平 胡亚美 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期682-685,共4页
目的　利用逆转录 多重巢式聚合酶链反应 (reversetranscription Multiplexnestedpolymerasechainreaction ,RT MultiplexNestedPCR)分析 30例不同类型的白血病患者染色体畸变情况。方法　采用国内首次建立的一种RT MultiplexNestedPCR... 目的　利用逆转录 多重巢式聚合酶链反应 (reversetranscription Multiplexnestedpolymerasechainreaction ,RT MultiplexNestedPCR)分析 30例不同类型的白血病患者染色体畸变情况。方法　采用国内首次建立的一种RT MultiplexNestedPCR方法 ,同时筛选出 2 9种对急性白血病诊断和预后具有重要意义的染色体结构畸变。结果　 14 / 19例白血病儿童携带有 7种染色体畸变或基因异常 ,包括t(1;19)、t(8;2 1)、dupMLL(11q2 3)、t(12 ;2 1)、TAL1D、HOX11和EVI1原癌基因活化 ;11/ 11例白血病成人中共检出 5种染色体易位或基因异常 ,包括t(8;2 1)、t(15 ;17)、t(9;2 2 )、HOX11和EVI1原癌基因活化。首次在 1例成人急性早幼粒细胞白血病 (acutepromyelocyticleukemia ,APL)标本中发现一种因早幼粒细胞白血病 (promyelocyticleukemia ,PML)基因剪接位置不同造成的新型PML/RARα融合转录本。结论　RT MultiplexNestedPCR可用于白血病患者初诊时染色体畸变的筛选 。 展开更多
关键词 白血病 染色体畸变 逆转录聚合酶链反应 融合基因 RT-PCR
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RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测microRNA 被引量：23
9
作者 张旗 何湘君 潘秀英 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期87-91,共5页
目的:用改进的RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测组织中的microRNAs(miRNAs),并评价其敏感性和特异性。方法:提取组织中的小于200bp的RNA,用poly(A)聚合酶在其3′末端加尾,再用5′带40nt延伸序列的单碱基锚定Olig-dT引物进行反转录... 目的:用改进的RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测组织中的microRNAs(miRNAs),并评价其敏感性和特异性。方法:提取组织中的小于200bp的RNA,用poly(A)聚合酶在其3′末端加尾,再用5′带40nt延伸序列的单碱基锚定Olig-dT引物进行反转录,得到约80nt的cDNA,然后用特异引物进行SYBRGreen实时定量PCR扩增。结果:该法线性范围宽,可检测低丰度的miRNAs,能特异区分3′末端碱基不同的亚型,但对序列中间个别碱基不同的亚型不能鉴别。对15种miRNA在大鼠心、肝和大脑皮层的相对表达的检测验证了该法的可靠性。另外,海马组织中的miRNAs表达与大脑皮层组织有一定差异。熔解曲线的单一峰型和电泳检测到的单一条带都证明了扩增的特异性。结论:该法可快速、敏感地检测不同组织中大多数miRNAs的表达差异,可用于寻找组织特异及疾病相关的miRNAs。 展开更多
关键词 微RNAS 逆转录聚合酶链反应 实验室技术和方法
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RASSF1基因不同转录本在肺癌组织中的转录表达及临床意义 被引量：24
10
作者 邵康 赫捷 +9 位作者 程邦昌 肖智雄 张德超 黄微 张翠艳 周芳 熊美华 唐槐静 石素胜 姆巴东 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期149-152,共4页
目的　探讨RASSF1基因 3种不同转录本在肺癌中的表达情况及其临床意义。方法采用RT PCR方法检测 5 1例肺癌癌组织及相应癌旁正常组织中RASSF1A、RASSF1B及RASSF1CmRNA的表达情况。结果　 (1) 3种不同转录本在癌旁正常肺组织中均表达 ;... 目的　探讨RASSF1基因 3种不同转录本在肺癌中的表达情况及其临床意义。方法采用RT PCR方法检测 5 1例肺癌癌组织及相应癌旁正常组织中RASSF1A、RASSF1B及RASSF1CmRNA的表达情况。结果　 (1) 3种不同转录本在癌旁正常肺组织中均表达 ;在癌组织中 ,RASSF1A及RASSF1B存在较高的表达缺失 ,其表达缺失率分别为 5 4 .9% (2 8/ 5 1)和 37.3% (19/ 5 1) ,RASSF1C则全部表达。 (2 )RASSF1A表达与肺癌淋巴结转移及病理分期有关 ,淋巴结转移者及晚期病例均存在较高的RASSF1A表达缺失 (P <0 .0 5 )。 (3)RASSF1B和RASSF1C表达与肺癌分期、组织学类型、分化程度及吸烟指数等均无显著相关性 (P >0 .0 5 )。结论　RASSF1基因 3种不同转录本在肺癌中的表达存在明显差异 ,其中转录本A与肺癌淋巴结转移及病理分期相关 ,是一新型肺癌抑癌基因。 展开更多
关键词 肺癌 RASSF1基因 基因转录 转录本A 淋巴结转移 病理分期
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荧光定量RT-PCR在流感病毒检测上的应用 被引量：25
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作者 程小雯 周丽 +7 位作者 赵锦 房师松 庾蕾 叶宝英 何建凡 吕星 张再清 杨洪 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期289-290,共2页
目的　探讨实时荧光定量RT PCR检测方法在流行性感冒检测诊断上的意义。方法　收集集体暴发疑似流感、SARS患者的咽拭子标本 16起 2 0 7份和双份血清标本 10 4份 ,应用荧光定量RT PCR检测方法、MDCK细胞培养法和血凝抑制试验进行病原学... 目的　探讨实时荧光定量RT PCR检测方法在流行性感冒检测诊断上的意义。方法　收集集体暴发疑似流感、SARS患者的咽拭子标本 16起 2 0 7份和双份血清标本 10 4份 ,应用荧光定量RT PCR检测方法、MDCK细胞培养法和血凝抑制试验进行病原学和血清学检测。结果　 2 0 7份集体暴发疑似流感、SARS患者的咽拭子标本中用荧光定量RT PCR检测 ,阳性 79份。阳性率 38 16 % (79 2 0 7)。MDCK细胞培养 ,16起中有 13起共 14 5份咽拭子有 6 2份标本阳性。阳性率 2 9 95 % (6 2 2 0 7)。两者的阳性率差异有显著意义 (χ2 =8.6 4 ,P <0 0 0 5 )。有 9起 10 4份成功的采集了双份血清 ,经HI试验有 6 4份双份血清与H3N2亚型抗原产生血抑 4倍增长 ,阳性率 6 1 5 4 % (6 4 10 4 )。结论　荧光定量RT PCR方法检测流感病毒能够在 3～ 4h内得出结果、且操作方便、特异性强、灵敏度高。因此我们认为实时荧光定量RT PCR方法 ,可作为一种快速的流感病毒检测诊断方法。 展开更多
关键词 实时荧光定量RT-PCR 流感病毒 阳性率 咽拭子 患者 MDCK细胞 暴发 HI试验 血凝抑制试验 倍增
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抑癌候选基因NDRG2在乳腺肿瘤组织及乳腺癌细胞系中的表达分析 被引量：15
12
作者 刘娜 刘新平 +3 位作者 王立峰 张健 王晓斌 药立波 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第12期1065-1068,共4页
目的 :分析抑癌候选基因NDRG2在人类乳腺肿瘤组织及乳腺癌细胞系中的表达情况 .方法 :收集 4种乳腺癌细胞系及 2 1例乳腺肿瘤组织及其癌旁组织 ,提取总RNA ,应用半定量RT PCR及RNA斑点杂交的方法检测NDRG2mRNA的表达水平 .为进一步分析N... 目的 :分析抑癌候选基因NDRG2在人类乳腺肿瘤组织及乳腺癌细胞系中的表达情况 .方法 :收集 4种乳腺癌细胞系及 2 1例乳腺肿瘤组织及其癌旁组织 ,提取总RNA ,应用半定量RT PCR及RNA斑点杂交的方法检测NDRG2mRNA的表达水平 .为进一步分析Ndrg2蛋白质的表达水平 ,分别提取 2 1例组织及细胞系的总蛋白 ,应用蛋白印迹技术检测其Ndrg2的蛋白表达水平 ,同时运用免疫组化的方法检测 4种乳腺癌细胞系中Ndrg2的表达情况 .结果 :RT PCR结果显示 ,4种乳腺癌细胞系中 ,有 3种NDRG2mRNA水平明显降低 .2 1例乳腺肿瘤组织中 ,有 5例NDRG2的mRNA水平明显降低 .蛋白印迹结果显示 ,筛选出的 3种低表达NDRG2mRNA乳腺癌细胞系中 2种Ndrg2的蛋白表达明显降低 ,而有 1种Ndrg2的蛋白表达没有变化 .2 1例乳腺肿瘤组织中发现 5例Ndrg2的蛋白水平明显下降 ,与RT PCR检测结果一致 .免疫组化结果显示 ,4种乳腺癌细胞系中 ,2种细胞系Ndrg2的表达水平明显降低 ,1种细胞系Ndrg2表达水平没有明显变化 ,与蛋白印迹结果一致 .结论 :Ndrg2在某些乳腺肿瘤组织和乳腺癌细胞系中呈低表达 ,提示其可能对乳腺肿瘤的发生或发展有重要作用 ,这不仅为研究乳腺癌的发病机制进一步提供了线索 。 展开更多
关键词 NDRG2 乳腺肿瘤 逆转录聚合酶链反应 印迹法 蛋白质
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实时定量RT-PCR检测急性白血病患者骨髓细胞WT1基因表达 被引量：20
13
作者 顾伟英 陈子兴 +8 位作者 曹祥山 胡绍燕 朱江 王志林 严峰 王玮 岑建农 沈慧玲 钱军 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期728-731,共4页
目的探讨急性白血病 (AL)患者骨髓细胞WT1基因表达水平。方法建立实时定量RT PCR方法 ,检测了 10 8例AL患者和 2 3例非白血病患者骨髓细胞WT1基因及内参照 β 胆色原脱氢酶 (GAPDH)基因的表达水平。结果初诊与复发AL患者骨髓细胞WT1基... 目的探讨急性白血病 (AL)患者骨髓细胞WT1基因表达水平。方法建立实时定量RT PCR方法 ,检测了 10 8例AL患者和 2 3例非白血病患者骨髓细胞WT1基因及内参照 β 胆色原脱氢酶 (GAPDH)基因的表达水平。结果初诊与复发AL患者骨髓细胞WT1基因中位表达水平经GAPDH校正后分别为 75 .10和 89.5 6 ,明显高于完全缓解组和对照组 (分别为 2 .0 7和 1.5 1) ,对照组与完全缓解组之间及初诊与复发组之间无统计学差异 ;70例初诊AL中急性淋巴细胞白血病、M1、M2 、M3 亚型WT1基因表达水平明显高于M5,即粒系表达明显高于单核系 ,且WT1基因表达水平与白细胞计数、骨髓原始细胞比例、mdr1基因表达无相关性 ,但与染色体核型有关。对其中 2例患者动态检测WT1基因表达可提示白血病复发情况。结论WT1基因在AL患者骨髓细胞高表达 ,可作为白血病疗效评价及监测残留病灶的指标。 展开更多
关键词 WT1基因 骨髓细胞 患者 表达水平 AL 初诊 急性白血病 实时定量 GAPDH 高表达
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ET-1促进人血管平滑肌细胞的表型变化和增殖 被引量：16
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作者 张英民 党红波 +1 位作者 王克强 葛均波 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期215-218,共4页
目的：研究ET-1与VSMC表型变化和增殖的关系。方法：用MTT法研究ET-1对平滑肌细胞增殖的影响，3~H-TdR法测定ET-1对平滑肌细胞DNA合成的作用，流式细胞仪法观察对平滑肌细胞增殖周期的影响，逆转录聚合酶链法观察对平滑肌细胞表型变化... 目的：研究ET-1与VSMC表型变化和增殖的关系。方法：用MTT法研究ET-1对平滑肌细胞增殖的影响，3~H-TdR法测定ET-1对平滑肌细胞DNA合成的作用，流式细胞仪法观察对平滑肌细胞增殖周期的影响，逆转录聚合酶链法观察对平滑肌细胞表型变化的影响。结果：与对照组比较，ET-1明显促进平滑肌细胞增殖；促进平滑肌细胞DNA合成；促进平滑肌细胞从G_0期向S期的转变，G_0/G_1期细胞百分比明显降低，而S期细胞百分比增加；促进平滑肌细胞的表型转化，从第2d到第7d随时间延长1-Caldesmon表达逐渐增高。结论：ET-1促进平滑肌细胞表型转化，同时对平滑肌细胞增殖亦有明显的促进作用。 展开更多
关键词 血管平滑肌细胞 内皮素-1 细胞表型 细胞增殖 MTT法 ^3H-TdR法
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中药双龙丸对血管平滑肌细胞血小板衍化生长因子-A及单核细胞趋化蛋白-1mRNA表达的影响 被引量：17
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作者 王会玲 胡婉英 《中国中西医结合杂志》 CSCD 北大核心 2000年第8期612-615,共4页
目的 :探讨中药双龙丸干预动脉粥样硬化的分子学作用机制 ,主要是对血小板衍化生长因子 A(PDGF A)、单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)mRNA表达的影响。方法 :采用培养的家兔动脉粥样硬化细胞模型 ,用高脂血清造成动脉粥样硬化细胞模型 ,用中... 目的 :探讨中药双龙丸干预动脉粥样硬化的分子学作用机制 ,主要是对血小板衍化生长因子 A(PDGF A)、单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)mRNA表达的影响。方法 :采用培养的家兔动脉粥样硬化细胞模型 ,用高脂血清造成动脉粥样硬化细胞模型 ,用中药血清药理学方法将药物血清作用于细胞模型 ,采用逆转录 -聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,观察双龙丸对PDGF A、MCP 1mRNA表达水平的影响。结果 :高脂血清能刺激细胞表达PDGF A、MCP 1mRNA ,双龙丸药物血清能使PDGF A、MCP 1mRNA表达水平降低。结论 :双龙丸能抑制细胞自分泌生长因子功能 ,这是其干预动脉粥样硬化的药理作用机制之一。 展开更多
关键词 双龙丸 动脉粥样硬化 中医药疗法 PDGF-A MCP-1
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促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤的临床病理学研究 被引量：24
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作者 杨吉龙 徐维萍 +2 位作者 王坚 朱雄增 张仁元 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期650-655,共6页
目的探讨促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤(DSRCT)的细胞学和组织学形态、免疫学表型以及在石蜡包埋组织中检测EWSWT1融合基因的可行性。方法回顾性复习15例DSRCT的临床资料、1例细胞学形态、14例组织学形态和15例免疫学表型,采用逆转录聚... 目的探讨促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤(DSRCT)的细胞学和组织学形态、免疫学表型以及在石蜡包埋组织中检测EWSWT1融合基因的可行性。方法回顾性复习15例DSRCT的临床资料、1例细胞学形态、14例组织学形态和15例免疫学表型,采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法检测1例石蜡包埋组织中的EWSWT1融合性mRNA,经测序证实并确定融合类型。结果13例为男性,2例为女性,年龄范围12～38岁,平均23.8岁。临床上多表现为腹部不适、腹胀、腹痛和腹部包块,伴有呕心、便秘和体重减轻等症状。体检显示,多数病例于中下腹可触及质硬肿块,境界不清,活动度差。影像学检查显示腹腔或盆腔内多个或单个结节状肿块,直径为3～25cm,平均8.6cm。细胞学涂片显示,在出血性的背景中可见散在、成簇的小圆细胞,核染色深,核仁不清,核分裂象易见,胞质稀少。组织学上,肿瘤由深染的小圆细胞、卵圆形细胞及短梭形细胞组成,呈大小不一、外形不规则的巢状排列,大的瘤巢中央可见坏死,瘤巢之间为大量增生的纤维结缔组织,可伴有玻璃样变性。所有病例均弥漫强阳性表达AE1/AE3、波形蛋白、结蛋白和神经特异性烯醇化酶,部分病例尚表达CAM5.2、上皮膜抗原、CD57、嗜铬粒素A、突触素和WT1,不表达肌生成素、CK5/6、CD117、钙(视)网膜蛋白和CD99。RTPCR检测出EWSWT1融合性mRNA,测序结果显示由EWS基因的7号外显子与WT1基因的8号外显子融合所产生,融合性基因含有KTS序列。结论(1)DSRCT是一种好发于青少年男性腹腔和盆腔内、具有多向性分化的高度恶性小圆细胞肿瘤。(2)瘤细胞特征性的波形蛋白和结蛋白核旁点状染色,在DSRCT的诊断和鉴别诊断中具有十分重要的价值。(3)在石蜡包埋的DSRCT组织中能检测出EWSWT1融合基因的转录产物,RTPCR可作为DSRCT一项实用的分子遗传学诊断手段。 展开更多
关键词 软组织肿瘤 逆转录聚合酶链反应 基因融合
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2009-2013年南京市流感流行病学特征分析 被引量：24
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作者 Michael James Cunningham 李伟 +1 位作者 资海荣 卫平民 《中华疾病控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期3-7,共5页
目的描述2009-2013年期间南京市流感的流行病学规律和特点。方法流感样本来源于流感样病例,利用逆转录聚合酶链反应确定阳性病例以及流感分型。采用Excel 2007整理数据和SPSS 19.0进行统计分析。结果 2009-2013年间,南京地区共有流感样... 目的描述2009-2013年期间南京市流感的流行病学规律和特点。方法流感样本来源于流感样病例,利用逆转录聚合酶链反应确定阳性病例以及流感分型。采用Excel 2007整理数据和SPSS 19.0进行统计分析。结果 2009-2013年间,南京地区共有流感样病例17 906例,其中阳性2 990例,流感阳性率为16.7%。流感阳性率随月份、季度和年份而改变,南京阳性率高峰主要出现在秋冬季,也伴有一些夏季的高峰。甲型流感主要在夏季、秋季和冬季流行,乙型流感主要在冬季流行。2009-2013年南京优势毒株为甲型H1N1,H3N2和乙型流感。H3N2通常在秋季和夏季达到流行高峰,甲型H1N1大流行在秋季出现高峰,乙型流感主要在冬季流行。南京地区在秋季和初冬出现流行高峰,但有些年份,在夏季和初秋出现H3N2流行高峰。采用移动流行病学方法建立标准模型,一般流感在南京的流行大约持续11周,流行阈值为25.21%,流感阳性的背景率为5.82%。结论南京流感高峰通常一年发生一次,但在有些年份中,会出现两个流感高峰时期。 展开更多
关键词 流感 人 流行病学 逆转录聚合酶链反应
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兔骨髓干细胞向软骨细胞分化用于半月板组织工程重建 被引量：22
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作者 徐青镭 吴海山 +1 位作者 周维江 万年宇 《中国临床康复》 CSCD 2003年第6期912-913,T002,共3页
目的:以特定的细胞因子对其进行刺激和诱导,使已经体外分离并扩增的兔骨髓间充质干细胞向软骨细胞谱系分化,为半月板组织工程重建提供种子细胞。方法:将已分离并经体外传代培养扩增的兔骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)在... 目的:以特定的细胞因子对其进行刺激和诱导,使已经体外分离并扩增的兔骨髓间充质干细胞向软骨细胞谱系分化,为半月板组织工程重建提供种子细胞。方法:将已分离并经体外传代培养扩增的兔骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)在用碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)和转化生长因子β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)协同刺激后,用逆转录-聚合酶链式反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)的方法从分子水平寻找进入软骨细胞分化谱系的证据。结果:已分离并经体外扩增的兔骨髓MSCs在用bFGF和TGF-β1协同刺激后,用RT-PCR的方法探明有pC-I的编码基因表达,证明其已经进入软骨细胞分化谱系。结论:bFGF和TGF-β1能够刺激MSCs的体外增殖并且使其进入软骨细胞分化谱系,为半月板组织工程重建提供了可靠的自体来源种子细胞。 展开更多
关键词 兔 骨髓干细胞 软骨细胞 分化 半月板 组织工程 成纤维细胞生长因子 碱性 转化生长因子
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肿瘤细胞系血管内皮生长因子及其受体共表达的研究 被引量：14
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作者 傅建新 王玮 +4 位作者 白霞 王玲 朱子玲 陈子兴 阮长耿 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1217-1221,共5页
背景与目的:血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)旁分泌在肿瘤血管新生中的作用已得到证实,但其自分泌作用尚不清楚。本研究的目的是分析VEGF及其受体(Flt-1和KDR)基因在恶性肿瘤细胞系中的共表达。方法:以看家基... 背景与目的:血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)旁分泌在肿瘤血管新生中的作用已得到证实,但其自分泌作用尚不清楚。本研究的目的是分析VEGF及其受体(Flt-1和KDR)基因在恶性肿瘤细胞系中的共表达。方法:以看家基因为内标,采用半定量逆转录-聚合酶链反应分析VEGF及其受体基因在30种肿瘤细胞系和4种内皮细胞中的表达水平。结果:在29种肿瘤细胞系和3种内皮细胞系检测到中度以上的VEGF基因表达,而人脐静脉内皮细胞仅有低表达;Flt-1基因表达分别见于50%(6/12)的血液肿瘤,28%(5/18)的实体瘤细胞和2种内皮细胞;仅在16.7%(2/12)的血液肿瘤,33.3%(6/18)实体瘤细胞和2种内皮细胞检测到KDR基因表达;而ECV304细胞并无Flt-1或KDR基因的表达。结论:VEGF基因高表达是肿瘤细胞的重要特征,而VEGF及其受体共表达表明肿瘤细胞系中存在自分泌途径。 展开更多
关键词 肿瘤细胞 内皮生长因子 生长因子受体 基因表达/分析 逆转录聚合酶链反应
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洛沙坦降低糖尿病大鼠肾组织膜3型基质金属蛋白酶mRNA的表达 被引量：16
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作者 丁鹤林 徐明彤 +6 位作者 陈黎红 黎锋 邓庆丽 王佑民 傅祖植 程桦 钟光恕 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期264-267,共4页
目的　研究洛沙坦对糖尿病大鼠肾组织膜 3型基质金属蛋白酶 (MT3 MMP)mRNA表达的影响。方法　雄性Wistar大鼠分为 3组 ,A组 (11只 )为正常对照组 ,B组 (11只 )为糖尿病未干预组 ,C组 (9只 )为糖尿病大鼠洛沙坦 (血管紧张素Ⅱ 1型受体阻... 目的　研究洛沙坦对糖尿病大鼠肾组织膜 3型基质金属蛋白酶 (MT3 MMP)mRNA表达的影响。方法　雄性Wistar大鼠分为 3组 ,A组 (11只 )为正常对照组 ,B组 (11只 )为糖尿病未干预组 ,C组 (9只 )为糖尿病大鼠洛沙坦 (血管紧张素Ⅱ 1型受体阻断剂 )干预组。以链脲佐菌素 (STZ)制备糖尿病大鼠模型。大鼠饲养 18周后取出肾脏检测MT3 MMPmRNA表达、电镜检测大鼠肾小球基底膜厚度及系膜基质密度 (系膜基质面积 /系膜面积 ) ;收集 2 4h尿测定尿白蛋白排泄量 (UAE)。mRNA表达采用RT PCR ,以 β actin作为内对照。UAE测定采用大鼠白蛋白特异的酶免疫分析试剂盒。结果　肾组织MT3 MMPmRNA表达在B组大鼠 (1.37± 0 .96 )显著高于A组 (0 .75± 0 .34,P <0 .0 5 )和C组 (0 .75± 0 .30 ,P <0 .0 5 ) ,而后两组比较差异无显著性。UAE、肾小球基底膜厚度及系膜基质密度在B组大鼠均显著高于A组和C组 (P <0 .0 5 )。结论　STZ糖尿病大鼠肾组织MT3 MMPmRNA表达明显增加 ,洛沙坦处理能延缓糖尿病肾病的发生 ,与此同时降低MT3 MMPmRNA表达。提示MT3 MMP与糖尿病肾病发病可能有一定关系。 展开更多
关键词 MRNA 实验性糖尿病 糖尿病肾病 洛沙坦 基质金属蛋白酶 逆转录聚合酶链反应
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