血管瘤型禽白血病的实验室诊断 被引量：7

1

作者 罗明星 周碧君 +4 位作者 史开志 杨均 汪德生 安廷贵 杨峰 《山地农业生物学报》 2009年第1期46-50,共5页

采用血清学方法和分子生物学技术对某蛋鸡场感染鸡进行实验室诊断,采用禽白血病A或B亚群抗体检测试剂盒对该鸡场的血清样本进行检测,抗体阳性率达到70%(7/10);针对ALV群特异性抗原P27基因进行PCR扩增,血液、肝脏病料样本中核酸的检出率... 采用血清学方法和分子生物学技术对某蛋鸡场感染鸡进行实验室诊断,采用禽白血病A或B亚群抗体检测试剂盒对该鸡场的血清样本进行检测,抗体阳性率达到70%(7/10);针对ALV群特异性抗原P27基因进行PCR扩增,血液、肝脏病料样本中核酸的检出率分别为66.7%(4/6)、75%(3/4);取ALV囊膜糖蛋白gp85基因的扩增产物进行酶切分析,扩增的目的片断中存在BglⅡ和SspⅠ酶切位点,BamHⅠ不能切割PCR产物。试验结果证实本次疫病是由ALV-A亚群病毒引起的血管瘤型白血病。 展开更多

关键词 禽白血病病毒(ALV) 血管瘤型白血病 血清学 PCR鉴定 酶切分析

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小龙虾(Procambarus clarkii)加工前后优势腐败菌的分离与鉴定 被引量：10

2

作者 邓灵 赵康 +3 位作者 夏开 圣莎丽 解华东 毕旺来 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第18期100-104,共5页

以原料小龙虾和卤制加工后的即食小龙虾为对象研究其优势腐败菌种类,为后续研发适宜的杀菌工艺提供理论依据。采用传统平板分离法,从原料小龙虾与开始腐败的即食小龙虾中分别分离出优势腐败菌,通过菌落形态观察、革兰氏染色镜检对微生... 以原料小龙虾和卤制加工后的即食小龙虾为对象研究其优势腐败菌种类,为后续研发适宜的杀菌工艺提供理论依据。采用传统平板分离法,从原料小龙虾与开始腐败的即食小龙虾中分别分离出优势腐败菌,通过菌落形态观察、革兰氏染色镜检对微生物种类进行初步分类。采用16S rDNA PCR扩增、限制性内切酶酶切分析以及测序的方法,进行了菌种鉴定试验。结果表明,原料小龙虾优势腐败菌为阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、溶酪巨球菌(Macrococcus caseolyticus)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophilia)、微小杆菌(Exiguobacterium indicum)和芽胞杆菌属(Bacillus spp.);即食小龙虾优势腐败菌仅检测到以蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)与苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)为代表的芽孢杆菌,而其他类型的细菌在卤制加工过程中已被灭活。小龙虾加工前后优势腐败菌鉴定结果对比分析可知,高温卤制工艺难以除灭原料小龙虾中的芽孢杆菌,芽孢杆菌仍存活导致即食小龙虾腐败。 展开更多

关键词 小龙虾 优势腐败菌 菌种鉴定 16S rDNA测序 限制性内切酶消化

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银耳芽孢基因组DNA五种提取方法的比较 被引量：6

3

作者 刘娟 马爱民 +1 位作者 杨江涛 李大方 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第6期248-251,共4页

采用酚仿法、CTAB法、蛋白酶K法、氯化苄法和盐析法五种方法分别提取银耳芽孢基因组DNA,用吸光度估计DNA的纯度和得率、RAPD(随机扩增多态DNA)技术和限制性内切酶酶切反应评价DNA的质量。结果表明:五种方法所提的DNA纯度及产率有差别,... 采用酚仿法、CTAB法、蛋白酶K法、氯化苄法和盐析法五种方法分别提取银耳芽孢基因组DNA,用吸光度估计DNA的纯度和得率、RAPD(随机扩增多态DNA)技术和限制性内切酶酶切反应评价DNA的质量。结果表明:五种方法所提的DNA纯度及产率有差别,氯化苄法和蛋白酶K法的产率要高于另外三种方法,但CTAB法所提DNA纯度最高。综合而言,CTAB法是五种方法中最为适合银耳芽孢基因组DNA提取的方法。 展开更多

关键词 银耳 芽孢 DNA提取 RAPD 限制性内切酶酶切

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限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选检测KRAS基因第12位稀有突变

4

作者 周翠兰 陈婕 +2 位作者 许云思 付乙人 彭翠英 《中南医学科学杂志》 CAS 2024年第1期26-30,共5页

目的研究限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选检测KRAS基因第12位密码子稀有突变的可行性。方法将采用限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选检测方法作为实验组,限制性内切酶酶切联合蓝白斑筛选检测方法作为对照组。对照组将... 目的研究限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选检测KRAS基因第12位密码子稀有突变的可行性。方法将采用限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选检测方法作为实验组,限制性内切酶酶切联合蓝白斑筛选检测方法作为对照组。对照组将KRAS基因第12位密码子突变型(MUT)/野生型(WT)(MUT/WT 12)质粒按0∶1、1∶300、1∶1000、1∶3000的比例混合,限制性内切酶酶切PCR产物,酶切后产物进行蓝白斑筛选。实验组将MUT/WT 12质粒按0∶1、1∶3000、1∶10000、1∶30000的比例混合,在对照组方法的基础上酶切产物去磷酸化后再蓝白斑筛选。比较两组蓝白斑克隆数。限制性内切酶酶切鉴定实验组MUT/WT 12为1∶30000的阳性克隆,一代测序阳性克隆验证插入片段的序列。采用限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选验证26例肺癌病例游离DNA的KRAS基因第12位稀有突变。结果对照组1∶3000的培养皿上白色克隆17个,蓝色克隆2329个,白色/蓝色克隆为1/137;而实验组1∶30000的培养皿上白色克隆23个,蓝色克隆394个,白色/蓝色克隆为1/17,1∶30000实验组白色/蓝色克隆比例明显高于1∶3000对照组。实验组1∶30000培养血上5个阳性克隆酶切鉴定出3个阳性,其插入片段为KRAS第12位突变片段。限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选26例肺癌病例可检测出2例为KRAS基因第12位密码子突变。结论采用限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选可检测出1∶30000 KRAS基因稀有突变。 展开更多

关键词 限制性内切酶酶切KRAS基因 蓝白斑技术 去磷酸化 稀有突变

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三种全血提取基因组DNA方法的比较及Genomix方法的改良 被引量：6

5

作者 胡盛平 朴英姬 +1 位作者 陈玲 张庆英 《汕头大学医学院学报》 2001年第4期263-265,共3页

目的 :选择一种高效、简便快速、价格合适的从全血中提取基因组DNA的方法。方法 :分别采用 3种不同的方法从全血中提取基因组DNA ,比较了 3种方法提取的DNA的质量 ,以及各种方法所需时间及其费用。对其中的一种方法进行了改良。结果 :3... 目的 :选择一种高效、简便快速、价格合适的从全血中提取基因组DNA的方法。方法 :分别采用 3种不同的方法从全血中提取基因组DNA ,比较了 3种方法提取的DNA的质量 ,以及各种方法所需时间及其费用。对其中的一种方法进行了改良。结果 :3种方法提取的DNA的质量都能达到相关分子生物学实验的要求 ,但在操作程序、价格等方面存在差别。结论 :Genomix法操作简单、快速、灵活性好、价格便宜 。 展开更多

关键词 DNA提取 PCR 限制性酶切 Genomix GDNA

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吉林省非综合征型耳聋分子病因学分析——线粒体DNA12SrRNA1555位点突变基因筛查 被引量：4

6

作者 陈金霞 张桂茹 《中国实验诊断学》 2007年第6期782-785,共4页

目的探讨吉林省耳聋人群的病因学特征,考察本地区非综合征型耳聋线粒体基因(mtDNA)12SrRNAA1555G突变频率。方法收集长春市聋哑学校129例NSHI学生外周静脉血,提取mtDNA,PCR扩增目的基因片段,限制性内切酶(Alw26I)酶切分析,检测mtDNA A5... 目的探讨吉林省耳聋人群的病因学特征,考察本地区非综合征型耳聋线粒体基因(mtDNA)12SrRNAA1555G突变频率。方法收集长春市聋哑学校129例NSHI学生外周静脉血,提取mtDNA,PCR扩增目的基因片段,限制性内切酶(Alw26I)酶切分析,检测mtDNA A555G突变。结果被检测的129例NSHI学生(AmAn耳毒性致聋者37例),mtDNA A1555G突变阳性者3例,其中2例为初步确定为AmAn耳毒性致聋者,推测本地区NSHI耳聋mtDNAA1555G的突变频率为2.33%,由AmAn耳毒性致NSHI人群中mtDNA A1555G的突变频率为5.41%。结论AmAn耳毒性致聋是吉林省非综合征型耳聋的重要致病原因。通过对特定人群进行mtDNA A1555G突变基因的筛查,并对阳性个体进行早期干预,可降低药物性耳聋的发病率。 展开更多

关键词 非综合征型耳聋 MTDNA 基因突变 筛查 限制性内切酶分析

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一种简便的DNA定量分子量标准的制备 被引量：3

7

作者 王文华 葛常辉 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期62-64,共3页

目的:制备一种具有琼脂糖凝胶电泳定量功能的DNA分子量标准。方法:以pMD18-TSimple载体为基础骨架构建了长度为4.7kb的质粒,应用定点突变的方法,在载体上分别间隔100bp、200bp、400bp、800bp、1200bp处,加入了HindⅢ限制性内切酶的酶切... 目的:制备一种具有琼脂糖凝胶电泳定量功能的DNA分子量标准。方法:以pMD18-TSimple载体为基础骨架构建了长度为4.7kb的质粒,应用定点突变的方法,在载体上分别间隔100bp、200bp、400bp、800bp、1200bp处,加入了HindⅢ限制性内切酶的酶切位点,将该质粒扩增后并应用HindⅢ酶切后,1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果:获得的分子量条带大小依次为100bp、200bp、400bp、800bp、1200bp和2000bp,每次使用4μl可获得质量范围为10ng、20ng、40ng、80ng、120ng和200ng的定量标准品。结论:应用该方法制备标准品,具有制备简单、成本低、定量快速等优点。 展开更多

关键词 DNA分子量标准 载体构建 限制性内切酶酶切

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用胞质线粒体DNA电泳分析对玉米Y_(Ⅱ-1)型不育胞质归群 被引量：2

8

作者 秦泰辰 张亚兵 +2 位作者 邓德祥 徐明亮 卞云龙 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 1997年第3期146-148,共3页

以玉米同核异质不育系为材料（自交系Ｂ７７为核背景），应用限制性核酸内切酶（ＸｈｏＩ和ＢａｍＨＩ）消化不育胞质ＹⅡ－１型、Ｓ群、Ｔ群、Ｃ群和正常可育胞质（Ｎ）的线粒体ＤＮＡ，并经琼脂糖凝胶电泳。试验结果初步表明：ＹⅡ－... 以玉米同核异质不育系为材料（自交系Ｂ７７为核背景），应用限制性核酸内切酶（ＸｈｏＩ和ＢａｍＨＩ）消化不育胞质ＹⅡ－１型、Ｓ群、Ｔ群、Ｃ群和正常可育胞质（Ｎ）的线粒体ＤＮＡ，并经琼脂糖凝胶电泳。试验结果初步表明：ＹⅡ－１型不育胞质线粒体ＤＮＡ电泳图谱与Ｓ群有显著差异，酶切电泳图谱与Ｔ群不育胞质也有较大差别，与Ｃ群不育胞质有微小差异。因此，有待应用ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ技术对ＹⅡ－１不育胞质作进一步分析。 展开更多

关键词 玉米 雄性不育胞质 线粒体DNA 核酸内切酶 归群

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恶性疟原虫SSUrDNA特定片段的体外扩增及鉴定 被引量：3

9

作者 万磊 陈培霞 +2 位作者 薛采芳 刘忠湘 姜绍谆 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第3期169-171,共3页

根据已知疟原虫、其它寄生人体原虫及人的小亚单位核糖体核糖核酸基因（ＳＳＵｒＤＮＡ）编码区序列，借助计算机核酸序列软件分析，设计出一对用于恶性疟原虫（Ｐ．ｆ．）ＳＳＵｒＤＮＡ特定片段扩增的引物。采用双温度点聚合酶链反应... 根据已知疟原虫、其它寄生人体原虫及人的小亚单位核糖体核糖核酸基因（ＳＳＵｒＤＮＡ）编码区序列，借助计算机核酸序列软件分析，设计出一对用于恶性疟原虫（Ｐ．ｆ．）ＳＳＵｒＤＮＡ特定片段扩增的引物。采用双温度点聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，从我国Ｐ．ｆ．ＦＣＣ／ＹＮ茅芽株红内期基因组ＤＮＡ中，扩增出约５７０个碱基对（ｂｐ）的ＤＮＡ片段，与预期长度相符；而间日疟原虫（Ｐ．ｖ．）、利什曼原虫（Ｌ．ｄ．）、弓形虫（Ｔ．ｇ．）及人白细胞ＤＮＡ样本均无此扩增带出现。扩增片段经限制性内切酶消化和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交分析，证实为Ｐ．ｆ．ＳＳＵｒＤＮＡ目的片段。 展开更多

关键词 疟原虫 聚合酶链反应 SSUrDNA

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超纯水对限制性内切酶酶切反应的影响

10

作者 曲适 聂文营 +5 位作者 丁旭 郭佳琦 狄文慧 徐连秀 张超可 郝峰 《吉林医药学院学报》 2019年第5期327-328,共2页

目的 研究超纯水对限制性内切酶酶切结果的影响。方法 酶切体系中分别使用久置的超纯水和现用现配制的超纯水,以含酶切位点BamHⅠ和EcorⅤ的YFP-pcDNA3.1质粒为实验对象,双酶切后凝胶成像系统检测DNA琼脂糖凝胶电泳后的酶切结果。结果 ... 目的 研究超纯水对限制性内切酶酶切结果的影响。方法 酶切体系中分别使用久置的超纯水和现用现配制的超纯水,以含酶切位点BamHⅠ和EcorⅤ的YFP-pcDNA3.1质粒为实验对象,双酶切后凝胶成像系统检测DNA琼脂糖凝胶电泳后的酶切结果。结果 应用久置的超纯水酶切结果有明显弥散现象,而更换现配制的超纯水,未见酶切弥散现象。结论 超纯水在分子生物学酶切实验中扮演重要角色,酶切实验应选用新制备的超纯水。 展开更多

关键词 超纯水 限制性内切酶 琼脂糖凝胶电泳 限制性内切酶酶切

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一种不经热浴从双孢蘑菇子实体中提取DNA的新方法(英文) 被引量：1

11

作者 姬宏超 万艳娟 +1 位作者 莫美华 徐学锋 《食用菌学报》 北大核心 2012年第2期8-14,共7页

介绍一种不经热浴快速从双孢蘑菇子实体中提取DNA的新方法,并与传统的CTAB和SDS法相比较,结果显示:该方法得到的DNA完整性好,时间短,步骤少,有毒试剂用量少,在提取DNA的质量、得率、时间及完整性等方面都优于传统的CTAB和SDS法,为食药... 介绍一种不经热浴快速从双孢蘑菇子实体中提取DNA的新方法,并与传统的CTAB和SDS法相比较,结果显示:该方法得到的DNA完整性好,时间短,步骤少,有毒试剂用量少,在提取DNA的质量、得率、时间及完整性等方面都优于传统的CTAB和SDS法,为食药用菌子实体DNA的提取参考。 展开更多

关键词 双孢蘑菇 DNA提取 内切酶消解

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用于慢病毒包装的高纯度质粒DNA的大量制备和应用 被引量：1

12

作者 方红 杨文理 何涛 《泸州医学院学报》 2014年第3期257-260,共4页

目的:建立简便易行、成本低廉和安全可靠的高纯度质粒大量制备方法,探讨其在分子生物学研究中的应用。方法:培养含目的质粒的菌株,运用改良后的碱裂解法大量提取质粒DNA并进行纯化,微量核酸仪测定质粒DNA的产量及纯度;采用琼脂糖凝胶电... 目的:建立简便易行、成本低廉和安全可靠的高纯度质粒大量制备方法,探讨其在分子生物学研究中的应用。方法:培养含目的质粒的菌株,运用改良后的碱裂解法大量提取质粒DNA并进行纯化,微量核酸仪测定质粒DNA的产量及纯度;采用琼脂糖凝胶电泳、限制性核酸内切酶酶切、转染哺乳动物细胞和慢病毒包装,鉴定质粒DNA的质量及转染效率。结果:本质粒提取方法获得质粒DNA产量为2.5 mg/L菌液,OD260/OD280=1.91;以超螺旋质粒DNA为主;限制性核酸内切酶可完全酶切;哺乳动物细胞转染效率在85%以上;可用于慢病毒包装。结论:本方法抽提质粒DNA操作简单、经济实用,可替代质粒大量提取试剂盒获得高产优质的质粒DNA,充分满足了分子生物学实验的要求。 展开更多

关键词 质粒DNA 制备 酶切 转染 慢病毒包装

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RF-RAPD分子标记在杏鲍菇菌株鉴定上的应用 被引量：12

13

作者 宿红艳 王磊 +3 位作者 刘林德 迟晓燕 许珊珊 蔡德华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第3期264-267,共4页

本研究首先通过拮抗实验对5个不同来源供试杏鲍菇栽培菌株进行初步分类,进而采用RF-RAPD技术对供试菌株进行分析。结果显示,RF-RAPD分析结果与拮抗实验结果相一致,并且由于RF-RAPD同时采用了RFLP和RAPD两种分子标记,可更好地区分亲缘关... 本研究首先通过拮抗实验对5个不同来源供试杏鲍菇栽培菌株进行初步分类,进而采用RF-RAPD技术对供试菌株进行分析。结果显示,RF-RAPD分析结果与拮抗实验结果相一致,并且由于RF-RAPD同时采用了RFLP和RAPD两种分子标记,可更好地区分亲缘关系较近的香杏PL-3和京杏PL-10间的差异。由此可见,RF-RAPD是一种快速、准确鉴定杏鲍菇的新方法,可用于食用菌品种分类与鉴定。 展开更多

关键词 杏鲍菇 拮抗实验 限制性酶切 RAPD

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表观遗传学研究方法进展 被引量：7

14

作者 郑小国 陈亮 +1 位作者 楼巧君 罗利军 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期63-71,共9页

表观遗传调控是基因表达调控的重要组成部分,已成为当前研究的热点。目前其研究主要集中在DNA甲基化和组蛋白修饰。针对这两种表观修饰,其研究方法也取得了较大进展,一方面方法的灵敏度和特异性都在不断提高;另一方面表观修饰的检测正... 表观遗传调控是基因表达调控的重要组成部分,已成为当前研究的热点。目前其研究主要集中在DNA甲基化和组蛋白修饰。针对这两种表观修饰,其研究方法也取得了较大进展,一方面方法的灵敏度和特异性都在不断提高;另一方面表观修饰的检测正在逐步从定性检测向定量分析方向发展,从个别位点向高通量检测发展。此外,新一代测序技术的应用将大大推动表观遗传研究的发展,包括单分子实时测序法、单分子纳米孔测序法等。综述目前常用的DNA甲基化、组蛋白修饰研究方法以及最新的单分子测序技术,并对它们在表观遗传修饰检测中的应用作了简要对比分析。 展开更多

关键词 表观遗传学 DNA甲基化 组蛋白修饰 限制性内切酶酶切法 重亚硫酸盐法 染色质免疫共沉淀 单分子实时测序 单分子纳米孔测序

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杜氏藻的RF-RAPD分子系统学分析 被引量：3

15

作者 孙国华 隋正红 +2 位作者 张学成 郭健 张积军 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期157-160,共4页

关键词 杜氏盐藻 限制酶切 RAPD 分子标记

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进口饲料及肉制品中牛源性成分的PCR检测 被引量：1

16

作者 王静 徐宝梁 +2 位作者 王丙武 王曙光 董益阳 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期26-29,共4页

建立了进口饲料及肉骨粉中牛源性成分的PCR检测方法。扩增对象是牛线粒体上特异性的DNA片段 ,扩增产物为 2 71bp。样品的PCR产物经直接测序及限制性酶切片段分析 ,以进一步鉴定扩增结果。方法灵敏度实验结果显示 ,当肉骨粉样品中含有 0 ... 建立了进口饲料及肉骨粉中牛源性成分的PCR检测方法。扩增对象是牛线粒体上特异性的DNA片段 ,扩增产物为 2 71bp。样品的PCR产物经直接测序及限制性酶切片段分析 ,以进一步鉴定扩增结果。方法灵敏度实验结果显示 ,当肉骨粉样品中含有 0 1 2 5 %的牛源性成分时仍能检出。本方法简便、快速 ,灵敏 。 展开更多

关键词 进口饲料 肉制品 牛源性成分 PCR 检测

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