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人TFAR19的定点突变及其重组蛋白的表达、纯化和功能分析 被引量：4
1
作者 曹志敏 张颖妹 +1 位作者 陈英玉 马大龙 《北京医科大学学报》 CSCD 2000年第4期306-309,共4页
目的 :了解凋亡相关新基因TFAR19编码蛋白分子中潜在的Ser10 0 磷酸化位点与其促凋亡效应的关系。方法 :利用重叠延伸PCR定点突变技术构建TFAR19Ser10 0 →Ala10 0 突变体 ,用DNA测序技术验证 ,大肠杆菌表达 ,离子交换技术纯化重组突变... 目的 :了解凋亡相关新基因TFAR19编码蛋白分子中潜在的Ser10 0 磷酸化位点与其促凋亡效应的关系。方法 :利用重叠延伸PCR定点突变技术构建TFAR19Ser10 0 →Ala10 0 突变体 ,用DNA测序技术验证 ,大肠杆菌表达 ,离子交换技术纯化重组突变蛋白 ,将其加入培养的白血病细胞株HL 6 0 ,通过PI染色 ,流式细胞仪分析 ,观察突变重组蛋白的促凋亡效应。结果 :构建成TFAR19Ala10 0 突变体 ,并经DNA测序所证实 ,在大肠杆菌中获得了高水平表达 ,Westernblot表明突变型重组蛋白与野生型具有相同的免疫学活性 ,流式细胞仪分析发现突变蛋白对撤除血清的HL 6 0细胞具有与野生蛋白相似的剂量依赖性促凋亡效应。结论 :TFAR19分子中潜在的Ser10 0 磷酸化位点对其促凋亡效应无影响 。 展开更多
关键词 TFAR19 点突变 凋亡 氧化磷酸化 重组蛋白质
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卵巢癌抗独特型单链抗体6B11scFv/hGM-CSF融合蛋白质的表达及活性测定 被引量：1
2
作者 杨飞雪 钱和年 +3 位作者 冯捷 崔恒 付天云 叶雪 《北京医科大学学报》 CSCD 1998年第5期397-399,403,共4页
目的：为提高卵巢癌抗独特型抗体的免疫原性，构建表达６Ｂ１１ｓｃＦｖ／ｈＧＭＣＳＦ融合蛋白质，并对其活性进行测定。方法：用ＤＮＡ重组技术，将以前构建的６Ｂ１１ｓｃＦｖＬｉｎｋｅｒｈＧＭＣＳＦ融合基因克隆至ｐＥＴ... 目的：为提高卵巢癌抗独特型抗体的免疫原性，构建表达６Ｂ１１ｓｃＦｖ／ｈＧＭＣＳＦ融合蛋白质，并对其活性进行测定。方法：用ＤＮＡ重组技术，将以前构建的６Ｂ１１ｓｃＦｖＬｉｎｋｅｒｈＧＭＣＳＦ融合基因克隆至ｐＥＴ１６（ａ＋）表达载体，表达可溶蛋白质。用ＥＬＩＳＡ分析技术和细胞增殖试验测定融合蛋白质的抗体和细胞因子活性。结果：融合蛋白质实现可溶表达，能与ＣＯＣ１６６９单抗和小鼠抗人ＧＭＣＳＦ单抗特异结合，并能刺激ＧＭＣＳＦ依赖株增殖。结论：融合蛋白质保留了２种蛋白质的活性。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 抗独特型抗体 CSF 免疫学
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抗卵巢癌单链免疫毒素的载体构建及高效表达 被引量：1
3
作者 尤芳蕾 冯捷 +3 位作者 成夜霞 钱和年 周萍 叶雪 《北京医科大学学报》 CSCD 2000年第4期347-350,共4页
目的 :构建抗卵巢癌单链抗体 183B2 ScFv与假单孢外毒素 (peudononasexotoxin ,PE38)的融合蛋白表达载体并制备抗人卵巢癌单链免疫毒素蛋白 183B2 ScFvPE38,为卵巢癌导向治疗打下基础。方法 :采用基因工程技术 ,经过 3次亚克隆 ,将编码... 目的 :构建抗卵巢癌单链抗体 183B2 ScFv与假单孢外毒素 (peudononasexotoxin ,PE38)的融合蛋白表达载体并制备抗人卵巢癌单链免疫毒素蛋白 183B2 ScFvPE38,为卵巢癌导向治疗打下基础。方法 :采用基因工程技术 ,经过 3次亚克隆 ,将编码单链抗体的基因及编码毒素的基因亚克隆至原核表达载体pET30a(+ )上 ,并在IPTG的诱导下进行表达。采用直接ELISA及细胞杀伤对抗体及毒素部分的活性进行检查。结果 :表达蛋白183B2 ScFvPE38具有较好的抗体活性及毒素活性。结论 :抗卵巢癌单链免疫毒素 183B2 ScFvPE38具有良好的免疫学活性及生物学活性 。 展开更多
关键词 药物载体 卵巢肿瘤 生物疗法 单链免疫毒素
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