期刊文献+
共找到9篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
流行性腹泻病毒M基因与甲病毒载体重组RNA的构建 被引量:14
1
作者 余丽芸 侯喜林 《动物医学进展》 CSCD 2005年第5期73-76,共4页
将猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M基因导入甲病毒载体(plasmid Semliki ForestViru,pSFV) ,研究该基因及其编码蛋白的表达。首先将扩增的病毒M 基因导入pSFV的SP6 启动子下游。用Spe Ⅰ酶将pSFV M重组质粒DNA 线性化,再将其体外转录成5′末... 将猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M基因导入甲病毒载体(plasmid Semliki ForestViru,pSFV) ,研究该基因及其编码蛋白的表达。首先将扩增的病毒M 基因导入pSFV的SP6 启动子下游。用Spe Ⅰ酶将pSFV M重组质粒DNA 线性化,再将其体外转录成5′末端含帽子结构的重组RNA。然后通过电穿孔法将此重组RNA转染BHK 21 细胞,收集病毒样粒子用于感染BHK 21 细胞。采用细胞免疫化学的方法对转染和感染细胞的表达产物进行分析。pSFV M RNA 转染和病毒粒子感染哺乳动物细胞表达的M 蛋白,可与PEDV多克隆抗体起特异反应,证明体外转录的重组RNA 含有PEDV M的特异序列。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 M基因 甲病毒载体 重组rna
下载PDF
流行性腹泻病毒E基因与pSFV重组RNA的构建 被引量:2
2
作者 余丽芸 侯喜林 《黑龙江八一农垦大学学报》 2005年第1期47-50,共4页
将猪流行性腹泻病毒(PEDV)的E基因导入甲病毒载体(pSFV) ,研究该基因及其编码蛋白的表达。首先将扩增的病毒E基因导入pSFV 的Sp6启动子下游。用SpeⅠ酶将pSFV- E重组质粒DNA线性化,再将其体外转录成5′末端含帽子结构的重组RNA。然后通... 将猪流行性腹泻病毒(PEDV)的E基因导入甲病毒载体(pSFV) ,研究该基因及其编码蛋白的表达。首先将扩增的病毒E基因导入pSFV 的Sp6启动子下游。用SpeⅠ酶将pSFV- E重组质粒DNA线性化,再将其体外转录成5′末端含帽子结构的重组RNA。然后通过电穿孔法将此重组RNA转染BHK21细胞,收集病毒样粒子用于感染BHK21细胞。采用细胞免疫化学的方法对转染和感染细胞的表达产物进行分析。pSFV-E RNA 转染和病毒粒子感染哺乳动物细胞表达的E蛋白,可与抗PEDV多克隆抗体起特异反应,证明体外转录的重组RNA含有PEDV E 的特异序列。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 E基因 甲病毒载体 重组rna
下载PDF
我国登革2型病毒prM基因与甲病毒载体重组RNA的构建 被引量:3
3
作者 于曼 秦鄂德 +2 位作者 欧武 段鸿元 杨佩英 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期473-476,共4页
目的 将我国登革 2型病毒的prM(D2 prM)基因导入甲病毒载体 (pSfV) ,研究该基因及其编码蛋白介导的抗病毒作用。方法 首先将扩增的病毒prM基因导入pSfV的Sp6启动子下游并进行核苷酸序列测定。用SpeⅠ酶将pSfⅤ prM重组DNA线形化 ,... 目的 将我国登革 2型病毒的prM(D2 prM)基因导入甲病毒载体 (pSfV) ,研究该基因及其编码蛋白介导的抗病毒作用。方法 首先将扩增的病毒prM基因导入pSfV的Sp6启动子下游并进行核苷酸序列测定。用SpeⅠ酶将pSfⅤ prM重组DNA线形化 ,再将其体外转录成 5′末端含帽子结构的重组RNA。然后通过电穿孔法将此重组RNA转染BHK 2 1/ 13细胞。采用X Gal原位染色和免疫荧光法对转染细胞的表达产物进行分析。结果 通过碱基序列测定证明病毒的prM基因已插入到甲病毒载体中 ,而且其重组DNA的转录物经RNaseA消化证实为RNA。重组RNA的细胞转染率达 90 %以上。prM蛋白表达细胞约占 80 %。结论 由pSfV prMRNA转染哺乳动物细胞所产生的蛋白可与登革 2型病毒多克隆抗体起特异反应 ,证明体外转录的重组RNA含有登革 2型病毒特异序列。 展开更多
关键词 登革2型病毒 prM基因 甲病毒载体 重组rna
原文传递
水稻条纹病毒楚雄分离物一个重组RNA序列分析
4
作者 程文金 吴祖建 谢联辉 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2009年第18期352-355,共4页
为检测水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)基因组存在的重组RNA,采用RT-PCR方法扩增并克隆云南楚雄分离物(YCX07)的RNA重组片段YCX07R。克隆重组片段并测定序列。序列分析表明,YCX07R由RSV RNA2的3'端序列与RNA3的3'端序列重... 为检测水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)基因组存在的重组RNA,采用RT-PCR方法扩增并克隆云南楚雄分离物(YCX07)的RNA重组片段YCX07R。克隆重组片段并测定序列。序列分析表明,YCX07R由RSV RNA2的3'端序列与RNA3的3'端序列重组而成,具有RSV基因组结构特征,采取双义编码策略,即在正、负链的5'端分别存在一个阅读框,编码两个重组蛋白YCX07R-5P、YCX07R-3P。分析推测重组更可能通过类似于脊髓灰质炎病毒(Poliovirus)的引物互补延伸机制发生。 展开更多
关键词 RSV 重组rna 双义编码
下载PDF
沉默结缔组织生长因子基因重组腺病毒的构建及功能验证 被引量:2
5
作者 梁睿 康权 +5 位作者 谭俊杰 赵利华 索涛莉 孙艳辉 金先庆 罗庆 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期194-198,共5页
目的:构建沉默结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)基因的复制缺陷型重组腺病毒Ad-siCTGF,并进行功能验证。方法:选取已验证的能高效沉默CTGF基因的靶序列,克隆入载体pSES-HUS中;将质粒线性化处理后与腺病毒骨架质... 目的:构建沉默结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)基因的复制缺陷型重组腺病毒Ad-siCTGF,并进行功能验证。方法:选取已验证的能高效沉默CTGF基因的靶序列,克隆入载体pSES-HUS中;将质粒线性化处理后与腺病毒骨架质粒pAdEasy共同转染大肠埃希菌BJ5183,构建重组腺病毒载体Ad-siCTGF;腺病毒载体用PacI酶切线性化处理后转染HEK293细胞,包装重组腺病毒;采用"乒乓交互感染法"提高病毒滴度。用此病毒感染4T1细胞,行实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative-PCR,RFQ-PCR)及Western印迹法验证其沉默效果。结果:PacI酶切电泳证实重组腺病毒载体Ad-siCTGF构建成功,扩增纯化后测定重组病毒Ad-siCTGF的滴度为2.6×1010pfu/mL。感染此病毒后,4T1细胞中CTGF mRNA表达水平下调至36.27%,蛋白表达水平下调至31.56%。结论:成功构建能沉默CTGF基因的重组腺病毒,为进一步研究CTGF在肿瘤中的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 腺病毒科感染 DNA 重组 rna干扰 基因 CTGF 细胞 4T1
下载PDF
灵芝多糖(GL-B)对肿瘤坏死因子α和γ干扰素产生及其mRNA表达的影响 被引量:37
6
作者 张群豪 林志彬 《北京医科大学学报》 CSCD 1999年第2期179-183,共5页
探讨灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞,肿瘤坏死因子α,脾细胞γ干扰素的产生及其mRNA表达的影响。方法;采集小鼠PM和脾淋巴细胞,体外给药,分离细胞培养上清。生物法测定TNFα,ELISA测定IFNγ;RT-PCR方法检测... 探讨灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞,肿瘤坏死因子α,脾细胞γ干扰素的产生及其mRNA表达的影响。方法;采集小鼠PM和脾淋巴细胞,体外给药,分离细胞培养上清。生物法测定TNFα,ELISA测定IFNγ;RT-PCR方法检测mRNA的表达。结果;GL-B25-400mg.L^-1使正常小鼠PM培养上清中TNFα活性升高,并呈剂量依赖关系,24h在高峰,72h后开始减少。 展开更多
关键词 灵芝多糖 药理学 免疫增强剂 TNFΑ 干扰素Γ
下载PDF
小RNA合成技术与小RNA药物研究进展
7
作者 裴佳伟 王雪 +3 位作者 黄倩 谭慎行 田野 骞爱荣 《陕西师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期1-15,共15页
小RNA是一类长度20~24 nt、通过RNA-RNA相互作用调控目标基因的非编码RNA,其作用靶点广泛,能够多途径调节致病基因表达,已经成为新药研发热点。小RNA药物的研发依赖于RNA原料的获取,为此总结了化学合成、体外转录合成及体内生物合成3种... 小RNA是一类长度20~24 nt、通过RNA-RNA相互作用调控目标基因的非编码RNA,其作用靶点广泛,能够多途径调节致病基因表达,已经成为新药研发热点。小RNA药物的研发依赖于RNA原料的获取,为此总结了化学合成、体外转录合成及体内生物合成3种小RNA合成方式,重点介绍了使用si-RNA结合蛋白表达siRNA、rRNA支架、tRNA支架及改良tRNA支架4种小RNA生物合成技术;提出利用杂合tRNA支架以生物发酵的方式能够大规模生产重组小RNA,该方法具有活性高、成本低、带有天然修饰、安全性高等优点,为临床RNA药物原料来源提供了备选方案。此外,归纳了美国食品药品监督管理局批准上市的14种小RNA药物以及当前在研小RNA药物的最新研究进展,分析了小RNA药物所面临的挑战及未来发展方向,以期加深对小RNA合成技术和小RNA药物研究进展的理解。 展开更多
关键词 rna合成 rna药物 rna治疗 重组小rna
下载PDF
携反义二型基质金属蛋白酶基因的重组腺病毒的构建 被引量:5
8
作者 张明满 李德华 +4 位作者 苟兴华 严律南 韩蕾 赵兰英 胡海洋 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2004年第5期428-432,共5页
目的 构建携带反义二型基质金属蛋白酶 (MMP2 )基因的重组腺病毒。方法 从新鲜肝癌组织中提取总RNA ,用RT PCR法合成MMP2cDNA序列中 5′端转录起始位点附近长约 5 0 0bp的基因片段 ,将此片段反义克隆到腺病毒载体 (AdEasy)系统的多克... 目的 构建携带反义二型基质金属蛋白酶 (MMP2 )基因的重组腺病毒。方法 从新鲜肝癌组织中提取总RNA ,用RT PCR法合成MMP2cDNA序列中 5′端转录起始位点附近长约 5 0 0bp的基因片段 ,将此片段反义克隆到腺病毒载体 (AdEasy)系统的多克隆位点 ,经转染 2 93细胞生成携带反义MMP2基因的重组腺病毒Ad MMP2 AS。结果 成功构建并包装携带反义MMP2基因片段的重组腺病毒Ad MMP2 AS,病毒滴度达 1× 10 8/ml。结论 构建的重组腺病毒Ad MMP2 AS可望能有效地将反义MMP2基因片段导入人肝癌细胞株 ,为进一步研究肝癌浸润和转移机理以及探讨抑制肝癌浸润和转移的方法提供实验基础。 展开更多
关键词 反义二型基质金属蛋白酶 重组腺病毒 肝细胞癌 基因治疗
下载PDF
携反义基质金属蛋白酶-2的重组腺病毒对肝癌生长的影响 被引量:2
9
作者 张明满 严律南 +6 位作者 李德华 刘江文 苟兴华 韩蕾 苏芝 赵兰英 胡海洋 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期525-529,共5页
目的探讨携带反义二型基质金属蛋白酶(MM P 2)基因的重组腺病毒(A d-MM P 2AS)对人肝癌细胞株(B e l-7402)体外侵袭性和人肝癌动物模型生长的抑制作用。方法用已构建的A d-MM P 2AS感染人肝癌细胞株(B e l-7402),用侵袭小室模型检测A d-... 目的探讨携带反义二型基质金属蛋白酶(MM P 2)基因的重组腺病毒(A d-MM P 2AS)对人肝癌细胞株(B e l-7402)体外侵袭性和人肝癌动物模型生长的抑制作用。方法用已构建的A d-MM P 2AS感染人肝癌细胞株(B e l-7402),用侵袭小室模型检测A d-MM P 2AS对B e l-7402细胞降解人工基底膜的抑制作用;用W estern B lot和明胶酶谱检测A d-MM P 2AS对B e l-7402细胞分泌MM P 2的影响;用感染了A d-MM P 2AS的B e l-7402细胞接种于裸鼠皮下,使其在裸鼠体内成瘤,以观察其成瘤能力;用A d-MM P 2AS瘤内注射,以观察它对肝癌生长的抑制作用。结果A d-MM P 2AS感染的B e l-7402细胞分泌MM P 2被抑制、穿过人工基底膜M atrige l的B e l-7402细胞数下降52%、感染A d-MM P 2AS的B e l-7402细胞的成瘤量下降4.3倍,A d-MM P 2AS瘤内注射后瘤体生长减少63%。结论A d-MM P 2AS能明显抑制肝癌的生长,对肝癌有治疗潜力。 展开更多
关键词 肝细胞癌 二型基质金属蛋白酶 重组腺病毒 反义rna技术
下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部