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黄浦江水域抗生素及抗性基因污染初步研究 被引量:45
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作者 沈群辉 冀秀玲 +2 位作者 傅淑珺 刘园园 李琳 《生态环境学报》 CSCD 北大核心 2012年第10期1717-1723,共7页
采用高效液相色谱-质谱法,调查了黄浦江江水及底泥中6种常见兽用抗生素的含量特征,并采用实时荧光定量PCR方法,分别研究了该水域相应的8种代表性抗生素抗性基因(Antibiotics Resistance Genes,ARGs)的存在及丰度水平。结果显示,调查的... 采用高效液相色谱-质谱法,调查了黄浦江江水及底泥中6种常见兽用抗生素的含量特征,并采用实时荧光定量PCR方法,分别研究了该水域相应的8种代表性抗生素抗性基因(Antibiotics Resistance Genes,ARGs)的存在及丰度水平。结果显示,调查的四环素类、磺胺类及氯霉素抗生素在江水中的质量浓度范围分别在0.44~2.69、0.97~1.96、0.03~0.26μg·L-1之间,在底泥中的质量分数则分别为22.10~72.74、25.98~117.29、nd~50.47μg·kg-1。所有样品中除tet(O)、tet(B/P)未检出外,其他6种抗性基因均有检出。与四环素类抗性基因相比,磺胺类抗性基因的绝对拷贝数及相对丰度较高,为黄浦江水域中的优势抗性基因。相关性分析表明:江水中sul(Ⅲ)、tet(W),以及底泥中的sul(Ⅱ)丰度与对应相中磺胺类抗生素含量显著正相关,江水中sul(A)则与水相中氯霉素、四环素含量显著相关,其他几种抗生素与抗性基因间未见相关性存在。除抗生素外,黄浦江水域ARGs的相对丰度还可能与抗性基因种类及其环境因素(如光照、温度、pH和重金属等)有关。 展开更多
关键词 黄浦江 ARGs 高效液相色谱 质谱法 实时荧光定量pcr
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Electroacupuncture in the repair of spinal cord injury:inhibiting the Notch signaling pathway and promoting neural stem cell proliferation 被引量:33
2
作者 Xin Geng Tao Sun +3 位作者 Jing-hui Li Ning Zhao Yong Wang Hua-lin Yu 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2015年第3期394-403,共10页
Electroacupuncture for the treatment of spinal cord iniury has a good dinical curative effect, but the underlying mechanism is unclear. In our experiments, the spinal cord of adult Sprague-Daw- ley rats was clamped fo... Electroacupuncture for the treatment of spinal cord iniury has a good dinical curative effect, but the underlying mechanism is unclear. In our experiments, the spinal cord of adult Sprague-Daw- ley rats was clamped for 60 seconds. Dazhui (GV14) and Mingmen (GV4) acupoints of rats were subjected to electroacupuncture. Enzyme-linked immunosorbent assay revealed that the expres- sion of serum inflammatory factors was apparently downregulated in rat models of spinal cord injury after electroacupuncture. Hematoxylin-eosin staining and immunohistochemistry results demonstrated that electroacupuncture contributed to the proliferation of neural stem cells in rat injured spinal cord, and suppressed their differentiation into astrocytes. Real-time quantitative PCR and western blot assays showed that electroacupuncture inhibited activation of the Notch signaling pathway induced by spinal cord injury. These findings indicate that electroacupuncture repaired the injured spinal cord by suppressing the Notch signaling pathway and promoting the proliferation of endogenous neural stem ceils. 展开更多
关键词 nerve regeneration spinal cord electroacupuncture therapy neural stem cells notchsignaling pathway ASTROCYTES inflammation survival curve PROLIFERATION differentiation real-timequantitative pcr western blot assay neural regeneration
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维持性血液透析终末期肾病患者肠道优势菌群多样性变化研究 被引量:13
3
作者 金晓倩 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2015年第5期513-516,共4页
目的探讨维持性血液透析终末期肾病患者肠道优势菌群多样性及其与炎症因子的相关性。方法采集维持性血液透析的稳定终末期肾病患者和健康对照受试者的血液和粪便样本,采用荧光实时定量PCR(real-time quantitative PCR,QPCR)检测肠道优... 目的探讨维持性血液透析终末期肾病患者肠道优势菌群多样性及其与炎症因子的相关性。方法采集维持性血液透析的稳定终末期肾病患者和健康对照受试者的血液和粪便样本,采用荧光实时定量PCR(real-time quantitative PCR,QPCR)检测肠道优势菌群的变化情况,应用酶联免疫吸附技术(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测患者血液中的白介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、白介素6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和内毒素(lipoposaccharide,LPS)。结果维持性血液透析终末期肾病患者肠道菌群总菌量差异无统计学意义,但肠道内有益菌群如双歧杆菌属细菌、乳酸杆菌属细菌和粪杆菌属细菌显著降低,而肠道内有害菌如肠杆菌科细菌和肠球菌属细菌均显著升高(P<0.05)。维持性血液透析终末期肾病患者血液中IL-6、TNF-α和LPS显著升高,均与双歧杆菌属细菌有显著负相关,与肠杆菌科细菌有显著正相关。肠道内乳酸杆菌属细菌和粪杆菌属细菌与IL-6呈显著负相关,肠球菌属细菌与其呈显著正相关。此外,乳杆菌属细菌与TNF-α呈显著负相关,肠球菌属细菌和LPS呈显著正相关。结论维持性血液透析终末期肾病患者肠道优势菌群多样性发生了显著变化,且与患者炎症因子有密切的相关性。 展开更多
关键词 维持性血液透析 终末期肾病 肠道优势菌群 实时定量pcr 细胞因子 相关性分析
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miR-191在胃癌组织中的表达及其靶基因的预测 被引量:9
4
作者 郭鹏辉 杜燕蕾 聂玉强 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2012年第25期2347-2352,共6页
目的:分析胃癌组织中miR-191的表达及预测其靶基因,并检测靶基因在胃癌组织中的表达.方法:胃癌及配对癌旁正常组织标本50例,应用基于SYBRGreenⅠ的实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-191的表达情况,后用2-??CT方法进行相对定量分析.利用... 目的:分析胃癌组织中miR-191的表达及预测其靶基因,并检测靶基因在胃癌组织中的表达.方法:胃癌及配对癌旁正常组织标本50例,应用基于SYBRGreenⅠ的实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-191的表达情况,后用2-??CT方法进行相对定量分析.利用生物信息学软件对miR-191进行靶基因预测.用免疫组织化学检测靶基因在胃癌组织中的表达情况,并分析其与miR-191表达情况的关系.结果:miR-191在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织[0.0314(0.0037-0.4924)vs0.0240(0.0037-0.1593),P<0.05],miR-191与临床病理特征(性别、年龄、病理组织分型、淋巴结转移和TNM分期)无显著相关性.对miR-191预测得到磷脂酶C-delta1(phospholipaseC-delta1,PLCD1)、SOX4等9个靶基因,其中SOX4和NDST1被证明是miR-191的靶基因.PLCD1在胃癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织(56.7%vs96.7%,P<0.01),且其与miR-191在胃癌中的表达呈负相关(90%vs30%,r=-0.639,P<0.01).结论:miR-191在胃癌组织中呈高表达,可能通过调控PLCD1对胃癌的发病起重要作用. 展开更多
关键词 胃癌 miR-191 实时荧光定量pcr 磷脂酶C-delta1 免疫组织化学
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新生仔猪口服屎肠球菌对其肠道菌群组成及化学屏障的影响 被引量:9
5
作者 黄怡 黄琴 +2 位作者 崔志文 李卫芬 余东游 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1007-1010,1019,共5页
随机选择24头出生时间相近的健康杜×长×大外三元仔猪,分为2个组,每组3个重复;每个重复4头。分别在仔猪刚出生、3日龄及5日龄灌服10%灭菌脱脂奶(对照组)或含有屎肠球菌活菌(5×108~6×108 CFU/mL)的10%脱脂奶重悬液(... 随机选择24头出生时间相近的健康杜×长×大外三元仔猪,分为2个组,每组3个重复;每个重复4头。分别在仔猪刚出生、3日龄及5日龄灌服10%灭菌脱脂奶(对照组)或含有屎肠球菌活菌(5×108~6×108 CFU/mL)的10%脱脂奶重悬液(处理组),每次2mL/头,仔猪25日龄断奶。记录哺乳期仔猪腹泻发生率。断奶当天屠宰仔猪,采集肠道内容物及黏膜样品,检测盲肠内容物主要菌群的数量、各肠段pH值和结肠内容物乳酸含量,用实时定量PCR检测空肠黏膜化学屏障相关基因的表达量。结果显示,屎肠球菌使仔猪盲肠的乳酸菌比率升高8.98%,致病性肠杆菌的数量和比例分别下降28.68%(P<0.05)和13.01%,仔猪腹泻率也下降了43.21%,但不影响细菌总数和乳酸菌数量,也不影响肠道pH值、结肠乳酸含量以及空肠黏膜MUC2、pBD-1和PMAP-37mRNA的表达量,却显著下调LYS mRNA的表达。结果表明,口服屎肠球菌改善哺乳期仔猪肠道菌群组成,促进肠道健康,同时它对溶菌酶基因表达的抑制作用可能是维持乳猪肠道微生态稳定的重要因素之一。 展开更多
关键词 屎肠球菌 仔猪 肠道菌群 腹泻率 化学屏障 实时定量pcr
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真蛸热休克蛋白90基因(HSP90)的克隆及表达 被引量:9
6
作者 孙田田 苏永全 +3 位作者 洪婧妮 邬阳 张曼 毛勇 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1367-1375,共9页
为深入了解真蛸热应激响应机制,实验以真蛸的应激蛋白为研究对象,借助同源扩增和cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术获得真蛸热休克蛋白90(HSP90)的cDNA全序列(2 709 bp),它包含119 bp的5'非编码区(untra... 为深入了解真蛸热应激响应机制,实验以真蛸的应激蛋白为研究对象,借助同源扩增和cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术获得真蛸热休克蛋白90(HSP90)的cDNA全序列(2 709 bp),它包含119 bp的5'非编码区(untranslated regions,UTR)、454 bp的3'UTR和2 136 bp的开放阅读框(opening reading frame,ORF),ORF共编码711个氨基酸,推算其分子量为81.5 ku,理论等电点为5.09。同源分析显示,所推导的氨基酸序列高度保守,并且含有HSP90家族特有的5个保守信号序列区域。实时荧光定量PCR分析表明,该基因在所有选取的组织中均有表达,肝组织中表达量最高。 展开更多
关键词 真蛸 热休克蛋白90 克隆 实时荧光定量pcr
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黄连多糖对AGEs诱导内皮细胞增殖及其受体表达的作用研究 被引量:8
7
作者 尹登科 杨晔 +2 位作者 陈松 李云 高向东 《药物生物技术》 CAS CSCD 2012年第6期476-479,共4页
考察黄连多糖对高级糖基化终产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和AGEs受体(RAGE)表达的作用。采用水提,Sevag法去蛋白,醇沉法获得黄连多糖(CCP);80%汇聚的HUVECs分成6组,分别为空白对照组、BSA对照组(蛋白浓度200μg/mL)、AGE... 考察黄连多糖对高级糖基化终产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和AGEs受体(RAGE)表达的作用。采用水提,Sevag法去蛋白,醇沉法获得黄连多糖(CCP);80%汇聚的HUVECs分成6组,分别为空白对照组、BSA对照组(蛋白浓度200μg/mL)、AGEs组(蛋白浓度200μg/mL)、AGEs+CCP(25μg/mL)、AGEs+CCP(50μg/mL)和AGEs+CCP(100μg/mL),采用MTT法检测黄连多糖对AGEs诱导HUVECs增殖的影响;实时荧光定量PCR检测RAGE mRNA表达;Western Blot分析RAGE蛋白表达情况。HUVECs经AGEs诱导48h后,其增殖率显著增殖。黄连多糖可以剂量依赖性的抑制AGEs诱导HUVECs早期增殖作用,定量PCR和Western Blot结果表明CCP可以在mRNA和蛋白水平抑制RAGE表达。黄连多糖可通过抑制RAGE表达,降低AGEs对内皮细胞的激活作用。 展开更多
关键词 黄连多糖 高级糖基化终产物 内皮细胞 增殖 受体 实时定量pcr
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西方蜜蜂不同级型王浆主蛋白MRJP8基因的表达差异 被引量:5
8
作者 李江红 梁庆环 +1 位作者 陈大福 梁勤 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期1-7,共7页
【目的】王浆主蛋白在蜜蜂的级型分化中具有重要的功能。为探究mrjp8在西方蜜蜂Apis mellifera不同级型的表达模式及功能差异。【方法】利用荧光定量PCR技术对西方蜜蜂工蜂、雄蜂和蜂王不同发育时期和不同组织的mrjp8表达水平进行检测... 【目的】王浆主蛋白在蜜蜂的级型分化中具有重要的功能。为探究mrjp8在西方蜜蜂Apis mellifera不同级型的表达模式及功能差异。【方法】利用荧光定量PCR技术对西方蜜蜂工蜂、雄蜂和蜂王不同发育时期和不同组织的mrjp8表达水平进行检测。【结果】工蜂体内mrjp8在9日龄前后的毒腺组织内特异性高表达,为参照基因表达量的上万倍,在其他发育时期和组织的表达量则明显较低,其表达具有明显的时空特异性;在雄蜂体内其表达量与对照相当;在蜂王体内表达量可达参照的近1 000倍,没有组织特异性。【结论】mrjp8的这种表达模式提示其在工蜂防御及维系蜂王长寿命方面有积极作用,这为进一步研究该基因乃至整个王浆蛋白基因家族的进化和功能分化提供了依据。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 级型 王浆主蛋白 表达模式 荧光定量pcr
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水稻铜/锌超氧化物歧化酶铜伴侣基因克隆与表达分析 被引量:4
9
作者 谢旻 骆鹰 +5 位作者 张超 王伟平 罗彪 陈钊 汪启明 饶力群 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期2940-2946,共7页
本研究对水稻铜/锌超氧化物歧化酶铜伴侣(OsCCS)的基本特征、分布情况及功能做了初步探究。通过同源蛋白序列比对,发现OsCCS在多个物种中保守存在。通过芯片分析,结果表明OsCCS热胁迫后表达上调,且OsCCS在各组织中表达有差异,其中在叶... 本研究对水稻铜/锌超氧化物歧化酶铜伴侣(OsCCS)的基本特征、分布情况及功能做了初步探究。通过同源蛋白序列比对,发现OsCCS在多个物种中保守存在。通过芯片分析,结果表明OsCCS热胁迫后表达上调,且OsCCS在各组织中表达有差异,其中在叶中的表达量高,在茎、穗中表达量低。通过实时定量PCR对芯片结果进行验证,发现与芯片结果一致。构建了pCAMBIA2300-OsCCS-GFP载体,通过转化烟草瞬时表达,发现OsCCS蛋白定位于细胞核。上述研究为深入了解OsCCS在水稻中的生物学功能提供了基础。 展开更多
关键词 铜锌超氧化物歧化酶铜伴侣 瞬时表达 热胁迫 实时定量pcr
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极端耐盐植物盐穗木脱水胁迫响应基因Rd22的克隆及表达分析 被引量:4
10
作者 张霞 常丹 +1 位作者 彭丹 张富春 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期5-8,共4页
目的:选择合适的标记基因用于检测胁迫处理盐穗木的有效性。方法:根据NCBI同源序列比对设计简并引物,通过RT-PCR从盐穗木(Halostachys caspica)中克隆获得盐穗木脱水胁迫响应基因Rd22(HcRd22)基因,并采用实时定量PCR技术检测其逆境胁迫... 目的:选择合适的标记基因用于检测胁迫处理盐穗木的有效性。方法:根据NCBI同源序列比对设计简并引物,通过RT-PCR从盐穗木(Halostachys caspica)中克隆获得盐穗木脱水胁迫响应基因Rd22(HcRd22)基因,并采用实时定量PCR技术检测其逆境胁迫下的表达规律。结果:最终扩增获得301bp盐穗木HcRd22核酸序列,NCBI和clustalwz序列比对分析表明HcRd22具有BURP结构域。400 mmol/L盐胁迫和50μmol/L ABA处理分别使HcRd22的基因表达量在处理12h上调2.5倍和3倍。结论:所克隆的HcRd22基因属于盐胁迫和ABA处理的响应基因,可作为今后研究盐穗木胁迫处理的标准基因。 展开更多
关键词 盐穗木 脱水胁迫响应蛋白基因Rd22 同源克隆 实时定量pcr
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富含多糖甜玉米幼穗RNA提取及高温胁迫基因表达分析 被引量:3
11
作者 李余良 张丽华 +3 位作者 赵楠 胡建广 刘建华 郑锦荣 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期38-41,共4页
以改良Trizol试剂法从富含多糖的甜玉米幼穗中提取高质量、完整的总RNA,利用实时荧光定量PCR对高温胁迫下粤甜13雌穗发育的8个差异表达基因进行分析。结果表明,8个基因分为上调表达和下调表达,实时荧光定量PCR和测序法基因表达谱检测的... 以改良Trizol试剂法从富含多糖的甜玉米幼穗中提取高质量、完整的总RNA,利用实时荧光定量PCR对高温胁迫下粤甜13雌穗发育的8个差异表达基因进行分析。结果表明,8个基因分为上调表达和下调表达,实时荧光定量PCR和测序法基因表达谱检测的基因上调或下调表达的趋势一致,上调表达基因ZM2G058057和下调表达基因ZM2G059964、ZM2G044670相对表达量较高,可能在高温胁迫影响甜玉米幼雌穗发育过程中起更重要的作用。 展开更多
关键词 甜玉米 幼穗 总RNA提取 高温胁迫 差异表达基因 实时荧光定量pcr
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家蝇取食粗纤维后β-葡萄糖苷酶活性与基因表达量的变化 被引量:3
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作者 张姝 胡蓉 +2 位作者 吴建伟 国果 付萍 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期157-164,共8页
β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,BG)是昆虫降解纤维素起关键作用的限速酶,在糖原降解和糖类代谢方面具有重要的生理功能。本研究用粗纤维含量不同的饲料饲养家蝇Musca domestica,分为对照组(粗纤维含量为30%)、实验组1(粗纤维含量为40%)... β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,BG)是昆虫降解纤维素起关键作用的限速酶,在糖原降解和糖类代谢方面具有重要的生理功能。本研究用粗纤维含量不同的饲料饲养家蝇Musca domestica,分为对照组(粗纤维含量为30%)、实验组1(粗纤维含量为40%)和实验组2(粗纤维含量为50%)。分别在家蝇发育的不同时期取样,采用实时荧光定量PCR技术和DNSA法检测β-葡萄糖苷酶基因的mRNA表达水平和β-葡萄糖苷酶活性。结果显示,β-葡萄糖苷酶基因mRNA表达水平和酶活性随家蝇的个体发育逐渐提高(P<0.05),并且与饲料中粗纤维的含量呈正相关(P<0.05)。实验组1β-葡萄糖苷酶基因mRNA表达水平较对照组提高了1.7~2.4倍,酶活性提高了1.04~1.37倍;实验组2mRNA表达水平较对照组提高了3.1~5.0倍,酶活性提高了1.19~2.25倍。这些结果表明取食粗纤维对家蝇β-葡萄糖苷酶基因表达量及酶活性具有诱导作用。 展开更多
关键词 家蝇 个体发育 Β-葡萄糖苷酶 粗纤维 实时荧光定量pcr
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猪生殖与呼吸综合征病毒的SYBR Green-Ⅰ荧光定量PCR检测 被引量:2
13
作者 王小武 符芳 +3 位作者 许红喜 周艳君 童光志 李曦 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期401-406,共6页
根据猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白基因核酸序列设计引物,经BLAST比较发现,该引物既可以扩增较早发现的PRRSV毒株,也可以扩增近期发现的在Nsp2基因上有较大变异的PRRSV毒株,以含有该引物扩增序列的重组质粒作为标准品建立了检测... 根据猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白基因核酸序列设计引物,经BLAST比较发现,该引物既可以扩增较早发现的PRRSV毒株,也可以扩增近期发现的在Nsp2基因上有较大变异的PRRSV毒株,以含有该引物扩增序列的重组质粒作为标准品建立了检测PRRSV的SYBR Green-Ⅰ荧光定量PCR方法。结果表明,该方法标准曲线的相关系数大于0.99,敏感性可以达到1×101拷贝/μL,约为普通PCR的100倍;用该方法检测人工感染PRRSV的猪全血,结果阳性检出率为100%。敏感性、特异性和稳定性试验表明,该方法具有很高的敏感性、特异性和稳定性,可以用来快速检测PRRSV。 展开更多
关键词 猪生殖与呼吸综合征病毒 SYBR Green-Ⅰ 荧光定量pcr
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辣椒3-磷酸甘油醛脱氢酶基因CaGAPB的克隆及表达分析 被引量:1
14
作者 李严曼 欧阳孟真 +1 位作者 孙守如 朱磊 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期1382-1389,共8页
本实验采用RT-PCR和RACE的方法,我们从辣椒叶片中克隆到3-磷酸甘油醛脱氢酶β亚基基因(CaGAPB)的全长序列,基因编码区共1 359 bp,编码452个氨基酸。生物信息学分析显示,该基因编码的蛋白分子量为48.2 kD,等电点6.52;进化树分析表明CaGAP... 本实验采用RT-PCR和RACE的方法,我们从辣椒叶片中克隆到3-磷酸甘油醛脱氢酶β亚基基因(CaGAPB)的全长序列,基因编码区共1 359 bp,编码452个氨基酸。生物信息学分析显示,该基因编码的蛋白分子量为48.2 kD,等电点6.52;进化树分析表明CaGAPB与同为茄科的番茄、马铃薯、烟草以及葡萄科的葡萄GAPB处于同一进化枝上,表现出较近的亲缘关系,其氨基酸序列同源性达到95%以上;荧光定量分析发现,CaGAPB基因可以被低温处理显著诱导表达,而其他的一些胁迫(NaCl,机械损伤,PEG,甘露醇)和信号分子(乙烯利,H_2O_2,SA)处理均会抑制其表达,同时非生物胁迫DC3000侵染对其表达无影响。综上所述,CaGAPB可能是同辣椒的低温抗性相关,其具体功能有待于进一步的研究。 展开更多
关键词 3-磷酸甘油醛脱氢酶β亚基 辣椒 基因克隆 荧光定量pcr
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低剂量γ-射线照射人淋巴母细胞诱导BTG2基因mRNA变化
15
作者 何颖 沈先荣 +3 位作者 钱甜甜 王庆蓉 蒋定文 陈伟 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 2015年第1期20-24,共5页
为观察低剂量γ-射线对人淋巴母细胞AHH1 B细胞转位基因2(B cell translocation gene 2,BTG2)基因m RNA表达水平的影响,探讨BTG2基因作为低剂量范围辐射生物剂量计的可能性,采用0-1.0 Gyγ-射线照射人淋巴母细胞,照射后不同时间点(0-72... 为观察低剂量γ-射线对人淋巴母细胞AHH1 B细胞转位基因2(B cell translocation gene 2,BTG2)基因m RNA表达水平的影响,探讨BTG2基因作为低剂量范围辐射生物剂量计的可能性,采用0-1.0 Gyγ-射线照射人淋巴母细胞,照射后不同时间点(0-72 h)提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR方法检测BTG2基因的表达变化,分析该基因的时间-剂量效应关系。结果表明,照射后BTG2基因转录水平表达在低剂量范围呈剂量依赖增加,照射后24 h达峰值,之后逐渐下降,在48 h和72 h时处于平台期,在168 h恢复至初始水平。BTG2基因对低剂量电离辐射敏感,有较好的剂量效应和时间效应关系,具有开发为低剂量辐射生物剂量计的潜力。 展开更多
关键词 低剂量电离辐射 人淋巴母细胞 BTG2 基因表达 实时荧光定量pcr
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习惯性流产孕妇巨细胞病毒pp65抗原检测的临床意义
16
作者 卢银平 董继华 +1 位作者 刘朝 曹伟 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2006年第21期2987-2988,共2页
目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染与习惯性流产(RPL)的关系。方法:采集习惯性流产孕妇和正常产前体检孕妇外周血,分离外周血单个核细胞(PBMCs)和血浆,分别用免疫荧光法和实时定量PCR检测HCMV pp65抗原和HCMV-DNA,并比较2种方法的... 目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染与习惯性流产(RPL)的关系。方法:采集习惯性流产孕妇和正常产前体检孕妇外周血,分离外周血单个核细胞(PBMCs)和血浆,分别用免疫荧光法和实时定量PCR检测HCMV pp65抗原和HCMV-DNA,并比较2种方法的一致性。结果:46例RPL患者HCMV pp65抗原有14例阳性,阳性率30.4%,50例正常体检孕妇HCMV pp65抗原有4例阳性,阳性率8%,2组孕妇HCMV活动性感染率有显著性差异(2χ=6.76,P<0.01)。孕妇HC-MV pp65抗原阳性率升高,孕妇流产几率增加(2χ=6.39,P<0.01)。免疫荧光法和实时定量PCR有较好的一致性(93.5%)。结论:习惯性流产孕妇HCMV活动性感染率显著高于正常孕妇,HCMV pp65抗原检测可作为RPL早期诊断指标之一。 展开更多
关键词 习惯性流产 巨细胞病毒 PP65抗原 免疫荧光 定量pcr
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萝卜蚜反-β-法尼烯结合蛋白基因的时空表达模式分析(英文)
17
作者 纪祥龙 战一迪 +1 位作者 李佩玲 刘勇 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1376-1383,共8页
【目的】气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)有助于提高昆虫嗅觉系统的敏感性,并且在蚜虫报警信息素反-β-法尼烯[(E)-β-farnesene EBF]的通信过程中起重要作用。萝卜蚜Lipaphis erysimi是十字花科作物的主要害虫,为了减少... 【目的】气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)有助于提高昆虫嗅觉系统的敏感性,并且在蚜虫报警信息素反-β-法尼烯[(E)-β-farnesene EBF]的通信过程中起重要作用。萝卜蚜Lipaphis erysimi是十字花科作物的主要害虫,为了减少蔬菜田间的农药使用,EBF对蚜虫防治具有很大的潜力。然而,目前萝卜蚜对EBF反应的研究甚少。【方法】本研究利用PCR和RACE技术克隆并鉴定了2种公认的在萝卜蚜中对EBF具有高度亲和力的气味结合蛋白的基因LeryOBP3和LeryOBP7;利用RT-qPCR检测了它们在萝卜蚜不同发育阶段和无翅成蚜不同组织中的表达谱。【结果】克隆获得的萝卜蚜2个基因序列LeryOBP3(Gen Bank登录号:KJ703012)和LeryOBP7(Gen Bank登录号:KJ703013)分别与豌豆蚜Acyrthosiphum pisum ApisO BP3和ApisO BP7序列对比有较高的氨基酸序列一致性(分别为94%和88%),基因序列符合气味结合蛋白基因的典型特征。LeryOBP3和LeryOBP7开放阅读框全长分别为357和468 bp,分别编码118和155个氨基酸。发育表达谱表明,LeryOBP3和LeryOBP7的表达量高峰出现于成虫期;组织表达谱表明,LeryOBP3在成蚜足中表达量较高,而LeryOBP7主要表达于成蚜触角组织中。【结论】在萝卜蚜成虫触角中的LeryOBP7结合蛋白可能与其对EBF的响应有关。 展开更多
关键词 萝卜蚜 报警信息素 气味结合蛋白 基因表达谱 实时荧光定量pcr
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利用常规PCR和实时荧光定量PCR检测杨梅凋萎病菌 被引量:15
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作者 任海英 戚行江 +1 位作者 梁森苗 郑锡良 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期1-10,共10页
凋萎病是近年来危害杨梅的主要病害。为了快速灵敏的检测杨梅凋萎病菌(Pestalotiopsis versicolor和P.microspo-ra),本研究开发了常规PCR和SYBRGreen实时荧光定量PCR技术各一套。利用P.versicolor(JN861773)和P.micros-pora(JN... 凋萎病是近年来危害杨梅的主要病害。为了快速灵敏的检测杨梅凋萎病菌(Pestalotiopsis versicolor和P.microspo-ra),本研究开发了常规PCR和SYBRGreen实时荧光定量PCR技术各一套。利用P.versicolor(JN861773)和P.micros-pora(JN861776)的ITSl-5.8S rDNA-ITS2序列的相同部分设计引物对(PvmlL/PvmlR)。该引物对利用常规PCR技术能特异性扩增出杨梅凋萎病菌188bp的目标产物,而对照菌株则呈阴性。该常规PCR体系能够检测人工接种后21d和田间自然发病的有病症杨梅组织中的凋萎病菌。检测下限是0.6×10^5拷贝数。利用PvmlL/PvmlR进行SYBRGreen实时荧光定量PCR,检测灵敏度是常规PCR的100倍,检测下限是0.6×10^3拷贝数,能够检测出人工接种及田间已经感染但尚未表现症状的杨梅组织中的凋萎病菌。这两项技术,简单、快速、灵敏.特异性强.可以应用于杨梅凋萎病的诊断和苗木检疫。 展开更多
关键词 杨梅 凋萎病菌 常规pcr SYBR Green实时荧光定量pcr 分子检测
原文传递
转基因烟草中外源基因实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:10
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作者 王盛 谢芝勋 +6 位作者 谢丽基 谢志勤 黄莉 罗思思 邓显文 黄娇玲 刘加波 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期745-749,共5页
【目的】建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法,为转基因植物中外源基因拷贝数的检测提供参考。【方法】采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,检测转基因烟草中外源绿色荧光蛋白基因(GFP)的拷贝数,以... 【目的】建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法,为转基因植物中外源基因拷贝数的检测提供参考。【方法】采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,检测转基因烟草中外源绿色荧光蛋白基因(GFP)的拷贝数,以烟草单拷贝的内源核糖核酸还原酶基因(RNR2)作为内参基因,建立相对定量的双标准曲线法检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法。【结果】构建RNR2基因、GFP基因实时荧光定量PCR的标准曲线,分别为y=-0.2858x+5.6695和y=-0.2826x+2.1048,R2分别为0.9994和0.9989,相关性较高。在检测的5株转基因烟草中GFP基因的拷贝数分别为5、8、19、28和45,非转基因烟草植株的GFP基因拷贝数为0。【结论】建立的转基因烟草中外源基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法具有简单、快速、准确等优点,可用于基因工程中对优良转化植株的筛选及外源基因表达量的快速检测和定量分析。 展开更多
关键词 转基因烟草 双标准曲线法 外源基因 拷贝数 SYBR Green I实时荧光定量pcr
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atp1基因在小麦BNS雄性不育系和自身转换系中的差异表达 被引量:4
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作者 赵大华 孙慧慧 +1 位作者 于同英 李友勇 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期488-493,共6页
atp1基因在植物中是线粒体基因组编码,其产物ATP1是线粒体ATP合酶F1的α亚基,在小麦BNS的雄性不育系和它的转换系中差异表达。为了检测该基因的表达丰度,探讨与BNS不育性的联系,以BNS不育系和它的转换系的幼穗、花药和穗轴等组织为材料... atp1基因在植物中是线粒体基因组编码,其产物ATP1是线粒体ATP合酶F1的α亚基,在小麦BNS的雄性不育系和它的转换系中差异表达。为了检测该基因的表达丰度,探讨与BNS不育性的联系,以BNS不育系和它的转换系的幼穗、花药和穗轴等组织为材料,利用实时荧光定量PCR方法,测定和比较该基因在不同组织中的表达水平,结果表明,该基因在各组织中的总表达量比内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因表达量高3-4个数量级;在幼穗及各穗轴营养组织中表达量一致;花药与营养组织比较,在不育系四分体和单核期花药中表达均上调;在不育系中,该基因表达量在单核期花药中显著下调。这些结果说明,线粒体atp1基因在小麦中是一个高水平表达基因,在BNS营养组织中组成型表达,在花药中特异性上调表达,在不育系中表达受到抑制,表现显著下调,表明atp1基因的下调表达与BNS不育性有关。 展开更多
关键词 小麦 BNS雄性不育 atp1 基因差异表达分析 荧光实时定量pcr
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