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猪繁殖与呼吸综合征病毒通用型实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用
被引量：
7
1
作者
宋建领
高华峰
+1 位作者
信爱国
李华春
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期497-500,共4页
根据GenBank登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美型毒株和欧洲型毒株N蛋白基因保守序列,设计1对特异性引物和1条探针,以ABI公司PRRSV RNA为标准品,优化了PRRSV实时荧光定量RT-PCR检测方法,25μL反应体系引物prrsv-f/prrsv-r(20μmo...
根据GenBank登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美型毒株和欧洲型毒株N蛋白基因保守序列,设计1对特异性引物和1条探针,以ABI公司PRRSV RNA为标准品,优化了PRRSV实时荧光定量RT-PCR检测方法,25μL反应体系引物prrsv-f/prrsv-r(20μmol/L)各0.5μL,探针prrsv-p(10μmol/L)0.5μL为反应最佳工作浓度,标准曲线Ct值和模板启始浓度的log值之间具有良好的线性相关性。特异性、敏感性和重复性检测结果显示,该方法能特异的检测PRRSV北美型毒株和欧洲型毒株,与其他主要猪病病原检测无交叉反应;针对PRRSV RNA标准品检测,灵敏度可以达到10拷贝;重复性检测Ct值变异系数为0.74%～1.52%。用建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法,对40份临床样品检测,与商品化试剂盒检测结果完全一致。
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关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
荧光定量
rt-pcr
RNA标准品
北美型毒株
欧洲型毒株
原文传递
应用改良的实时TaqMan荧光定量RT-PCR技术检测口蹄疫病毒及其3D基因转录水平
被引量：
3
2
作者
石立立
顾潮江
+6 位作者
张倩
张玮莹
李勇
鲁彬
何成
屈三甫
郑从义
《中国病毒学》
CSCD
2006年第5期449-453,共5页
将改良的实时TaqMan荧光定量RT-PCR技术应用于口蹄疫病毒感染体内和体外的定量检测以及其3D基因转录水平分析。结果表明:对样品中口蹄疫病毒基因组RNA的检测灵敏度可达l0个基因拷贝,可同时检测病毒正负链复制水平且重复性较好,所测口蹄...
将改良的实时TaqMan荧光定量RT-PCR技术应用于口蹄疫病毒感染体内和体外的定量检测以及其3D基因转录水平分析。结果表明:对样品中口蹄疫病毒基因组RNA的检测灵敏度可达l0个基因拷贝,可同时检测病毒正负链复制水平且重复性较好,所测口蹄疫病毒3D基因转录水平可高达6.9×104拷贝/μL;与实时SYBRGreenⅠ染料RT-PCR技术比较,改良的实时TagMan荧光定量RT-PCR技术检测灵敏度高6.7倍。以上结果证实,改良的实时TaqMan荧光定量RT-PCR技术在病毒检测和基因表达水平分析方面有更高的灵敏度和特异性。
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关键词
口蹄疫病毒
实时
taqman
rt-pcr
技术
定量检测
下载PDF
职称材料
定量检测马动脉炎病毒方法的建立
3
作者
杨松
梁成珠
+1 位作者
高宏伟
陈溥言
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2011年第9期115-118,共4页
为建立快速、敏感、准确的马动脉炎病毒检测方法,笔者选取病毒基因组中高度保守的ORF7序列设计引物和Taq-Man探针,分别使用马动脉炎病毒的总RNA和含有选定检测序列的克隆标准品进行一步法实时定量RT-PCR,绘制扩增曲线,两曲线斜率之差小...
为建立快速、敏感、准确的马动脉炎病毒检测方法,笔者选取病毒基因组中高度保守的ORF7序列设计引物和Taq-Man探针,分别使用马动脉炎病毒的总RNA和含有选定检测序列的克隆标准品进行一步法实时定量RT-PCR,绘制扩增曲线,两曲线斜率之差小于0.1,证明两者的扩增效率相同,可用选定检测序列的克隆标准品对马动脉炎病毒进行定量检测。
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关键词
定量检测
real
-
time
taqman
rt-pcr
马动脉炎病毒
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职称材料
马动脉炎病毒实时RT-PCR检测方法的建立
被引量：
5
4
作者
杨松
梁成珠
+2 位作者
高宏伟
刘永华
陈溥言
《动物医学进展》
CSCD
2007年第5期32-35,共4页
选取马动脉炎病毒基因组中高度保守的开放阅读框7序列,设计了特异性引物和TaqMan探针,利用一步法的实时定量RT-PCR来定量检测马动脉炎病毒。分别使用马动脉炎病毒的总RNA和含有选定检测序列的克隆标准品做扩增曲线,两曲线斜率之差小于0...
选取马动脉炎病毒基因组中高度保守的开放阅读框7序列,设计了特异性引物和TaqMan探针,利用一步法的实时定量RT-PCR来定量检测马动脉炎病毒。分别使用马动脉炎病毒的总RNA和含有选定检测序列的克隆标准品做扩增曲线,两曲线斜率之差小于0.1,证明两者的扩增效率相同,可用选定检测序列的克隆标准品对马动脉炎病毒进行定量检测。该方法敏感,快速,准确,且无交叉污染,能满足海关及检疫部门对马动脉炎病毒快速、准确的检测要求。
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关键词
实时反转录-聚合酶链反应
定量检测
马动脉炎病毒
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职称材料
题名
猪繁殖与呼吸综合征病毒通用型实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用
被引量：
7
1
作者
宋建领
高华峰
信爱国
李华春
机构
云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期497-500,共4页
基金
云南省农业科技创新工程资助项目(2008LA019)
云南省后备人才基金资助项目(2009CI061)
云南省高层次科技人才培引工程资助项目(20080C002)
文摘
根据GenBank登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美型毒株和欧洲型毒株N蛋白基因保守序列,设计1对特异性引物和1条探针,以ABI公司PRRSV RNA为标准品,优化了PRRSV实时荧光定量RT-PCR检测方法,25μL反应体系引物prrsv-f/prrsv-r(20μmol/L)各0.5μL,探针prrsv-p(10μmol/L)0.5μL为反应最佳工作浓度,标准曲线Ct值和模板启始浓度的log值之间具有良好的线性相关性。特异性、敏感性和重复性检测结果显示,该方法能特异的检测PRRSV北美型毒株和欧洲型毒株,与其他主要猪病病原检测无交叉反应;针对PRRSV RNA标准品检测,灵敏度可以达到10拷贝;重复性检测Ct值变异系数为0.74%～1.52%。用建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法,对40份临床样品检测,与商品化试剂盒检测结果完全一致。
关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
荧光定量
rt-pcr
RNA标准品
北美型毒株
欧洲型毒株
Keywords
porcine
reproductive
and
respiratory
syndrome
virus
real
-
time
taqman
rt-pcr
standard
RNA
samples
American
PRRSV
strain
European
PRRSV
strain
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
应用改良的实时TaqMan荧光定量RT-PCR技术检测口蹄疫病毒及其3D基因转录水平
被引量：
3
2
作者
石立立
顾潮江
张倩
张玮莹
李勇
鲁彬
何成
屈三甫
郑从义
机构
武汉大学生命科学学院
出处
《中国病毒学》
CSCD
2006年第5期449-453,共5页
基金
国家重点基础研究发展规划项目"973"(1999011904)
文摘
将改良的实时TaqMan荧光定量RT-PCR技术应用于口蹄疫病毒感染体内和体外的定量检测以及其3D基因转录水平分析。结果表明:对样品中口蹄疫病毒基因组RNA的检测灵敏度可达l0个基因拷贝,可同时检测病毒正负链复制水平且重复性较好,所测口蹄疫病毒3D基因转录水平可高达6.9×104拷贝/μL;与实时SYBRGreenⅠ染料RT-PCR技术比较,改良的实时TagMan荧光定量RT-PCR技术检测灵敏度高6.7倍。以上结果证实,改良的实时TaqMan荧光定量RT-PCR技术在病毒检测和基因表达水平分析方面有更高的灵敏度和特异性。
关键词
口蹄疫病毒
实时
taqman
rt-pcr
技术
定量检测
Keywords
Foot-and-mouth
disease
virus
real
-
time
taqman
rt-pcr
Quantificational
detection
分类号
S854.43 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
定量检测马动脉炎病毒方法的建立
3
作者
杨松
梁成珠
高宏伟
陈溥言
机构
辽宁医学院动物医学院
青岛出入境检验检疫局
南京农业大学动物医学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2011年第9期115-118,共4页
文摘
为建立快速、敏感、准确的马动脉炎病毒检测方法,笔者选取病毒基因组中高度保守的ORF7序列设计引物和Taq-Man探针,分别使用马动脉炎病毒的总RNA和含有选定检测序列的克隆标准品进行一步法实时定量RT-PCR,绘制扩增曲线,两曲线斜率之差小于0.1,证明两者的扩增效率相同,可用选定检测序列的克隆标准品对马动脉炎病毒进行定量检测。
关键词
定量检测
real
-
time
taqman
rt-pcr
马动脉炎病毒
Keywords
quantitative
detection
real
-
time
taqman
rt-pcr
equine
a
rt
eritis
viral
分类号
S852.652 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
马动脉炎病毒实时RT-PCR检测方法的建立
被引量：
5
4
作者
杨松
梁成珠
高宏伟
刘永华
陈溥言
机构
辽宁医学院动物医学院
青岛出入境检验检疫局
南京农业大学动物医学院
出处
《动物医学进展》
CSCD
2007年第5期32-35,共4页
文摘
选取马动脉炎病毒基因组中高度保守的开放阅读框7序列,设计了特异性引物和TaqMan探针,利用一步法的实时定量RT-PCR来定量检测马动脉炎病毒。分别使用马动脉炎病毒的总RNA和含有选定检测序列的克隆标准品做扩增曲线,两曲线斜率之差小于0.1,证明两者的扩增效率相同,可用选定检测序列的克隆标准品对马动脉炎病毒进行定量检测。该方法敏感,快速,准确,且无交叉污染,能满足海关及检疫部门对马动脉炎病毒快速、准确的检测要求。
关键词
实时反转录-聚合酶链反应
定量检测
马动脉炎病毒
Keywords
real
time
taqman
rt-pcr
quantitative
detection
Equine
a
rt
eritis
virus
分类号
S852.652 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪繁殖与呼吸综合征病毒通用型实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用
宋建领
高华峰
信爱国
李华春
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
7
原文传递
2
应用改良的实时TaqMan荧光定量RT-PCR技术检测口蹄疫病毒及其3D基因转录水平
石立立
顾潮江
张倩
张玮莹
李勇
鲁彬
何成
屈三甫
郑从义
《中国病毒学》
CSCD
2006
3
下载PDF
职称材料
3
定量检测马动脉炎病毒方法的建立
杨松
梁成珠
高宏伟
陈溥言
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2011
0
下载PDF
职称材料
4
马动脉炎病毒实时RT-PCR检测方法的建立
杨松
梁成珠
高宏伟
刘永华
陈溥言
《动物医学进展》
CSCD
2007
5
下载PDF
职称材料
已选择
0
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