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远端同源异型盒2和叉头盒O3a在大鼠脑皮质发育过程中的分布与表达 被引量：1
1
作者 慕雅婷 李艳 +1 位作者 郭琼 王磊 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期658-662,共5页
目的探讨远端同源异型盒2(Dlx2)和叉头盒O3a(FoxO3a)在SD大鼠脑皮质发育过程中的表达特点。方法应用Real-time PCR法检测Dlx2 mRNA和FoxO3a mRNA分别在受孕11d(E11)、E13、E15、E17、E19及生后1d(P1)的表达情况;应用免疫组织化学技术显... 目的探讨远端同源异型盒2(Dlx2)和叉头盒O3a(FoxO3a)在SD大鼠脑皮质发育过程中的表达特点。方法应用Real-time PCR法检测Dlx2 mRNA和FoxO3a mRNA分别在受孕11d(E11)、E13、E15、E17、E19及生后1d(P1)的表达情况;应用免疫组织化学技术显示Dlx2和FoxO3a在E11、E13、E15、E17、E19及P1蛋白的表达情况。结果 FoxO3a与Dlx2 mRNA在E11~P1均有表达,而FoxO3a mRNA表达高峰明显早于Dlx2 mRNA;Dlx2mRNA表达在E15~E17时大幅度上升,而在此之后始终保持这一高水平的表达;Dlx2 mRNA与FoxO3a mRNA的表达在E15~P1呈现出一致的变化趋势;Dlx2基因在E19时出现mRNA水平的高表达而未见蛋白表达。结论Dlx2和FoxO3a基因在胚胎后期鼠脑皮质中均有表达,且其表达趋势具有一定的一致性;两基因的分布随皮质分层而改变。 展开更多
关键词 远端同源异型盒2 叉头盒O3a 大脑皮质 胚胎发育 实时定量聚合酶链反应 免疫组织化学 大鼠
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小麦蚕豆间作对根际土壤氮转化微生物的影响 被引量：10
2
作者 唐艳芬 续勇波 +1 位作者 郑毅 雷宝坤 《农业资源与环境学报》 CAS 2016年第5期482-490,共9页
通过田间小区试验,采用磷脂脂肪酸(PLFA)、实时荧光定量PCR研究了小麦蚕豆间作不同生育期对根际土壤微生物群落的变化、氨氧化细菌(AOB)、氨氧化古菌(AOA)以及反硝化细菌中亚硝酸还原酶(nirK)、一氧化氮还原酶(norB)和氧化亚氮还原酶(no... 通过田间小区试验,采用磷脂脂肪酸(PLFA)、实时荧光定量PCR研究了小麦蚕豆间作不同生育期对根际土壤微生物群落的变化、氨氧化细菌(AOB)、氨氧化古菌(AOA)以及反硝化细菌中亚硝酸还原酶(nirK)、一氧化氮还原酶(norB)和氧化亚氮还原酶(nosZ)基因拷贝数以及土壤酶活性和土壤硝态氮、铵态氮含量的影响。结果表明:与单作相比,小麦蚕豆间作显著提高了根际土壤中总的PLFAs生物量、细菌、真菌、放线菌和好氧菌的生物量。土壤样品中的amoA基因拷贝数在10~5~10~6范围内AOB的amoA基因数量高于AOA。在不同的生育期,根际土壤中nirK的基因拷贝数都是间作高于单作;在拔节期,间作蚕豆的norB基因显著高于其他种植模式(P<0.05);在拔节期、抽穗期,nosZ基因均是间作显著高于单作(P<0.05),并随着生育期呈现降低的趋势。间作降低了根际土壤NO_3^--N的含量,提高了NH_4^+-N的含量(P<0.05)。说明小麦蚕豆间作后改变了根际土壤的微环境,使得土壤微生物群落结构发生改变,这种改变在一定程度上能够对土壤氮素的有效保蓄和供应、同时防止氮素损失和污染起到积极作用,为间作增产提供了氮素营养保障。 展开更多
关键词 间作 磷脂脂肪酸(PLFA) 荧光定量pcr AMO A基因 反硝化基因
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中华鲟TaqMan实时荧光PCR检测方法的建立 被引量：2
3
作者 陈光哲 郑红霞 祝长青 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期399-403,共5页
为给中华鲟提供及时而有效的保护,本研究根据NCBI上已公布的中华鲟D-loop基因序列设计并筛选了引物与探针组合,建立了中华鲟TaqMan实时荧光PCR检测方法,并对所建立的实时荧光PCR方法进行方法学评价。结果显示,建立的方法能够对中华鲟及... 为给中华鲟提供及时而有效的保护,本研究根据NCBI上已公布的中华鲟D-loop基因序列设计并筛选了引物与探针组合,建立了中华鲟TaqMan实时荧光PCR检测方法,并对所建立的实时荧光PCR方法进行方法学评价。结果显示,建立的方法能够对中华鲟及其产品进行快速而准确的检测,且特异性好,检测灵敏度高,能够达到0.001 ng的中华鲟DNA和100个拷贝的重组质粒DNA。该方法在应用于全国多个地区采集的鲟鱼样品的检测时,结果表明只有7个从相关科研单位得到的已经鉴定的中华鲟标本,经检测才是真正的中华鲟,而许多餐馆中号称的"中华鲟"经检测并非真正的中华鲟,只是其他的一些鲟鱼品种。因此本研究建立的中华鲟TaqMan实时荧光PCR检测方法特异性强、灵敏度高,且具有较好的应用价值。 展开更多
关键词 中华鲟 TaqMan实时荧光pcr 特异性 灵敏度
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miRNA-191在胃癌组织中的表达 被引量：8
4
作者 郭鹏辉 杜艳蕾 聂玉强 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1560-1562,共3页
目的分析胃癌组织中miRNA-191的表达及预测其靶基因。方法选取胃癌及配对癌旁正常组织标本50例,应用基于SYBR GreenⅠ的实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miRNA-191的表达情况,后用2-ΔΔCT方法进行相对定量分析。利用生物信息学软件对miRNA... 目的分析胃癌组织中miRNA-191的表达及预测其靶基因。方法选取胃癌及配对癌旁正常组织标本50例,应用基于SYBR GreenⅠ的实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miRNA-191的表达情况,后用2-ΔΔCT方法进行相对定量分析。利用生物信息学软件对miRNA-191进行靶基因预测。结果 miRNA-191在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(P<0.05),miRNA-191与临床病理参数(性别、年龄、病理分型、淋巴结转移和TNM分期)无明显关系(P>0.05)。对miRNA-191预测得到PLCD1、SOX4等9个靶基因。结论 miR-NA-191在胃癌组织中高表达,可能在胃癌的发病中起重要作用。 展开更多
关键词 胃癌 mirNA-191 实时荧光定量pcr 靶基因
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实时定量PCR检测大肠埃希菌在LB培养基和血中对抗生素的药物敏感性 被引量：3
5
作者 马恩陵 廉东波 +4 位作者 李云玖 张立阳 谢秀丽 徐英春 蒋朱明 《中国临床营养杂志》 2006年第4期212-216,共5页
目的 建立以实时定量PCR快速检测大肠埃希菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素药物敏感性的方法。方法 临床血培养获得大肠埃希菌株，以常规纸片法检测其对抗生素的药物敏感性。分别在LB液体培养基和健康人新鲜全血中加入该大肠埃... 目的 建立以实时定量PCR快速检测大肠埃希菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素药物敏感性的方法。方法 临床血培养获得大肠埃希菌株，以常规纸片法检测其对抗生素的药物敏感性。分别在LB液体培养基和健康人新鲜全血中加入该大肠埃希菌至终浓度为0．5麦氏单位，采用不加抗生素的标本作为生长对照组，加入耐受或敏感的抗生素的标本作为耐受药物组或敏感药物组，37℃震荡培养，分别提取0、1、2、3、4小时的基因组DNA，以大肠埃希菌特异β-右旋半乳糖苷酶基因的引物和TaqMan探针，对标本进行实时定量PCR检测。结果 实时定量PCR方法有较好的重复性（CT值变异系数0．26％～1．56％）和精确度（大肠埃希菌DNA提取效率在LB培养基中为43．6％，在血中为26．7％），标准曲线线性关系好（R^2≥0．998）。培养1～3小时后，耐受药物组与生长对照组的大肠埃希菌DNA拷贝数均呈对数增长，在LB液体培养基中增至约19～120倍，在新鲜全血中增至约6～11倍；敏感药物组大肠埃希菌DNA拷贝数呈减少趋势，在LB液体培养基中减至0．22～0．12倍，在新鲜全血中为1．29～0．14倍。上述药敏结果与常规纸片法一致。结论 采用实时定量PCR检测大肠埃希菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素的药物敏感性，结果与常规纸片法一致，但更快速。 展开更多
关键词 实时定量pcr 抗生素药物敏感性 大肠埃希菌
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亚硝酸氮浓度变化对感染白斑综合症病毒的凡纳滨对虾的影响 被引量：2
6
作者 向赟 王刚 +2 位作者 陈兆明 张锐 孙成波 《安徽农业科学》 CAS 2014年第30期10569-10572,10659,共5页
[目的]为对虾产业的健康可持续发展提供依据.[方法]研究不同亚硝酸氮浓度变化对感染WSSV的凡纳滨对虾的影响.[结果]先感染WSSV试验中,亚硝酸氮浓度在渐变和突变过程中对凡纳滨对虾累积死亡率及病毒增殖的影响显著（P＜0.05）.突变试验... [目的]为对虾产业的健康可持续发展提供依据.[方法]研究不同亚硝酸氮浓度变化对感染WSSV的凡纳滨对虾的影响.[结果]先感染WSSV试验中,亚硝酸氮浓度在渐变和突变过程中对凡纳滨对虾累积死亡率及病毒增殖的影响显著（P＜0.05）.突变试验中起始浓度、中浓度、高浓度组凡纳滨对虾的累积死亡率分别为52.2％ 、70.0％和76.7％,病毒含量分别为7.0×10^6、1.2×107和9.4×10^6copy/g;渐变试验中累积死亡率分别为50.0％、63.3％和66.7％,病毒含量分别为4.7×10^6、2.7×10 7和1.1 × 10^7 copy/g.后感染WSSV试验中24h对虾死亡率低于12.2％,48h后突变组首先出现死亡高峰,72 ～ 120 h存在显著差异（P＜0.05）;渐变组试验中起始、中、高浓度亚硝酸氮组凡纳滨对虾的死亡率分别为21.1％、30％和50％,病毒含量分别为9.8×10^4 、2.2×105和2.3×10v6 copy/g;突变组试验中凡纳滨对虾的死亡率分别为31.1％ 、48.9％和61.1％,病毒含量分别为2.7×10^5、2.1×10^6和5.2×10^6 copy/g.[结论]携带WSSV的凡纳滨对虾对亚硝酸氮浓度变化更敏感,更易引起WSSV从潜伏感染转为急性感染.亚硝酸氮突变影响对虾对WSSV的易感性比渐变更为显著. 展开更多
关键词 亚硝酸氮 凡纳滨对虾 白斑综合症病毒 实时荧光定量pcr 病毒含量
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原癌基因PIM-1检测在前列腺癌诊断中的临床意义 被引量：1
7
作者 何慧婵 毕学成 +6 位作者 戴奇山 王劭晟 刘文华 江福能 刘良式 魏鸿蔼 钟惟德 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期352-353,共2页
目的探讨原癌基PIM-1在前列腺癌诊断中的价值。方法实时荧光定量PCR法检测23例前列腺癌、37例良性前列腺增生及3例正常前列腺组织标本中PIM-1的表达,根据标准曲线法,比较3种组织中PIM-1定量的差异。结果前列腺癌、良性前列腺增生与正常... 目的探讨原癌基PIM-1在前列腺癌诊断中的价值。方法实时荧光定量PCR法检测23例前列腺癌、37例良性前列腺增生及3例正常前列腺组织标本中PIM-1的表达,根据标准曲线法,比较3种组织中PIM-1定量的差异。结果前列腺癌、良性前列腺增生与正常前列腺组织PIM-1的定量表达值分别为4.45±0.63、2.57±0.74、1.05±0.04,3组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论实时荧光RT-PCR定量检测PIM-1有可能成为前列腺癌诊断的可靠辅助指标。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 实时定量pcr 基因表达
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2013—2015年菏泽市手足口病病原监测结果 被引量：4
8
作者 刘雅娟 刘芳 《职业与健康》 CAS 2017年第7期946-949,共4页
目的了解2013—2015年菏泽市手足口病(HFMD)的病原情况,研究其流行病学特征,为菏泽市今后HFMD疫情的研判和防治提供参考。方法从2013—2015年菏泽市各县区HFMD定点医疗单位收集的临床诊断病例的粪便或肛拭子标本中,提取病毒核酸,应用实... 目的了解2013—2015年菏泽市手足口病(HFMD)的病原情况,研究其流行病学特征,为菏泽市今后HFMD疫情的研判和防治提供参考。方法从2013—2015年菏泽市各县区HFMD定点医疗单位收集的临床诊断病例的粪便或肛拭子标本中,提取病毒核酸,应用实时荧光定量PCR进行EV71、CoxA16和其他肠道病毒核酸检测。结果 2013—2015年共收集样本1 688份,其中阳性样本1 434份,检出率为84.95%;EV71阳性样本844份,阳性率为50.00%;CoxA16阳性样本197份,阳性率为11.67%;其他肠道病毒阳性样本393分,阳性率为23.28%。各年病毒型别分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论 2013—2015年菏泽市HFMD主要由EV71和CoxA16引起。确诊病例病毒检出率从高到低分别是EV71、其他肠道病毒和CoxA16。2014年出现过CoxA16病原的小暴发,2013和2015年均以EV71为主。 展开更多
关键词 手足口病 实时荧光定量pcr 肠道病毒71型(EV71) 柯萨奇疔毒A16型(CoxA16)
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实时荧光定量PCR检测手足口病肠道病毒71型与柯萨奇病毒16型临床分析 被引量：3
9
作者 王海 周蕾 +1 位作者 张永乐 刁宏燕 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第24期6074-6075,6078,共3页
目的探讨肠道病毒71型(EV71)与柯萨奇病毒A 16型(Cox A16)实时荧光定量PCR检测在早期诊断手足口病(HFMD)中的意义,为临床治疗提供参考依据。方法对2012年3月-2013年6月157例疑似HFMD患儿的粪便、疱疹液、鼻咽拭子样本进行EV71、Cox A16... 目的探讨肠道病毒71型(EV71)与柯萨奇病毒A 16型(Cox A16)实时荧光定量PCR检测在早期诊断手足口病(HFMD)中的意义,为临床治疗提供参考依据。方法对2012年3月-2013年6月157例疑似HFMD患儿的粪便、疱疹液、鼻咽拭子样本进行EV71、Cox A16、肠道病毒(EV)的实时荧光定量PCR检测,根据试剂说明书的标准判定;采用SPSS16.0进行数据分析。结果粪便中EV、EV71、Cox A16的检出率分别为94.09%、42.04%、38.85%,高于鼻咽拭子样本,差异有统计学意义(P<0.05);而粪便与疱疹液中EV、EV71、Cox A16的阳性率相比,差异无统计学意义。结论对HFMD患儿早期诊断、早期治疗,应该首选粪便标本采用实时荧光定量PCR法检测EV、EV71、Cox A16。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒71型 柯萨奇病毒A 16型 实时荧光定量 聚合酶链反应
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冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏中α-烯醇化酶基因mRNA的转录水平 被引量：1
10
作者 马莉 计红 +5 位作者 甄莉 郭景茹 刘艳芝 彭梦玲 孔凡志 杨焕民 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第9期929-933,共5页
目的研究冷应激前后大鼠心脏、肝脏、脾脏中α-烯醇化酶（α-enolase,ENO1）基因m RNA的转录水平。方法将大鼠随机分为正常对照组（24℃,正常饲喂7 d）和冷应激组（置4℃,应激12 h）,提取各组大鼠心脏、肝脏及脾脏细胞总RNA,反转录成c D... 目的研究冷应激前后大鼠心脏、肝脏、脾脏中α-烯醇化酶（α-enolase,ENO1）基因m RNA的转录水平。方法将大鼠随机分为正常对照组（24℃,正常饲喂7 d）和冷应激组（置4℃,应激12 h）,提取各组大鼠心脏、肝脏及脾脏细胞总RNA,反转录成c DNA,以其为模板,PCR扩增ENO1基因,应用生物信息学软件DNAstar进行同源性分析,实时荧光定量PCR法检测大鼠心脏、肝脏、脾脏中ENO1基因m RNA的转录水平。结果冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏总RNA的1%琼脂糖凝胶电泳可见28S、18S和5S 3条带,A260/A280值为1.8～2.0;ENO1基因经2%琼脂糖凝胶电泳分析可见107 bp的目的基因条带;ENO1基因序列与NCBI上公布序列的同源性为100%;冷应激组大鼠肝脏、脾脏组织中ENO1基因m RNA的转录水平明显高于正常对照组（P〈0.01）,正常对照组大鼠心脏组织中ENO1基因m RNA转录水平明显高于冷应激组（P〈0.05）。结论冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏中ENO1基因m RNA的转录水平均发生显著改变,本实验为动物应激状态评估及应激发生机制的研究提供了实验依据。 展开更多
关键词 冷应激 α-烯醇化酶 基因转录 实时荧光定量pcr
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