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脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞中microRNA-146a与TNF-α的相关性研究 被引量：8
1
作者 曾振国 龚洪翰 +10 位作者 李勇 聂贞蕴 揭克敏 詹以安 聂成 刘芬 丁成志 邵强 卿城 朱白鹭 钱克俭 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期709-712,共4页
目的观察肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和microRNA-146a在脂多糖（LPS）诱导的NR8383肺泡巨噬细胞中的动态表达，分析二者在时间上的变化关系，探讨microRNA-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控作用及其机制。方法体外培养的肺泡巨噬细胞接... 目的观察肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和microRNA-146a在脂多糖（LPS）诱导的NR8383肺泡巨噬细胞中的动态表达，分析二者在时间上的变化关系，探讨microRNA-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控作用及其机制。方法体外培养的肺泡巨噬细胞接种于六孔板，贴壁后加入1μg／mL的LPS，刺激0、3、6、12h后离心收集培养上清液和细胞。采用实时荧光定量PCR检测细胞中microRNA-146a和TNF-αmRNA的表达，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测培养上清液中TNF-α蛋白水平的表达。microRNA-146a和TNF-αmRNA的相关性采用双变量Pearson相关性分析。结果（1）培养上清液中的TNF-α蛋白在LPS刺激3h后显著升高[（359．80±57．54）pg／mL，P〈0．01]，于12h达高峰[（729．22±50．40）pg／ml，pg〈0．01]；（2）LPS刺激3h后，细胞中TNF-αmRNA的表达即达到顶峰[（67．48±24．52）倍，P〈0．01]，6h后开始降低[（29．53±4．26）倍，P〈0．05]；（3）LPS刺激6h后，microRNA-146a表达水平显著增高[（5．33±0．81）倍，P〈0．01]，并且持续增高[12h：（8．21±1．19）倍，P〈0．01]；（4）细胞中microRNA-146a的表达水平与TNF-αmRNA的含量呈负相关（r=-0．895，P〈0．01）。结论在LPS诱导的肺泡巨噬细胞中，microRNA-146a的表达水平与TNF-αmRNA的含量呈负相关，推测microRNA-146a可能参与了肺泡巨噬细胞的炎症反应调控。 展开更多
关键词 microRNA-146a 肺泡巨噬细胞 肿瘤坏死因子-Α 实时荧光定量PCR 炎症
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2014年济南市一起聚集性病毒性脑炎的调查及快速病原学鉴定 被引量：4
2
作者 关恒云 王春荣 +6 位作者 刘岚铮 杨国樑 赵小东 吕燕 韩秀云 张先慧 徐胜平 《中华实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期769-771,共3页
目的 快速鉴定2014年济南市一起聚集性病毒性脑炎的病原体,分析其流行病学及病原学特征.方法 采用统一的个案调查表对住院患儿逐一进行个案调查.4例患儿均采集粪便和脑脊液标本.采用实时荧光定量（RT） PCR方法检测总肠道病毒（PE）、... 目的 快速鉴定2014年济南市一起聚集性病毒性脑炎的病原体,分析其流行病学及病原学特征.方法 采用统一的个案调查表对住院患儿逐一进行个案调查.4例患儿均采集粪便和脑脊液标本.采用实时荧光定量（RT） PCR方法检测总肠道病毒（PE）、肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A组（CVA） 16、10和6型病毒核酸;PE阳性标本采用巢式反转录PCR方法扩增5＆#39;-UTR区基因,测定核苷酸序列并进行同源性分析.结果 本起聚集性病毒性脑炎疫情首发病例出现于2014年4月8日,呈人传人的传播模式.RT-PCR结果显示,所有标本PE核酸检测为阳性,而EV71、CVA16、CVA10和CVA6核酸检测均为阴性.5＆#39;-UTR区核苷酸序列在美国生物技术信息中心网站经碱基局部对准检索工具分析（http：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）显示与肠道病毒柯萨奇病毒B5（CVB5）同源性最高,彼此之间核苷酸同源性为99.2％ ～ 100.0％,与2010年河南株CVB5（HQ998851）的核苷酸同源性为96.7％～97.4％.4例患儿经积极的抗病毒、抗感染及相关对症支持治疗,均痊愈出院,无后遗症发生.结论 本起聚集性病毒性脑炎病原体为CVB5,与2010年河南株CVB5核苷酸同源性最高.RT-PCR和巢式反转录PCR方法可快速、准确地鉴定肠道病毒引起的病毒性脑炎. 展开更多
关键词 病毒性脑炎 柯萨奇病毒B5 实时荧光定量聚合酶链反应 巢式反转录聚合酶链反应
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基于新一代高通量测序技术分析拮抗酵母Cryptoccocus laurentii诱导处理樱桃番茄果实后转录组学的变化 被引量：1
3
作者 唐琼 郑晓冬 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第18期55-62,共8页
罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii)作为生物激发子,能显著诱导采后樱桃番茄对灰葡萄孢(Botrytiscinerea)的抗性响应,但其防治机制尚未完全明确。本实验以樱桃番茄为材料,利用新一代高通量测序技术Illumina HiSeqTM4000对罗伦隐球酵... 罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii)作为生物激发子,能显著诱导采后樱桃番茄对灰葡萄孢(Botrytiscinerea)的抗性响应,但其防治机制尚未完全明确。本实验以樱桃番茄为材料,利用新一代高通量测序技术Illumina HiSeqTM4000对罗伦隐球酵母处理及水对照处理的番茄果肉组织进行转录组测序,采用生物信息学方法对差异基因进行功能注释和通路分析,并利用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time-quantitative polymerase chainreaction,RT-qPCR)技术对随机选取的差异表达基因进行验证。结果表明,樱桃番茄果实经过罗伦隐球酵母诱导处理48 h后,共有3 141个基因差异表达,上、下调表达基因分别为1 689个和1 452个,这些差异表达基因涉及多个代谢路径,揭示罗伦隐球酵母对番茄的诱导作用是一个多代谢路径参与的调控过程。此外,RT-qPCR验证结果与转录组分析结果趋势一致。 展开更多
关键词 罗伦隐球酵母 樱桃番茄 转录组学 实时荧光定量聚合酶链式反应
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结直肠癌组织中CD_(40) mRNA的表达变化及临床意义
4
作者 杨晨晨 李忠 +3 位作者 吴雨岗 牟琴峰 罗光华 谢海彬 《山东医药》 CAS 2013年第7期37-39,共3页
目的观察结直肠癌组织中CD40mRNA的表达变化,并探讨其临床意义。方法应用RT-PCR法分别检测30例结直肠癌及其癌旁组织中CD40mRNA的相对表达量,并分析其表达与结直肠癌患者性别、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期相关... 目的观察结直肠癌组织中CD40mRNA的表达变化,并探讨其临床意义。方法应用RT-PCR法分别检测30例结直肠癌及其癌旁组织中CD40mRNA的相对表达量,并分析其表达与结直肠癌患者性别、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期相关性。结果结直肠癌组织中CD40mRNA的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05);结直肠癌组织中CD40mRNA的表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期相关(P<0.05),与患者性别、浸润深度及远处转移无关(P>0.05)。结论结直肠癌组织中CD40mRNA表达显著降低,并与肿瘤的浸润性生长相关;CD40分子可能成为判断结直肠癌预后的有效指标。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 结直肠肿癌 CD40mRNA 实时定量多聚酶链反应
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联合检测EB病毒不同抗体及EB病毒DNA在鼻咽癌血清学诊断中的价值 被引量：43
5
作者 叶倩 李筱莉 +5 位作者 陈岩松 郭俊英 高嫣妮 余小龙 崔兆磊 陈燕 《现代肿瘤医学》 CAS 2016年第19期3045-3048,共4页
目的:评价EB病毒(EBV)抗衣壳抗原VCA-IgA抗体、抗早期抗原EA-IgA抗体、抗立即早期抗原Rta-IgG抗体和EBV-DNA检测在鼻咽癌诊断中的价值。方法:收集160例初治鼻咽癌,133例症状相似的非鼻咽癌患者和163名健康体检者的血清和血浆。采用酶联... 目的:评价EB病毒(EBV)抗衣壳抗原VCA-IgA抗体、抗早期抗原EA-IgA抗体、抗立即早期抗原Rta-IgG抗体和EBV-DNA检测在鼻咽癌诊断中的价值。方法:收集160例初治鼻咽癌,133例症状相似的非鼻咽癌患者和163名健康体检者的血清和血浆。采用酶联免疫法检测血清VCA-IgA、EA-IgA和RtaIgG抗体的水平,用实时荧光定量PCR检测血浆EBV-DNA的相对含量。按鼻咽癌2008临床TNM分期法进行分期,计算不同分组、各临床分期以及鼻咽癌治疗前后的各抗体阳性率、抗体水平以及EB-DNA的检测结果并进行数据分析。结果:鼻咽癌组VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG和EBV-DNA阳性率均高于鼻咽相关疾病组及健康对照组(均P<0.05)。血清VCA-IgA和EA-IgA结果相对A值(即r A或S/CO值)在Ⅰ、Ⅱ期低于Ⅲ、Ⅳ期,差异有统计学意义(P<0.05),但阳性率在各期间比较差异无统计学意义(P>0.05);Ⅰ、Ⅱ期患者Rta-IgG的r A值和阳性率明显低于Ⅲ、Ⅳ期患者(P<0.05);血浆中EBV-DNA阳性率及EBVDNA中位数水平随着临床分期的升高而增高,Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗有效(CR+PR)患者的EBV-DNA含量明显低于治疗前水平(P<0.05)。结论:VCA-IgA、EA-IgA、RtaIgG、EBV-DNA检测有助于鼻咽癌的辅助诊断、临床分期预测及疗效评估。 展开更多
关键词 鼻咽癌 抗体 EB病毒DNA 实时荧光定量聚合酶链反应
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k-ras基因在中国结直肠癌患者中的突变状态 被引量：30
6
作者 刘伟 王丽 +5 位作者 余英豪 王旭洲 武一曼 吴在增 欧阳学农 王烈 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2011年第13期1367-1374,共8页
目的:评价中国结直肠癌患者中k-ras基因突变状态及其与临床病理参数的关系.方法:收集2008-01/2009-12在中国人民解放军南京军区福州总医院手术切除的临床资料完整的结直肠癌石蜡包埋组织280例,分别应用实时荧光定量PCR和直接测序法检测... 目的:评价中国结直肠癌患者中k-ras基因突变状态及其与临床病理参数的关系.方法:收集2008-01/2009-12在中国人民解放军南京军区福州总医院手术切除的临床资料完整的结直肠癌石蜡包埋组织280例,分别应用实时荧光定量PCR和直接测序法检测结直肠癌中k-ras基因外显子2中第12、13编码子上最常见的7种突变类型,即第12编码子的35G>A、35G>T、35G>C、34G>A、34G>T、34G>C及第13编码子的38G>A,同时将两种检测结果进行比对分析.结果:(1)经直接基因测序,确认在280例结直肠癌中,k-ras基因测序阳性(基因突变型)94例,阳性率33.57%(94/280),其中第12编码子的35G>A、35G>T、35G>C、34G>A、34G>T及34G>C的突变率分别为14.64%(41/280)、4.29%(12/280)、0.36%(1/280)、2.86%(8/280)、3.57%(10/280)、0.36%(1/280),第13编码子的38G>A的突变率为7.5%(21/280);(2)94例k-ras基因测序阳性(基因突变型)病例中,实时荧光定量PCR阳性91例[灵敏度96.8%(91/94)],阴性3例;186例基因测序阴性(野生型)中,实时荧光定量PCR阴性184例[特异性98.9%(184/186)],阳性2例;实时荧光定量PCR法与直接基因测序法符合率为98.2%[(91+184)/280];(3)k-ras基因突变与患者性别、年龄相关(均P<0.05),而与肿瘤部位、分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移及远处转移无相关性(均P>0.05).结论:(1)中国结直肠癌患者中存在较大比例的k-ras基因突变(33.57%),在临床选取表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂和抗EGFR单抗靶向药物治疗结直肠癌患者之前均应常规检测k-ras基因突变状态,从而为靶向治疗提供可靠的参考依据;(2)实时荧光定量PCR检测结果与基因测序检测结果高度一致,实时荧光定量PCR能够准确、快速、简便的检测出结直肠癌k-ras基因突变位点,可用于结直肠癌k-ras基因突变的检测;(3)k-ras基因突变与结直肠癌的生物学行为无明显相关性,但在≥60岁的女性人群中k-ras基因突变率较高 展开更多
关键词 结直肠癌 K-RAS基因 基因突变 直接基因测序法 实时荧光定量PCR 靶向治疗 临床病理参数
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SYBR Green实时荧光定量PCR技术平台的建立 被引量：16
7
作者 陈英剑 胡成进 赵苗青 《实用医药杂志》 2004年第11期997-999,共3页
目的建立SYBRGreen实时荧光定量PCR技术平台。方法通过摸索SYBRGreen工作液的配制方法,经典PCR检测HBVDNA方法转为SYBRGreen实时荧光定量PCR方法及建立大鼠TGF-bate1mRNA表达水平的SYBRGreen实时荧光定量PCR方法。结果SYBRGreenⅠ工作液... 目的建立SYBRGreen实时荧光定量PCR技术平台。方法通过摸索SYBRGreen工作液的配制方法,经典PCR检测HBVDNA方法转为SYBRGreen实时荧光定量PCR方法及建立大鼠TGF-bate1mRNA表达水平的SYBRGreen实时荧光定量PCR方法。结果SYBRGreenⅠ工作液,40×H2O溶液稳定性好,最佳反应浓度为1∶10000。HBVDNA的SYBRGreen实时荧光定量PCR方法,最佳的MgCl2反应浓度4.0mmol,引物浓度0.5μmol,81℃时收集荧光信号。定量分析用标准曲线斜率为-3.32,相关系数为-0.994,误差为0.016。大鼠TGF-bate1表达水平的SYBRGreen实时荧光定量PCR方法,TGF-bate1和Bate-actin的最佳MgCl2反应浓度均为3.5mmol,引物浓度前者为0.8μmol,后者为0.5μmol,在87℃时收集荧光信号。靶基因TGF-bate1mRNA的相对量用下述公式计算:(1+Etgf)Ct1/(1+Eact)Ct2。结论初步建成了可检测DNA和mRNA的SYBRGreen实时荧光定量PCR技术平台。 展开更多
关键词 SYBR Green 实时荧光定量PCR 技术平台
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B族溶血性链球菌(GBS)感染对妊娠结局的影响 被引量：23
8
作者 赵小娅 谢月英 +3 位作者 周旭丽 谢纲 文佳 洪威 《分子诊断与治疗杂志》 2016年第3期170-173,共4页
目的探讨妊娠晚期孕妇产前筛查B族溶血性链球菌(group B Streptococcus,GBS)感染的临床价值及对妊娠结局的影响。方法以2014年1月至2014年12月在本院产科门诊就诊的4 091例妊娠晚期孕妇为研究对象,采用实时荧光定量PCR(real-time fluore... 目的探讨妊娠晚期孕妇产前筛查B族溶血性链球菌(group B Streptococcus,GBS)感染的临床价值及对妊娠结局的影响。方法以2014年1月至2014年12月在本院产科门诊就诊的4 091例妊娠晚期孕妇为研究对象,采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)检测是否感染GBS,以检测结果为阳性的孕妇为GBS阳性组,共225例,按1∶1比例在检测结果为阴性孕妇中随机抽取225例作为阴性组,随访该2组孕妇的妊娠结局。结果 4 091例孕妇GBS阳性检出率为5.4%(225/4 091)。GBS阳性组与阴性组比较,发生胎膜早破[20.4%(46/225)和11.1%(25/225)]、宫内感染[19.1%(43/225)和7.5%(17/225)]、新生儿感染[11.5%(26/225)和5.7%(13/225)]概率均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。早产和难产发生率在GBS阳性和阴性孕妇中比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 GBS感染会明显增加胎膜早破、宫内感染及新生儿感染的发生率,对妊娠结局造成不良影响,应对孕晚期孕妇常规进行GBS筛查。 展开更多
关键词 B族溶血性链球菌 实时荧光定量PCR 感染 妊娠结局 新生儿
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重症急性胰腺炎不同病程的细菌移位及肠道菌群组成结构的变化研究 被引量：18
9
作者 满意 常加伟 汤亲青 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期71-76,共6页
目的探究重症急性胰腺炎(severe acte pancreatitis,SAP)大鼠肠道菌群结构、细菌移位随病程延长发生的改变。方法随机情况下将健康SD大鼠分为对照组(Control组n=10)、SAP组(n=30)。其中SAP组又分为6、12、24 h亚组(每亚组分别为10只大鼠... 目的探究重症急性胰腺炎(severe acte pancreatitis,SAP)大鼠肠道菌群结构、细菌移位随病程延长发生的改变。方法随机情况下将健康SD大鼠分为对照组(Control组n=10)、SAP组(n=30)。其中SAP组又分为6、12、24 h亚组(每亚组分别为10只大鼠)。按比例配置5%牛磺胆酸钠试剂,采用胰胆管逆行注射制作SAP模型。模型制备成功后分别于6、12、24 h后处死大鼠,检测血清淀粉酶、内毒素水平,观察胰腺及肠黏膜病理改变,用细菌培养法检测腹腔及脏器细菌移位率并用质谱仪鉴定培养出的阳性菌株,16S rDNA、实时荧光定量-聚合酶链式反应(real time-PCR)进行肠腔细菌定量分析。结果SAP组6、12、24 h亚组大鼠血清淀粉酶较对照组升高明显,且>3倍以上(U/L:2086±686 vs.8707±1672,9012±1505,8797±1298;P﹤0.01),胰腺组织及小肠黏膜出现明显病理损伤;随着病程延长,SAP组大鼠肠腔内大肠埃希菌不断增殖(×10^-5:4.53±1.26 vs.10.07±2.57,16.18±3.51,19.45±4.70;P﹤0.01),乳酸杆菌不断减少(×10^-3:23.12±4.46 vs.11.43±2.68,5.20±2.07.2.02±0.94;P﹤0.01),同样双歧杆菌也不断减少(×10^-5:23.30±6.00 vs.17.61±3.94,13.21±2.84,9.49±3.41;P﹤0.01);血清内毒素检测阳性率、肠系膜淋巴结及腹腔脏器细菌移位率均不断升高(血清内毒素:0 vs.30%,50%,60%;肝脏:0 vs.20%,50%,70%;胰腺:0 vs.30%,40%,60%;肠系膜淋巴结:0 vs.40%,70%,80%;P﹤0.01)。结论SAP大鼠肠道黏膜屏障受损,肠道菌群紊乱,肠腔内需氧菌与厌氧菌比例倒置,随着病程延长,以大肠埃希菌为主的条件致病菌不断增值,乳酸杆菌、双歧杆菌等厌氧益生菌不断减少,致使肠腔细菌及内毒素移位,其与SAP并发的胰腺及全身感染存在一定关系,且随着病程延长不断加重。 展开更多
关键词 重症急性胰腺炎(SAP) 肠黏膜屏障 肠道微生态 16SrDNA 实时荧光定量-聚合酶链式反应(real time-PCR)
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实时荧光定量PCR法测定发酵乳中双歧杆菌 被引量：17
10
作者 吴燕涛 刘晓莉 +1 位作者 曹悦 王立平 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第8期172-175,共4页
对实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测发酵乳中双歧杆菌的DNA提取方法、PCR扩增效率、标准曲线绘制进行探讨,通过比较分析碱式提取法、玻璃珠破碎法和酶解法3种提取方法对发酵乳中总DNA提取效率、4种不同参考菌株的PCR扩增效率以... 对实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测发酵乳中双歧杆菌的DNA提取方法、PCR扩增效率、标准曲线绘制进行探讨,通过比较分析碱式提取法、玻璃珠破碎法和酶解法3种提取方法对发酵乳中总DNA提取效率、4种不同参考菌株的PCR扩增效率以及单一菌株标准曲线与混合菌株标准曲线的计数结果,建立实时荧光定量PCR快速测定发酵乳制品中双歧杆菌数量方法。结果表明:酶解法提取发酵乳中总DNA效果最好,OD260/280比值基本接近1.80,且提取的质量浓度含量最高;不同菌株的PCR扩增效率不同,其中参考菌株1.2213的Ct值与其他3菌株的Ct值存在显著性差异;根据单一菌株绘制标准曲线与混合菌株绘制标准曲线计数结果无显著性差异,后者计数结果更客观、准确。采用酶解法获取样品中的菌体细胞,基于混合菌液绘制标准曲线,采用实时荧光定量PCR技术确定发酵乳中双歧杆菌种属数量,可快速、准确地测定发酵乳中双歧杆菌的数量。 展开更多
关键词 发酵乳 双歧杆菌 实时荧光定量聚合酶链式反应
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3岁儿童患龋过程中龋易感因素的相关分析 被引量：16
11
作者 郝文婧 徐赫 +3 位作者 陈霄迟 周琼 张萍 秦满 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期193-198,共6页
目的 观察3岁儿童从无龋到患龋过程中龋易感因素的变化,以期为低龄儿童龋齿风险评估提供相关依据.方法 选择144名34 ～38个月龄无龋儿童观察1年.在观察基线、6个月及12个月时分别采集口腔龈上集合菌斑和相关问卷调查;根据各观察期末不... 目的 观察3岁儿童从无龋到患龋过程中龋易感因素的变化,以期为低龄儿童龋齿风险评估提供相关依据.方法 选择144名34 ～38个月龄无龋儿童观察1年.在观察基线、6个月及12个月时分别采集口腔龈上集合菌斑和相关问卷调查;根据各观察期末不同患龋状况,将研究对象分成无龋组（12个月保持无龋）、6个月患龋组（6个月时有龋或充填体）和12个月患龋组（6个月时无龋、12个月时有龋或充填体）.应用实时荧光定量PCR比较不同组间变形链球菌（Streptococcus mutans,Sm）和远缘链球菌（Streptococcus sobrinus,Ss）数量的差异.结果 130名儿童完成了12个月的复查,失访率为9.7％（14/144）.在12个月观察期末,无龋组为58人,6个月患龋组为44人,12个月患龋组为28人.在基线、6个月和12个月时3组儿童的口腔卫生和饮食习惯自身前后对比差异均无统计学意义（P＞0.05）.基线时无龋组进甜食和睡前进甜食或甜饮料的频率均显著低于6个月患龋组和12个月患龋组（P ＜0.001）.基线时6个月患龋组Sm和Ss的数量[Sm拷贝数：（6.33±2.21）×103,Ss拷贝数：（1.99±0.45）×103]均显著高于无龋组[Sm拷贝数：（5.81 ±2.43）×103,Ss拷贝数：（1.34±0.53）×103] （P ＜0.05）;6个月复查时,12个月患龋组Sm和Ss的数量[Sm拷贝数：（6.81 ±2.32）×103,Ss拷贝数：（1.97±1.43）×103]均显著高于无龋组[Sm拷贝数：（6.09±2.31）×103,Ss拷贝数：（1.34±0.55）×103] （P ＜0.05）.结论 3岁儿童在临床检出龋齿前6个月时Sm和Ss数量已显著升高;高频率摄取甜食及睡前进甜食或甜饮料是儿童未来患龋的重要易感因素. 展开更多
关键词 龋齿 牙菌斑 儿童口腔医学 实时荧光定量聚合酶链反应
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手足口病柯萨奇病毒A2、A4和A5型SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：14
12
作者 吕莉琨 杨东靖 +3 位作者 李力 谭昭麟 李佳萌 苏旭 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第1期15-19,共5页
目的建立一种快速、灵敏、特异的SYBR GreenⅠ实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)方法,以期用于检测柯萨奇病毒A2、A4和A5型。方法根据3种病毒vp1基因保守序列设计特异性引物,建立并优化SYBR GreenⅠrRT-PCR方法。分别构建3种病... 目的建立一种快速、灵敏、特异的SYBR GreenⅠ实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)方法,以期用于检测柯萨奇病毒A2、A4和A5型。方法根据3种病毒vp1基因保守序列设计特异性引物,建立并优化SYBR GreenⅠrRT-PCR方法。分别构建3种病毒的vp1部分基因的重组质粒作为病毒的体外转录标准品,分别以100~109和102~105倍稀释的标准品、其他6种肠道病毒、两种呼吸道RNA病毒及以临床诊断为手足口病的临床标本为模板,经过优化SYBR GreenⅠrRT-PCR反应条件,建立标准曲线和溶解曲线对其灵敏度、重复性、特异性进行评价,分析其临床应用中的效果。结果成功建立了3种柯萨奇病毒的SYBR GreenⅠ荧光定量rRT-PCR方法及定量标准曲线,方法的灵敏度为101copies/μl质粒标准品,变异系数均<2%,与柯萨奇病毒A组6、10、16型,肠道病毒EV71型,诺如病毒,轮状病毒,麻疹病毒和乙型流感病毒均无交叉反应。检测84份手足口病临床标本,阳性率分别为36.9%(CVA4)、8.33%(CVA5)和7.14%(CVA2),经测序验证符合率为100%。结论建立的检测柯萨奇病毒A2、A4和A5型的SYBR GreenⅠrRT-PCR方法具有良好的灵敏度、重复性和特异性,可用于手足口病病原体的分型检测。 展开更多
关键词 SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链反应 柯萨奇病毒A2型 柯萨奇病毒A4型 柯萨奇病毒A5型
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红参中精氨酸双糖苷对小鼠的抗疲劳作用 被引量：13
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作者 黄宝亮 丁传波 +4 位作者 王佳奇 郑毅男 刘文丛 张晶 徐晓华 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期897-902,共6页
目的:观察小鼠强迫性游泳诱发的疲劳现象,探讨红参中非皂苷类物质——精氨酸双糖苷(AFG)对小鼠的抗疲劳作用及其初步机制。方法:从红参中分离出AFG提取物,将80只ICR小鼠分为空白对照组,低、中和高剂量(100、200和400mg·kg^(-1))AFG... 目的:观察小鼠强迫性游泳诱发的疲劳现象,探讨红参中非皂苷类物质——精氨酸双糖苷(AFG)对小鼠的抗疲劳作用及其初步机制。方法:从红参中分离出AFG提取物,将80只ICR小鼠分为空白对照组,低、中和高剂量(100、200和400mg·kg^(-1))AFG组,每组20只,连续灌胃给药28d后对小鼠进行强迫性游泳实验,检测各组小鼠体质量,脏器指数,强迫性游泳时间,乳酸(LD)、尿素氮(BUN)、肝糖原(Gly)水平及腓肠肌中PGC-1α基因表达水平。结果:与空白对照组比较,低、中和高剂量AFG组小鼠的体质量和脏器指数差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组比较,低、中和高剂量AFG组小鼠强迫性游泳时间、Gly水平和PGC-1αmRNA基因表达水平均明显增加(P<0.05或P<0.01),且呈剂量依赖性;与空白对照组比较,低、中和高剂量AFG组小鼠血清中的LD和BUN水平明显降低(P<0.01)。结论:AFG对小鼠有抗疲劳作用,其机制可能与能量代谢有关。 展开更多
关键词 红参 精氨酸双糖苷 力竭性游泳 实时荧光定量聚合酶链反应 免疫印迹法
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胶体金免疫层析试剂盒对甲型H1N1流感病毒(2009)抗原快速检测的敏感性分析 被引量：14
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作者 田棣 何静 +5 位作者 刘祎 张万菊 徐磊 陈功祥 周志统 胡芸文 《检验医学》 CAS 2013年第2期154-158,共5页
目的了解胶体金免疫层析试剂盒对甲型H1N1流感病毒(2009)抗原快速检测的敏感性。方法分别用甲型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金免疫层析法)和甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金免疫层析法)对171例疑似甲型H1N1流感(2009)患者鼻咽... 目的了解胶体金免疫层析试剂盒对甲型H1N1流感病毒(2009)抗原快速检测的敏感性。方法分别用甲型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金免疫层析法)和甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金免疫层析法)对171例疑似甲型H1N1流感(2009)患者鼻咽拭子标本进行检测,以实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)核酸检测结果为参考,比较胶体金免疫层析试剂盒对不同病程以及不同病毒核酸载量标本检测的敏感性。结果 2种试剂盒的检测敏感性与标本的病毒核酸载量呈正相关(P<0.01),病毒载量≥108拷贝/mL时均可达73.3%。同时,2种试剂盒的阳性检出率与标本的病程呈负相关(P<0.01),发病1～2 d时分别为66.7%和62.5%,推测其在实际应用中的理论敏感性分别可达77.3%和74.6%。结论胶体金免疫层析试剂盒检测甲型H1N1流感病毒(2009)在发病初期及病毒载量较高时有较好的检测效果,可帮助临床早期诊断和海关口岸等机构的现场筛查。但鉴于胶体金免疫层析法自身的局限性,其结果只能作为初步参考,最终的确认结果应以PCR结果为准。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感病毒(2009) 抗原快速检测 胶体金免疫层析法 实时荧光定量聚合酶链反应
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实时荧光定量PCR法检测人骨肉瘤耐MTX细胞系中RFC、DHFR、GST-π的mRNA表达 被引量：12
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作者 于明东 李书忠 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期858-861,共4页
[目的]研究RFC(还原叶酸载体)、GST-π(谷胱甘肽S转移酶π)、DHFR(二氢叶酸还原酶)mRNA在人骨肉瘤U2-OS细胞系及人骨肉瘤耐药细胞系U2-OS/R1-R3中的表达差异,并探讨其在人骨肉瘤MTX化疗耐药中的意义。[方法]采用冲击并逐步增加诱导药物... [目的]研究RFC(还原叶酸载体)、GST-π(谷胱甘肽S转移酶π)、DHFR(二氢叶酸还原酶)mRNA在人骨肉瘤U2-OS细胞系及人骨肉瘤耐药细胞系U2-OS/R1-R3中的表达差异,并探讨其在人骨肉瘤MTX化疗耐药中的意义。[方法]采用冲击并逐步增加诱导药物浓度诱导的方法,诱导人骨肉瘤细胞系U2-OS,并建立耐MTX细胞系(U2-OS/R1-R3),利用荧光定量PCR技术在mRNA水平检测RFC、GST-π、DHFR在U2-OS及(U2-OS/R1-R3)中的表达。[结果]本试验成功建立三株人骨肉瘤耐药细胞系U2-OS/R1-R3中,荧光定量PCR结果显示MTX耐药与DHFRmRNA表达增加有关,与RFCmRNA的表达降低有关,与GST-πmRNA的表达增加有关。[结论]本试验在基因水平探讨人骨肉瘤细胞MTX化疗耐药机制,DHFR、GST-π基因表达的增加及RFC基因表达的降低参与了人骨肉瘤细胞的MTX耐药,为临床探索骨肉瘤患者的MTX耐药机制提供了重要的依据,为临床筛选MTX化疗不敏感患者提供重要的依据。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 甲氨喋呤(MTX) 还原叶酸载体(RFC) 二氢叶酸还原酶(DHFR) 谷胱甘肽S转移酶(GST-π)
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荧光标志技术与PCR检验技术相结合在高危型人乳头瘤病毒诊断中的应用研究 被引量：11
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作者 时秀云 于欣 马苏琳 《中国现代药物应用》 2019年第19期6-8,共3页
目的探讨荧光标志技术与聚合酶链式反应(PCR)检验技术相结合(实时荧光定量PCR在高危型人乳头瘤病毒(HPV)诊断中的应用价值。方法 224例高危型HPV感染患者为研究对象,均分别进行实时荧光定量PCR检验与第二代杂交俘获试验(HC-Ⅱ)检测。比... 目的探讨荧光标志技术与聚合酶链式反应(PCR)检验技术相结合(实时荧光定量PCR在高危型人乳头瘤病毒(HPV)诊断中的应用价值。方法 224例高危型HPV感染患者为研究对象,均分别进行实时荧光定量PCR检验与第二代杂交俘获试验(HC-Ⅱ)检测。比较不同程度宫颈病变患者HPV检出情况;比较两种检测方法的HPV阳性检出率分析两种检测方法的一致性。结果 224例高危型HPV感染患者中, 76例患者存在不同程度的宫颈上皮内瘤变(CIN),其中CINⅠ级41例, CINⅡ级23例,CINⅢ级12例;72例患者为鳞状上皮病变和慢性宫颈炎。CIN各期患者的实时荧光定量PCR HPV检出率与HC-ⅡHPV检出率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);鳞状上皮病变和慢性宫颈炎患者的实时荧光定量PCR HPV检出率为62.5%,高于HC-Ⅱ的33.3%,差异具有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测的HPV阳性检出率为75.4%, HC-Ⅱ检测的HPV阳性检出率为62.9%,实时荧光定量PCR检测的HPV阳性检出率高于HC-Ⅱ检测,差异具有统计学意义(χ2=8.210, P<0.05)。两种检测方法的符合率为83.0%(186/224),一致性检验结果显示,两种检测方法的Kappa值为0.67,提示虽然阳性检出率存在差异,但两种检测方法仍具有较高的一致性。结论实时荧光定量PCR检测高危型HPV具有较高的特异性和灵敏度,临床诊断价值明显,在实验条件允许的情况下,可做为首选的HPV检验方法加以推广和应用。 展开更多
关键词 实时荧光定量聚合酶链式反应 高危型人乳头瘤病毒 第二代杂交俘获试验 诊断价值
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不同中药复方对慢性心衰大鼠MMP-2、TIMP-2的影响 被引量：11
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作者 张艳 廖佳丹 王彩玲 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期409-412,I0002,共5页
目的研究基质金属蛋白酶2(MMP-2)及内源性基质金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP-2)在慢性心衰中的作用,从分子生物学角度探讨中药不同配伍对慢性心衰心室重构的影响,并进一步阐明其作用机理。方法以冠脉结扎法配合力竭式游泳、减食等方法造... 目的研究基质金属蛋白酶2(MMP-2)及内源性基质金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP-2)在慢性心衰中的作用,从分子生物学角度探讨中药不同配伍对慢性心衰心室重构的影响,并进一步阐明其作用机理。方法以冠脉结扎法配合力竭式游泳、减食等方法造成大鼠慢性心衰动物模型,分成模型组、西药组、益气中药组、活血中药组、益气活血中药组、益气活血利水中药组和正常组。利用实时荧光定量PCR技术及SABC免疫组化法检测慢性心衰大鼠MMP-2、TIMP-2表达的变化情况。结果慢性心衰动物模型组大鼠心肌MMP-2表达明显升高,TIMP-2表达降低,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.01);经过治疗,各用药组大鼠心肌组织MMP-2表达明显降低,TIMP-2表达升高,其中益气活血组、益气活血利水组与西药组比较,差异无统计学意义(P>0.05),且益气活血利水组疗效明显优于益气活血组(P<0.01)。结论益气活血利水中药作用于心肌组织,通过影响MMP-2、TIMP-2的表达,抑制或逆转心室重构的过程,从而达到治疗慢性心衰的目的。 展开更多
关键词 益气活血利水 实时荧光定量PCR 免疫组化法 基质金属白酶-2 基质金属蛋白酶组织抵 制剂-2 大鼠
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2020-2022年北京市通州区呼吸道感染患者呼吸道病原体流行特征分析 被引量：10
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作者 邹林 高翔 +6 位作者 张冲 佟玲 王建国 郗璐 张建明 刘永红 彭晓旻 《疾病监测》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期799-805,共7页
目的调查2020—2022年北京市通州区呼吸道传染病病原体的流行特征,为临床呼吸道感染疾病的诊断治疗和疫情防控提供参考依据。方法按照呼吸道感染病例纳入标准,收集2020年1月至2022年12月,到首都医科大学附属北京潞河医院就诊的1176例呼... 目的调查2020—2022年北京市通州区呼吸道传染病病原体的流行特征,为临床呼吸道感染疾病的诊断治疗和疫情防控提供参考依据。方法按照呼吸道感染病例纳入标准,收集2020年1月至2022年12月,到首都医科大学附属北京潞河医院就诊的1176例呼吸道感染患者的呼吸道样本,应用多重实时荧光聚合酶链式反应技术,对29种呼吸道感染病原体的核酸进行检测和数据分析。结果1176例样本中,检出26种呼吸道传染病病原体核酸阳性,病毒和细菌总检出率34.86%(410/1176),其中单一感染病毒类病原体98例(23.90%,98/410),单一感染细菌类病原体185例(45.12%,185/410),检出大于1种病原体的混合感染127例(30.98%,127/410),其中病毒+细菌混合感染39例(9.51%,39/410)、细菌+细菌混合感染88例(21.46%,88/410);<5、5~17、18~44、45~64、≥65岁年龄组检出率分别为30.77%(24/78)、35.59(42/118)、29.06%(120/413)、36.28%(78/215)、41.48%(146/352);上呼吸道和下呼吸道样本检出率分别为25.97%(195/751)和50.59%(215/425);按样本采集时间分组,检出率前2位的月份组分别是2020年1月,检出率84.00%(21/25),2021年12月,检出率59.78%(55/92)。结论2020年1月至2022年12月北京市通州区呼吸道传染病感染病毒情况明显减少,病原体以细菌类多见,混合感染情况占比较高,混合感染主要以细菌类混合感染为主,其中重症肺炎病例混合感染情况更加复杂多样,感染率最高的细菌类病原体是铜绿假单胞菌,老年人为易感人群且男性更易感染;春秋季节为感染的高发期。 展开更多
关键词 呼吸道感染 流行特征 多种病原体 实时荧光定量聚合酶链式反应
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实时荧光定量PCR法检测鼻咽癌患者血浆游离EB病毒DNA的临床应用 被引量：8
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作者 曾刚毅 唐孝亮 钟海军 《检验医学与临床》 CAS 2008年第10期591-592,共2页
目的了解本地区鼻咽癌(NPC)患者血浆游离EB病毒DNA(EBV-DNA)的检出状况,探讨其诊断价值和临床意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术对110例鼻咽癌患者和91例其他恶性肿瘤患者(对照组)进行血浆EBV-DNA检测。结果NPC患者EB... 目的了解本地区鼻咽癌(NPC)患者血浆游离EB病毒DNA(EBV-DNA)的检出状况,探讨其诊断价值和临床意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术对110例鼻咽癌患者和91例其他恶性肿瘤患者(对照组)进行血浆EBV-DNA检测。结果NPC患者EBV-DNA阳性率为56.4%(62/110),对照组阳性率为8.8%(8/91),经χ2检验,χ2=32.36,P<0.01。男性NPC患者外周血浆EBV-DNA的阳性率为64.4%(47/73),女性患者阳性率为40.5%(15/37),经χ2检验,二者差异有统计学意义(χ2=5.67,P<0.05)。62例血浆EBV-DNA阳性的NPC患者的拷贝数与8例血浆EBV-DNA阳性的其他恶性肿瘤患者的拷贝数比较,差异无统计学意义(经Wilcoxon非参数秩和检验,uc=1.57,P>0.05)。结论FQ-PCR检测血浆EBV-DNA对NPC辅助诊断有很高的临床实用价值,男性NPC患者对EBV的免疫力低于女性,更易受侵,其原因与机制有待进一步研究。 展开更多
关键词 鼻咽癌 EB病毒DNA 实时荧光定量聚合酶链反应
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植物乳杆菌FS5-5在盐胁迫下的转录组学分析 被引量：10
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作者 宋雪飞 郭晶晶 +3 位作者 姜静 唐筱扬 张颖 乌日娜 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第6期20-26,共7页
以分离自东北自然发酵大酱中的一株耐盐植物乳杆菌FS5-5(Lactobacillus plantarum FS5-5)为实验对象,在转录水平上对该菌株盐胁迫相关基因表达进行了研究。结果表明:在对数生长期,表达显著下调的共29个基因,分别为参与碳水化合物转运和... 以分离自东北自然发酵大酱中的一株耐盐植物乳杆菌FS5-5(Lactobacillus plantarum FS5-5)为实验对象,在转录水平上对该菌株盐胁迫相关基因表达进行了研究。结果表明:在对数生长期,表达显著下调的共29个基因,分别为参与碳水化合物转运和代谢的4个基因,氨基酸转运和代谢的9个基因,维生素代谢的3个基因,核苷酸代谢的6个基因,遗传信息翻译、核糖体结构和形成的7个基因;表达显著上调的有参与碳水化合物转运和代谢的4个基因。这些变化可能与L.plantarum FS5-5的盐胁迫机制密切相关。选取参与维生素代谢的3个基因和核苷酸代谢的1个基因,通过实时定量聚合酶链式反应对转录组学结果进行验证,结果表明两种方法中基因表达趋势一致。实验对L.plantarum FS5-5的盐胁迫反应进行了比较全面的分析,为提高工业生产中菌株的耐受性提供了理论依据。 展开更多
关键词 植物乳杆菌 盐胁迫 实时定量聚合酶链式反应 转录组学
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