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含1555位点的线粒体DNA拷贝数与非综合征型耳聋临床表型的关系 被引量：9
1
作者 程祖建 张榕 +5 位作者 杨滨 刘奇才 江凌 陈静 陈勇 欧启水 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第36期2536-2539,共4页
目的定量检测非综合征型耳聋患者mtDNhA1555G突变型／野生型的拷贝数，探讨mtDNAA1555G突变型的拷贝数与临床表型之间的关系。方法建立RT—ARMS—qPCR系统对含突变型和野生型mtDNA1555位点的拷贝数进行定量检测并计算其突变的比例。结... 目的定量检测非综合征型耳聋患者mtDNhA1555G突变型／野生型的拷贝数，探讨mtDNAA1555G突变型的拷贝数与临床表型之间的关系。方法建立RT—ARMS—qPCR系统对含突变型和野生型mtDNA1555位点的拷贝数进行定量检测并计算其突变的比例。结合散发组和家系组耳聋患者的临床资料，分析mtDNAA1555G突变型的拷贝数与耳聋严重程度的关系。结果散发组mtDNAA1555G同质性突变的患者中，突变拷贝数与耳聋轻重程度无关（R=0．001，P=0．997）；散发组mtDNAA1555G异质性突变的患者中，突变型与野生型的拷贝数比例与耳聋轻重程度相关（R=0．771，P=0．003）；家系组mtDNAA1555G同质性突变的拷贝数与耳聋轻重程度相关（R=0．341，P=0．022）；家系组mtDNAA1555G异质性突变的拷贝数与耳聋轻重程度相关（R=0．85，P=0．015）。结论含mtDNAA1555G点突变的拷贝数与非综合征性耳聋的严重程度密切相关，为揭示非综合征耳聋临床表型多样性奠定了基础。 展开更多
关键词 非综合征型耳聋 MTDNA 1555 RT—ARMS—qpcr系统 拷贝数
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非综合征型耳聋患者mtDNA A1555G异质性突变比例与临床表型的关系 被引量：5
2
作者 程祖建 杨滨 +1 位作者 江凌 欧启水 《中华耳科学杂志》 CSCD 2008年第4期381-384,共4页
目的定量检测非综合征型耳聋患者线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)1555突变型/野生型的拷贝数,探讨突变型/野生型比例与临床表型之间的关系。方法建立实时定量PCR技术和扩增阻滞突变系统(Real-time quantitative PCR和Amplification ... 目的定量检测非综合征型耳聋患者线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)1555突变型/野生型的拷贝数,探讨突变型/野生型比例与临床表型之间的关系。方法建立实时定量PCR技术和扩增阻滞突变系统(Real-time quantitative PCR和Amplification refractory mutation system,RT-ARMS-qPCR系统)对含突变型和野生型mtDNA 1555位点的拷贝数进行定量检测并计算比例。共检测散发组12例、家系组7例异质性突变患者,结合耳聋患者的临床资料,分析突变型与野生型的比例与耳聋严重程度的关系。结果散发组mtDNA A1555G异质性突变的患者中,突变型mtDNA所占的比例与耳聋轻重程度相关(r=0.771,P=0.003);家系组患者中,突变型mtD-NA所占的比例亦与耳聋轻重程度相关(r=0.850,P=0.015)。结论突变型mtDNA占所有mtDNA的比例与耳聋的严重程度密切相关,是非综合征型耳聋临床表型多样性的分子基础。 展开更多
关键词 非综合征型耳聋 线粒体DNA 突变 实时定量pcr技术和扩增阻滞突变(RT-ARMS-qpcr)系统 拷贝数 临床表型
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线粒体DNA 3243A→G异质水平定量检测方法的建立及应用 被引量：3
3
作者 张小勤 陈琳 +5 位作者 杨宇 郑超 颜景斌 路兆宁 吕建新 李伟 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期438-443,共6页
目的针对线粒体糖尿病致病位点mtDNA 3243A→G异质性突变，建立一种快速简便、低成本，但相对准确、敏感的定量检测方法，为不同条件下选择最佳检测方案提供参考。方法收集浙江省温州市一个母系遗传性线粒体糖尿病伴耳聋家系（maternall... 目的针对线粒体糖尿病致病位点mtDNA 3243A→G异质性突变，建立一种快速简便、低成本，但相对准确、敏感的定量检测方法，为不同条件下选择最佳检测方案提供参考。方法收集浙江省温州市一个母系遗传性线粒体糖尿病伴耳聋家系（maternally inherited diabetes and deafness MIDD）共17人，提取外周血全基因组DNA，同时分别应用PCR-限制性片段长度多态性技术（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism PCR-RLFP）、实时荧光定量PCR结合突变阻滞形成系统（realtime-amplification refractory mutation system-quantitative PCR，RT-ARMS-qPCR）和焦磷酸测序技术检测mtDNA A3243G突变的异质水平；并以0～100％不同比例A3243G突变负荷的11个标准品为对照，3种方法同时分别检测，根据实际检测值与预期检测值的相关程度，对这三种检测方法做出可靠性比较分析。结果PCR-RFLP、RTARMS-qPCR和焦磷酸测序技术对A3243G定量标准品的检测结果中，PCR-RFLP相对定量分析结果与预期值之间呈直线相关，决定系数R2=0．828；RT-ARMS-qPCR检测11个标准对照的突变负荷结果与预期值之间呈直线相关，决定系数R2=0．998；焦磷酸测序技术检测结果与预期值之间呈直线相关，决定系数R2=0．997。定量检测A3243G异质水平结果PCR-RFLP介于10％～60％，RTARMS-qPCR为0到100％，焦磷酸测序技术为1％到95％；RTARMS-qPCR和焦磷酸测序技术的检测结果均接近预期值；针对MIDD家系17位成员的检测中A3243G突变携带者有13例，非A3243G突变携带者有4份，这三种方法定性检测结果一致。RT-ARMS-qPCR和焦磷酸测序技术两种方法定量检测结果差异无统计学意义（t=1．140，P〉0．05）。结论针对mtDNA 3243A→G异质性突变的定量检测方法，PCR-RFLP不适合定量检测，但可作为一种临床检测方法用于人群初步筛查。对于低异质水平的A3243G突变可用RT ARMS-qP 展开更多
关键词 线粒体DNA pcr-限制性片段长度多态性技术 实时荧光定量pcr结合突变阻滞形成系统 焦磷酸测序技术
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建立RT-ARMS-qPCR系统定量测定含A1555G突变的线粒体DNA拷贝数 被引量：1
4
作者 程祖建 杨滨 +2 位作者 江凌 陈静 欧启水 《中国实验诊断学》 北大核心 2009年第6期713-715,共3页
目的建立RT-ARMS-qPCR(real time-amplification refractory mutation system-quantitative PCR)系统定量测定含线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)A1555G位点突变的片段的拷贝数,为阐明线粒体耳聋临床表型多样性的分子生物学基础奠定... 目的建立RT-ARMS-qPCR(real time-amplification refractory mutation system-quantitative PCR)系统定量测定含线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)A1555G位点突变的片段的拷贝数,为阐明线粒体耳聋临床表型多样性的分子生物学基础奠定基础。方法根据ARMS的基本原理设计引物,在引物3’端插入错配碱基AC建立RT-ARMS-qPCR系统,优化定量PCR体系,并进行方法学评价。经PCR分别扩增相应突变型和野生型的片段,将其克隆到pGEM-T Easy载体上,构建质粒标准品;同时对含突变型和/或野生型mtDNA 1555位点的片段的拷贝数进行定量检测。结果RT-ARMS-qPCR系统用于检测含mtDNA 1555位点的片段,线性检测范围为102-108拷贝数/μl,检测灵敏度为1×102拷贝数/μl,其批内变异系数(CV)为1.34%,批间CV为1.96%,重复性好;突变型和野生型引物分别只扩增相应片段,特异性好。结论RT-ARMS-qPCR系统适合于定量检测含mtDNA A1555G点突变的线粒体DNA片段,结果稳定、准确,有助于阐明线粒体耳聋严重程度的分子基础。 展开更多
关键词 DNA 线粒体 RT-ARMS-qpcr系统 耳聋
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