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2011年-2015年南昌市流感监测哨点医院病原学检测结果分析 被引量:11
1
作者 贺凤兰 夏文 +3 位作者 周显凤 樊国印 吴景文 倪贤生 《中国卫生检验杂志》 CAS 2016年第18期2679-2681,2685,共4页
目的了解2011年-2015年南昌市流感病毒流行情况,为科学制定流感防控策略提供参考依据。方法收集2011年1月-2015年12月南昌市哨点监测医院流感样病例标本,采用实时荧光定量反转录PCR(real-time RTPCR)反应进行病毒核酸检测分型,阳性标... 目的了解2011年-2015年南昌市流感病毒流行情况,为科学制定流感防控策略提供参考依据。方法收集2011年1月-2015年12月南昌市哨点监测医院流感样病例标本,采用实时荧光定量反转录PCR(real-time RTPCR)反应进行病毒核酸检测分型,阳性标本接种MDCK细胞进行病毒分离,血凝抑制实验鉴定。结果共检测流感标本核酸3 856份,阳性标本829份,阳性率为21.5%;其中新甲型H1N1、季节性H3、B型阳性率分别为4.69%、10.8%、5.9%。各年度阳性率差异有统计学意义(χ2=160.38,P〈0.01)。不同年龄组流感病毒检出结果差异有统计学意义(χ2=12.93,P〈0.01),其中以5岁~年龄组阳性率最高(25.8%),0岁~年龄组阳性率最低(14.6%)。流感病毒在各监测年度冬春交季有1个流行高峰。结论南昌市2011年-2015年有3种毒株呈现共同或先后交替流行。新型人禽流感病毒的活跃对南昌市流感病毒流行态势造成了一定的影响。 展开更多
关键词 流感 病原学监测 实时荧光逆转录pcr
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荧光定量RT-PCR检测雏鸡感染NDV强毒后胸腺和法氏囊中TLR2与TLR4 mRNA的表达 被引量:8
2
作者 侯巍 岳华 汤承 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期254-258,共5页
Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在识别病原微生物过程中发挥重要作用。为了定量检测TLR2、TLR4 mRNA表达水平,研究病原与机体的相互作用,本研究建立了检测鸡TLR2、TLR4 mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法,... Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在识别病原微生物过程中发挥重要作用。为了定量检测TLR2、TLR4 mRNA表达水平,研究病原与机体的相互作用,本研究建立了检测鸡TLR2、TLR4 mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法,检测了新城疫病毒强毒(vNDV)感染SPF雏鸡后36h、48h时胸腺、法氏囊中TLR2、TLR4 mRNA表达量变化。结果显示该方法特异性好,RRT-PCR产物分别在85.5℃、83.3℃出现单特异峰,对TLR2、TLR4的扩增效率分别为105.91%和95.30%,相关系数分别为0.9980、0.9996,最低检测限分别为108拷贝/反应和461拷贝/反应。感染后36h vNDV显著抑制TLR2、TLR4基因在法氏囊、胸腺中的表达;感染后48h时,法氏囊、胸腺中TLR2基因的表达水平显著升高,胸腺中TLR4基因的表达显著升高,而法氏囊中TLR4基因的表达仍处于抑制状态。本研究证明TLR2和TLR4参与了鸡体对NDV的感染应答。 展开更多
关键词 Toll样受体 mRNA 荧光定量rt-pcr 新城疫病毒
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葡萄斑点病毒的RT-PCR检测 被引量:7
3
作者 卓娜 王国平 +1 位作者 邓丛良 洪霓 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期717-720,共4页
由葡萄斑点病毒(Grapevine fleck virus,GFkV)引起的葡萄斑点病是世界上普遍发生的葡萄病毒病害。采用RT-PCR从表现明显斑点症状的葡萄样品维多利亚、无核白鸡心和胜宝叶片中检测到预期大小为179 bp的片段。对这些扩增片段进行克隆、序... 由葡萄斑点病毒(Grapevine fleck virus,GFkV)引起的葡萄斑点病是世界上普遍发生的葡萄病毒病害。采用RT-PCR从表现明显斑点症状的葡萄样品维多利亚、无核白鸡心和胜宝叶片中检测到预期大小为179 bp的片段。对这些扩增片段进行克隆、序列测定及比对分析,结果表明,来源于这3个样品的GFkV序列间相似性为97.2%~98.9%,与NCBI已登录GFkV序列AJ309022的相似性为96.6%~97.8%。在此基础上,采用纳米磁珠法从以上3个葡萄品种的休眠枝条韧皮部与休眠芽中提取病毒RNA,根据上述已测序列设计合成了TaqMan探针与引物,初步建立了GFkV的MNP Real time-RT-PCR检测体系。结果表明,无核白鸡心中GFkV含量最高,且该病毒在休眠芽中的含量比韧皮部约高出10倍,通过MNP Real time-RT-PCR最低可从100μg葡萄组织中检测到GFkV。 展开更多
关键词 葡萄斑点病毒 纳米磁珠 realtime-rt-pcr
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一种新颖简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法的建立 被引量:129
4
作者 张驰宇 徐顺高 黄新祥 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第9期883-888,共6页
为建立一种新颖、简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法,根据实时定量标准曲线,推导出相对定量基因表达的公式.公式显示相对表达指数只与CT值和标准曲线的斜率相关.构建标准曲线的标准品需要通过克隆和体外转录获得,实验过程繁琐.当人为成... 为建立一种新颖、简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法,根据实时定量标准曲线,推导出相对定量基因表达的公式.公式显示相对表达指数只与CT值和标准曲线的斜率相关.构建标准曲线的标准品需要通过克隆和体外转录获得,实验过程繁琐.当人为成比例增减标准品各个稀释度的具体拷贝数时,标准曲线的斜率并不改变,说明标准曲线斜率与标准品的具体拷贝数无关.因此,新的相对定量方法可以用任何一个待测样品的总RNA(或cDNA),经系列稀释后作为标准品,来构建相对定量标准曲线,获得斜率.与绝对定量法比较,新方法获得了基本相同的斜率和非常一致的定量结果(差异小于4%),而传统的2-#$CT法却表现出较大的定量误差.这些结果表明,新的相对定量方法是一种简便、准确和高效的定量基因表达的方法. 展开更多
关键词 荧光实时定量rt-pcr 相对定量 绝对定量 标准曲线 mRNA定量 斜率
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四步法消除SYBR GreenⅠ实时定量RT-PCR中引物二聚体的影响 被引量:47
5
作者 张驰宇 张高红 +1 位作者 杨敏 贲昆龙 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期387-392,共6页
为建立一种新的SYBRgreenⅠ实时定量RT PCR方法 ,使之能够有效消除引物二聚体 (PDs)对实时定量结果的影响 .对RT PCR特异性扩增产物和PDs分别进行了凝胶电泳检测和熔解曲线分析 .依据PDs和扩增产物的熔解温度 (Tm)特点 ,在通用的三步法... 为建立一种新的SYBRgreenⅠ实时定量RT PCR方法 ,使之能够有效消除引物二聚体 (PDs)对实时定量结果的影响 .对RT PCR特异性扩增产物和PDs分别进行了凝胶电泳检测和熔解曲线分析 .依据PDs和扩增产物的熔解温度 (Tm)特点 ,在通用的三步法的延伸步骤之后 ,增加一个短暂的 (5s)恒温和荧光检测步骤 ,使这个步骤的温度高于PDs的Tm,但低于扩增产物的Tm,简称该法为四步法 .PDs的Tm 通常高于 72℃ ,但低于扩增产物的Tm .将四步法第四步的温度设置在高于PDs的Tm ,但低于扩增产物的Tm 时 ,四步法能够有效地消除PDs的影响 .对三步法和四步法SYBRgreenⅠ实时定量RT PCR进行了比较 ,发现三步法根本不能用于RNA的实时定量 ,而四步法能够实现包括低丰度RNA在内的RNA的定量 .选择Tm 值尽可能小的引物 ,使PDs与扩增产物Tm 值之间有足够的差距 ,将更有利于四步法的应用 。 展开更多
关键词 引物二聚体 荧光实时定量rt-pcr SYBR green 四步法 RNA定量
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猪生殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:44
6
作者 宋志军 宋长绪 +6 位作者 杨增岐 朱道中 武占银 蒋智勇 林志雄 刘燕玲 张福良 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期98-102,共5页
根据GenBank登录的PRRSV保守基因序列设计合成了引物和探针,并对其进行了筛选;对荧光定量PCR的反应条件进行了优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。同时用建立的检测方法对组织病料进行了检测,并与常规RT-PCR做了对比。结果显示,... 根据GenBank登录的PRRSV保守基因序列设计合成了引物和探针,并对其进行了筛选;对荧光定量PCR的反应条件进行了优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。同时用建立的检测方法对组织病料进行了检测,并与常规RT-PCR做了对比。结果显示,所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法灵敏度可达5.0×100拷贝/μL,比常规RT-PCR灵敏度高100倍。用该方法对东莞、增城、湛江等地的猪血清和多种组织样品进行了检测。结果,该方法与常规RT-PCR检测方法的阳性符合率为100%。用该方法对3份不同的组织样品进行了重复检测,结果表明,该方法具有良好的重复性,可满足当前PRRS的诊断需要。 展开更多
关键词 猪生殖与呼吸综合征病毒 实时定量rt-pcr TaqMan荧光探针
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凋亡相关基因Livin、Smac/DIABLO在胃癌组织中的表达及其意义 被引量:24
7
作者 赵毅 邓鑫 王强 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第6期593-601,共9页
背景与目的:作为一种促凋亡基因,Smac/DIABLO与凋亡抑制基因Livin相互作用,共同参与调控细胞癌变的起始及发展。本研究检测凋亡抑制蛋白Livin及线粒体促凋亡蛋白Smac/DIABLO在胃癌组织中的表达,观察其表达水平与胃癌各临床病理因素的关... 背景与目的:作为一种促凋亡基因,Smac/DIABLO与凋亡抑制基因Livin相互作用,共同参与调控细胞癌变的起始及发展。本研究检测凋亡抑制蛋白Livin及线粒体促凋亡蛋白Smac/DIABLO在胃癌组织中的表达,观察其表达水平与胃癌各临床病理因素的关系。方法:应用实时荧光定量PCR SYBR Green荧光染料法检测75例手术切除的胃癌组织、20例癌旁组织及正常胃组织中Livin mRNA和Smac/DIABLO mRNA的表达,Western blot结合及免疫组化SP法检测两种蛋白的表达及组织学定位。结果:正常胃组织及癌旁组织中均无Livin mRNA表达,胃癌组织中Livin mRNA表达显著上调,相对表达量为6.374±4.759,低分化胃腺癌组织及有淋巴结转移组的相对表达量显著高于中高分化胃腺癌组织(P<0.05),其表达与肿瘤大小、浸润深度及TNM分期无关,Livin蛋白的表达结果与之相符;胃癌组织中Smac/DIABLO mRNA的表达(0.731±0.420)低于正常胃组织(1.104±0.276)及癌旁组织(1.061±0.737),但差异无统计学意义(P>0.05),Smac/DIABLO mRNA表达水平与胃癌各临床病理因素无关;Smac/DIABLO蛋白表达与mRNA表达存在差异。Smac/DIABLO在肠型胃癌(84.38%)与弥漫型胃癌(60.65%)中的表达有一定差异(P<0.05)。结论:Livin与Smac/DIABLO在不同阶段和不同病理类型胃癌中的表达及相关性存在差异,Livin基因高表达与胃癌的发生及分化转移密切相关。 展开更多
关键词 凋亡抑制蛋白 线粒体促凋亡蛋白 胃肿瘤 实时荧光定量 Western BLOT 免疫组化
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实时定量RT-PCR检测鱼类传染性造血器官坏死病毒方法的建立与应用 被引量:25
8
作者 岳志芹 刘荭 +4 位作者 梁成珠 高宏伟 徐彪 邓明俊 江育林 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期91-95,共5页
建立了Taqman实时定量RT-PCR方法检测传染性造血器官坏死病毒(IHNV)。选取IHNV病毒的N蛋白基因保守序列,利用PrimerExpress2.0软件设计引物和探针。以梯度稀释的含有IHNV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量RT-PCR反应以确定检测灵... 建立了Taqman实时定量RT-PCR方法检测传染性造血器官坏死病毒(IHNV)。选取IHNV病毒的N蛋白基因保守序列,利用PrimerExpress2.0软件设计引物和探针。以梯度稀释的含有IHNV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量RT-PCR反应以确定检测灵敏度。病毒浓度在5×106—5个拷贝,共7个数量级的范围内,定量RT-PCR反应有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为5个拷贝。根据病毒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线。该方法具有特异性,对鲤春血症病毒(SVCV)、病毒性出血性败血症(VHSV)、传染性胰脏坏死病毒(IPNV)、草鱼呼肠孤病毒(GCRV)、流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、EPC细胞系、牙鲆的核酸都没有扩增反应。在50批待检样品中,有3批鱼类感染IHNV,利用标准曲线进行了定量分析。实时定量RT-PCR检测IHNV方法,灵敏度高,特异性好,可以进行定量分析,在鱼病的快速检测上具有重要意义。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病毒(IHNV) 实时定量rt-pcr TAQMAN探针
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荧光定量RT-PCR技术快速检测SARS病毒核酸 被引量:24
9
作者 冯燕 卢亦愚 +5 位作者 严菊英 史雯 李敏红 龚黎明 葛琼 周敏 《中国病毒学》 CSCD 2005年第3期228-231,共4页
建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量RTPCR方法用于检测严重急性呼吸道综合症病毒(severeacuterespiratorysyndromeassociatecoronavirus,SARSCoV)核酸。筛选针对SARS病毒基因保守区域设计的引物与TaqMan探针,并对荧光定量RTPC... 建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量RTPCR方法用于检测严重急性呼吸道综合症病毒(severeacuterespiratorysyndromeassociatecoronavirus,SARSCoV)核酸。筛选针对SARS病毒基因保守区域设计的引物与TaqMan探针,并对荧光定量RTPCR反应体系与反应条件进行优化,验证本方法的特异性、敏感度与重复性。实验结果表明:本方法对SARS病毒核酸的检测具有高度特异性,与甲1型、甲3型、乙型流感病毒、禽流感病毒H5N1、麻疹及其他呼吸道病毒均无交叉反应;检测灵敏度达0.1TCID50;从病毒核酸提取至检测完成仅需3h左右,且操作简便,重复性好。本研究建立的TaqMan荧光定量RTPCR方法特异、敏感、快速,适合于临床实验室进行SARS病毒的早期快速检测。 展开更多
关键词 荧光定量rt-pcr TAQMAN探针 SARS病毒
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实时荧光RT-PCR一步法检测苹果茎沟病毒 被引量:22
10
作者 郭立新 向本春 +3 位作者 陈红运 段维军 陈洪俊 朱水芳 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期57-61,共5页
根据苹果茎沟病毒(ASGV)各分离物外壳蛋白(CP)基因的保守序列,设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,建立了对ASGV的实时荧光RT-PCR检测方法。TaqMan-MGB探针3’端具有小沟结合分子(Minor groove binder, MGB),提高了探针的Tm值... 根据苹果茎沟病毒(ASGV)各分离物外壳蛋白(CP)基因的保守序列,设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,建立了对ASGV的实时荧光RT-PCR检测方法。TaqMan-MGB探针3’端具有小沟结合分子(Minor groove binder, MGB),提高了探针的Tm值,缩短了探针长度,解决了病毒各分离物之间基因组变异较大、难以找到较长一致的序列来设计探针的困难。该方法的检测灵敏度比常规RT-PCR电泳检测高约10倍,对于ASGV等在果树体内含量较低的病毒尤为适用。此方法快速、灵敏,整个检测过程完全闭管,无需PCR后处理。 展开更多
关键词 苹果茎沟病毒(ASGV) 实时荧光rt-pcr 检测 TAQMAN-MGB探针
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雷公藤甲素对血管生成的抑制作用 被引量:17
11
作者 丁怡 张建成 +3 位作者 侯立军 张杰 王秋林 王树人 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第4期778-781,共4页
利用体外培养人脐静脉内皮细胞,经不同浓度的雷公藤甲素(0、5、10、20、30μg/L)处理后,MTT法显示雷公藤甲素可抑制内皮细胞的增殖,5μg/L雷公藤甲素的抑制率达29.15%;琼脂凝胶立体细胞培养系统检测发现内皮细胞经雷公藤甲素作用后,其... 利用体外培养人脐静脉内皮细胞,经不同浓度的雷公藤甲素(0、5、10、20、30μg/L)处理后,MTT法显示雷公藤甲素可抑制内皮细胞的增殖,5μg/L雷公藤甲素的抑制率达29.15%;琼脂凝胶立体细胞培养系统检测发现内皮细胞经雷公藤甲素作用后,其游走能力降低;鸡胚尿囊膜试验观察到雷公藤甲素可有效抑制血管的生成;荧光定量RT-PCR检测发现雷公藤甲素可下调内皮细胞u-PAmRNA的表达。因此认为,雷公藤甲素可能在基因水平上干扰内皮细胞u-PAmRNA的表达,减少u-PA蛋白的生成,从而有效地抑制血管内皮细胞的增殖和移行,这可能是雷公藤甲素抑制血管生成的主要机制之一。 展开更多
关键词 雷公藤甲素 内皮细胞 尿激酶型纤溶酶原激活物 血管生成 荧光定量rtpcr 抑制血管生成 人脐静脉内皮细胞 抑制作用 血管内皮细胞 mRNA
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菊花FT类似基因的克隆与表达分析 被引量:20
12
作者 潘才博 张启翔 +1 位作者 潘会堂 孙明 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期769-776,共8页
以地被菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)'七月桃花'为材料,利用同源基因克隆法结合RACE技术克隆了光周期调控开花重要基因FLOWERING LOCUS T(FT)的类似基因(基因登陆号GQ925916,命名为CmFT)。该基因开放阅读框有525bp,可编... 以地被菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)'七月桃花'为材料,利用同源基因克隆法结合RACE技术克隆了光周期调控开花重要基因FLOWERING LOCUS T(FT)的类似基因(基因登陆号GQ925916,命名为CmFT)。该基因开放阅读框有525bp,可编码174个氨基酸。蛋白比对发现,CmFT所推测的氨基酸序列包含FT类蛋白保守基序和两个关键性氨基酸残基。通过系统遗传进化树分析进一步表明CmFT属于FT亚家族成员。SYBR GREEN法实时荧光定量RT-PCR表达分析结果表明CmFT在花芽的表达量最高,茎的表达量次之,叶片表达量最低。在短日条件下,该基因的表达量呈昼夜节律表达型,在光照期间呈下降趋势,在夜间逐渐上升,光照前4h时达到最高水平。在长日条件下,其相对表达量显著低于短日条件下且趋于零。由此推测,该基因主要与菊花光周期敏感性密切相关,可能在光周期促进开花中发挥一定的作用。 展开更多
关键词 菊花 光周期敏感性 FT类似基因 实时定量rt-pcr
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定量RT-PCR及其在植物学研究中的应用 被引量:15
13
作者 胡丹丹 顾金刚 +1 位作者 姜瑞波 董金皋 《植物营养与肥料学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期520-525,共6页
定量RT-PCR(Quantitative reverse transcriptase-PCR)是在反转录和定量PCR的基础上发展起来的一种特异性检测基因表达的技术。主要包括相对定量RT-PCR(Relative quantitative RT-PCR)、竞争性定量RT-PCR(Competitive quan-titative RT-... 定量RT-PCR(Quantitative reverse transcriptase-PCR)是在反转录和定量PCR的基础上发展起来的一种特异性检测基因表达的技术。主要包括相对定量RT-PCR(Relative quantitative RT-PCR)、竞争性定量RT-PCR(Competitive quan-titative RT-PCR)、比较定量RT-PCR(Comparative quantitative RT-PCR)和实时定量RT-PCR(Real time quantitative RT-PCR)四种。目前定量RT-PCR在植物学研究中的应用越来越广泛,如植物营养学研究、植物发育学研究、植物抗逆机理研究、转基因植物的检测、病原菌的检测、植物与微生物互作机理研究、植物抗病性检测等方面。本文综述了定量RT-PCR的原理及在植物学中的应用。 展开更多
关键词 相对定量rtpcr 竞争性定量rt-pcr 比较定量rt-pcr 实时定量rt-pcr 植物学
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实时定量RT-PCR监测慢性粒细胞白血病患者造血干细胞移植后bcr-abl mRNA水平 被引量:19
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作者 秦亚溱 李金兰 +9 位作者 主鸿鹄 阮国瑞 李玲娣 张艳 许兰平 刘代红 黄晓军 陈珊珊 陆道培 刘艳荣 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期511-514,共4页
目的评价实时定量 RT-PCR(Q-PCR)技术用于监测慢性粒细胞白血病(CML)患者异基因造血干细胞移植(HSCT)疗效的意义。方法采用基于 TaqMan 探针的 Q-PCR 技术检测112例CML 患者 HSCT 后不同时间共316份骨髓标本 bcr-abl mRNA 的表达。bcr-a... 目的评价实时定量 RT-PCR(Q-PCR)技术用于监测慢性粒细胞白血病(CML)患者异基因造血干细胞移植(HSCT)疗效的意义。方法采用基于 TaqMan 探针的 Q-PCR 技术检测112例CML 患者 HSCT 后不同时间共316份骨髓标本 bcr-abl mRNA 的表达。bcr-abl mRNA 水平以内参基因abl 进行归一化。采用荧光原位杂交法(FISH)评估 HSCT 后是否达细胞遗传学完全缓解(CCyR)。结果 Q-PCR 实验可重复敏感度为5个拷贝。abl 及 bcr-abl 基因C_T 值的批内差及批间差均<2.0%。HSCT 后1个月开始持续处于 CCyR 状态的101例患者,中位跟踪时间为12(6~60)个月的289份标本表现为 HSCT 后各时间段均有一定数量患者可检测出 bcr-abl mRNA,总体上随着 HSCT 时间延长,中位水平逐渐降低。HSCT 后1个月中位 bcr-abl 水平为0.035%(0~0.406%),较本室资料初治 CML 慢性期患者中位水平降低3个对数级,3个月时为0.006%(0~0.683%),6个月开始降至0%(0~0.225%),移植6个月后标本最高 bcr-abl 水平为0.068%。8例患者 HSCT 后未达 CCyR 或遗传学复发时 bcr-abl 水平为0.12%~13.45%,其中5例患者遗传学复发前的1份标本(复发前1~2个月) bcr-abl 水平为0.09%~3.42%。9例持续 CCyR 患者 bcr-abl 水平曾经>0.090%,但随后均下降至0。2例急变期患者 HSCT 后1.6和3个月内持续 CCyR,但分别于1个月和1.5个月后进展为血液学复发,bcr-abl 水平亦从0及0.140% 分别急剧增至46.900% 和75.900%。结论 Q-PCR 技术精确、可靠,对CML 患者 HSCT 后有必要定期系列监测 bcr-abl 水平,以及时了解病情变化。对急变期患者需要更密切的监测。 展开更多
关键词 白血病 髓样 慢性 造血干细胞移植 融合蛋白类 BCR-ABL 聚合酶链反应
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DD3 mRNA在前列腺癌组织中定量表达分析 被引量:15
15
作者 陶志华 毛晓露 +10 位作者 王彩虹 陈晓东 余凯远 翁志梁 胡元平 张筱骅 谢辉 王瓯晨 宋其同 李澄棣 陈占国 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期130-133,共4页
目的:探讨DD3基因在前列腺组织中表达的临床意义。方法:用荧光定量RT-PCR方法对21例前列腺癌(PCa)组织、27例非前列腺部位的肿瘤组织、39例良性前列腺增生(BPH)组织和15例正常前列腺组织中的DD3的表达进行了定量分析,用ROC曲线对DD3 mRN... 目的:探讨DD3基因在前列腺组织中表达的临床意义。方法:用荧光定量RT-PCR方法对21例前列腺癌(PCa)组织、27例非前列腺部位的肿瘤组织、39例良性前列腺增生(BPH)组织和15例正常前列腺组织中的DD3的表达进行了定量分析,用ROC曲线对DD3 mRNA诊断PCa的性能进行了分析。结果:27例非前列腺组织中均未检测到DD3基因的表达。DD3在PCa组、BPH组和正常前列腺组表达量的中位数分别为7.2×106、2.5×104、1.5×104拷贝/mg组织。PCa组较BPH组和正常前列腺组DD3的表达量显著增高(P<0.01),而BPH组和正常前列腺组间则差异无显著性(P>0.05)。DD3表达量与临床分期和分化程度之间均无明显相关性。DD3 mRNA曲线下面积(AUC-ROC)为0.937(95%CI:0.879~0.995)。当临界值为1.4×105拷贝/mg组织时,灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、阳性拟然比(+LR)、阴性拟然比(-LR)分别为90.5%、85.0%、86.7%、76.0%、94.3%、6.03和0.11。结论:DD3 mRNA的表达仅限于前列腺组织,具有良好的组织特异性。DD3 mRNA表达在PCa组织中显著升高,在正常前列腺和BPH组织中差异无显著性。DD3 mRNA可作为PCa诊断的良好标志物,在PCa早期诊断、微转移诊断、预后判断、指导治疗等方面也具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 前列腺癌 DD3基因 实时荧光定量rt-pcr 前列腺组织
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外源水杨酸调控水稻化感抑草作用及其分子生理特性 被引量:10
16
作者 邱龙 王海斌 +4 位作者 熊君 方长旬 吴文祥 何海斌 林文雄 《应用生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期330-336,共7页
为了探讨外源水杨酸(SA)调控水稻化感抑草效应的可行性,研究了不同浓度的外源SA对强化感水稻PI312777抑草效应的影响及其生理生化特性,并运用实时定量RT-PCR(FQ-PCR)技术检测SA介导的关键酶苯丙氨酸解氨酶基因(ZB8)的相对表达量.结果表... 为了探讨外源水杨酸(SA)调控水稻化感抑草效应的可行性,研究了不同浓度的外源SA对强化感水稻PI312777抑草效应的影响及其生理生化特性,并运用实时定量RT-PCR(FQ-PCR)技术检测SA介导的关键酶苯丙氨酸解氨酶基因(ZB8)的相对表达量.结果表明:外源SA能够诱导水稻化感抑草效应增强,而且这种诱导效应与SA的浓度和处理时间相关.叶面喷施SA后,PI312777对稗草的抑制率显著提高,其根系活力、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性增强,过氧化氢酶(CAT)活性降低;而伴生杂草稗草的相应生理指标的变化趋势则相反.PI312777植株中的苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性增强,总酚含量升高.0.2mmol.L-1的SA诱导水稻化感抑草效应最显著,该浓度下目的基因ZB8的相对表达丰度随处理时间先上调后下调,在24h达到表达高峰. 展开更多
关键词 水杨酸 化感水稻 实时定量rtpcr苯丙氨酸解氨酶
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莱芜猪和杜洛克猪肌肉H-FABP基因表达量与肌内脂肪和脂肪酸含量关联分析 被引量:16
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作者 呼红梅 王继英 +3 位作者 郭建凤 张印 沈彦锋 武英 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第4期64-68,共5页
旨在研究莱芜猪和杜洛克猪间肌肉H-FABP基因mRNA表达差异,同时分析H-FABP基因mRNA表达量与肌内脂肪和脂肪酸含量的相关性,探索莱芜猪肌内脂肪沉积的分子机理。试验选择100kg体重莱芜猪10头、杜洛克7头,采用荧光定量RT-PCR法测定H-FABP基... 旨在研究莱芜猪和杜洛克猪间肌肉H-FABP基因mRNA表达差异,同时分析H-FABP基因mRNA表达量与肌内脂肪和脂肪酸含量的相关性,探索莱芜猪肌内脂肪沉积的分子机理。试验选择100kg体重莱芜猪10头、杜洛克7头,采用荧光定量RT-PCR法测定H-FABP基因mRNA表达丰度,并测定肌内脂肪和脂肪酸含量。结果表明,莱芜猪背最长肌H-FABP基因mRNA的表达量比杜洛克猪高36.16%。莱芜猪和杜洛克猪肌肉H-FABP基因mRNA的表达量与肌内脂肪含量相关显著,H-FABP基因mRNA的表达量和肌内脂肪含量与饱和脂肪酸、饱和+单不饱和脂肪酸含量相关显著,莱芜猪H-FABP基因mRNA的表达量和肌内脂肪含量与多不饱和脂肪酸含量相关显著,与脂肪酸总量相关不显著,但是杜洛克猪则与此相反。莱芜猪和杜洛克猪肌肉H-FABP基因mRNA表达量与肌内脂肪和脂肪酸组成相关显著,该基因可作为莱芜猪肌内脂肪选育的候选基因。 展开更多
关键词 莱芜猪 荧光定量rt-pcr H-FABP基因mRNA表达量 肌内脂肪 脂肪酸
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Down-Regulated Expression of RACK1 Gene by RNA Interference Enhances Drought Tolerance in Rice 被引量:15
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作者 LI Da-hong LIU Hui +2 位作者 YANG Yan-li ZHEN Ping-ping LIANG Jian-sheng 《Rice science》 SCIE 2009年第1期14-20,共7页
The receptor for activated C-kinase 1 (RACK1) is a highly conserved scaffold protein with versatile functions, and plays important roles in the regulation of plant growth and development. Transgenic rice plants, in ... The receptor for activated C-kinase 1 (RACK1) is a highly conserved scaffold protein with versatile functions, and plays important roles in the regulation of plant growth and development. Transgenic rice plants, in which the expression of RACK1 gene was inhibited by RNA interference (RNAi), were studied to elucidate the possible functions of RACK1 in responses to drought stress in rice. Real-time PCR analysis showed that the expression of RACK1 in transgenic rice plants was inhibited by more than 50%. The tolerance to drought stress of the transgenic rice plants was higher as compared with the non-transgenic rice plants. The peroxidation of membrane and the production of malondialdehyde were significantly lower and the superoxide dismutase activity in transgenic rice plants was significantly higher than those in non-trangenic rice plants It is suggested that RACK1 negatively regulated the redox system-related tolerance to drought stress of rice plants. 展开更多
关键词 Oryza sativa receptor for activated C-kinase 1 gene RNA interference transgenic plant drought stress real-time quantitative rt-pcr gene expression
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胃癌腹膜转移中GALECTIN-3MRNA的表达与意义 被引量:10
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作者 杨志明 伍晓汀 +3 位作者 何涛 达明绪 罗婷 钱昆 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期105-108,共4页
目的探讨GALECTIN-3基因在胃癌腹膜转移中的作用。方法通过实时定量RT-PCR方法,对35例同期伴腹膜转移病人的胃癌原发灶、淋巴结转移灶、腹膜转移灶、正常胃粘膜组织中GALECTIN-3MRNA的表达水平进行实时定量RT-PCR检测。结果胃癌原发灶(3... 目的探讨GALECTIN-3基因在胃癌腹膜转移中的作用。方法通过实时定量RT-PCR方法,对35例同期伴腹膜转移病人的胃癌原发灶、淋巴结转移灶、腹膜转移灶、正常胃粘膜组织中GALECTIN-3MRNA的表达水平进行实时定量RT-PCR检测。结果胃癌原发灶(385.639±98.534)、腹膜转移灶(368.589±93.431)、淋巴结转移灶(375.920±94.346)中GALECTIN-3MRNA表达量同正常胃粘膜(2.158±0.896)中的表达量相比,差异具有统计学意义(P<0.05),胃癌原发灶、腹膜转移灶及淋巴结转移灶三者中的表达量两两相比,差异无统计学意义(P>0.05)。GALECTIN-3MRNA在胃癌原发灶与腹膜转移灶中的表达呈正相关(R=0.997,P=0.000)。结论GALECTIN-3MRNA在胃癌中的高表达与胃癌腹膜转移密切相关。胃癌病灶的GALECTIN-3MRNA检测可作为术前判断胃癌已伴腹膜转移或具有腹膜转移潜能的生物学标记。 展开更多
关键词 胃癌 腹膜转移 GALECTIN-3 实时定量rt-pcr
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实时荧光RT-PCR检测冷冻草莓中诺如病毒 被引量:15
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作者 周阳 栾军 +6 位作者 蒋鲁岩 唐泰山 杨军 张常印 张弛 付瑞燕 祝长青 《食品安全质量检测学报》 CAS 2013年第2期515-520,共6页
目的建立冷冻草莓中的GI、GII型诺如病毒实时荧光RT-PCR检测方法,并应用于实际样品的检测。方法对草莓样品进行前处理、病毒富集、病毒RNA的提取和纯化,然后采用实时荧光RT-PCR进行检测。结果核酸提取方法能够有效地去除抑制因子,同时对... 目的建立冷冻草莓中的GI、GII型诺如病毒实时荧光RT-PCR检测方法,并应用于实际样品的检测。方法对草莓样品进行前处理、病毒富集、病毒RNA的提取和纯化,然后采用实时荧光RT-PCR进行检测。结果核酸提取方法能够有效地去除抑制因子,同时对104份送检样品进行检测,结果均为阴性。结论所建立的核酸提取与实时荧光RT-PCR结合的检测体系适合于草莓样品中诺如病毒GI、GII型的检测。 展开更多
关键词 冷冻草莓 诺如病毒 实时荧光 rt-pcr 快速检测
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