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miR-21在白血病发病过程中的作用研究 被引量：4
1
作者 张帅 王萍玉 +3 位作者 尹娟 李有杰 马颖 谢书阳 《滨州医学院学报》 2009年第3期164-166,共3页
目的本实验旨在研究miR-21在白血病细胞中表达情况,探讨miR-21基因与白血病发病的关系。方法提取组织中的小于200 bp的RNA,用poly(A)聚合酶在其3′末端加尾,再用5′带40 nt延伸序列的单碱基锚定Olig-dT引物进行反转录,然后用特异引物进... 目的本实验旨在研究miR-21在白血病细胞中表达情况,探讨miR-21基因与白血病发病的关系。方法提取组织中的小于200 bp的RNA,用poly(A)聚合酶在其3′末端加尾,再用5′带40 nt延伸序列的单碱基锚定Olig-dT引物进行反转录,然后用特异引物进行real-time PCR扩增,从而检测部分miRNAs在白血病细胞株K562中的表达,并与正常人骨髓表达情况相对比。结果通过real-time PCR分析,癌基因miR-21在K562细胞中的表达量约为(1.73±0.24)×105个拷贝,明显高于正常人骨髓组织中miR-21的表达(P<0.01)。结论本研究表明miR-21在K562细胞中的表达量增高,可能在白血病的发生过程中起重要作用。 展开更多
关键词 实时定量pcr MIR-21 白血病 基因表达
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天津沿岸海水中创伤弧菌的PCR检测和定量 被引量：3
2
作者 杨健 赵化冰 +3 位作者 张明露 朱滨 朱琳 蔡宝立 《安全与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期98-101,共4页
采用普通PCR方法和SYBRGreen实时定量PCR方法，根据刨伤弧菌16SrDNA和23SrDNA基因间隔序列（internal transcribed spacer，ITS）设计引物，对渤海湾天津沿岸海水中的创伤弧菌进行了定性和定量检测。8个样品采集白天津市汉沽区沿岸海水... 采用普通PCR方法和SYBRGreen实时定量PCR方法，根据刨伤弧菌16SrDNA和23SrDNA基因间隔序列（internal transcribed spacer，ITS）设计引物，对渤海湾天津沿岸海水中的创伤弧菌进行了定性和定量检测。8个样品采集白天津市汉沽区沿岸海水，采集时间分别为2008年7月、10月和2009年3月、5月。PCR检测结果表明，这些样品都能扩增出276hp的ITS序列，这些序列和GenBank上的同源序列（DQ462478）的相似性为96％一98％。用SYBRGreen实时定量PCR方法测定了8个海水样品，样品中创伤弧菌的浓度为7．12×10^3-8．40×10^5个／L，表明天津沿岸海水存在严重的创伤弧菌污染。 展开更多
关键词 微生物学 海水 创伤弧菌 pcr 实时定量pcr ITS序列
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一种新的T细胞相关分子IBP表达水平定量检测方法的建立 被引量：1
3
作者 张竹君 李淑慧 +1 位作者 陈安 胡川闽 《医学研究杂志》 2009年第4期25-28,共4页
目的建立一种定量检测IBP表达水平的方法,为研究IBP在免疫细胞分化以及在免疫性疾病当中的作用奠定基础。方法利用反转录PCR和PCR技术获得目的基因和内参基因片段,构建重组质粒,以重组质粒为标准品,建立实时PCR标准曲线;测定外周血白细... 目的建立一种定量检测IBP表达水平的方法,为研究IBP在免疫细胞分化以及在免疫性疾病当中的作用奠定基础。方法利用反转录PCR和PCR技术获得目的基因和内参基因片段,构建重组质粒,以重组质粒为标准品,建立实时PCR标准曲线;测定外周血白细胞IBP和β-actin表达水平。以β-actin为内参照,均一化检测结果。结果重组质粒的阳性克隆经PCR扩增,0.8%琼脂糖凝胶电泳鉴定,目的基因片段插入载体内;建立起实时PCR标准曲线。检测20例正常人全血标本,得到比较稳定的检测结果。结论成功建立了用实时PCR定量检测IBPmRNA表达水平方法,为进一步研究IBP奠定了基础。 展开更多
关键词 IBP rea time pcr Β-ACTIN
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肉牛黄体期和卵泡期阴道菌群结构的比较研究 被引量：1
4
作者 刘畅 王军 +1 位作者 刘红羽 吕文发 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第8期16-17,20,共3页
为了研究生殖激素对阴道菌群的影响,选取7头健康肉牛,分别采集黄体期和卵泡期阴道分泌物,提取细菌总DNA,根据DGGE克隆测序结果,选择5种特异性细菌,利用荧光定量PCR技术检测各细菌数量。结果表明,总菌、大肠杆菌、鞘氨醇单胞菌和睡眠嗜... 为了研究生殖激素对阴道菌群的影响,选取7头健康肉牛,分别采集黄体期和卵泡期阴道分泌物,提取细菌总DNA,根据DGGE克隆测序结果,选择5种特异性细菌,利用荧光定量PCR技术检测各细菌数量。结果表明,总菌、大肠杆菌、鞘氨醇单胞菌和睡眠嗜血杆菌菌群数量在两组间无显著差异(P>0.05),但黄体期链球菌属数量显著高于卵泡期(P<0.01),卵泡期乳杆菌属数量显著高于黄体期(P<0.05)。结果提示,肉牛黄体期与卵泡期的阴道菌群结构存在显著差异。 展开更多
关键词 肉牛 黄体期和卵泡期 阴道 real-time pcr 菌群
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鸭乙型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量：10
5
作者 刘扬科 郑立运 +7 位作者 常俊标 王川庆 杨霞 王庆端 陈陆 赵军 杨猛 张金来 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期7-12,共6页
为建立一种快速、特异的鸭乙型肝炎病毒(DHBV)SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,设计一对引物扩增DHBV基因组,将其克隆到pMD-18-T载体上,然后以该重组质粒为模板,选择DHBV S基因保守序列设计一对定量PCR引物,构建标准曲线,进行特异性、... 为建立一种快速、特异的鸭乙型肝炎病毒(DHBV)SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,设计一对引物扩增DHBV基因组,将其克隆到pMD-18-T载体上,然后以该重组质粒为模板,选择DHBV S基因保守序列设计一对定量PCR引物,构建标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验,并用所建立的方法评价拉米夫定和阿德福韦酯在鸭体内对DHBV-DNA复制的抑制效果。结果表明:该方法能特异性检测到DHBV;相关系数为1.00,扩增效率为105%;敏感度高,最低检测限为70个拷贝。拉米夫定和阿德福韦酯对DHBV感染后鸭外周血DHBV-DNA的复制均有很好的抑制效果,但停药后会出现轻度"反跳"现象。建立的DHBV SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有特异、灵敏、快速等优点,可用于抗HBV药物的评价。 展开更多
关键词 鸭乙型肝炎病毒 SYBRGreen I 荧光定量pcr
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急进高原与平原大鼠肠道双歧杆菌的分子生物学实验对比研究 被引量：7
6
作者 单体栋 邓芝云 +5 位作者 张方信 邵珂 段云 张盼 陈嘉屿 汪泳 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2011年第3期197-200,共4页
目的探讨应用荧光定量PCR法对急进高原大鼠肠道双歧杆菌数量变化的分子生物学实验研究。方法 Wistar大鼠60只,随机分为2组:平原对照组和3 848米的高原缺氧组各30只。急进海拔3 848米造成大鼠急性缺氧模型并分别于24、6、d取材,每次随机... 目的探讨应用荧光定量PCR法对急进高原大鼠肠道双歧杆菌数量变化的分子生物学实验研究。方法 Wistar大鼠60只,随机分为2组:平原对照组和3 848米的高原缺氧组各30只。急进海拔3 848米造成大鼠急性缺氧模型并分别于24、6、d取材,每次随机各取10只,观察肠道菌群中双歧杆菌的变化。结果高原缺氧组双歧杆菌数量明显少于平原对照组(P<0.05)。结论急进高原缺氧复杂环境下,可使肠道有益菌———双歧杆菌的数量减少,可能影响肠道微生态平衡。 展开更多
关键词 急进高原 双歧杆菌 肠道微生态 16S rDNA 荧光pcr
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被动游泳运动对小鼠抑郁样行为及其肠道菌群组成的影响
7
作者 陈文迪 张诗琪 +3 位作者 王亚楠 李咏贤 刘颖 徐宏伟 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2021年第5期52-62,共11页
被动游泳运动可诱发小鼠抑郁样行为,游泳环境的改变已成为抑郁样行为严重程度影响因素之一。观察不同水质、水温及持续时间对被动游泳小鼠抑郁样行为的影响,并初步探讨肠道菌群组成与抑郁样行为的关系。通过不同条件下的被动游泳运动建... 被动游泳运动可诱发小鼠抑郁样行为,游泳环境的改变已成为抑郁样行为严重程度影响因素之一。观察不同水质、水温及持续时间对被动游泳小鼠抑郁样行为的影响,并初步探讨肠道菌群组成与抑郁样行为的关系。通过不同条件下的被动游泳运动建立抑郁样行为小鼠模型。采用糖水偏好实验及强迫游泳实验评价其行为学变化;采用16S rDNA高通量测序技术及实时荧光定量PCR技术对小鼠肠道菌群进行分子生态学分析。被动游泳16周后,各模型组小鼠体质量及糖水偏爱度均较正常对照组降低,而不动时间则有所延长。其中,室温海水游泳15 min小鼠体质量及糖水偏爱度降低程度最大,不动时间最长,与正常对照组比较,均具有显著性差异(P<0.05)。各模型组小鼠肠道菌群Chao指数、Shannon指数及PCoA分析均较正常对照组具有显著性差异(P<0.05),其从门水平到属水平的丰度也发生不同程度改变。其中,室温海水游泳15 min小鼠肠道菌群组成变化程度最大,并发生拟杆菌属、普氏菌属等多个菌属的富集以及乳杆菌属丰度的减少,实时荧光定量PCR实验也得到了较为一致的结果(P<0.05)。以上结果表明,被动游泳运动可导致小鼠抑郁样行为的发生,其肠道菌群组成也发生明显改变;同时,菌群组成的改变会随着抑郁样行为的严重程度而有所变化。 展开更多
关键词 游泳运动 抑郁样行为 肠道菌群 16S rDNA高通量测序 实时荧光定量pcr 小鼠
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ALK基因在肺腺癌中的临床病理特征及其与患者预后的相关性研究 被引量：2
8
作者 李修泽 张逊 +2 位作者 徐美林 史俊杰 景国慧 《医学理论与实践》 2016年第7期841-843,共3页
目的:探讨肺腺癌患者中间变性淋巴瘤激酶(ALK)基因的表达及其与患者预后的相关性。方法:用常规免疫组织化学法(IHC)及实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测256例经石蜡包埋的肺腺癌标本的ALK基因表达情况,分析比较阳性组与阴性组患者在临床病... 目的:探讨肺腺癌患者中间变性淋巴瘤激酶(ALK)基因的表达及其与患者预后的相关性。方法:用常规免疫组织化学法(IHC)及实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测256例经石蜡包埋的肺腺癌标本的ALK基因表达情况,分析比较阳性组与阴性组患者在临床病理特征及预后的差异性。结果:ALK基因表达率在≤60岁组患者中表达率较>60岁组高(χ2=6.117,P<0.05);在不吸烟组患者中表达率较吸烟组患者高(χ2=12.124,P<0.05);而与性别无相关性(χ2=2.950,P>0.05),与TNM分期无相关性(χ2=3.563,P>0.05),与淋巴结转移亦无相关性(χ2=0.737,P>0.05)。ALK基因阳性组患者3年生存率低于阴性组(43.5%VS 71.6%,χ2=7.552,P<0.05)。经KaplanMeier生存分析显示,ALK基因阳性组患者总生存期(OS)低于阴性组。阳性组患者中位生存期同样低于阴性组(33.5个月VS 49.1个月,P<0.05)。结论:ALK基因在年轻、无吸烟史的肺腺癌患者中的表达率较高;ALK基因阳性可能是影响肺腺癌患者预后不良的独立危险因素之一。 展开更多
关键词 间变性淋巴瘤激酶 免疫组化 实时荧光定量pcr 生存率 预后
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Taqman-MGB探针RT-PCR方法检测食品中脊髓灰质炎病毒 被引量：1
9
作者 李想 黄一 +5 位作者 潘良文 卢钟山 张舒亚 吕蓉 刘月明 高琴 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第10期200-205,共6页
目的:建立食品中脊髓灰质炎病毒Taqman-MGB探针实时荧光RT-PCR检测方法。方法:在脊髓灰质炎病毒基因组2A区设计引物和探针,对3种血清型脊髓灰质炎病毒进行单独和同时检测。通过参照分子建立标准曲线,对人工接种病毒的牡蛎、蓝莓、生菜... 目的:建立食品中脊髓灰质炎病毒Taqman-MGB探针实时荧光RT-PCR检测方法。方法:在脊髓灰质炎病毒基因组2A区设计引物和探针,对3种血清型脊髓灰质炎病毒进行单独和同时检测。通过参照分子建立标准曲线,对人工接种病毒的牡蛎、蓝莓、生菜和水食品样品进行检测。结果:建立的检测体系分别高度特异于相应血清型病毒检测,对3种血清型脊髓灰质炎病毒进行单独和同时检测的下限均为2拷贝参照分子DNA。基于参照分子建立的4条标准曲线具有很好线性关系(R2=0.999)和较高反应效率(1.01～1.04)。对4种食品样品的分析表明,建立的实时荧光RT-PCR方法可稳定检测到各添加浓度脊髓灰质炎病毒。结论:建立的Taqman-MGB探针实时荧光RT-PCR检测体系适于食品中脊髓灰质炎病毒的检测。 展开更多
关键词 脊髓灰质炎病毒 实时荧光RT-pcr TAQMAN-MGB探针 食品 参照分子
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