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百合无症病毒的RT-PCR和IC-RT-PCR检测 被引量：43
1
作者 王继华 瞿素萍 +2 位作者 孔宝华 陆琳 余朝秀 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第2期148-150,173,共4页
应用DAS-ELISA,RT-PCR和IC-RT-PCR技术检测百合无症病毒(LSV)。结果表明:RT-PCR和IC-RT-PCR分别可从2ng和200ng百合叶片组织中检测出LSV,分别是DAS-ELISA敏感度的1000倍和10倍。百合鳞茎的不同取样部位对PCR检测结果的影响较大,RT-PCR... 应用DAS-ELISA,RT-PCR和IC-RT-PCR技术检测百合无症病毒(LSV)。结果表明:RT-PCR和IC-RT-PCR分别可从2ng和200ng百合叶片组织中检测出LSV,分别是DAS-ELISA敏感度的1000倍和10倍。百合鳞茎的不同取样部位对PCR检测结果的影响较大,RT-PCR难以从鳞片和根部检测出病毒,但IC-RT-PCR可以检测出病毒。 展开更多
关键词 百合 无症病毒 rt-pcr IC-rt-pcr DAS—elisa 检测技术 切花
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重庆辣椒病毒病病原初步鉴定和分析 被引量：41
2
作者 郭思瑶 童艳 +2 位作者 黄娅 罗信福 青玲 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期263-270,共8页
利用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和RT-PCR法对重庆地区发生的辣椒病毒病的病原进行了鉴定和优势病毒分析。利用5种常见蔬菜病毒的血清对采自重庆8个区县的152份辣椒病毒病样品进行Dot-ELISA检测,结果表明,共有118份辣椒样品检测呈阳性,其... 利用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和RT-PCR法对重庆地区发生的辣椒病毒病的病原进行了鉴定和优势病毒分析。利用5种常见蔬菜病毒的血清对采自重庆8个区县的152份辣椒病毒病样品进行Dot-ELISA检测,结果表明,共有118份辣椒样品检测呈阳性,其中,黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的侵染最普遍,总检出率高达57.89%;番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,To MV)的总检出率最低,为22.52%;烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,Tu MV)和蚕豆萎蔫病毒2号(Broad bean wilt virus 2,BBWV-2)的总检出率分别为30.26%、36.18%和24.34%。在118份阳性样品中,有66.10%的样品受两种及以上病毒复合侵染,其中33.33%的样品受到CMV和Tu MV复合侵染,有26.27%的样品受3种病毒复合侵染。设计5种病毒的特异性引物,随机选取16份阳性样品进行RT-PCR扩增,克隆测序结果表明扩增片段确实是5种病毒的相应序列,且RT-PCR与ELISA检测结果基本吻合。检测结果表明CMV是重庆地区辣椒上的优势病毒种类,且该地区辣椒上病毒复合侵染现象普遍。本文首次报道了To MV和Tu MV侵染辣椒。 展开更多
关键词 辣椒 辣椒病毒病 DOT-elisa rt-pcr 病原鉴定
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TGF-β_2转染关节软骨细胞的实验研究 被引量：31
3
作者 王卫国 娄思权 +1 位作者 佘华 夏家辉 《中华骨科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期434-438,共5页
目的观察人关节软骨细胞在体外单层培养过程中的去分化,以及转染TGF-β2在关节软骨细胞内的表达和对去分化的抑制作用。方法从手术中切除的软骨组织中分离培养成人关节软骨细胞,通过脂质体介导的方法将已构建的pcDNA3.1(+)/TGF-β2转染... 目的观察人关节软骨细胞在体外单层培养过程中的去分化,以及转染TGF-β2在关节软骨细胞内的表达和对去分化的抑制作用。方法从手术中切除的软骨组织中分离培养成人关节软骨细胞,通过脂质体介导的方法将已构建的pcDNA3.1(+)/TGF-β2转染到体外单层培养的软骨细胞中。采用RT-PCR、ELISA、组织学染色、免疫组化和原位杂交的方法,分别对转染组和未转染组的第1、6、9代细胞进行检测,比较目的基因表达、软骨细胞形态以及胶原和多糖生物合成的差异。结果经多次传代后,未转染软骨细胞在体外单层培养过程中逐渐走向去分化,TGF-β2、Ⅱ型胶原和蛋白多糖聚糖体的表达逐渐减低,而Ⅰ型胶原的表达增高。目的基因在转染组各代软骨细胞内均得到表达,转染后细胞保持软骨细胞的形态,Ⅱ型胶原和蛋白多糖聚糖体表达虽有降低,但均高于未转染的同代细胞,而Ⅰ型胶原表达增高的程度低于未转染细胞。结论人关节软骨细胞在体外单层培养中有去分化趋势;pcDNA3.1(+)/TGF-β2真核表达载体转染人关节软骨细胞获得成功,在转染后关节软骨细胞内稳定表达,并对软骨细胞的去分化有抑制作用。 展开更多
关键词 转染TGF-β2 关节软骨细胞 rt-pcr elisa 组织学染色 免疫组化 原位杂交 去分化
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茅苍术及其麸炒品对胃溃疡大鼠抗炎作用的比较研究 被引量：35
4
作者 于艳 贾天柱 才谦 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期705-710,共6页
该实验旨在比较茅苍术生品和麸炒品对实验性胃溃疡大鼠的抗炎作用,初步探讨茅苍术抗胃溃疡的作用机制。采用改良Okabe法即外科手术胃黏膜局部注射乙酸法诱导大鼠胃溃疡模型。大鼠分成10组,即假手术组,模型组,奥美拉唑组,三九胃泰组,茅... 该实验旨在比较茅苍术生品和麸炒品对实验性胃溃疡大鼠的抗炎作用,初步探讨茅苍术抗胃溃疡的作用机制。采用改良Okabe法即外科手术胃黏膜局部注射乙酸法诱导大鼠胃溃疡模型。大鼠分成10组,即假手术组,模型组,奥美拉唑组,三九胃泰组,茅苍术生品和麸炒品低、中、高剂量组,灌胃给药,每日2次,连续给药10 d,腹主动脉采血,分离血清,分取胃组织溃疡面。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清及胃组织中炎症因子白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和前列腺素E2(PGE2)的含量。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测胃组织中IL-8和TNF-αmRNA的表达。免疫组织化学法检测胃组织中TNF-α和IL-8的蛋白表达。与假手术组比较,模型组大鼠血清及胃组织中IL-6,IL-8,TNF-α和PGE2的含量明显升高,胃组织中IL-8和TNF-αmRNA的表达和二者的蛋白表达量显著增加,各治疗组均出现不同程度的降低。与茅苍术生品比较,相同剂量的茅苍术麸炒品具有更好的降低血清及胃组织中IL-6,IL-8,TNF-α和PGE2的含量,下调胃组织中IL-8和TNF-αmRNA表达的作用,其中高剂量组及中剂量组均有显著性差异。茅苍术对乙酸致胃溃疡大鼠具有明显的抗炎作用,麸炒后该作用增强;茅苍术抗胃溃疡的作用部分是由于下调IL-6,IL-8,TNF-α和PGE2的含量。 展开更多
关键词 茅苍术 胃溃疡 炮制 elisa rt-pcr 免疫组织化学
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RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒 被引量：19
5
作者 李军 林继煌 +4 位作者 陆承平 何孔旺 倪艳秀 还红华 钱永清 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期246-248,共3页
根据猪传染性胃肠炎病毒 ( TGEV)纤突蛋白 S基因的 5′端核酸序列设计了 1对引物。该对引物扩增的目的片段长度为 886bp。在优化 RT-PCR反应条件的基础上 ,建立了检测 TGEV的 RT-PCR方法。用此RT-PCR方法检测 56份猪腹泻粪样 ,同时用夹... 根据猪传染性胃肠炎病毒 ( TGEV)纤突蛋白 S基因的 5′端核酸序列设计了 1对引物。该对引物扩增的目的片段长度为 886bp。在优化 RT-PCR反应条件的基础上 ,建立了检测 TGEV的 RT-PCR方法。用此RT-PCR方法检测 56份猪腹泻粪样 ,同时用夹心 ELISA法作对照。结果显示 ,RT-PCR法检测的 2 0份阳性粪样 ,用夹心 ELISA法检测有 1 4份呈阳性 ,两者的符合率为 89%。 RT-PCR法比夹心 ELISA法敏感性更高 ,可用于 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 rt-pcr 猪 诊断方法
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DAS-ELISA、RT-PCR和IC-RT-PCR检测葡萄卷叶病毒Ⅲ的比较研究 被引量：16
6
作者 陈建军 2刘崇怀 +2 位作者 古勤生 潘兴 曹孜义 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期173-177,共5页
在生长季节分3次对部分葡萄品种枝条上部、中部和下部叶片及韧皮部,进行双抗体夹心法(DAS-ELISA)、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫捕捉反转录聚合酶链式反应(IC-RT-PCR)3种方法检测卷叶病毒Ⅲ(GLRaV-3)的比较。结果表明:DAS-ELISA... 在生长季节分3次对部分葡萄品种枝条上部、中部和下部叶片及韧皮部,进行双抗体夹心法(DAS-ELISA)、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫捕捉反转录聚合酶链式反应(IC-RT-PCR)3种方法检测卷叶病毒Ⅲ(GLRaV-3)的比较。结果表明:DAS-ELISA的检出率明显低于RT-PCR和IC-RT-PCR方法。RT-PCR可以检测出RNA提取液为1:10-4的GLRaV-3病毒,但它受到了提取RNA难以及其它物质(如蛋白质、DNA等)干扰的影响,检测难度增加。从检测的灵敏度来看,RT-PCR和IC-RT-PCR比DAS-ELISA灵敏;并且,IC-RT-PCR比其它两种方法较快,整个过程仅需8h。 展开更多
关键词 DAS-elisa rt-pcr IC-rt-pcr 葡萄 卷叶病毒Ⅲ 比较研究 检测 检出率
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诺如病毒检测方法研究进展 被引量：23
7
作者 李志凯 苏国成 +1 位作者 苏文金 周常义 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1417-1424,共8页
诺如病毒是引起人类非细菌性胃肠炎的主要病原之一,具有很高的传染性和变异性,可导致严重的公共卫生问题,尤其在抵抗力弱的人群中有很高的发病率,因此开发快速、准确的检测技术对预防和控制诺如病毒的传播是非常重要的。本文综述了近年... 诺如病毒是引起人类非细菌性胃肠炎的主要病原之一,具有很高的传染性和变异性,可导致严重的公共卫生问题,尤其在抵抗力弱的人群中有很高的发病率,因此开发快速、准确的检测技术对预防和控制诺如病毒的传播是非常重要的。本文综述了近年来RT-PCR、环介导等温扩增、实时荧光定量PCR、巢式PCR、ELISA、免疫层析、基因芯片等技术在诺如病毒检测中的应用及发展趋势。 展开更多
关键词 诺如病毒 检测方法 rt-pcr 环介导等温扩增 实时荧光定量pcr 巢式pcr elisa 免疫层析 基因芯片
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重庆辣椒上番茄斑萎病毒的血清学检测及分子鉴定 被引量：21
8
作者 孙淼 荆陈沉 +5 位作者 楚成茹 吴根土 孙现超 谢艳 刘勇 青玲 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期487-494,共8页
为明确重庆地区辣椒上番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的发生情况及其外壳蛋白基因(cp)序列变异特征,采用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和反转录PCR(RT-PCR)技术对采自重庆的298份辣椒病毒病样品进行了检测和分子鉴定。Dot-E... 为明确重庆地区辣椒上番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的发生情况及其外壳蛋白基因(cp)序列变异特征,采用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和反转录PCR(RT-PCR)技术对采自重庆的298份辣椒病毒病样品进行了检测和分子鉴定。Dot-ELISA检测结果表明,有40份辣椒样品检测到TSWV,检出率为13.42%。通过电子显微镜在TSWV检测呈阳性的样品中观察到具包膜的球状病毒粒体。设计扩增TSWV cp的引物,选取6个TSWV阳性样品进行RT-PCR扩增,均扩增到大小约750 bp的目的片段。序列分析表明,重庆辣椒分离物TSWV-CQ(KX611497)与已报道的22个TSWV分离物cp基因的核苷酸相似性为96.1%~99.4%,与已报道的TSWV中国分离物亲缘关系较近,表现出明显的地理相关性。 展开更多
关键词 辣椒 番茄斑萎病毒 DOT-elisa rt-pcr
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免疫斑点法和免疫捕获RT-PCR检测黄瓜绿斑驳花叶病毒 被引量：17
9
作者 尚海丽 周雪平 吴建祥 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期485-490,共6页
黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是葫芦科作物上重要的病毒之一.用提纯的黄瓜绿斑驳花叶病毒免疫新西兰大白兔制备CGMMV的多克隆抗体.该多克隆抗体的间接ELISA效价达1∶512 000,与CGMMV17.5 ku外壳蛋白... 黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是葫芦科作物上重要的病毒之一.用提纯的黄瓜绿斑驳花叶病毒免疫新西兰大白兔制备CGMMV的多克隆抗体.该多克隆抗体的间接ELISA效价达1∶512 000,与CGMMV17.5 ku外壳蛋白有特异性反应,而与烟草花叶病毒、齿兰环斑病毒和健康植物没有任何反应.用ACP-ELISA分析多抗灵敏度表明多抗检测1∶40 960倍稀释的CGMMV病叶时仍呈阳性反应.用该多抗建立了检测CGMMV的免疫斑点法(dot-ELISA)和免疫捕获RT-PCR方法(IC-RT-PCR).病叶汁液可被dot-ELISA检出的最大稀释度为1∶10 240.IC-RT-PCR从感染CGMMV的病叶组织中扩增到与预期大小相同的480 bp DNA条带,且当CGMMV病叶稀释1∶163 840倍时检测仍呈阳性.检测CGMMV的dot-ELISA和IC-RT-PCR方法的建立为该病毒病的诊断和控制提供了技术支撑. 展开更多
关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 多克隆抗体 DOT-elisa IC-rt-pcr
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水稻黑条矮缩病病毒外壳蛋白基因S10的原核表达、多克隆抗体制备及应用 被引量：19
10
作者 欧阳元龙 吴建祥 +2 位作者 熊如意 周益军 周雪平 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期25-30,共6页
用RT-PCR方法从感染水稻黑条矮缩病毒(rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)水稻中克隆该病毒的外壳蛋白基因S10,然后将此外壳蛋白基因再亚克隆到原核表达载体PET-32a中构建成重组原核表达载体pET32a-CP。将重组表达载体转化大肠杆菌... 用RT-PCR方法从感染水稻黑条矮缩病毒(rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)水稻中克隆该病毒的外壳蛋白基因S10,然后将此外壳蛋白基因再亚克隆到原核表达载体PET-32a中构建成重组原核表达载体pET32a-CP。将重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,Ni+ NTA亲和柱纯化获得分子量约为76kD含硫氧还蛋白的融合蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫兔子制备RBSDV外壳蛋白的多克隆抗体,并用制备的多克隆抗体建立了可靠、灵敏、特异的检测RBSDV的免疫捕获RT-PCR及Dot-blot ELISA方法,为该水稻病毒病的诊断提供技术支持。 展开更多
关键词 水稻黑条矮缩病病毒 原核表达 多克隆抗体 免疫捕获反转录聚合酶链式反应 斑点酶联免疫吸附测定
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中国株兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因在大肠杆菌中的表达及其免疫原性鉴定 被引量：14
11
作者 严维巍 崔治中 王永坤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期447-449,共3页
应用 RT- PCR技术扩增编码兔出血症病毒 (rabbit hem orrhagic disease virus,RHDV) WX84株衣壳蛋白 VP6 0基因 ,将 PCR产物按相应的阅读框架克隆到表达性载体 p GEX- 6 P- 1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游。将重组质粒转化入大肠杆... 应用 RT- PCR技术扩增编码兔出血症病毒 (rabbit hem orrhagic disease virus,RHDV) WX84株衣壳蛋白 VP6 0基因 ,将 PCR产物按相应的阅读框架克隆到表达性载体 p GEX- 6 P- 1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游。将重组质粒转化入大肠杆菌 BL2 1株 ,在 1.0 m mol/ L IPTG和 37℃的条件下诱导 ,VP6 0 - GST基因融合蛋白获了高效表达。经聚丙烯酰胺凝胶电泳和 Western- blotting试验证实所表达的融合蛋白产物相对分子质量与预期的 870 0 0相符。将表达产物经电泳切胶回收目的条带后免疫小鼠 ,所得抗血清应用间接 EL ISA检测 ,与 RHDV病毒粒子呈阳性反应。试验结果表明 ,大肠杆菌中表达的 RHDV VP6 展开更多
关键词 中国株 兔出血症病毒 衣壳蛋白 VP60基因 大肠杆菌 基因表达 免疫原性 鉴定 rt-pcr elisa 病毒性出血症
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甘蔗黄叶病毒病早期快速RT-PCR诊断和鉴定 被引量：16
12
作者 王中康 殷幼平 J.C.Comstock 《西南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2001年第4期301-303,共3页
甘蔗黄叶病毒病 (YLS)是一种由黄症病毒 (Luteovirus)引起 ,随种蔗传带的新病害。利用由黄症病毒组特征片段克隆测序设计的特异性引物对YLSR 4 62和YLSF 111开发出一种可以早期快速检测无症甘蔗繁殖材料带毒情况的反转录多聚酶链式反应... 甘蔗黄叶病毒病 (YLS)是一种由黄症病毒 (Luteovirus)引起 ,随种蔗传带的新病害。利用由黄症病毒组特征片段克隆测序设计的特异性引物对YLSR 4 62和YLSF 111开发出一种可以早期快速检测无症甘蔗繁殖材料带毒情况的反转录多聚酶链式反应技术 (RT -PCR)。对来自世界各地和美国甘蔗主产区的 14 0个甘蔗品种及育种材料进行了检测 ,黄症叶片样品RT -PCR阳性检出率为 10 0 % ,而无症样品带毒率为 5 5 .17%。与DAS -ELIS相比 ,显症和无症样品的检测符合度分别为 76.4 7%和 5 6.2 4 % ,表明分子诊断较血清学方法灵敏。而单纯采用叶片糖分锤度单一指标诊断YLS是不可靠的。美国的主栽甘蔗品种和大部分育种材料 (95 .0 % )对于YLS均表现感病或带毒。 展开更多
关键词 rt-pcr DAS-elisa 甘蔗 黄叶综合症
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三叶半夏的2种病毒检测 被引量：13
13
作者 申屠苏苏 王海丽 +2 位作者 陈集双 何煜波 高必达 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期664-667,共4页
目的:研究我国主产地栽培及野生三叶半夏的2种病毒病害发生情况和病毒种类。方法:症状观察法,DAS-ELISA及RT-PCR。结果与结论:侵染我国半夏的病毒主要为黄瓜花叶病毒CMV(cucumber mosaic virus)的天南星科株系和大豆花叶病毒SMV(soybeen... 目的:研究我国主产地栽培及野生三叶半夏的2种病毒病害发生情况和病毒种类。方法:症状观察法,DAS-ELISA及RT-PCR。结果与结论:侵染我国半夏的病毒主要为黄瓜花叶病毒CMV(cucumber mosaic virus)的天南星科株系和大豆花叶病毒SMV(soybeen mosaic virus)的天南星科株系,后者与以前报道的芋花叶病毒D sMV(dasheen mosaic virus)和SMV都有血清学阳性反应。人工栽培的三叶半夏普遍受到这2种病毒的侵染。其中,在早春检测的浙江宁波栽培半夏21个样品中CMV与SMV的检出率分别为71.4%和14.3%,浙江萧山栽培半夏18个样品中的检出率分别为100%和44.4%;河北栽培半夏21个样品中的检出率分别为61.9%和33.3%;安徽栽培半夏12个样品中的检出率分别为50.0%和41.7%;四川栽培半夏12个样品中2种病毒的检出率均为16.7%;北京栽培半夏16个样品中SMV的检出率为31.3%,未检测到CMV。25个来自全国各地的野生三叶半夏样品中CMV和SMV的平均检出率为20.0%。 展开更多
关键词 三叶半夏 黄瓜花叶病毒 大豆花叶病 DAS-elisa rt-pcr
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规模化种禽场禽白血病检测方法的比较及初步应用 被引量：16
14
作者 奚德华 梁有志 +7 位作者 尹丽萍 王姣 辜新贵 阎晓东 庄新娟 钱琨 秦爱建 刘岳龙 《中国家禽》 北大核心 2014年第3期14-17,共4页
在规模化种鸡场禽白血病净化工作中,选择合适的检测方法至关重要。本研究从规模化种鸡场采集疑似禽白血病发病鸡群20份样本和正常鸡群10份样本,分别用ELISA、RT-PCR以及IFA进行平行比较试验。结果表明ELISA、RT-PCR和IFA的符合率均达到9... 在规模化种鸡场禽白血病净化工作中,选择合适的检测方法至关重要。本研究从规模化种鸡场采集疑似禽白血病发病鸡群20份样本和正常鸡群10份样本,分别用ELISA、RT-PCR以及IFA进行平行比较试验。结果表明ELISA、RT-PCR和IFA的符合率均达到96.7%,RT-PCR和IFA灵敏度相对较高,但对实验室条件和人员要求相对严格,不适用在种鸡场推广。ELISA操作简便、快速、成本低,对实验室条件和人员要求相对较低,适合作为规模化鸡场种鸡群禽白血病净化时批量检测的工具。 展开更多
关键词 禽白血病 净化 elisa rt-pcr IFA
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猪瘟病毒4种检测方法的比较 被引量：14
15
作者 张朝红 张彦明 +3 位作者 张永国 郭抗抗 魏中锋 孙裴 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第5期24-28,共5页
应用病毒分离鉴定、荧光抗体法、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和夹心ELISA 4种方法,分别对23份猪瘟病料组织中的猪瘟病毒(CSFV)进行了检测,并比较4种检测方法的优缺点。结果显示,病毒分离鉴定法准确性较高,诊断比较容易,但存在试验步... 应用病毒分离鉴定、荧光抗体法、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和夹心ELISA 4种方法,分别对23份猪瘟病料组织中的猪瘟病毒(CSFV)进行了检测,并比较4种检测方法的优缺点。结果显示,病毒分离鉴定法准确性较高,诊断比较容易,但存在试验步骤繁琐,所需时间长的缺点;荧光抗体检测法所需时间较短,但需要经验比较丰富人员来判定结果,且存在假阳性结果,特异性比较差;RT-PCR检测法具有快速、敏感等优点,特别是样品保存不理想时更有价值,利用套式PCR(nested-PCR)可以提高检测的特异性;夹心ELISA检测法具有快速、敏感等优点,但在样品保存不理想时会出现假阴性结果。 展开更多
关键词 猪瘟 病毒分离鉴定 荧光抗体 反转录-聚合酶链式反应 elisa
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RT-PCR检测齿兰环斑病毒技术的建立 被引量：13
16
作者 明艳林 李梅 +1 位作者 郑国华 吴祖建 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2003年第3期345-347,共3页
根据已报道的齿兰环斑病毒(ORSV)外壳蛋白(CP)基因序列,进行同源性比较,设计了一对各为20bp的引物.通过优化试验条件,建立了稳定的RT-PCR检测ORSV体系,其检测灵敏度可达0.01ng·mL-1.将此方法与ELISA进行比较,结果表明,RT-PCR检测... 根据已报道的齿兰环斑病毒(ORSV)外壳蛋白(CP)基因序列,进行同源性比较,设计了一对各为20bp的引物.通过优化试验条件,建立了稳定的RT-PCR检测ORSV体系,其检测灵敏度可达0.01ng·mL-1.将此方法与ELISA进行比较,结果表明,RT-PCR检测灵敏度比ELISA高1000倍.应用这两种方法同时检测了138瓶兰花组培苗样品,其中RT-PCR检测出32瓶兰花组培苗感染病毒,而ELISA只能检测其中的18瓶. 展开更多
关键词 齿兰环斑病毒 检测 rt-pcr 外壳蛋白 序列分析 同源性 elisa 兰科植物
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进口大豆上菜豆荚斑驳病毒的免疫捕获巢式RT-PCR检测 被引量：13
17
作者 于翠 杨翠云 +1 位作者 宋绍祎 洪健 《植物检疫》 2006年第4期201-204,共4页
利用DASELISA对进口大豆上BPMV进行检测发现,从美国进口的部分大豆样品对BPMV的多抗血清呈阳性反应;利用免疫吸附电镜观察发现,ELISA检测阳性的大豆种皮病汁液中存在直径约30nm的球状病毒粒子。根据BPMV外壳蛋白(CP)基因的保守序列设计... 利用DASELISA对进口大豆上BPMV进行检测发现,从美国进口的部分大豆样品对BPMV的多抗血清呈阳性反应;利用免疫吸附电镜观察发现,ELISA检测阳性的大豆种皮病汁液中存在直径约30nm的球状病毒粒子。根据BPMV外壳蛋白(CP)基因的保守序列设计了2对嵌合引物,建立了BPMV的高灵敏的免疫捕获巢式RTPCR(ICnestedRTPCR)检测方法。该方法经免疫捕获、反转录和2轮PCR扩增,能从带毒大豆种子中扩增到预期大小的DNA条带。序列测定与分析表明此条带的序列为BPMV部分CP基因,在系统关系树上与BPMV的其它分离物形成一簇亲缘关系很近。实验表明从进境大豆上检测到了BPMV。 展开更多
关键词 菜豆荚斑驳病毒 大豆 elisa 免疫电镜 免疫捕获巢式 rt-pcr
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马铃薯Y病毒单克隆抗体的制备及其检测应用 被引量：11
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作者 宋革 郭玉双 +2 位作者 饶黎霞 周雪平 吴建祥 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期517-526,共10页
马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是危害农作物的重要病毒之一,在全球广泛传播并造成了严重的经济损失,而建立特异、灵敏的检测技术是防控PVY的关键。本研究以提纯PVYN病毒粒子为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得4株能分泌PVY单... 马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是危害农作物的重要病毒之一,在全球广泛传播并造成了严重的经济损失,而建立特异、灵敏的检测技术是防控PVY的关键。本研究以提纯PVYN病毒粒子为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得4株能分泌PVY单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3B2、3E4、20B2和25C2),杂交瘤细胞分泌的腹水单抗的效价在10^(-6)~10^(-7)之间,Western blot分析发现3B2、3E4和20B2这3株单抗仅与感染PVY的叶片中1条分子质量约为30ku的蛋白有特异性反应。该蛋白的分子质量与PVY的外壳蛋白亚基大小相符,推测制备的这3个单抗能识别PVY的外壳蛋白亚基,而25C2单抗与感染PVY的病叶组织中约55ku的蛋白有特异性反应。进而以制备的单抗为核心建立了检测植株中PVY的ACP-ELISA、dot-ELISA、tissue blot-ELISA和IC-RTPCR这4种血清学方法。特异性分析结果表明,这4种血清学方法检测感染PVY的样品呈阳性反应,而检测健康的烟草和马铃薯及感染马铃薯S病毒、马铃薯X病毒、马铃薯卷叶病毒、马铃薯A病毒的样品呈阴性反应;灵敏度分析结果表明,ACP-ELISA和dot-ELISA检测马铃薯病叶的灵敏度分别达1∶81 920倍和1∶10 240倍稀释(g/mL),而具有最高检测灵敏度的IC-RT-PCR方法在感病植物组织稀释到1∶5 242 880倍(g/mL)时仍能检测到病毒。用建立的血清学方法对2015年采自云南的30个田间马铃薯样品进行检测,结果发现其中有20样品感染PVY,且血清学方法的检测结果与RT-PCR结果一致。抗PVY特异、灵敏单抗的制备及血清学检测方法的建立,为我国作物上PVY的检测和诊断、脱毒种薯生产、抗病育种和科学防控提供了物质和技术支撑。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 单克隆抗体 ACP-elisa DOT-elisa TISSUE blot-elisa IC-rt-pcr
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猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立 被引量：13
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作者 杨利峰 杨建民 +2 位作者 周向梅 彭红 赵德明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期292-295,共4页
将RT-PCR方法和高灵敏度的地高辛检测系统相结合,先建立猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的RT-PCR方法,用地高辛标记RT-PCR产物;再建立CSFV的PCR-ELISA方法,用生物素标记的探针在链亲和素包被的微量板孔中杂交捕获地高辛标记... 将RT-PCR方法和高灵敏度的地高辛检测系统相结合,先建立猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的RT-PCR方法,用地高辛标记RT-PCR产物;再建立CSFV的PCR-ELISA方法,用生物素标记的探针在链亲和素包被的微量板孔中杂交捕获地高辛标记的PCR产物,最后进行免疫显色得出结果。试验主要对RT-PCR ELISA的各种反应条件进行了优化,确定了1mg/L的链亲和素、50μg/L生物素标记的探针、1∶3000抗地高辛的过氧化物酶、37℃杂交2h等为最适反应条件。该方法的敏感性比常规琼脂糖凝胶电泳检测高100倍以上,克服了组织样品中CSFV含量少而难以检测的困难,为猪瘟的早期诊断和分子流行病学调查提供了一条新途径。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 rt—pcr elisa 诊断
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高水平母源抗体仔猪接种猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗的免疫效果分析 被引量：13
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作者 施开创 许心婷 +2 位作者 舒秀远 莫胜兰 陈汉忠 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期402-406,共5页
为评估猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒活疫苗的免疫效果,本研究于规模猪场选取具有母源抗体的仔猪,接种PRRS弱毒活疫苗后不同时间采集血清,应用RT-PCR检测PRRS病毒(PRRSV)核酸,应用N-ELISA和G-ELISA两种试剂盒检测PRRSV抗体。结果显示,... 为评估猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒活疫苗的免疫效果,本研究于规模猪场选取具有母源抗体的仔猪,接种PRRS弱毒活疫苗后不同时间采集血清,应用RT-PCR检测PRRS病毒(PRRSV)核酸,应用N-ELISA和G-ELISA两种试剂盒检测PRRSV抗体。结果显示,在免疫接种后60 d内可在实验仔猪血清中检测到疫苗株核酸,而在整个实验期间未能检测到野毒株核酸。仔猪在免疫前具有较高的母源抗体,阳性率达到100%,此后逐渐下降,在免疫后第28 d/60 d(第2次试验/第1次试验)降到低点后又稳步升高,从免疫后第60 d/90 d到150 d试验结束时阳性率均达到100%。应用两种ELISA试剂盒同时检测329份血清样品,检测结果的符合率为96.96%;配对χ~2检验,p>0.05,两者差异不显著;Kappa值为0.81,属于极强一致性;两者相关系数r为0.794,具有显著线性相关。本研究结果表明,高水平母源抗体猪群接种弱毒活疫苗后取得良好的免疫效果,可选用N-ELISA或G-ELISA试剂盒进行免疫效果评估。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 弱毒活疫苗 间接elisa rt-pcr 抗体 病毒核酸
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