为了建立葫芦科作物干种子主要种传病毒检测方法,在现有的TRIZOL法、CTAB法等提取植物总RNA方法的基础上进行改良,从富含有多糖的甜瓜干种子中提取高质量的总RNA。建立了18 S r RNA为内参基因的侵染葫芦科作物4种主要种传病毒的两重RT-...为了建立葫芦科作物干种子主要种传病毒检测方法,在现有的TRIZOL法、CTAB法等提取植物总RNA方法的基础上进行改良,从富含有多糖的甜瓜干种子中提取高质量的总RNA。建立了18 S r RNA为内参基因的侵染葫芦科作物4种主要种传病毒的两重RT-PCR检测方法。应用改良TRIZOL法分别提取单粒和0.1 g(约20粒)带毒甜瓜种子的总RNA作为检测模板,分别对4种种传病毒进行RT-PCR检测,结果表明可分别从携带4种种传病毒的甜瓜种子上检测到对应的病毒,18 S r RNA基因能够很好的作为内参基因对病毒检测结果进行评估。展开更多
为实现田间土壤棉花黄萎病菌的早期检测,建立了土壤中棉花黄萎病菌的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。以含342bp PCR扩增产物的阳性质粒为参考,构建了标准曲线,并对该曲线的特异性、敏感性、可重复性进行了评价。结果表明,该方法具有...为实现田间土壤棉花黄萎病菌的早期检测,建立了土壤中棉花黄萎病菌的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。以含342bp PCR扩增产物的阳性质粒为参考,构建了标准曲线,并对该曲线的特异性、敏感性、可重复性进行了评价。结果表明,该方法具有快速、特异性强、敏感度高等特点。检测范围在3.8×103-3.8×108copies/μL之间有良好的线性关系,相关系数R2为0.996,扩增效率为101.5%,灵敏度比常规PCR方法高102倍。展开更多
为了快速、准确地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRSV),本研究根据PRRSV基因序列设计特异性引物和探针,建立了一种可同时检测PRRSV经典毒株、高致病性变异毒株以及近几年中国新出现的NADC...为了快速、准确地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRSV),本研究根据PRRSV基因序列设计特异性引物和探针,建立了一种可同时检测PRRSV经典毒株、高致病性变异毒株以及近几年中国新出现的NADC30-like毒株的TaqMan-MGB实时荧光定量方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行验证,同时用建立的实时荧光定量方法与常规PCR方法对临床收集的120份疑似PRRSV样品进行检测。结果表明,该方法特异性良好,对PRRSV的经典毒株、高致病性变异毒株及NADC30-like毒株均有良好的扩增,但对猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(RV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的检测结果均为阴性,无交叉反应;模板浓度在101～108拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,标准曲线结果显示其扩增的相关系数为0.9999,扩增效率为93%;敏感性高,约是常规PCR方法的100倍,最低可以检测到101拷贝/μL的模板;重复性好,批内和批间重复性试验变异系数分别为0.17%～0.90%和0.65%～2.34%;用本研究所建立的实时荧光定量检测方法对120份临床样品进行检测,PRRSV阳性检出率为59.2%(71/120),而常规PCR方法的PRRSV阳性检出率为44.2%(53/120)。该方法的建立为PRRSV的实验室诊断、流行病学调查,以及预防和控制中国PRRSV的流行提供了快速、准确的检测手段。展开更多
文摘为了建立葫芦科作物干种子主要种传病毒检测方法,在现有的TRIZOL法、CTAB法等提取植物总RNA方法的基础上进行改良,从富含有多糖的甜瓜干种子中提取高质量的总RNA。建立了18 S r RNA为内参基因的侵染葫芦科作物4种主要种传病毒的两重RT-PCR检测方法。应用改良TRIZOL法分别提取单粒和0.1 g(约20粒)带毒甜瓜种子的总RNA作为检测模板,分别对4种种传病毒进行RT-PCR检测,结果表明可分别从携带4种种传病毒的甜瓜种子上检测到对应的病毒,18 S r RNA基因能够很好的作为内参基因对病毒检测结果进行评估。
文摘为实现田间土壤棉花黄萎病菌的早期检测,建立了土壤中棉花黄萎病菌的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。以含342bp PCR扩增产物的阳性质粒为参考,构建了标准曲线,并对该曲线的特异性、敏感性、可重复性进行了评价。结果表明,该方法具有快速、特异性强、敏感度高等特点。检测范围在3.8×103-3.8×108copies/μL之间有良好的线性关系,相关系数R2为0.996,扩增效率为101.5%,灵敏度比常规PCR方法高102倍。
文摘为了快速、准确地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRSV),本研究根据PRRSV基因序列设计特异性引物和探针,建立了一种可同时检测PRRSV经典毒株、高致病性变异毒株以及近几年中国新出现的NADC30-like毒株的TaqMan-MGB实时荧光定量方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行验证,同时用建立的实时荧光定量方法与常规PCR方法对临床收集的120份疑似PRRSV样品进行检测。结果表明,该方法特异性良好,对PRRSV的经典毒株、高致病性变异毒株及NADC30-like毒株均有良好的扩增,但对猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(RV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的检测结果均为阴性,无交叉反应;模板浓度在101～108拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,标准曲线结果显示其扩增的相关系数为0.9999,扩增效率为93%;敏感性高,约是常规PCR方法的100倍,最低可以检测到101拷贝/μL的模板;重复性好,批内和批间重复性试验变异系数分别为0.17%～0.90%和0.65%～2.34%;用本研究所建立的实时荧光定量检测方法对120份临床样品进行检测,PRRSV阳性检出率为59.2%(71/120),而常规PCR方法的PRRSV阳性检出率为44.2%(53/120)。该方法的建立为PRRSV的实验室诊断、流行病学调查,以及预防和控制中国PRRSV的流行提供了快速、准确的检测手段。
